Диагноз амебиаза устанавливается при обнаружении: Протозойные болезни амебиаз (amebiasis)

Содержание

Протозоозы – что делать? Симптомы, анализы и лечение H-Clinic

17.12.2020

Протозойные заболевания или протозоозы — это заболевания, вызванные простейшими микроорганизмами. Такие инфекции могут быть системными (поражать весь организм) и кишечными (поражают желудочно-кишечный тракт). 

К системным протозоозам относятся малярия, бабезиоз, лейшманиоз, токсоплазмоз, трипаносомоз. 

В этой статье мы поговорим о простейших, которые поражают желудочно-кишечный тракт и вызывают кишечные инфекции.

Кишечные простейшие передаются фекально-оральным путем. Встречаются простейшие, а соответственно и инфекции, вызванные ими, по всеми миру, но наиболее широко распространены в областях с плохими санитарно-гигиеническими условиями и контролем за состоянием воды. Токсоплазмоз, кстати, тоже передается орально-фекальным путем, но при этом не поражает ЖКТ (подробнее по ссылке). Некоторые простейшие могут распространяться половым путем, например при орально-анальных контактах.

Несколько разновидностей простейших вызывают тяжелые инфекции у пациентов с ВИЧ-инфекцией в продвинутой стадии.

Наиболее важными кишечными протозойными патогенами являются лямблии и амебы, криптоспоридии, бластоцисты и др.

Многие патогенные и непатогенные микроорганизмы могут находиться в кишечнике в одно и то же время. При этом инфекции, вызванные кишечными простейшими, в большинстве случаев характеризуются либо бессимптомным течением, либо стертой клинической симптоматикой. Настороженность по поводу паразитарных заболеваний имеет место при хронических диареях, кожных высыпаниях неясной этиологии, в некоторых случаях при длительно сохраняющейся эозинофилии в крови. 

Постановка диагноза основывается на сборе эпидемиологического анамнеза, на выявлении симптомов и физикального обследования, а также на результатах лабораторного исследования кала на простейшие, а при наличии возможностей — на антигены возбудителей (криптопроридии, амебы, лямблии) или выявление генетического материала простейших с помощью молекулярно-генетических методов.

Микроскопический анализ кала является скрининговым методом диагностики, но может потребовать повторных исследований, методов концентрации и специальных окрашиваний. Наиболее информативным в этом плане может быть анализ трехдневного кала с применением специальных методов обогащения, с интервалом в две недели при первом отрицательном результате. Два последовательных отрицательных результата исследования кала на я/гельминтов и простейшие с интервалом в 14 дней позволяют исключить паразитарную (и глистную) инвазию, и дообследоваться в другом направлении.

Entamoeba histolytica/E. dispar.

Кишечный амебиаз распространен повсеместно, преимущественно в Центральной Америке, западной Южной Америке, Западной и Южной Африке и на индийском субконтиненте. В развитых странах большинство случаев происходит среди недавних иммигрантов и туристов, вернувшихся из эндемичных областей. Амебиаз является третьей по распространенности причиной смерти от паразитозов после малярии и шистосомоза.

 

Разновидностей амеб множество, но наиболее часто выявляются E.histolytica и E. dispar. Принято считать, что E.dispar непатогенна, но при ее выявлении в совокупности с клинической картиной заболевания, необходимость лечения рассматривается индивидуально.

Человек инфицируется при заглатывании цист с пищей или водой, или при оральных сексуальных контактах. После попадания в организм человека из цисты выходит трофозоит, который по мере продвижения по кишечнику может либо проникать в ткани кишечника, либо выводиться с калом (как в виде цист, так и в виде трофозоитов). Для заражения опасны только цисты.

В 90% случаев течение болезни бессимптомное. Если все же есть клиническая картина, то она может варьировать от легкой диареи до тяжелой дизентерии (боль в животе, диарея с кровью и слизью, снижение веса, повышение Т тела) и даже вызывать опасные осложнения: перфорацию кишечника, кишечные кровотечения и др. К факторам риска тяжелого течения относятся молодой возраст, беременность, лечение кортикостероидами, злокачественные новообразования, недоедание и алкоголизм, а также ВИЧ-инфекция.

Амебная инфекция может стать хронической и проявляться в виде диареи с болью в животе, слизью, метеоризмом, потерей веса. Могут обнаруживаться безболезненные, пальпируемые скопления — амебомы — по ходу толстого кишечника. 

При внекишечном амебиазе наиболее часто поражается печень (абсцесс печени). Симптомы включают боль или дискомфорт в области печени, иррадиирующие в правое плечо, неустойчивую лихорадку, потливость, озноб, тошноту, рвоту, слабость и потерю веса. Абсцесс может перфорировать в поддиафрагмальное пространство, правую плевральную полость, правое легкое, перикард. 

Основным методом диагностики, помимо общеклинических исследований (при которых можно обнаружить лейкоцитоз, эозинофилию, повышение СОЭ, повышение уровня трансаминаз печени и др.) является микроскопия кала. При этом 3х-кратное исследование повышает чувствительность до 95%. Чувствительностью до 100% обладают иммунохроматографические методы, основанные на выявлении антигена амеб в кале, кроме того они позволяют дифференцировать E. dispar и E.Histolytica. Так же могут использоваться молекулярно-генетические методы — ПЦР, и серологические методы — определение наличия антител к амебам, но серологические данные нельзя интерпретировать отдельно от других.

Из инструментального обследования информативным может быть колоноскопия, при которой выявляются характерные изъязвления стенки кишечника, а дальше проводится биопсия и гистологическое исследование материала, где могут быть выявлены трофозоиты амеб.

