Действие кагоцел: (Kagocel), , , , , , 12 — Детская музыкальная школа №2 имени А.П. Бородина

Содержание

Противовирусный препарат «Кагоцел» содержит госсипол, провоцирующий бесплодие у мужчин. Росгвардия закупает это лекарство коробками

Несмотря на непрекращающуюся критику, создатель «Кагоцела» Феликс Ершов продолжает называть свою разработку одной из самых совершенных.

«Кагоцел» — высокомолекулярный природный полимер, получаемый путем химического синтеза из растительного сырья. Я сам постоянно принимаю «Кагоцел» — в профилактических целях, и всем рекомендую этот замечательный препарат для защиты как в начале гриппозного сезона, так и на его пике, когда уже вокруг все болеют», — рассказывал Ершов «Московскому комсомольцу» накануне нового сезона продаж препарата — в сентябре 2019 года.

Однако практически все российские исследования «Кагоцела», в том числе посвященные госсиполу и фертильности, проводились не независимыми учеными, а коллегами Ерошова из «Ниармедик». Так, в одном из них утверждается, что госсипол действительно содержится в составе «Кагоцела» (при этом в «Ниармедик» старательно избегают употребления самого слова «госсипол», заменяя его химической формулой), но создателям препарата якобы удалось купировать его вредные свойства.

Дело в том, что госсипол вреден для человека, если попадает в организм в свободном состоянии. Но целлюлоза, добавляемая в процессе производства в «Кагоцел», связывает вещество. Правда, есть один нюанс. Исследования специалисты «Ниармедик» проводили только в лабораторных условиях, имитируя состав желудочного сока (в нем госсипол не высвобождался).

Однако дополнительных исследований на биологических моделях in vivo и in vitro, гарантирующих безопасность «Кагоцела» в соответствии с действующими требованиями Минздрава РФ, не проводилось.

У западных ученых пока нет четкого представления о том, как применять госсипол без вреда для человека. В одной из публикаций, размещенных на сайте национальной медицинской библиотеки США, говорится, что в случае с коровами связанный госсипол все-таки может высвобождаться в процессе пищеварения.

КАГОЦЕЛ ТАБЛ 12 МГ №10

Состав

Активное вещество: Кагоцел — 12 мг

Вспомогательные вещества: крахмал картофельный — 10 мг; кальция стеарат — 0,65 мг; Лудипресс (лактоза прямого прессования, состав Лудипресса: лактозы моногидрат, повидон (Коллидон 30), кросповидон (Коллидон CL) — до 100 мг

Описание лекарственной формы

Таблетки: от кремового до коричневого цвета круглые двояковыпуклые с вкраплениями.

Фармакологическое действие

Фармакологическое действие — иммуномодулирующее, противовирусное.

Фармакодинамика

Основным механизмом действия лекарственного препарата Кагоцел® (далее по тексту — Кагоцел) является способность индуцировать продукцию интерферона. Кагоцел вызывает образование в организме человека т.н. позднего интерферона, являющегося смесью альфа- и бета-интерферонов, обладающих высокой противовирусной активностью. Кагоцел вызывает продукцию интерферона практически во всех популяциях клеток, принимающих участие в противовирусном ответе организма: Т- и В- лимфоцитах, макрофагах, гранулоцитах, фибробластах, эндотелиальных клетках. При приеме внутрь одной дозы Кагоцела титр интерферона в сыворотке крови достигает максимальных значений через 48 ч. Интерфероновый ответ организма на введение Кагоцела характеризуется продолжительной (до 4–5сут) циркуляцией интерферона в кровотоке. Динамика накопления интерферона в кишечнике при приеме внутрь Кагоцела не совпадает с динамикой титров циркулирующего интерферона. В сыворотке крови продукция интерферона достигает высоких значений лишь через 48 ч после приема Кагоцела, в то время как в кишечнике максимум продукции интерферона отмечается уже через 4 ч.

Кагоцел, при назначении в терапевтических дозах, нетоксичен, не накапливается в организме. Препарат не обладает мутагенными и тератогенными свойствами, не канцерогенен и не обладает эмбриотоксическим действием.

Наибольшая эффективность при лечении Кагоцелом достигается при его назначении не позднее 4-го дня от начала острой инфекции. В профилактических целях препарат может применяться в любые сроки,в т.ч. и непосредственно после контакта с возбудителем инфекции.

Фармакокинетика

Через 24 ч после введения в организм Кагоцел накапливается, в основном, в печени, в меньшей степени в легких, тимусе, селезенке, почках, лимфоузлах. Низкая концентрация отмечается в жировой ткани, сердце, мышцах, семенниках, мозге, плазме крови. Низкое содержание Кагоцела в головном мозге объясняется высокой молекулярной массой препарата, затрудняющей его проникновение черезГЭБ. В плазме крови препарат находится преимущественно в связанном виде.

При ежедневном многократном введении КагоцелаVd препарата колеблется в широких пределах во всех исследованных органах. Особенно выражено накопление препарата в селезенке и лимфатических узлах. При приеме внутрь в общий кровоток попадает около 20% введенной дозы препарата. Всосавшийся препарат циркулирует в крови, в основном, в связанной с макромолекулами форме: 47% — с липидами, 37% — с белками. Несвязанная часть препарата составляет около 16%.

Выведение: из организма препарат выводится, в основном, через кишечник: через 7сут после введения — 88% введенной дозы,в т.ч. 90% — через кишечник и 10% — почками. В выдыхаемом воздухе препарат не обнаружен.

Показания препарата Кагоцел®

профилактика и лечение гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) у взрослых и детей в возрасте от 3 лет;

лечение герпеса у взрослых.

Противопоказания
повышенная чувствительность к компонентам препарата;
дефицит лактазы, непереносимость лактозы, глюкозо-галактозная мальабсорбция;
беременность;
период лактации;
возраст до 3 лет.

Применение при беременности и кормлении грудью

В связи с отсутствием необходимых клинических данных Кагоцел не рекомендуется принимать в период беременности и лактации.

Побочные действия

Возможно развитие аллергических реакций.

Если любые из указанных в инструкции побочных эффектов усугубляются, или пациент заметил любые другие побочные эффекты, не указанные в инструкции, следует сообщить об этом врачу.

Взаимодействие

Кагоцел хорошо сочетается с другими противовирусными препаратами, иммуномодуляторами и антибиотиками (аддитивный эффект).

Способ применения и дозы

Внутрь.

Для лечения гриппа иОРВИ взрослым назначают по 2 табл. 3 раза в день в первые 2 дня, в последующие 2 дня — по 1 табл. 3 раза в день. Всего на курс лечения — 18 табл., длительность курса — 4 дня.

Профилактика гриппа иОРВИ у взрослых проводится 7-дневными циклами: 2 дня по 2 табл. 1 раз в день, 5 дней перерыв, затем цикл повторить. Длительность профилактического курса — от 1нед до нескольких месяцев.

Для лечения герпеса у взрослых назначают по 2 табл. 3 раза в день в течение 5 дней. Всего на курс лечения — 30 табл., длительность курса — 5 дней.

Для лечения гриппа иОРВИ детям в возрасте от 3 до 6 лет назначают по 1 табл. 2 раза в день в первые 2 дня, в последующие 2 дня — по 1 табл. 1 раз в день. Всего на курс — 6 табл., длительность курса — 4 дня.

Для лечения гриппа иОРВИ детям в возрасте от 6 лет назначают по 1 табл. 3 раза в день в первые 2 дня, в последующие 2 дня — по 1 табл. 2 раза в день. Всего на курс лечения — 10 табл., длительность курса — 4 дня.

Профилактика гриппа иОРВИ у детей в возрасте от 3 лет проводится 7-дневными циклами: 2 дня по 1 табл. 1 раз в день, 5 дней перерыв, затем цикл повторить. Длительность профилактического курса — от 1нед до нескольких месяцев.

Передозировка

При случайной передозировке рекомендуется назначение обильного питья, индукция рвоты.

Особые указания

Для достижения лечебного эффекта прием Кагоцела следует начинать не позднее 4-го дня от начала заболевания.

Влияние на способность управлять транспортными средствами и работать с механизмами. Влияние препарата на способность к управлению транспортными средствами, механизмами не изучено.

Форма выпуска

Таблетки 12 мг. По 10 табл. в контурную ячейковую упаковку из пленкиПВХ и фольги алюминиевой с термосвариваемым покрытием. 1 контурную упаковку помещают в пачку.