При подозрении на внекишечный амебиаз используют Р-графию органов грудной клетки, УЗИ органов брюшной полости, КТ с контрастированием или МРТ. 

Лечение проводится только после лабораторного подтверждения диагноза. И оно включает в себя несколько схем последовательно применяемых противомикробных препаратов (действующих как на ткани кишечника, так и в просвете кишечника), в зависимости от тяжести заболевания, формы (кишечная или внекишечная), индивидуальной непереносимости препаратов и другого-другого-другого.

Giardia duodenalis.

Лямблиоз не менее широко распространен — лямблии наиболее часто обнаруживаются при исследовании кала. Пути передачи те же, инфицирование происходит при проглатывании цист. После попадания в организм из цист выходит трофозоит, который паразитирует в тканях тонкой кишки, дозревает, а затем выводится в окружающую среду с калом в виде цист.

Характер клинических проявлений у человека, вероятно, зависит от ряда факторов, включая вирулентность изолята, паразитарную нагрузку и иммунный ответ хозяина. Половина переносит без симптомов, 15 процентов выделяют цисты без симптомов (бессимптомная инфекция встречается как у детей, так и у взрослых, а бессимптомное выделение кист может длиться шесть месяцев и более), 35-45% отмечают клинические симптомы острой или хронической инфекции. 

Острый лямблиоз: диарея, недомогание, стеаторея, спазмы в животе и вздутие, метеоризм, тошнота, снижение веса, рвота, лихорадка, запор, крапивница.

Симптомы обычно развиваются после инкубационного периода от 7 до 14 дней. Возникновение острых желудочно-кишечных симптомов в течение одной недели после контакта вряд ли может быть связано с инфекцией Giardia . Симптомы могут длиться от двух до четырех недель.

Симптомы хронического лямблиоза могут включать: жидкий стул, но обычно не диарея, стеаторея, потеря веса (от 10 до 20 процентов веса тела), мальабсорбция, задержка роста, недомогание, усталость, депрессия, спазмы в животе, метеоризм, отрыжка. Проявления могут усиливаться и уменьшаться в течение многих месяцев.

Нарушение всасывания может быть причиной значительной потери веса, которая может возникнуть при лямблиозе. Даже в случаях бессимптомной инфекции может возникнуть нарушение всасывания жиров, сахаров, углеводов и витаминов. Это может привести к гипоальбуминемии и дефициту витаминов A, B12 и фолиевой кислоты. Приобретенная непереносимость лактозы встречается примерно у 40 процентов пациентов — клинически это проявляется обострением кишечных симптомов после употребления молочных продуктов.

Восстановление может занять много недель даже после избавления от паразита. 

Осложнения: мальабсорбция, потеря веса, у путешественников длительная диарея, у детей может привести к задержке роста. Редко — сыпь, крапивница, афтозные язвы и реактивный артрит или синовит, холецистит, холангит или гранулематозный гепатит. При этом лямблиоз не ассоциирован со смертностью даже у иммунокомпрометированных лиц.

Диагностика  основана на обнаружении простейших (трофозоитов или цист) при микроскопии кала, на выявлении антигена лямблий в кале иммунохроматографическими методами, обнаружении генетического материала методом ПЦР. При подозрении на лямблиоз и получении 5 негативных результата исследования кала необходимо рассмотреть возможность исследования дуоденального содержимого. Стоит помнить, что на обнаружение паразита могут влиять прием антибактериальных, антацидных препаратов, а также обследования с использованием контрастных веществ.

Лечение проводится только при лабораторном подтверждении диагноза и при наличии клинических проявлений заболевания, лечение бессимптомных носителей осуществляется в случае, если они контактируют с беременными, с больными муковисцидозом, если это дети, посещающие ДДО или работники пищевой промышленности.

Спорообразующие простейшие (Cryptosporidium parvum, Isospora belli, Cyclospora cayetanensis, Mycrosporidia)

Жизненный цикл для всех спорообразующих простейших одинаков и начинается после проглатывания спор, из которых в тонком кишечнике высвобождаются спорозоиты и начинают активно размножаться в энтероцитах, а затем способствуют развитию новых спор, выделяющихся с калом после гибели энтероцитов. При паразитировании данных микроорганизмов значительно страдает архитектоника ворсинок, что нарушает всасывание. 

Из всех спорообразующих наиболее изучены криптоспоридии — о них и пойдет речь.

Cryptosporidium spp.

Путь передачи — фекально-оральный, инфицирование при проглатывании цист с водой, пищей, от человека к человеку, от животных к человеку. Факторами риска тяжелого течения могут быть ВИЧ-инфекция, трансплантация органов, дефицит IgA, гипогаммаглобулинемия и прием иммунодепрессантов.

В 30% случаев встречается бессимптомное течение. У пациентов, у которых развиваются симптомы, инкубационный период обычно составляет от 7 до 10 дней (от 2 до 28 дней). Диарея, связанная с криптоспоридиозом, может быть острой или хронической, кратковременной, прерывистой или непрерывной, скудной или обильной, с водянистым стулом до 25 л/день. Часто пациенты отмечают недомогание, тошноту и анорексию, спастические боли в животе и субфебрильную температуру. У иммунокомпетентных людей болезнь обычно проходит без лечения в течение 10–14 дней, хотя может сохраняться дольше или рецидивировать после первоначального улучшения. У людей с ослабленным иммунитетом криптоспоридиоз может стать хроническим изнурительным заболеванием с постоянной диареей и значительным истощением. Наиболее подвержены риску люди, живущие с ВИЧ, не принимающие антиретровирусную терапию и имеющие низкий уровень СД4+ менее 100-50кл/мкл. 

Диагностика основана на выявлении микроорганизмов при микроскопии кала, выявлении их генетического материала методом ПЦР, обнаружение антигенов криптоспоридий в фекалиях, гистологическом исследовании биоптатов слизистой оболочки кишечника.  

Если пациент с иммунодефицитом, то лечение может вызвать некоторые трудности — чаще это длительная, комбинированная терапия, которая может не дать желаемых результатов. При наличии ВИЧ-инфекции у пациента следует незамедлительно начать антиретровирусную терапию, в некоторых случаев этого бывает достаточно, но все же иногда необходимо добавить и противопаразитарные препараты.

У иммунокомпетентных лиц лечение криптоспоридиоза не требуется, если только клинические проявления не длятся более двух недель. 

Blastocystis hominis

Распространен повсеместно. Фекально-оральный путь передачи. У людей паразитирует в толстом кишечнике, чаще встречается у пациентов с ВИЧ-инфекцией. Патогенез развития заболевания изучен не до конца. Вопрос о том, действительно ли этот паразит является патогеном для человека, остается спорным. Выделение этого паразита с диареей у пациентов с трансплантацией почек и другими иммунодефицитами коррелирует, но практически не связано со смертностью. У людей с ВИЧ-инфекцией и бластоцистозом симптомы исчезают самопроизвольно или подтверждается другая их этиология. 

Клинические проявления при бластоцистозе могут включать: диарею, тошноту, анорексию, спазмы в животе, вздутие живота, метеоризм, крапивницу и усталость. Обычно описывается водянистая диарея (может быть острой или хронической). Лихорадка обычно отсутствует.

Диагностика — микроскопия и ПЦР-исследование кала, а также культуральные методы.

Пациенты с обнаруженными бластоцистами в кале и без клинических проявлений не нуждаются в лечении. Если все же есть клинические проявления, то необходимо исключить другую их этиологию, и только в случае исключения другой этиологии рассматривается вопрос о лечение.

Balantidium coli

Балантидиаз человека наиболее распространен в тропических и субтропических регионах и развивающихся странах. Путь передачи фекально-оральный, при заглатывании цист при употреблении зараженной пищи или воды. Источником инфекции являются свиньи. Эксцистация происходит в тонкой кишке, паразит колонизирует подвздошную и толстую кишки, могут проникать в ткани, цисты формируются в просвете кишечника и выделяются с калом. 

Большинство случаев протекает бессимптомно. Риск развития симптомов увеличивается при сопутствующей инфекционной патологии. Симптомы могут включать тошноту, рвоту, потерю веса, боль в животе и заметную диарею с примесью крови. Фульминантное течение заболевания с перфорацией кишечника возникает редко.

Диагноз инфекции B. coli устанавливается путем обнаружения трофозоитов или цист при исследовании кала или соскобах слизистой оболочки, полученных при колоноскопии или ректороманоскопии.

Оптимальный подход к лечению балантидиаза неясен. В целом, лечение целесообразно при симптоматическом течении инфекции. Если симптомы не исчезают после проведенной терапии, необходимо повторить исследование кала для исключения другой этиологии.

Dientamoeba fragilis

Ранее считалась комменсалом. Путь передачи фекально-оральный, инфекция ассоциирована с энтеробиозом. 

Инфекция может быть симптоматической или бессимптомной. Общие симптомы включают боль в животе, острую и рецидивирующую диарею, тошноту, рвоту, метеоризм. D. fragilis может проявляться периферической эозинофилией и/или эозинофильным колитом. Диарея обычно длится 1-2 недели, тогда как боль в животе может сохраняться в течение 1-2 месяцев. Из-за очень высокой связи с острицами у некоторых пациентов также может проявляться анальный зуд, инфекции нижних мочевыводящих путей. 

Диагноз ставится путем обнаружения трофозоитов при микроскопии образцов стула или с помощью молекулярно-генетических методов.

У бессимптомного человека обычно не требует лечения, но инфекции, вызванные D. fragilis, следует лечить, если организм обнаруживается как единственный патоген в образцах стула пациентов с абдоминальной болью или диареей более 1 недели.

Непатогенные простейшие

Несколько непатогенных простейших обитают в кишечном тракте и могут быть идентифицированы в образцах стула, отправленных в клиническую лабораторию для исследования яиц и паразитов. Поскольку диагностическая лаборатория может сообщить об этих непатогенных паразитах, важно уметь различать организмы, требующие лечения, и организмы, которые этого не требуют.

Непатогенные простейшие можно разделить на две группы: амебы и жгутиковые. 

К непатогенным амебам относятся:

  • Endolimax nana

  • Entamoeba bangladeshi

  • Entamoeba coli

  • Entamoeba dispar

  • Entamoeba gingivalis

  • Entamoeba hartmanni

  • Entamoeba Pocki

  • Entamoeba moshkovskii

  • Iodamoeba bütschlii

К непатогенным жгутикам относятся:

  • Chilomastix mesnili

  • Trichomonas hominis

Перечисленные выше непатогенные амебы и жгутиконосцы являются кишечными организмами, за исключением E. gingivalis , который не является кишечным организмом; он встречается вокруг зубов (альвеолярная пиорея), в криптах миндалин, а также в мазках из влагалища и шейки матки у женщин с внутриматочными спиралями.

Вот и подошел к концу казалось бы бесконечный обзор простейших, которые могут вызвать поражение ЖКТ. Самое время подвести итог.

Профилактика кишечных заболеваний, вызываемых простейшими, по большому счету сводится к гигиене рук и употреблении в пищу термически обработанных продуктов, а также бутилированной воды либо воды после термической обработки. 

Кал на я/гельминтов и простейшие — это наиболее простой и доступный метод диагностики при подозрении на паразитарные заболевания, но информативность метода существенно увеличивается при повторных исследования, а также при применении методов обогащения и концентрации.