Производитель

1. ООО «НИАРМЕДИК ПЛЮС». 125252, Россия, Москва, ул. Авиаконструктора Микояна, 12.

Тел./факс: (495) 741-49-89.

2. ООО «Хемофарм». 249030, Россия, Калужская обл., Обнинск, Киевское шоссе, 62.

Тел.: (48439) 90-500; факс: (48439) 90-525.

Условия отпуска из аптек

Без рецепта.

Условия хранения препарата Кагоцел®

В сухом, защищенном от света месте, при температуре не выше 25 °C.

Хранить в недоступном для детей месте.

Срок годности препарата Кагоцел®

2 года.

Не применять по истечении срока годности, указанного на упаковке.

141 отзыв, инструкция по применению

Противовирусный препарат, индуктор синтеза интерферона. Активное вещество представляет собой натриевую соль сополимера (1→4)-6-0-карбоксиметил-β-D-глюкозы,(1→4)-β-D-глюкозы и (21→24)-2,3,14,15,21,24,29,32-октагидрокси-23-(карбоксиметоксиметил)-7,10-диметил-4, 13-ди(2-пропил)-19,22,26,30,31-пентаоксагептацикло [23.3.2.2^16.20.0^5.28.0^8.27.0^9.18.0^12.17] дотриаконта-1,3,5(28),6,8(27), 9(18),10, 12(17), 13,15-декаена.

Вызывает образование в организме так называемого позднего интерферона, являющегося смесью альфа- и бета-интерферонов, обладающих высокой противовирусной активностью. Кагоцел^® вызывает продукцию интерферона практически во всех популяциях клеток, принимающих участие в противовирусном ответе организма: Т- и В- лимфоцитах, макрофагах, гранулоцитах, фибробластах, эндотелиальных клетках. При приеме внутрь одной дозы препарата Кагоцел^® титр интерферона в сыворотке крови достигает максимальных значений через 48 ч. Интерфероновый ответ организма на введение препарата Кагоцел^® характеризуется продолжительной (до 4-5 сут) циркуляцией интерферона в кровотоке. Динамика накопления интерферона в кишечнике при приеме препарата внутрь не совпадает с динамикой титров циркулирующего интерферона. В сыворотке крови содержание интерферона достигает высоких значений лишь через 48 ч после приема препарата Кагоцел^®, в то время как в кишечнике максимум продукции интерферона отмечается уже через 4 ч.

Кагоцел^® при назначении в терапевтических дозах нетоксичен, не накапливается в организме. Препарат не обладает мутагенными и тератогенными свойствами, не канцерогенен и не обладает эмбриотоксическим действием.

Наибольшая эффективность при лечении препаратом Кагоцел^® достигается при его назначении не позднее 4-го дня от начала острой инфекции. В профилактических целях препарат может применяться в любые сроки, в т.ч. и непосредственно после контакта с возбудителем инфекции.

Фармакокинетика

Всасывание и распределение

При приеме внутрь в общий кровоток поступает около 20% введенной дозы препарата. Через 24 ч после приема внутрь препарат накапливается в основном в печени, в меньшей степени — в легких, тимусе, селезенке, почках, лимфатических узлах. Низкая концентрация отмечается в жировой ткани, сердце, мышцах, семенниках, мозге, плазме крови. Низкое содержание в головном мозге объясняется высокой молекулярной массой препарата, затрудняющей его проникновение через ГЭБ. В плазме крови препарат находится преимущественно в связанном виде: с липидами — 47%, с белками — 37%. Несвязанная часть препарата составляет около 16%.

При ежедневном многократном приеме препарата V_d колеблется в широких пределах во всех исследованных органах. Особенно выражено накопление препарата в селезенке и лимфатических узлах.

Выведение

Выводится, в основном, через кишечник: через 7 сут после приема из организма выводится 88% введенной дозы, в том числе 90% — с калом и 10% — с мочой. В выдыхаемом воздухе препарат не обнаружен.

Журнал БИОПРЕПАРАТЫ 2021 №2

Во втором выпуске журнала «БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение» (№ 2-2021) представлены оригинальные научные статьи.

А.А. Воропаев, О.В. Фадейкина, Д.С. Давыдов и А.А. Мовсесянц продемонстрировали результаты исследований по установлению оптимальных параметров методики определения невидимых механических включений на основе метода Култера для оценки качества растворов для парентерального применения. Авторы предложили модификацию методики на основе метода Култера с использованием апертуры диаметром 200 мкм и провели валидационные исследования модифицированной методики. Валидационные характеристики модифицированной методики соответствовали критериям приемлемости. По мнению авторов, применение модифицированной методики позволит оценить весь требуемый диапазон размеров невидимых механических включений при оценке качества лекарственных средств по показателю «Невидимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения».

В статье Т.М. Соколовой и В.В. Полоскова «Действие препарата Кагоцел® на экспрессию генов Toll-подобных рецепторов системы врожденного иммунитета в ТНР-1 моноцитах человека с разным уровнем дифференцировки» представлены результаты изучения действия субстанции Кагоцел на индукцию экспрессии генов Toll-подобных рецепторов (TLR) системы врожденного иммунитета в культуре клеток острого моноцитарного лейкоза человека линии THP-1 с разным уровнем дифференцировки. Полученные результаты характеризуют Кагоцел® как стимулятор генов TLR в линии клеток THP-1. Показано расширение спектра индуцированных генов TLR в ТНР-1 моноцитах при повышении концентрации препарата. По мнению авторов, позитивная регуляция активности генов TLR может объяснять проявляемые препаратом Кагоцел® антивирусные и интерферон-индуцирующие свойства, а также указывает на дополнительные возможности широкого применения при иммунопатологиях различного происхождения.

Обзоры, методические материалы, а также полнотекстовые версии представленных оригинальных статей размещены на сайте www. biopreparations.ru

кагоцел потенция

>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>

Что такое кагоцел потенция?

Мне 50 лет. Я думал, что активные годы интимной жизни канули в лето. Что потенцию не восстановить. Но не тут было. Мне помог препарат Эроксин Экстра. Теперь я снова в строю!

Эффект от применения кагоцел потенция

Для меня, это лучшее средство для поддержания мужской потенции. Цена меньше, чем у конкурентов при этом действие препарата ничем не отличается от более дорогих конкурентов.

Мнение специалиста

Еще молод, но из-за постоянного стресса в постели начались проблемы, то эрекция внезапно пропадает, то все очень быстро случается. Химические препараты не пью принципиально, влияют на печень, решил попробовать это средство. Состав хороший, все натуральное.

Я знал, что эффект мгновенным не будет, но приятно было отметить, что уже через неделю потенция стала значительно лучше. Пропил месячный курс, чувствую себя снова 20-летним!

Как заказать

Для того чтобы оформить заказ кагоцел потенция необходимо оставить свои контактные данные на сайте. В течение 15 минут оператор свяжется с вами. Уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 3-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении.

Отзывы покупателей:

Юля

Препарат «Eroxin extra» является биологически активным веществом, но его действия можно сравнить с эффектом от полноценного лекарственного средства. Врачи рекомендуют использовать “Эроксин” в следующих случаях: Когда у мужчины присутствует сильное желание и возбуждение, но необходимая эрекция не наступает в течение длительного времени; Эрекции недостаточно для введения полового члена во влагалище; Половой член находится в эрегированном состоянии довольно непродолжительное время, быстро «падает»; У мужчины наблюдается преждевременная эякуляция, половой акт быстро оканчивается, а партнерша остается неудовлетворённой; У мужчины диагностировано бесплодие без определения точных причин патологии; Возраст мужчины превышает 50 лет и ему необходима профилактика эректильной дисфункции.

Вика

Основу формулы препарата составляют уникальные вытяжки и экстракты. Природные компоненты тщательно сбалансированы: Корень Эврикомы – мощнейший афродозиак, поддерживает мужскую потенцию на высоком уровне, укрепляет мышечную систему. Растение повышает в крови тестостерон, что влечет за собой продолжительную эрекцию и увеличение высококачественного эякулянта (высокая концентрация здоровых сперматозоидов). Корень Женьшеня – увеличивает выработку гормона андрогена, стимулирует либидо, повышает физический тонус. Женьшень помогает решить проблему вялости, бессонницы, нормализует давление, укрепляет иммунную систему. Экстракт Йохимбе – оказывает антидепрессивное действие, усиливает выносливость, улучшает кровоток органов малого таза, благотворно влияет на эрекцию и насыщенность полового акта. Цинка Лактат – необходим для полноценного функционирования мужского организма, осуществляет гормональный синтез, стимулирует выработку достаточного объема спермы, обеспечивает полноценную работу предстательной железы.