В большинстве случаев лечение проводится только после лабораторного подтверждения диагноза. Но даже при обнаружении в кале некоторых простейших не всегда необходимо проведение противопаразитарного лечения, поэтому будьте внимательны, не занимайтесь самолечением! Интерпретацию результатов обследования должен осуществлять врач в совокупности с оценкой клинических проявлений заболевания.

Услуги, упомянутые в статье*:

  • Микроскопическое исследование кала на яйца, личинки гельминтов и простейшие с применением специального метода обогащения (А26.19.011.001.s02)

  • Микроскопическое исследование дуоденального содержимого на яйца и лечинки гельминтов и простейшие (А26.16.002.s01)

  • Микробиологическое (культуральное) исследование фекалий на дизентерийную амебу (Entamoeba hystolityca) (А26.14.007.s01)

  • Микробиологическое (культуральное) исследование фекалий на бластоцисты (Blastocystis spp. ) (А26.19.010.s03)

  • Определение антигенов криптоспоридий (Cryptosporidium parvum) в образцах фекалий (А26.19.036)

  • Определение антигенов лямблий (Giardia lamblia) в образцах фекалий (А26.19.03)

  • Иммунохроматографическое исследование кала на дизентерийную амебу (Entamoeba hystolityca) (А26.19.098.s01)

  • Экспресс-исследование кала на скрытую кровь иммунохроматографическим методом (А09.19.001.001)

*Назначение и интерпретация результатов анализов должны проводиться только лечащим врачом. Уточнить детали можно по телефону +7 (495) 120-42-12

Автор: врач-инфекционист Университетской клиники H-Clinic Анастасия Александровна Коновалова.

Медицинский редактор: руководитель Университетской клиники, к.м.н., врач-инфекционист Коннов Данила Сергеевич.


Возврат к списку

Амебиаз легких — причины, симптомы, диагностика и лечение

Амебиаз лёгких – это инфекционное заболевание, вызываемое простейшими микроорганизмами (дизентерийной амёбой), характеризующееся развитием воспаления и образованием абсцессов в лёгочной ткани. Проявляется одышкой, кашлем с кровянистой мокротой, лихорадкой и болями в грудной клетке. Диагноз выставляется на основании данных лучевого исследования, обнаружения возбудителя лабораторными методами. При амебиазе назначается консервативная терапия препаратами с антипротозойной активностью, антибактериальными средствами. При формировании хронических абсцессов лёгких, эмпиеме плевры выполняется оперативное лечение.

Общие сведения

Амебиаз лёгких нечасто встречается как самостоятельная патология и обычно является осложнением более распространённой кишечной формы заболевания. Единичные случаи легочных поражений наблюдаются повсеместно. Заболеваемость значительно выше в условиях субтропического и тропического климата. Инфекция регистрируется круглогодично, в жаркое время года количество заболевших несколько увеличивается. Основную массу пациентов составляют лица мужского пола в возрасте от 20 до 60 лет. Соотношение количества заболевших мужчин и женщин составляет 9:1. В группу риска по заболеваемости амебиазом входят лица с иммуносупрессией любой этиологии, в том числе, беременные и женщины в послеродовом периоде.

Амебиаз легких

Причины

Амебиаз относится к протозойным антропонозным инфекциям. Возбудителем болезни является гистолитическая (дизентерийная) амёба, обладающая способностью существовать в вегетативных формах — большой вегетативной, тканевой, просветной и предцистной — и в виде цист. Инцистирование защищает амёбу от вредного внешнего воздействия. Пребывая в вегетативной форме, простейшие размножаются, распространяются по организму, формируя очаги в различных органах, в т. ч. в легких. Механизм передачи болезни – фекально-оральный. Источником инфекции является больной амебиазом или цистоноситель. Здоровый человек заражается через продукты питания, воду, предметы личного обихода. Возможен контактный способ инфицирования. Переносчиками цист нередко являются тараканы, мухи и некоторые другие насекомые.

Патогенез

Заражение происходит при заглатывании цист. Инцистированным дизентерийным амёбам не вредит кислая среда желудка. Они попадают в тонкий кишечник, где цисты преобразуются в предцистные и просветные вегетативные формы. В слепой кишке и восходящем отделе толстого кишечника простейшие активно размножаются. Они трансформируются в большую вегетативную форму, способную к передвижению и высвобождению ряда протеолитических ферментов. Благодаря этим способностям большая вегетативная амёба внедряется в стенку кишечника, где в дальнейшем персистирует в виде тканевой формы. Лимфогенным или гематогенным путём такая вегетативная форма попадает в дыхательную систему и вызывает лёгочный амебиаз. Поражение лёгких также развивается в случае прорыва амёбного абсцесса печени в плевральную полость.

При патоморфологическом исследовании выявляются множественные участки инфильтрации и абсцессы в альвеолярной ткани. Чаще поражается нижняя доля правого лёгкого. В центре амёбного абсцесса имеется участок некроза лёгочной ткани желатиноподобной консистенции. По периферии располагается зона перифокального воспаления. В некротизированной части можно обнаружить возбудителя болезни. В плевральной полости выявляется экссудат, нередко гнойного характера.

Симптомы амебиаза лёгких

Клиническая картина в начале заболевания во многом зависит от пути распространения инфекции. Лёгочным проявлениям часто предшествует типичная для дизентерии диарея или признаки поражения печени. На фоне субфебрильной лихорадки и болей в правом подреберье появляется кашель с мокротой. Откашливается коричнево-красное (цвета «анчоусного соуса») бронхиальное содержимое. Иногда при наличии желчно-бронхиального свища наблюдается окрашивание мокроты желчью в жёлто- зелёный цвет. К болям в области печени присоединяется выраженная торакалгия, тяжесть в груди, затруднение дыхания. Одышка возникает при небольших физических нагрузках. Субфебрильная температура тела периодически поднимается до высоких цифр и сопровождается ознобом.

Нередко присутствуют признаки поражения верхних дыхательных путей, явления язвенного глоссита. Больного беспокоят усиливающиеся при дыхании и кашле загрудинные боли, осиплость голоса, дискомфорт и чувство жжения в ротовой полости. На языке имеются многочисленные покрытые белым налётом язвочки. После удаления налёта такие язвы легко кровоточат. Изредка при лимфо – или гематогенном заносе дизентерийных амёб нарушение функции органов дыхания возникает на фоне полного здоровья. Появляются симптомы вялотекущей очаговой бронхопневмонии. Возникает стойкий субфебрилитет, кашель со слизистой или кровянисто-слизистой мокротой, умеренная одышка.

Осложнения

При отсутствии соответствующего лечения на месте очагов лёгочного воспаления формируются хронические абсцессы. Дренирование лёгочных и поддиафрагмальных абсцессов в полость плевры является причиной эмпиемы или пиопневмотораса. Очень часто формируются бронхиальные свищи (бронхо-плевральные, бронхо-печёночные), утяжеляющие течение основного заболевания. Их существование может привести к развитию сепсиса, тяжёлого аррозивного кровотечения, амилоидоза. Лёгочный амебиаз нередко осложняется возникновением перикардита с последующей тампонадой сердца.

Диагностика

Диагностируют амебиаз врачи-инфекционисты. Пациенты с лёгочными проявлениями заболевания нуждаются в консультации пульмонолога и торакального хирурга. При опросе уточняется наличие диареи в анамнезе, пребывание в регионах с жарким климатом, возможность контакта с больными амёбной дизентерией. Для подтверждения диагноза выполняются следующие диагностические мероприятия:

  • Физикальное исследование. Перкуссия грудной клетки помогает выявить участки резкого притупления перкуторного звука в проекции скопления экссудата или уплотнения лёгочной ткани. Там же выслушивается ослабление дыхания, вплоть до полного отсутствия дыхательных шумов. При аускультации также можно выслушать крепитацию, сухие и разнокалиберные влажные хрипы.
  • Рентгенография. В зависимости от путей распространения инфекции и длительности течения на рентгенограммах легких выявляются разнообразные симптомы. Определяются зоны инфильтрации лёгочной ткани и абсцессы с полостью деструкции и горизонтальным уровнем жидкости. Гомогенное затенение в нижнем лёгочном поле с косой линией Дамуазо свидетельствует о наличии плеврального выпота. Нередко наблюдаются частичная релаксация правого купола диафрагмы, а также признаки пиопневмоторакса.
  • Лабораторные анализы. В анализе крови выявляется лейкоцитоз, левый сдвиг лейкоцитарной формулы, ускорение СОЭ, повышение острофазовых показателей. При исследовании мокроты, плеврального экссудата иногда обнаруживаются тканевые формы дизентерийной амёбы. В целях диагностики используются серологические реакции (ИФА, реакция связывания комплемента, РНГА).

Лёгочный амебиаз необходимо дифференцировать с туберкулёзными изменениями, злокачественными новообразованиями органов дыхания, гнойно-деструктивными процессами в лёгких. Таких пациентов консультируют фтизиатры и онкологи. Нередко окончательный диагноз устанавливается только при исследовании патологического материала после хирургического вмешательства.

Лечение амебиаза лёгких

Ведение пациентов с амебиазом любой локализации осуществляет врач-инфекционист. Все больные с внекишечными проявлениями нуждаются в специализированной стационарной помощи. Пациенты с тяжёлыми осложнениями госпитализируются в реанимационное отделение. На начальных стадиях лёгочный амебиаз поддаётся консервативной терапии. Используются следующие основные группы лекарственных средств:

  • Амебицидные препараты. Назначаются тканевые и универсальные противоамёбные средства. Широко применяемый в терапии амебиаза солянокислый эметин обладает высоким амебицидным действием в отношении тканевых вегетативных форм, может использоваться в режиме монотерапии. Его недостатком является выраженное токсическое действие на человеческий организм. Предпочтительнее назначать менее токсичные средства или их комбинации. В настоящее время препаратом выбора является метронидазол.
  • Антибиотики. Антибиотики тетрациклинового ряда назначаются при наличии сопутствующих кишечных проявлений болезни для изменения состава микробиоты. Присоединение вторичной бактериальной инфекции при гнойной деструкции лёгкого, эмпиеме плевры является показанием для добавления в схему лечения антибактериальных препаратов широкого спектра действия.

Пациенты с хроническими лёгочными абсцессами, эмпиемой плевры, бронхоплевральными и печёночно-легочными фистулами нуждаются в хирургическом лечении. Выполняется экономная резекция лёгкого, лобэктомия или пульмонэктомия. Объём операции зависит от распространённости патологического процесса. При эмпиеме осуществляется дренирование плевральной полости, плеврэктомия с декортикацией.

Прогноз и профилактика

Диагностированный на раннем этапе амебиаз лёгких хорошо поддаётся консервативному лечению. Исход заболевания в этом случае обычно благоприятный. При присоединении лёгочных и внелёгочных осложнений прогноз становится серьёзным. Без своевременного хирургического вмешательства амебиаз, осложнённый пиопневмотораксом, перикардитом, лёгочным кровотечением, заканчивается летально. Индивидуальная профилактика сводится к строгому соблюдению правил личной гигиены. Общественные профилактические мероприятия направлены на своевременное выявление и лечение заболевших, санитарный контроль качества питьевой воды, продуктов питания.