Покупала данный препарат для мужа. У него была большая нервотрёпка перед сделкой на работе и в связи с этим начались проблемы в физическом плане. Уже и так перед ним кружилась, чтобы его отвлечь, и так. А эрекция совсем слабая. Стала замечать, что ему стало ещё хуже от этого. Как и любой другой мужик, он очень упрямый. Никаких врачей. Решила все взять в свои руки. Начиталась много всего и остановилась на капсулах eroxin. Заказала через интернет. Решила мужу не говорить и с помощью маленькой женской хитрости добавила ему в чаек после работы и вышла в красивой комбинации и все случилось. Надо было видеть мужа, эти глаза ни на что не поменять. Настроение поднялось. Я ему не сказала, конечно. Обидится, но сам факт, что таблетки не вредны и безопасные, муж довольный, что может быть идеальнее. Где купить кагоцел потенция? Еще молод, но из-за постоянного стресса в постели начались проблемы, то эрекция внезапно пропадает, то все очень быстро случается. Химические препараты не пью принципиально, влияют на печень, решил попробовать это средство.

Состав хороший, все натуральное. Я знал, что эффект мгновенным не будет, но приятно было отметить, что уже через неделю потенция стала значительно лучше. Пропил месячный курс, чувствую себя снова 20-летним!
Если кратко, то «противовирусный препарат «Кагоцел» приводит к бесплодию». Об этом некий доктор Сергей Николаевич рассказывал в начале декабря в рассылаемом по WhatsApp послании. Сегодня удалось выяснить — правда это или нет! Кагоцел — противовирусное средство, стимулирующее производство интерферонов и повышающее сопротивляемость организма к вирусам. Этот препарат давно и успешно используется для профилактической терапии и лечения. Кагоцел — это противовирусный, иммуномодулирующий лекарственный препарат. Его действие основано на повышении выработки интерферона (вещество в организме человека, обладающей противовирусным действием). Препарат в. Кагоцел – противовирусное средство, которое применяется для лечения и профилактики гриппа, ОРВИ, а также герпетической инфекции.

Антивирусный препарат Кагоцел вызывает необратимое бесплодие у мужчин Российские федеральные органы — в частности, Росгвардия, МВД, Минобороны и ФСБ — за последние три года закупили примерно 117 тысяч упаковок. Недавно прочитала, что препарат Кагоцел вызывае мужское бесплодие. Ходят слухи, что изначально препарат создавался, как противозачаточный. В мессенджерах и соцсетях распространяется информация о том, что популярный противовирусный препарат Кагоцел якобы вызывает мужское бесплодие. Наши читатели забили тревогу: неужели лекарство, которым они много лет. Доступные цены. Читайте отзывы и заказывайте по самой выгодной стоимости ✈ Вы сможете забрать Кагоцел таблетки 12мг 20 шт. в ближайшей аптеке!
http://ethical-hedonist.dreamhosters.com/2flourish/html/upload/vliiaet_li_pivo_na_potentsiiu9266.xml
http://smartdesigne.biz/userfiles/preparaty_dlia_potentsii_v_aptekakh_tsena2744.xml
http://wonwon.taipei/photo/orekhi_s_medom_dlia_potentsii3148.xml
http://www.

pharma-tools.pl/galeria/file/potentsiia_shop6922.xml
http://www.lemonsport.sk/upload/pochemu_plokhaia_potentsiia2794.xml
Для меня, это лучшее средство для поддержания мужской потенции. Цена меньше, чем у конкурентов при этом действие препарата ничем не отличается от более дорогих конкурентов.
кагоцел потенция
Мне 50 лет. Я думал, что активные годы интимной жизни канули в лето. Что потенцию не восстановить. Но не тут было. Мне помог препарат Эроксин Экстра. Теперь я снова в строю!
Применяемая для повышения потенции мазь Календулы продается в стеклянных банках по 25 и 40 г, а также алюминиевых тубах (по 15, 30 и 50 г), упакованных в картонные коробки и снабженных инструкцией по применению. Мазь календулы для повышения потенции используется среди мужчин довольно редко, хотя на ранних стадиях эректильной дисфункции эта аптечная мазь способна продемонстрировать результат. Соцветия календулы всегда широко использовались в медицине.

Мазь календулы для потенции мужчин оказывает положительное влияние на эрекцию, восстанавливает деятельность предстательной железы. Сосудорасширяющие мази для потенции повышают качество сексуальных контактов, позволяет достичь стойкой . Разберем, какая мазь эффективнее всего повышает потенцию: гепариновая мазь, нитроглицериновая, с календулой и другие. Календула – довольно распространенное растение, используемое в основном как декоративное. Однако она нашла свое место и в народной медицине – в частности, применяется для улучшения потенции у мужчин. Лучшие мази для потенции. Повышение потенции и достижение полноценной эрекции возможно с использованием различных . Мазь на основе календулы для повышения потенции можно приготовить самостоятельно или приобрести в аптеке, по весьма доступной стоимости. Гепариновая мазь. Мазь календулы для потенции мужчин: как применять, побочные ээффекты. Календула – довольно распространенное растение, используемое в основном как декоративное. Мазь Календулы для повышения потенции следует применять курсом, в течение длительного времени, срок лечения зависит от степени развития эректильной функции и конкретной причины, из-за которой она развилась.

Содержание: 1 Описание и состав. 2 Мазь Календулы для повышения потенции: инструкция по применению. 2.1 Как использовать? 2.2 Механизм действия. 2.3 Эффективность. 2.4 С чем можно комбинировать?

Лотошинская ЦРБ

Специфическая профилактика гриппа и ОРВИ зачастую оказывается неэффективной, поскольку не всегда производители вакцин способны предугадать мутацию циркулирующего вируса. Поэтому в качестве мер дополнительной профилактики гриппа и ОРВИ рекомендуется использовать некоторые препараты и лекарственные средства. О них вы сможете узнать из этого материала.

Меры профилактики гриппа и ОРВИ

Меры профилактики гриппа и ОРВИ включают в себя повышение защитных сил организма. После перенесенного гриппа, как известно, страдает иммунная система. Часто возникает повторное инфицирование бактериями или другими вирусами.

Как быстро восстановить иммунитет? Восстановить работу иммунной системы помогут любые витаминные комплексы, а также препараты, действие которых направлено на стимулирование иммунитета (ликопид, иммунал и другие).

Чтобы справиться с интоксикацией в период болезни и после, нужно пить больше жидкости: соков, компотов, морсов и т. д. Пользу принесут также живые натуральные витамины, которые содержатся в свежих овощах, фруктах, зелени, проростках, кисломолочных продуктах.

Профилактика ОРВИ заболеваний

Профилактика ОРВИ заболеваний включает в себя и правила личной гигиены.

1. Если кто-то в семье начал чихать, не дожидайтесь, когда и у вас потечет из носа. Немедленно приступайте к профилактике.

2. Во время эпидемии гриппа желательно принимать аскорбиновую кислоту.

3. Профилактический курс ремантадина, арбидола или лейкоцитарного интерферона значительно снизит риск заражения вирусной инфекцией.

4. Если приходится ухаживать за больным членом семьи, то в течение 5 дней болезни защитите себя трехслойной марлевой маской. И обязательно проветривайте комнату не менее 2 раза в день, а можно и чаще.

Препараты для профилактики гриппа и ОРВИ

Противовирусные препараты применяются для профилактики и лечения ОРВИ, гриппа. Эти средства призваны помочь иммунной системе противостоять инфекции. Рассмотрим препараты для профилактики гриппа.

Из современных противовирусных препаратов хорошо зарекомендовали себя тамифлю, реленза, арбидол, анаферон, кагоцел, римантадин, агри, гриппферон, интерферон, оциллококцинум. Эти лекарства отличаются друг от друга составом, способом действия и дозировкой.

Например, препарат тамифлю имеет доказанную эффективность против свиного гриппа. Для профилактики вирусных инфекций применяется по 75 мг в течение 4—6 недель.

Реленза представляет собой ингалятор, что не совсем подходит для аллергиков, астматиков и детей, склонных к частым ларингитам и фарингитам. Кроме того, при ингаляции важно правильно делать вдох, поэтому маленьким детям это средство лучше не использовать.

Эти препараты можно использовать для профилактики ОРВИ.

Средства для профилактики гриппа

Для профилактики гриппа средства нужно выбирать еще более тщательно.