Глоссарий

Острый инфаркт миокарда (ОИМ) – Острое нарушение кровотока в одной или нескольких коронарных артериях, что вызывает ишемию и некроз миокарда с развитием характерной ЭКГ- картины и повышением в крови специфичных для ИМ ферментов.

Основной причиной ОИМ является атеросклероз коронарных артерий. Ишемия возникает вследствие разрыва атеросклеротической бляшки и развитием тромбоза.

Другой причиной ОИМ является длительный спазм коронарных артерий (употребление кокаина), закупорка просвета этих артерий эмболом, травматические повреждения сердца и различные аномалии развития коронарных артерий и т.д. Все эти причины также могут привести к ишемии и развитию некроза миокарда.

Классификация ОИМ проводится по нескольким параметрам:

  • По времени возникновения выделяют первичный ИМ – он возникает в срок с начала болевого приступа до 28 дней.
  • Рецидивирующий ИМ – возникает в период от начала предыдущего ИМ и до 28 дней.
  • Повторный ИМ – развивается после 28 дней от начала предыдущего ИМ.
  • По локализации ОИМ, в зависимости от того, в какой коронарной артерии нарушен кровоток, может возникать в области верхушки, передней и боковой стенке левого желудочка (область кровоснабжения передней межжелудочковой ветви левой коронарной артерии, которая чаще всего поражается атеросклерозом). При поражении огибающей ветви левой венечной артерии, ОИМ возникает в области задней стенки левого желудочка и задних отделов межжелудочкой перегородки. ОИМ довольно редко возникает в правом желудочке и предсердиях, но имеет место быть.
  • По распространенности ОИМ делится на Q-инфаркт и инфаркт без-Q зубца.

По своему течению ОИМ проходит последовательно 2 стадии – некротическую и рубцевания.

Гистологическая картина некротической стадии: вся область инфаркта состоит из некротизированной ткани, которая отграничена от не вовлеченного в процесс миокарда зоной полнокровия и лейкоцитарным инфильтратом. Это так называемое демаркационное воспаление. Для этой стадии также характерно нарушение обменных процессов в окружающем зону некроза миокарде и нарушением нормального кровообращения в других органах.

Стадия рубцевания начинается в тот момент, когда в зоне некроза появляются молодые фибробласты. Благодаря макрофагам и ферментам фибробластам, происходит ферментативное расщепление некротизированной ткани и ее удаление. В замен образуется молодая грануляционная ткань, которая превращается в грубоволокнистую рубцовую.

Клиническая картина ОИМ может принимать разные формы.

Выделяют ангинозную форму, при которой основной жалобой является боль за грудиной, продолжительностью более 20 минут и не купируемая нитроглицерином. Иррадиация боли может быть в руки, челюсть, шею, спину и живот. Характер боли давящий, жгучий, интенсивный и зачастую нестерпимый.

Возможны, также, астматическая форма, коллаптоидная, аритмическая, церебральная, абдоминальная и безболевая (В 15-20% случаев.)

Диагностика ОИМ проводится исходя из клинической картины, ЭКГ, измерения уровня специфичных ферментов и других инструментальных исследований.

Лечение ОИМ является срочным и включает в себя купирование болевого синдрома, мероприятия направленные на реваскуляризацию миокарда, профилактику нового ИМ и ограничение зоны имеющегося ИМ.

К осложнениям ОИМ относят аритмии, ОСН, фибрилляция желудочков, острая или хроническая аневризма, разрыв сердца с его тампонадой, перикардит, шок и др.

ФАРМАТЕКА » Дифференциальная диагностика болезней кишечника в клинических примерах: кишечный амебиаз и иерсиниоз

Рассматриваются общие принципы дифференциальной диагностики язвенных поражений толстой кишки, требующей проведения достаточно широкого спектра исследований для уточнения характера патологии. В первую очередь исключаются злокачественные новообразования, затем воспалительные заболевания кишечника (болезнь Крона и язвенный колит), а также инфекционные болезни, при которых поражения кишечника сопровождаются образованием язв (туберкулез, сифилис, дизентерия, иерсиниоз, брюшной тиф). С образованием изолированных язв толстой кишки могут протекать и некоторые паразитарные кишечные болезни (шистосомоз, шигеллез, амебиаз). Приводятся два клинических случая, демонстрирующих сложность дифференциального диагноза: кишечный амебиаз и иерсиниоз. Подробно рассматриваются диагностические и лечебные мероприятия, проводившиеся на различных этапах течения этих заболеваний.

Многообразие генеза язвенных поражений толстой кишки определяет трудности дифференциальной диагностики и требует достаточно широкого спектра исследований для уточнения характера патологии. В первую очередь исключаются злокачественные новообразования, затем воспалительные заболевания кишечника (болезнь Крона и язвенный колит), а также инфекционные болезни, при которых поражения кишечника сопровождаются образованием язв (туберкулез, сифилис, дизентерия, иерсиниоз, брюшной тиф). Нередко встречаются язвы толстой кишки сосудистого генеза, что характерно для ишемического колита, системных васкулитов и лучевых поражений. Не следует забывать, что некоторые паразитарные кишечные болезни (шистосомоз, шигеллез, амебиаз) могут сопровождаться образованием изолированных язв толстой кишки.

В данной работе мы приводим два клинических случая, демонстрирующих сложность дифференциального диагноза: кишечный амебиаз и иерсиниоз.