Самый распространенный отечественный препарат арбидол, к сожалению, не имеет научно доказанных исследований, хотя у россиян он считается эффективным противовирусным средством. Также замечено, что польза арбидола повышается, если применять его одновременно с кагоцелом.

Кагоцел стимулирует выработку у человека собственного интерферона в организме, способствуя, таким образом, борьбе с вирусом. Однако у детей до 6 лет препарат не применяется, так как может внести дисбаланс в несовершенную иммунную систему маленького ребенка.

Римантадин необходимо строго рассчитывать по весу, и он непосредственно защищает от вируса гриппа. Но это средство плохо влияет на печень.

Анаферон, агри, оциллококцинум, афлубин являются гомеопатическими препаратами комплексного действия и способствуют повышению защитных сил организма. Принимать их надо с осторожностью, потому как возможна индивидуальная непереносимость.

Лекарство для профилактики гриппа и ОРВИ

Существуют и другие лекарства для профилактики гриппа.

Оксолиновая мазь — это один из первых противовирусных препаратов, появившихся на российском рынке. Сейчас применяется в основном для профилактики. Мазь необходимо закладывать в нос 2 раза в день.

Интерферон наряду с оксолинкой также «ветеран» российского фармацевтического рынка. Его неоспоримый плюс — низкая цена, но широкомасштабных исследований по его эффективности не проводилось.

Виферон (в свечах) используется с первых часов болезни, губительно действуя на вирусы и положительно — на иммунитет. Его применяют, начиная с грудного возраста и вплоть до старости.

Гриппферон — рекомбинантный, то есть синтетический интерферон, является более надежным и безопасным. Для профилактики его закапывают в нос 2 раза в день, для лечения — 5 раз в день.

Гриппферон закапывается в нос и применяется в основном для лечения. Но препарат может быть использован и для профилактики (не на протяжении всей эпидемии, а только на время тесного контакта с больным — как правило, около 5 дней). Гриппферон можно закапывать всем: и взрослым, и детям (старше 1 года). Это лекарство для профилактики ОРВИ можно использовать по такой же схеме.

Также необходимо иметь в аптечке жаропонижающие средства: парацетамол (наиболее предпочтителен), аспирин (не давать маленьким детям!), нурофен, анальгин.

границ | Паттерн экспрессии генов лимфоцитов пейерова пятна, подвергнутых воздействию кагоцела, предполагает, что рецепторы распознавания паттернов опосредуют его действие

Введение

Продукты распада бактерий, грибов и вирусов запускают быструю реакцию иммунных клеток и некоторых других типов клеток в организме как часть врожденного иммунного ответа (Kieser and Kagan, 2017). Среди этих продуктов распада (патоген-ассоциированные молекулярные структуры, PAMP) полисахариды клеточной стенки бактерий и грибов при связывании с toll-подобными рецепторами (Iwasaki and Medzhitov, 2004), рецепторами дектина-1 и, возможно, рецепторами других типов (Brown, 2005) вызывают воспаление, выработку интерферона, способствуют выживанию и пролиферации иммунных клеток (Ивасаки, Меджитов, 2004; Браун, 2005; Кизер и Каган, 2017).Некоторым полисахаридам природного происхождения приписывают иммуномодулирующую активность, в том числе лентинан (Borchers et al., 1999) и растительные β-D-глюканы (Estrada et al., 1997; Tada et al., 2009) привлекли наибольшее внимание, поскольку возможные терапевтические агенты, в то время как другие, такие как зимозан (CARLO and FIORE, 1958) или каррагинан (Necas and Bartosikova, 2013), оказались полезными исследовательскими инструментами в качестве индукторов иммунного ответа / воспаления. Следует отметить, что иммуномодулирующие эффекты глюканов были зарегистрированы у различных видов млекопитающих, птиц, рыб и даже беспозвоночных, что указывает на участие эволюционно консервативного пути / механизма (Vos et al., 2007).

Встречающиеся в природе глюканы стимулируют активность макрофагов, адаптивные B- и T-клеточные иммунные ответы и обладают противораковой активностью (Brown and Gordon, 2003). Некоторые глюканы традиционно используются в качестве лекарств от множества заболеваний (Bisen et al., 2010). Кагоцел — это синтетический сополимер модифицированной карбоксиметилцеллюлозы и природного полифенола, госсипола, который был разработан в НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Гамалеи и в дальнейшем продан в качестве перорального индуктора интерферона в России и странах СНГ компанией «Ниармедик».Госсипол, не более 3% по весу, ковалентно связан с карбоксиметилцеллюлозным каркасом. Обоснованием включения госсипола в полимер были его иммуномодулирующие свойства (Ершов и др., 1988), в то время как ковалентное связывание иммобилизовало полифенол и, таким образом, снизило его токсичность (Eagle and Castillon, 1948) или возможные эффекты мужской фертильности (Lim et al. др., 2019). Действительно, госсипол не высвобождается из кагоцела при хранении или инкубации с желудочным или кишечным соком (Sinitsin et al., 2020). В исследованиях хронической токсичности и репродуктивной токсичности умеренных доз кагоцела побочных эффектов выявлено не было (Боровская, 2017).

Клинические данные подтверждают эффективность кагоцела для лечения гриппа (Фазылов и др., 2016; Сологуб, Цветков, 2017) и для борьбы с другими вирусными инфекциями (Галегов и др., 2002; Логинова и др., 2020) в качестве монотерапии. или часть комбинированного лечения (Попов и др., 2017b). Анализ концентраций интерферона в плазме крови больных гриппом свидетельствует о повышении уровня цитокинов при введении кагоцела (Popov et al., 2017а). Однако молекулярные механизмы действия кагоцела изучены недостаточно. Стремясь выявить возможные механизмы действия кагоцела, мы использовали лимфоциты Пейера мышей в качестве тестовой системы, намеренно избегая дальнейшей изоляции определенных типов клеток для сохранения клеточных взаимодействий. Для предпочтительной стимуляции Т-лимфоцитов мы использовали конканавалин A в качестве митогена или, чтобы имитировать вирусную инфекцию, комбинацию конканавалина A и лиганда TLR3 poly I: C. Стимулированные лимфоциты инкубировали с различными концентрациями кагоцела или, в качестве положительного контроля, с четко определенными глюканами, лентинаном и овсяным β-D-глюканом, и анализировали продукцию цитокинов и характер экспрессии генов через 24 и 72 часа после обработки.

Результаты

Продукция цитокинов

Содержание цитокинов в культуральной среде анализировали через 24 и 72 часа культивирования с различными полисахаридами (рис. 1). Дисперсионный анализ, как и ожидалось, выявил значимое влияние времени и стимуляции митогена на концентрацию всех изученных цитокинов, за исключением IL10, на который не влиял тип митогена (рис. 1). Среди полисахаридов β-D-глюкан оказывал значительное влияние на TNFα (F _(1.000, _10,00) = 14,1, p = 0,004), IL2 (F _(1.000, _10,00) = 5,26, p = 0,045), Il10 (F _(1.000, _10,00) = 5,78, p = 0,037) и уровней INFγ (F _(1.000, _10,00) = 5,46, p = 0,042). Лентинан увеличивал уровни TNFα (F _(1.000, _10,00) = 5,81, p = 0,037) и IL6 (F _(1.000, _10,00) = 8,68, p = 0.015), в то время как INFγ было уменьшено с помощью этого лечения (F _{(1.000, 10.00)} = 15,48, p = 0,003). Кагоцел не оказывал стойкого действия на TNFα, IL2, IL6 и INFγ, однако инкубация лимфоцитов с кагоцелом увеличивала концентрацию IL10 (F _(3.000, _30,00) = 6,27, p = 0,002) в кажущейся дозе — зависимым образом (рисунок 1D). Повышенная продукция IL10 клетками, обработанными кагоцелом, может объяснить отсутствие эффектов препарата на выработку провоспалительных цитокинов стимулированными лимфоцитами.

РИСУНОК 1 . Концентрация TNFα (A) , IL6 (B) , IL2 (C) , IL10 (D) и INFγ (E) в среде через 24 (светлые столбцы) и 72 часа (заштрихованные столбцы) ) культивирования лимфоцитов пейеровых бляшек, стимулированных конканавалином A (ConA, белые столбцы) в отсутствие или в присутствии лиганда TLR-3 poly I: C. Клетки обрабатывали физиологическим раствором (H ₂ O), 300 мкг / мл β-D-глюкана овса (βDGlu), 300 мкг / мл лентинана (Lent) или 30-300 мкг / мл кагоцела.Результаты представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение от 6 независимых запусков эксперимента. Статистические данные о воздействии наркотиков см. В тексте.