Кишечный амебиаз

Амебиаз – это паразитарное поражение толстой кишки, вызываемое дизентерийной амебой (Entamoeba histolytica), которую впервые описал русский ученый Л.Ф. Леш в 1875 г. Для большинства пациентов характерно бессимптомное носительство, но могут развиваться хронические легкие формы диареи, а также тяжелые случаи заболевания. Выделяют семь видов амеб, которые в естественных условиях паразитируют в ротовой полости и кишечнике человека; однако только дизентерийная амеба является патогенной. Она существует в двух формах: подвижного трофозоита и цисты (рис. 1). Трофозоит – это паразитическая форма, обитающая в просвете и/или стенке толстой кишки. Размножается в анаэробных условиях; источником питания для дизентерийной амебы являются другие бактерии и тканевой субстрат. При амебной дизентерии трофозоиты отличаются крупными размерами (до 50 мкм в диаметре) и зачастую содержат фагоцитированные эритроциты на разной стадии переваривания, поэтому амебу также называют гематофагом или эритрофагом. Трофозоиты превращаются в цисты до момента выделения из кишечника. Цисты имеют хитиноподобную стенку, она обеспечивает им устойчивость к изменениям внешней среды, концентрациям хлора в системах водоснабжения и кислой среде желудочного сока [1].

Дизентерийная амеба может паразитировать у крыс, кошек, собак и приматов, но главным хозяином и резервуаром ее служит человек. Поскольку трофозоиты быстро погибают после выделения из кишечника, бессимптомные цистовыделители являются источником новых случаев инфекции; хронические носители могут выделять несколько миллионов цист в сутки. Инфицирующая доза обычно превышает 103, однако болезнь может возникнуть после заглатывания всего одной цисты. Возбудитель амебиаза передается фекально-оральным путем, обычно при непосредственных контактах человека с человеком. Кишечные и внекишечные (печеночные) формы инфекции поражают преимущественно мужчин, причем с такой частотой, что это трудно объяснить на основании различий в частоте контактов с источниками инвазии.

По сводным данным, 50 % жителей некоторых слаборазвитых стран, что составляет 10 % населения земного шара в целом, инфицированы дизентерийной амебой. Формы амебиаза, вызывающие ежегодно примерно 30 тыс. случаев смерти, встречаются в сравнительно немногих районах мира, чаще всего в Мексике, западных регионах Южной Америки, Южной Азии, а также в западных и юго-восточных районах Африки. Полагают, что это обусловлено одновременным наличием в этих географических регионах вирулентных штаммов дизентерийной амебы и санитарно-гигиенических условий, необходимых для их передачи [1].

Попав в пищеварительный тракт, цисты начинают делиться. В тонкой кишке оболочка цисты разрушается, высвобождая трофозоиты. Незрелые амебы достигают толстой кишки, где обитают в ее просвете, питаясь бактериями и остатками органических веществ. Почти постоянное наличие специфических гуморальных антител у носителей патогенных штаммов свидетельствует о том, что эти штаммы, как правило, проникают и заселяют ткани. Очевидно, что в инфекционном процессе играют роль как состояние организма хозяина, так и степень инфективности возбудителя. Повышению восприимчивости хозяина способствуют белковая дистрофия, употребление больших количеств углеводов, кортикостероидов, железа, а также беременность. Степень инфективности штаммов корелирует с их фагоцитарной активностью, продукцией коллагеназы, а также с иммуногенным цитотоксическим белком, устойчивостью к воспалительным реакциям со стороны организма хозяина и важнее всего – со способностью патогенных штаммов вызывать разрушение тканей хозяина при прямом клеточном контакте [1, 3]. Последний феномен начинается при прикреплении амеб с помощью лецитина к клеткам-мишеням. После этого наступает их цитолиз.

Характерным морфологическим субстратом этого паразитарного кишечного заболевания является изъязвление стенки толстой кишки. Небольшой участок поражения слизистой оболочки маскирует весьма значительную глубину некроза в подслизистом и мышечном слоях. Образовавшаяся язва имеет форму бутылки или пирамиды. Признаки острого воспалительного процесса при этом выражены слабо, и в отличие от поражений при бациллярной дизентерии участки слизистой оболочки в промежутках между изъязвлениями выглядят неизмененными. Локализация поражений в органах в порядке убывания частоты следующая: слепая и восходящая кишка, прямая и сигмовидная кишка, аппендикс и терминальный участок подвздошной кишки. При хроническом процессе в слепой и сигмовидной кишке могут сформироваться большие массы грануляционной ткани, так называемые амебомы [1, 2].

Варианты течения заболевания включают бессимптомное цистовыделение, кишечный амебиаз, амебиаз печени с развитием в ней абсцесса, плевропульмональный амебиаз и другие внекишечные поражения (мозг, перикард, селезенка).

Среди всех вариантов течения чаще встречается клинически выраженный кишечный амебиаз. У больных возникает перемежающийся зловонный, неоформленный или водянистый стул 1–4 раза в сутки. Фекалии иногда содержат примесь слизи и крови. Нарушения стула чередуются с периодами его нормализации, могут повторяться в течение нескольких месяцев или лет. Зачастую беспокоят метеоризм и схваткообразные боли в области живота. При пальпации слепой и восходящей кишки определяется умеренная болезненность. Ректороманоскопия и колоноскопия позволяют выявлять типичные изъязвления с участками неизмененной слизистой оболочки между ними. Диагноз устанавливается на основании обнаружения возбудителя в фекалиях или в биопсийном материале из язвы. При дифференциальной диагностике следует учитывать характер фекалий. В кроваво-слизистом кале цисты дизентерийной амебы, как правило, отсутствуют, но именно в нем могут быть обнаружены тканевые формы амеб (трофозоиты) [4]. Основная трудность исследования такого материала – нестойкость тканевой формы амебы, которая может разрушаться через 20–30 минут после дефекации. Собранный кал необходимо исследовать немедленно после дефекации. Гибель амеб в процессе хранения кала – основная причина гиподиагностики амебиаза. Если при обычной микроскопии кала амебы выделяются с большим трудом или имеется внекишечная форма, прибегают к иммуноферментным методам исследования крови больного. Одной из наиболее чувствительных является тест РПГА. Широко применяется прямой вариант РИФ, диагностическим считается титр 1 : 80 [4].