Экспрессия гена

После получения данных экспрессии гена, выраженных в виде нормализованных значений, сначала мы выполнили кластерный анализ. Полученная кластеризация соответствовала плану эксперимента, причем два верхних фактора в выходной иерархии — это время и применяемый митоген (дополнительная таблица S1). Таким образом, мы пришли к выводу, что наш экспериментальный план эффективно изменил паттерны экспрессии генов, связанных с воспалением, в лимфоцитах мышей Пейера.

Далее, для обзора данных с высоты птичьего полета, мы подсчитали гены с повышенной и пониженной регуляцией по сравнению с соответствующими контрольными клетками для каждой комбинации применяемого препарата, стимуляции митогена и времени. Как показано на фиг. 2, при обработке полисахаридами подавление преобладало в лимфоцитах, обработанных конканавалином А, через 24 ч инкубации, за исключением лентинана, который усиливал экспрессию гена. Через 72 часа инкубации количество генов с повышенной регуляцией превышало количество генов с пониженной регуляцией.В отличие от этого, когда стимуляция конканавалином A дополнялась поли I: C в качестве лиганда TLR3, количество генов с повышенной регуляцией обычно было выше, чем количество генов, связанных с воспалением, с пониженной регуляцией. Количество генов с пониженной регуляцией возрастало с увеличением концентрации кагоцела в инкубационной среде в клетках, стимулированных конканавалином А. Следует отметить, что в присутствии поли I: C в лимфоцитах, обработанных кагоцелом, поли I: C при некоторых концентрациях препарата не было выявлено подавленных генов.

РИСУНОК 2 . Подсчет повышающих (красный) и подавляющих (синий) генов, связанных с воспалением, в лимфоцитах пейеровских бляшек, стимулированных конканавалином А (ConA) в отсутствие или в присутствии лиганда TLR-3 поли I: C через 24 и 72 часа после обработки 300 мкг / мл овса β-D-глюкана (βDGlu), 300 мкг / мл лентинана (пост) или 30-300 мкг / мл кагоцела по сравнению с контрольными лимфоцитами, обработанными физиологическим раствором. РНК собирали в 3 независимых прогонах эксперимента.

Тепловые карты, представленные на рисунке 3, дают более подробное представление данных (полный список см. В дополнительной таблице S2).Для этой презентации мы сгруппировали отвечающие гены по биологическому процессу Gene Ontology. В целом паттерны экспрессии имели одинаковый профиль для всех проанализированных процессов. Подавление преобладало в клетках, стимулированных конканавалином A, тогда как при более сильной стимуляции комбинацией конканавалина A и поли I: C повышенная регуляция происходила чаще. Более выраженные изменения экспрессии генов наблюдались через 72 часа культивирования с полисахаридами, тогда как через 24 часа ответы на экспрессию генов были более умеренными.Наконец, хотя паттерны экспрессии при обработке клеток β-D-глюканом и лентинаном были одинаковыми, эффекты кагоцела были непохожими на эти два глюкана. Кагоцел наносили на клетки в трех различных концентрациях; Следует отметить, что наиболее выраженные эффекты на экспрессию генов наблюдались, что противоречит интуиции, при самой низкой концентрации препарата.

РИСУНОК 3 . Тепловая карта (log ₂-кратное изменение экспрессии) генов, участвующих в врожденном иммунном ответе, GO: 0045087 (A) , адаптивный иммунный ответ, GO: 0002250 (B) , защитный ответ на бактерии, GO: 0042742 (C) , защитный ответ на вирус, GO: 0051607 (D) и гуморальный иммунный ответ, GO: 0019730 (E) в лимфоцитах пейеровских бляшек мыши, стимулированных конканавалином A (ConA) в отсутствие или в присутствии лиганда TLR-3 поли I: C через 24 и 72 часа после обработки 300 мкг / мл β-D-глюкана овса, 300 мкг / мл лентинана или 30-300 мкг / мл кагоцела (Kag) по сравнению с контролем, физиологическим раствором- лечится, лимфоциты.РНК собирали в 3 независимых прогонах эксперимента.

Гены-ответчики в лимфоцитах, обработанных кагоцелом, участвовали в регуляции синтеза макромолекул (GO: 0031326, GO: 0010556, GO: 2000112), регуляции транскрипции (GO: 0006355, GO: 2001141, GO: 16) и апоптоз (GO: 0006915, GO: 0012501, GO: 0008219). В частности, гены, активируемые в лимфоцитах пейеровских бляшек, кодируют компоненты системы комплемента (C1qa, C2, C3), цитокин, хемокин и передачу сигналов липидов (Ccl21a, Il11, Il1b, Il23a, Il5, Ltb4r2, Alox15, Pla2g4a , Ptger1), внутриклеточной передачи сигнала (Mapkapk5, Hras) и, что важно, врожденного восприятия и ответа на патогены (Defa-rs1, Ifna1, Tlr2, Mrc1, Mx2).

Факторы транскрипции, связанные с ответом гена

Стремясь выяснить возможный механизм действия кагоцела, мы использовали гены-респонденты в качестве входных данных для обогащающего анализа сайтов связывания факторов транскрипции. Путем сопоставления результатов этого анализа для различных экспериментальных условий мы идентифицировали несколько факторов транскрипции, которые потенциально могут управлять изменениями экспрессии, вызванными кагоцелом, в лимфоцитах пейеровского пятна. Среди этих факторов CEBP, гомеобокс, факторы регуляции интерферона, NFκB, ретиноидный рецептор X альфа, Stat, Tead4 и белки, содержащие Zinc finger и SCAN-домен, имели наибольшее кратное обогащение.Следует отметить, что практически идентичные факторы транскрипции были выделены для двух контрольных глюканов, овсяного β-D глюкана и лентинана. Полный список идентифицированных транскрипционных факторов представлен в дополнительной таблице S3.

Главные регуляторы

Мы расширили наш поиск механизмов действия кагоцела и провели анализ потенциальных главных регуляторов и путей. Как правило, для этого типа анализа на выходе был представлен широкий спектр возможных регуляторов, а не один кандидат.Чтобы исключить бессмысленные результаты, мы сопоставили данные для одного и того же препарата в различных экспериментальных условиях (митоген и момент времени), в то время как в случае кагоцела мы также могли включить в этот анализ данные для трех доз. Регуляторы и пути с единичными или бессистемными входами не учитывались. Таким образом, мы смогли идентифицировать cIAP, CIKS, dock9, MEKK1, FXR, IKK, IRAK, TRAF, dsRNA: TLR3: путь TRIF и несколько путей, включающих передачу сигналов TLR, в качестве потенциальных регуляторов, лежащих в основе действия кагоцела на экспрессию гена лимфоцитов.Полный список идентифицированных главных регуляторов представлен в дополнительной таблице S4.

Обсуждение

Здесь мы сообщаем результаты анализа экспрессии генов в лимфоцитах Пейера мышей после обработки сополимером карбоксиметилцеллюлозы и госсипола, кагоцелом или встречающимися в природе глюканами, лентинаном и β-D глюканом овса в качестве положительных контролей. Полисахариды вызывали выраженные изменения воспаления и экспрессии иммунных генов, которые выдвигают на первый план рецепторы распознавания образов как вероятные мишени действия кагоцела.

Мы использовали первичную культуру мышиных лимфоцитов Пейера в качестве тест-системы для исследования эффектов кагоцела. Для такого выбора есть несколько причин. Во-первых, хорошо известно, что глюканы эффективны при пероральном приеме, и то же самое верно для синтетического глюкана кагоцел, который принимается перорально в качестве иммуностимулятора. Однако из-за высокой молекулярной массы этих полимеров (> 10 ⁵) они плохо всасываются из кишечника (Vos et al., 2007). Фармакокинетические данные для полисахаридов с аналогичной молекулярной массой свидетельствуют о том, что их биодоступность при пероральном воздействии находится в диапазоне от сотых до десятых процента (Mehvar and Shepard, 1992). При этом только около 10% дозы кагоцела всасывается из желудочно-кишечного тракта крыс при пероральном введении, предположительно, низкомолекулярная фракция полимера (Андреев-Андриевский и др., 2019). Несоответствие между очевидным воздействием глюканов на иммунную систему и их плохой абсорбцией может быть устранено путем наблюдения за специфическим накоплением полисахаридов в пятнах Пейера после перорального воздействия.Таким образом, после приема каррагинана он был обнаружен в пятнах Пейера (Nicklin et al., 1988). Глюканы могут интернализоваться М-клетками после связывания с рецептором дектина-1 (Smet et al., 2013), а кишечные эпителиоциты могут способствовать поглощению антигенов в виде частиц над пятнами Пейера (Howe et al., 2014). Хотя распределение кагоцела в различных тканях кишечной стенки не изучалось, мы предполагаем, что кагоцел может проникать в пятна Пейера при пероральном воздействии, что может сделать их потенциальным местом его действия на иммунитет.

Лимфоциты пейеровых бляшек представляют собой смешанную популяцию, состоящую из 60% B-клеток, 25% T-клеток, 10% дендритных клеток (CD11c +) и менее 5% макрофагов или полиморфноядерных нейтрофилов (Lefrançois and Lycke, 1996; Jung et al., 2010). Хотя это верно для свежевыделенных клеток, мы использовали протокол стимуляции, специально способствующий пролиферации Т-клеток (Dwyer and Johnson, 1981). Таким образом, учитывая относительно длительный период культивирования с митогенами перед применением лекарств, различные субпопуляции Т-клеток, по-видимому, составляли большую часть изученной культуры.

Существенные доказательства, накопленные за последние годы, предполагают, что связь между дыхательными путями и кишечной иммунной системой критически важна для противовирусной защиты хозяина. С одной стороны, респираторные вирусы могут вызывать повреждение кишечника, как при гриппе (Wang et al., 2014) или, в последнее время, при SARS-CoV-2 (Scaldaferri et al., 2020). Инфицированные эпителиальные клетки могут представлять вирусные антигены, чтобы способствовать клеточному иммунитету (Nguyen et al., 1998). В то же время иммунная система кишечника, в первую очередь пейеровский бляшек, является важным местом эмиграции лимфоцитов (Rothkötter et al., 1999; Heidegger et al., 2013). Следует отметить, что дендритные клетки составляют до 4% иммигрирующих клеток (Rothkötter et al., 1999). Основываясь на существующих связях между микробиотой, кишечной иммунной системой и общей устойчивостью хозяев к инфекции (Ichinohe et al., 2011; Clemente et al., 2012), было предложено несколько стратегий с использованием модификации диеты или прямого внедрение некоторых штаммов комменсальных бактерий (Villena et al., 2012; Goto et al., 2013; Illiano et al., 2020).Интересно, что результаты вакцинации против гриппа зависят от зондирования комменсальной микробиоты с помощью TLR (Oh et al., 2014), поэтому разрабатываемые оральные вакцины против гриппа напрямую используют лиганды TLR в качестве адъювантов (Lycke, 2012). Более того, некоторые полисахариды были предложены в качестве адъювантов для пероральных вакцин (Smet et al., 2013).

Гены, активируемые в лимфоцитах кишечника после инкубации с кагоцелом, включают несколько важных участников врожденного иммунного ответа, компонентов системы комплемента, систем противовирусной защиты и хемокинов.Хотя значение плазменной системы комплемента для иммунитета очевидно, важность недавно сообщенной экспрессии компонентов системы комплемента в Т-клетках не совсем ясна, но может быть связана с выживаемостью и дифференцировкой клеток (Hansen et al., 2018 ). Взаимодействие передачи сигналов от TLR и рецепторов к анафилатоксинам значительно изменяет иммунный ответ (Song, 2012). Меньше известно о значении экспрессии кининогена в лимфоцитах.Грас1, а. к.а. p21, является негативным регулятором клеточного цикла (Khanna et al., 2005), способным вызывать остановку клеточного цикла после активации TLR4 / TRIF как части противовирусного ответа (Mlcochova et al., 2020). Важно отметить, что H-Ras способен усиливать передачу сигналов интерферона (Chen et al., 2017). Белок теплового шока 27 кДа выполняет множество функций, при этом следует отметить, что после высвобождения во внеклеточное пространство HSP27 способен активировать NF-κB TLR4-зависимым образом (Shi et al., 2019).

Несколько генов, важных для миграции лимфоцитов или хемотаксиса, были среди генов-ответчиков в лимфоцитах, обработанных кагоцелом.Таким образом, CCL21, лиганд CCR7, активируется в PP-лимфоцитах, совместно стимулированных конканавалином A и Poly I: C, но не при стимуляции только конканавалином A. Важно отметить, что нарушение передачи сигналов CCL21 / CCR7 ослабляет иммунный ответ на множество вирусов, препятствуя миграции клеток и правильным взаимодействиям во время презентации антигена (Comerford et al., 2013). Рецептор 2 лейкотриена B4 — еще один активный медиатор клеточной миграции. Интересно, что хемотаксические эффекты лигандов TLR опосредуются этим рецептором (Lefebvre et al., 2010). После обработки кагоцелом лимфоциты PP экспрессировали больше РНК для TLR2, сенсора бактериальных липопротеинов и липотейхоевой кислоты. Одним из разнообразных лигандов этого рецептора является зимозан, грибковый β-глюкан (Sato et al., 2003). Однако известно, что TLR2 связывается с широким спектром лигандов и образует функциональные гетеродимеры с другими типами TLR и не-TLR молекул (Oliveira-Nascimento et al., 2012). Одним из партнеров димеризации TLR2 является TLR6, который также активируется в клетках, обработанных кагоцелом, вместе с 7 и 9, однако в меньшей степени по сравнению с TLR2.

IL23 — провоспалительный цитокин с многогранным действием на дифференцировку Т-клеток и продукцию INFγ (Guo et al., 2019). Как указано в обзоре (Novelli and Casanova, 2004), дефицит IL23 приводит к существенному снижению устойчивости к различным ДНК и РНК-вирусам, таким образом, индукция экспрессии IL23 является одним из очевидных положительных эффектов кагоцела для противовирусной защиты лимфоцитов. IFIT3 — это индуцированный интерфероном белок, также активируемый вирусной инфекцией и двухцепочечной РНК, способный ингибировать вирусную репликацию и инициацию трансляции, а также клеточную миграцию и пролиферацию (Fensterl and Sen, 2011).Сверхэкспрессии одного только IFIT3 было достаточно для подавления репликации вируса на модели свиней (Li et al., 2015). Другой ген, активируемый в PP лимфоцитах, обработанных кагоцелом, — это родственная дефенсину последовательность 1, богатый цистеином белок, специфичный для кишечника грызунов и не обнаруживаемый у человека (Andersson et al., 2012).

Белки устойчивости к миксовирусу 1 и 2 были активированы при лечении кагоцелом, что дает еще одно механистическое объяснение эффективности препарата. Эти GTPases ингибируют различные вирусы, блокируя ранние этапы репликации вируса (Haller et al., 2015). Рекомбинантный Mx-1, модифицированный для облегчения проникновения в клетки, был способен эффективно подавлять инфекцию гриппа in vitro и in vivo (Jung et al., 2019). Интересно, что белок MX может индуцироваться интерферонами как I, так и III типа (Haller et al., 2015). Из-за ограничений системы анализа экспрессии генов у нас нет экспериментальных данных об экспрессии интерферона III типа. Учитывая, что интерфероны типов I и III одновременно индуцируются TLR (Ank et al., 2008) и активация дектина-1 (Dutta et al., 2020), есть соблазн предположить, что интерферон III типа активизировался в обработанных кагоцелом клетках в нашем исследовании и опосредовал некоторые эффекты препарата. Еще одним компонентом клеточных систем противовирусной защиты, реагирующим на применение кагоцела, была 2–5′-олигоаденилатсинтетаза 2, фермент, способный прерывать репликацию вируса посредством активации РНКазы L и олигоаденилат-независимым образом (Kristiansen et al., 2010 ).

Ifna1 был одним из генов с наибольшим кратным изменением (> 5) в обработанных кагоцелом клетках по сравнению с контрольными PP-лимфоцитами.О подобном увеличении продукции интерферона, индуцированной кагоцелом, сообщалось ранее с использованием линий клеток человека (Вершинина и др., 2002). Противовирусные свойства интерферона изучаются годами, и поиск в PubMed «интерферон альфа И вирус» дает более 23 тысяч ссылок. Однако имеется больше информации об использовании интерферонов для лечения различных вирусных инфекционных заболеваний. Важно отметить, что потенцирующий эффект кагоцела на экспрессию Ifna был очевиден в присутствии лиганда TLR-3 poly I: C, что свидетельствует об участии дополнительных механизмов индукции интерферона.Сообщалось, что как dectin-1 (Dragicevic et al., 2012), так и рецепторы TLR2 (Vanhoutte et al., 2008) взаимодействуют с передачей сигналов TLR-3, чтобы значительно модифицировать функции лимфоцитов.

Примечательно, что большинство генов-ответчиков кагоцел, участвующих в противовирусной защите, были активированы только в лимфоцитах, костимулированных конканавалином А и поли I: C, тогда как в отсутствие дцРНК эти гены подавлялись в обработанных кагоцелом клеток по сравнению с контрольными лимфоцитами. Среди них следует указать Oasl, Il17, Ifit1 и Ccr1.Напротив, в клетках, стимулированных конканавалином А, РР-лимфоциты повышается регуляция Il5 под действием кагоцела, но не было обнаружено влияния на экспрессию этого цитокина в клетках, совместно стимулированных Con A и poly I: C. Другой интересной возможностью является участие аутокринной петли интерферона I типа в эффектах кагоцела. После активации рецепторов TLR, INFα может стимулировать клетку аутокринным образом через INFAR1 (Song et al., 2015), и, что важно, этот механизм, как сообщается, участвует в эффектах β-D-глюканов (Hassanzadeh- Киаби и др., 2017). Кроме того, интерферон типа I способен увеличивать продукцию IL10 различными типами иммунных клеток, стимулированных лигандами TLR (Gabryšová et al., 2014). Таким образом, повышенная продукция IL10 при обработке лимфоцитов Пейера с помощью кагоцела (рис. 1D) подтверждает участие INFα в реализации эффектов кагоцела.

Перед началом исследования мы предположили, что либо Toll-подобные рецепторы, либо рецептор дектина-1 могут опосредовать иммуномодулирующие эффекты кагоцела.В этом исследовании мы выполнили поиск основных молекул, опосредующих изменения в паттернах экспрессии генов. Среди кандидатов на опосредование действия кагоцела ключевые компоненты путей передачи сигналов TLR TRAF, Tab, TAK, IKKα и IKKβ, RIP и IRFs были идентифицированы с высокими баллами и низкими FDR, а экспрессия IRF3 и IFF7 была умеренно повышенной. регулируется кагоцелом (рис. 3). Идентификация пути IFNα, IFNβ / IFNAR / Tyk2 / Jak и его отдельных компонентов среди кандидатов подтверждает гипотезу об участии аутокринной петли интерферона в действии кагоцела на PP-лимфоциты.Далее, наши результаты подтверждают возможность участия рецептора дектина-1 в реализации эффектов кагоцела. Несмотря на то, что передача сигналов dectin-1 менее полно выяснена по сравнению с другими PRR (Tang et al., 2018), очевидно, что передача сигналов dectin и TLR2 тесно взаимодействует, опосредуя активируемый глюканами противогрибковый иммунитет (Brown, 2005). В подтверждение возможности активации дектина-1 кагоцелом SYK и ZAP-70 были идентифицированы среди кандидатов в главные молекулы. Более того, передача сигналов от обоих возможных рецепторов кагоцела сходится в оркестровке воспалительной реакции (Gantner et al., 2003). Наконец, костимуляция рецепторов TLR и Dectin-1 усиливает продукцию IL-10 (Gabryšová et al., 2014), обеспечивая одно из возможных объяснений повышенной продукции IL10, наблюдаемой в лимфоцитах, обработанных кагоцелом (рис. 1D).

Результаты нашего исследования суммированы на рисунке 4. Мы пришли к выводу, что лимфоциты Пейера, как важные игроки в противовирусной защите, могут быть доступны для кагоцела при пероральном приеме, что делает лимфоидную ткань кишечника вероятным местом для кагоцела. действие.Когда смешанная популяция PP-лимфоцитов подвергается действию кагоцела, лекарство предположительно связывается с рецепторами TLR2 и / или dectin-1, чтобы индуцировать передачу сигналов ниже по течению и активацию врожденного противовирусного ответа с возможным вовлечением аутокринной петли интерферона. Эти гены, активируемые лечением кагоцелом, участвуют в различных стадиях противовирусного и антибактериального иммунитета, начиная от определения патогена и модуляции иммунного ответа до эффекторных белков. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы проверить участие этих механизмов в иммуномодулирующем действии кагоцела.

РИСУНОК 4 . Возможный механизм действия кагоцела, как обобщено в результатах исследования. Элементы сети, выделенные жирным шрифтом, являются либо генами, активируемыми в лимфоцитах пейера, либо факторами транскрипции / главными регуляторами, идентифицированными с помощью инструментов биоинформатики.

Материалы и методы

Выделение лимфоцитов пейеровских бляшек

Пейеровские бляшки лимфоциты выделяли от самцов мышей BALB / c, как описано ранее (Lefrançois and Lycke, 1996).Вкратце, мышей гуманно умерщвляли, тонкий кишечник вырезали и помещали на лед. Полость кишечника промывали 20 мл ледяного PBS, и пятна Пейера подвергали микродиссекции под микроскопом и трижды промывали ледяным PBS с добавлением гентамицина (100 мкг / мл). Были объединены участки от 6-8 мышей.

Чтобы облегчить диссоциацию тканей, пластыри инкубировали в CMF (85% HBSS без Mg ²⁺, Ca ²⁺ и NaHCO ₃; 1xHEPES-бикарбонатный буфер и 5% FBS) на ротационном шейкере. 30 мин при 37 ° С.После этого ткань пропускали через сетчатый фильтр для клеток 70 мкм, суспензию осаждали (5 мин при 500 rcf) и трижды промывали CMF. Лимфоциты разделяли центрифугированием в 44% перколле, наслоенном поверх 80% перколла, в течение 20 мин при 600 rcf, четыре раза промывали в HBSS и ресуспендировали до 1 × 10 ⁶ / мл в RPMI 1640 с добавлением l-глутамина, 10% FBS. и 100 мкг / мл гентамицина. Для проверки количества жизнеспособных лимфоцитов клетки по-разному окрашивали йодидом пропидия (10 мкМ) и SYBR Green (1 мкМ), а количество живых клеток подсчитывали по микрофотографиям.В шести отдельных экспериментах в среднем 90 ± 3% клеток были жизнеспособными.

Культура лимфоцитов

Выделенные лимфоциты разделяли на две аликвоты и стимулировали 10 мкг / мл конканавалина A или комбинацией 10 мкг / мл конканавалина A и 10 мкг / мл агониста TLR-3 поли I: C. Для правильного отжига поли I: C нагревали 5 мин при 55 ° С и охлаждали до комнатной температуры в течение 1 ч. Стимулированные лимфоциты высевали в 24-луночные планшеты (SPL life Sciences, Южная Корея), 1.5 × 10 ⁶ клеток на лунку и инкубировали при 37 ° С в атмосфере 5% CO ₂ (инкубатор MCO-5AC, Sanyo, Япония).

Через 24 часа культивирования с митогенами к клеткам добавляли воду (H ₂ O) или 30, 100 или 300 мкг / мл кагоцела (Kag) в объеме 15 мкл (1: 100 об: v). Лимфоциты положительного контроля обрабатывали 300 мкг / мл лентинана (Lent) или 300 мкг / мл β-D-глюкана овса (βDGlu).

Образцы собирали через 24 и 72 часа инкубации с лекарственными средствами, по одной лунке на обработку, в каждую из двух временных точек.Клетки осаждали центрифугированием при 500 rcf в течение 5 мин. Культуральные среды собирали и замораживали при 80 ° С для последующего анализа содержания цитокинов, при этом клетки немедленно лизировали 500 мкл TRI Reagent в течение 20 мин на ротационном шейкере при комнатной температуре.

Таким образом, образцы экспрессии и продукция цитокинов для каждого из препаратов изучались в двух временных точках для каждого из двух протоколов стимуляции митогена. Всего было выполнено шесть независимых повторений этого дизайна.Концентрацию цитокинов измеряли во всех опытах, тогда как характер экспрессии генов исследовали только в трех последних прогонах.

ELISA

Культуральные среды анализировали на содержание INFα, INFγ, IL2, IL10 и TNFα с использованием наборов RnD в соответствии с инструкциями производителя.

Статистический анализ концентраций цитокинов проводился отдельно для каждого из протестированных препаратов с использованием трехфакторного дисперсионного анализа (факторы «Время», «Митоген» и «Лекарство») с Prism (v.8.0, GraphPad, США). Были проанализированы только основные эффекты и взаимодействия, которые считались значимыми при p <0,05.

Выделение РНК

Для достижения разделения фаз лизаты реагента TRI обрабатывали 1-бром-3-хлорпропаном (1:10 по объему), тщательно перемешивали и центрифугировали при 12000 rcf и 4 ° C в течение 15 минут. Водную фазу собирали и дополнительно очищали с использованием микронабор RNeasy (Qiagen, США) в соответствии с инструкциями производителя.Средний выход составил ≈800 нг на образец, как измерено с помощью флуорометра Qubit 4 (Invitrogen, США). Чистоту препаратов РНК анализировали с помощью NanoDrop (Thermo Scientific, США), и препараты с субоптимальным качеством (A ₂₆₀ / A ₂₈₀ <1,8, A ₂₆₀ / A ₂₃₀ <1,8) исключали из дальнейшего анализа. Повторные образцы из трех независимых опытов смешивали в равных количествах и хранили при -80 ° С до последующего анализа.

Анализ экспрессии гена

Анализ экспрессии генов выполняли с использованием панельных чипов nCounter Inflamutation мыши и анализировали с помощью программного обеспечения nCounter (NanoStiring Technologies, США) в соответствии с инструкциями производителя (Kulkarni, 2011).Вкратце, необработанные подсчеты были определены пороговыми значениями с использованием среднего значения плюс 2 стандартных отклонения встроенных отрицательных контрольных подсчетов индивидуально для каждого чипа. Затем подсчеты были нормализованы до коэффициента, полученного из подсчетов встроенных положительных контролей. Наконец, была применена вторая нормализация среднего геометрического экспрессии генов домашнего хозяйства для отдельных образцов.

Прогнозирование факторов транскрипции

В качестве следующего шага, отдельно для каждого тестируемого вещества, было рассчитано кратное изменение для каждого из генов-мишеней относительно уровня экспрессии в контрольном (обработанном физиологическим раствором) образце в соответствующий момент времени и выражается как log ₂.Гены с двукратным изменением экспрессии по сравнению с согласованным по времени контролем (обработанным физиологическим раствором) были названы генами-ответчиками (RG) и включены в дальнейший анализ. Факторы транскрипции, которые потенциально могут управлять экспрессией RG, были идентифицированы с использованием метода матрицы весовых коэффициентов. С этой целью были обнаружены сайты связывания факторов транскрипции в промоторной области (от -1,500 до +500 п.н. относительно сайта начала транскрипции) RG. Для этого координаты сайта начала транскрипции каждого исследуемого гена были идентифицированы с помощью пакета ‘biomaRt’ в среде R с использованием координат 5’UTR наиболее распространенной изоформы мРНК, оцененной с помощью Cufflinks (v.2.2.1, NIH) на основании данных секвенирования РНК Т-лимфоцитов CD ⁴⁺ Пейера (Visekruna et al., 2019). Поиск потенциальных сайтов связывания факторов транскрипции и анализ обогащения сайтов связывания в промоторных областях проводился для генов с повышенной и понижающей регуляцией отдельно по отношению к набору случайных 5000 промоторов генов, кодирующих белок, с использованием платформы GeneExplain («Search enriched TBFS in track ») и базу данных сайтов связывания транскрипционных факторов (TBFS) TRANSFAC v. 2020.2 (Koschmann et al., 2015). Вкратце, алгоритм ищет TBFS в промоторной области исследуемого и эталонного генов. Затем для исследуемого и эталонного генов рассчитывается количество промоторных областей, содержащих специфические TBFS, с последующим статистическим анализом с использованием точного критерия Фишера. Во время поиска TFBS пороговое значение матрицы позиционных весов (PWM) оптимизируется, чтобы максимизировать скорректированное кратное обогащение (отношение шансов с доверительным интервалом 99%). Сайты связывания факторов транскрипции с скорректированным кратным обогащением (отношение шансов с доверительным интервалом 99%), равным 1.1 и FDR <0,1 (критерий Фишера) считались значимыми.

Анализ онтологии генов

Функциональное обогащение генов-респондентов было исследовано относительно всего набора проанализированных генов (248 генов) с помощью инструмента PANTHER Overpresentation Test (выпущен 2020-07-28) с использованием полного биологического процесса GO и PANTHER Базы данных путей. Термины генной онтологии с p <0,05 (скорректированный биномиальный тест Бонферрони) считались значительно обогащенными.

Прогнозирование восходящих сигнальных путей и главных регуляторов

Наборы факторов транскрипции, полученные для генов с повышенной и отрицательной регуляцией для данной комбинации тестируемого вещества и временной точки, использовались в качестве входных данных для анализа восходящих сигнальных путей и главных регуляторов. (Платформа GeneExplain с базой данных Transpath v. 2020.2 и рабочий процесс «Поиск главных регуляторов в сетях»), как описано в (Koschmann et al., 2015). Поиск был выполнен с максимальным радиусом 10 шагов перед входным набором генов, и потенциальные главные регуляторы отфильтрованы с отсечкой: оценка> 0.2, FDR <0,05 и Z-оценка> 1,0 (где оценка отражает степень связи молекулы-регулятора с другими молекулами в базе данных и с входным списком; Z-оценка отражает специфичность каждой основной молекулы для входного списка; FDR представляет вероятность того, что молекула займет наблюдаемый или более высокий ранг по случайной случайности; FDR и Z-оценка рассчитывается на основе 1000 случайных результатов).

Материалы и реагенты

Гентамицин, Конканавалин А, RPMI-1640 с добавлением l-глутамина, HBSS, 10 × PBS и 1 М раствор натриевой соли HEPES были приобретены у ПанЭко (Россия).Percoll ^®, иодид пропидия, β-D-глюкан и калиевая соль полиинозин-полицитидиловой кислоты (Poly I: C) были приобретены в компании Sigma-Aldrich (Россия). SYBRGreen был приобретен в Lumiprobe (Россия). TRI REAGENT ^® был приобретен в Molecular Research Center, Inc. (США). Фетальная бычья сыворотка была приобретена в компании BioSera (Франция). Лентинан был приобретен у Toronto Research Chemicals (Канада). Набор RNeasy Micro Kit был приобретен в компании Qiagen (США). Кагоцел предоставлен компанией «НиарМедик Плюс» (Россия).

Заявление о доступности данных

Исходные материалы, представленные в исследовании, включены в статью / дополнительные материалы, дальнейшие запросы можно направить соответствующему автору.

Заявление об этике

Исследование на животных было рассмотрено и одобрено комиссией по биоэтике ООО «Институт митоинжиниринга МГУ» (Протокол № 143 от 11 марта 2019 г.).

Вклад авторов

Все перечисленные авторы внесли существенный, прямой и интеллектуальный вклад в работу и одобрили ее для публикации.

Финансирование

Исследование было проведено Институтом митоинжиниринга МГУ по контракту с ООО «Ниармедик». Частично финансирование было предоставлено Междисциплинарной научно-образовательной школой МГУ «Молекулярные технологии живых систем и синтетическая биология».

Конфликт интересов

Рецензент AZ заявил редактору о прошлом соавторстве с одним из авторов RZ.

Исследование выполнено Институтом митоинжиниринга МГУ по контракту с ООО «Ниармедик».Финансирующая организация, выступающая в качестве спонсора исследования, одобрила дизайн исследования, но не участвовала в сборе, анализе и интерпретации данных или принятии решения о публикации.

Примечание издателя

Все претензии, выраженные в этой статье, принадлежат исключительно авторам и не обязательно относятся к их аффилированным организациям или заявлению издателя, редакторов и рецензентов. Любой продукт, который может быть оценен в этой статье, или заявление, которое может быть сделано его производителем, не подлежат гарантии или одобрению со стороны издателя.

Благодарности

Авторы благодарят Ирину Савченко, Анфису Попову, Евгению Лагереву, Ольгу Фадееву и Екатерину Телятникову за техническую помощь при сборе данных. Биоинформатический анализ данных был выполнен Даниилом Поповым и Павлом Махновским из ИМБП РАН по контракту с Институтом митоинженерии МГУ. Рисунок 4 был создан с использованием Biorender. Авторы признательны доктору Руперту Холмсу за вычитку и редактирование рукописи.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: // www.frontiersin.org/articles/10.3389/fphar.2021.679511/full#supplementary-material

Ссылки

Andersson, M. L., Karlsson-Sjöberg, J. M. T., and Pütsep, K. L.-A. (2012). CRS-пептиды: уникальные защитные пептиды клеток Панета мыши. Mucosal Immunol. 5, 367–376. doi: 10.1038 / mi.2012.22