В некоторых случаях обнаруживаются обширное разрушение слизистой оболочки и подслизистого слоя толстой кишки, массивные кишечные кровотечения или перфорация стенки кишки с последующим развитием перитонита. Повторные тяжелые атаки в случае кишечной формы амебиаза могут приводить к развитию язвенного постдизентерийного колита. При этой форме заболевания амебы обычно не обнаруживаются в фекалиях и биопсийном материале, однако отмечаются резко положительные результаты серологических реакций. Пенетрация трофозоитов амеб в мышечный слой стенки кишечника может привести к образованию большой массы грануляционной ткани. Если патологический процесс охватывает всю окружность кишечной трубки, возникают явления частичной непроходимости. При пальпации определяется подвижное, болезненное, цилиндрическое образование. Такое осложнение, или амебома, чаще встречается в области слепой кишки. Наличие такого образования и рентгенологических признаков неравномерного сдавления стенок кишки, сужения просвета кишки может привести к ошибочному диагнозу аденокарциномы толстой кишки, болезни Крона с поражением слепой кишки, туберкулеза кишечника, дивертикулита, синдрома раздраженного кишечника [2].

Клинический случай

Примером сказанного является клиническое наблюдение больного с длительно недиагностируемым кишечным амебиазом и поражением слепой кишки.

Больной М. 1949 года рождения проживает в Московской области. В начале 1970-х гг. работал по контракту в Египте. В настоящее время работает станочником на деревообрабатывающем комбинате. В 1993 г. впервые появились боль в правой подвздошной области, общая слабость, потеря в весе, склонность к запорам, иногда примесь крови в фекалиях. С этими жалобами обратился к врачу лишь в 1995 г. При колоноскопии обнаружен продольный щелевидный рубец на задней стенке прямой кишки, а при ФГДС – язва луковицы 12-перстной кишки. Проведено лечение болезни с положительным эффектом. При повторной колоноскопии в феврале 1998 г. по месту жительства впервые выявлена язва слепой кишки. С подозрением на аденокарциному направлен в Московский областной онкологический диспансер, где диагноз не подтвердился.

В гастроэнтерологическом отделении МОНИКИ наблюдается с марта 1998 г. К этому времени боль в правой подвздошной области усилилась, приобрела постоянный характер, увеличилась примесь крови в фекалиях. Дифференциальный диагноз проводился между болезнью Крона с локализацией в слепой кишке, аденокарциномой толстой кишки, солитарной язвой толстой кишки неясного генеза. При обследовании – анемия: гемоглобин – 118 г/л, эритроциты – 3,74 ´ 1012/л, цветовой показатель –0,8; лейкоциты – 5,0 ´ 109/л, палочкоядерные нейтрофилы – 1 %, сегментоядерные нейтрофилы – 78 %, эозинофилы – 3,5 %, лимфоциты – 15 %, моноциты – 2,5 %, СОЭ – 2 мм/ч.

При ректороманоскопии патологические изменения в нижних отделах толстой кишки не выявлены. При рентгеноконтрастном исследовании кишечника (пассаж бариевой взвеси) тонкая кишка без патологических изменений. Колоноскопия 24.03.98: две язвы купола слепой кишки 0,7 ´ 0,6 см и 0,8 ´ 0,5 см с плотными краями, покрытые фибрином. В других отделах толстой кишки изменений нет. В биоптатах, взятых из краев язвенных дефектов, отмечается гиперплазия крипт с гроздьевидным их расположением, отек, лимфоплазмоцитарная инфильтрация с примесью эозинофилов. Заключение: нозологический диагноз по данному препарату затруднителен.

В связи с предположительным диагнозом болезни Крона больной получал в течение месяца сульфасалазин в дозе 4 г/сут без положительного клинического эффекта.

Контрольная колоноскопия 19.05.98: остается язвенный дефект округлой формы размерами 1,1 ´ 0,9 см с наложениями фибрина и выступающими краями на 1–2 мм, слизистая оболочка вокруг отечная, инфильтрированная. Гистологическое исследование препарата из дна язвы: картина хронического гнойного воспаления. На поверхности язвы и в щелях обширные скопления простейших (амебы?), вокруг них скопления эритроцитов. Местами простейшие резорбируют эритроциты (рис. 2, 3). При повторном анализе кала от 18.05.98 обнаружены простейшие, а 29.05.98 – цисты простейших. При повторной ФГДС – язвенная болезнь луковицы 12-перстной кишки в стадии ремиссии. При исследовании биопсийного материала и фекалий больного в Научно-исследовательском институте медицинской паразитологии и тропической медицины им. Марциновского найдены патогенные вегетативные формы Entamoeba histolytica. С диагнозом “кишечный амебиаз” больной направлен на лечение в Институт паразитологии. В течение двух месяцев проводился курс специфической терапии метронидазолом и интетриксом. При контрольном обследовании в сентябре 1998 г. язва слепой кишки зарубцевалась, и возбудитель в фекалиях не обнаруживался при повторных лабораторных пробах.

По данным литературы, при лечении больных с кишечным амебиазом соответствующими препаратами достигается быстрый и полный эффект. Иногда отмечаются рецидивы заболевания, поэтому в течение полугода после лечения ежемесячно рекомендуют проводить контрольные анализы фекалий. Повторные рецидивы трактуют как проявление реинвазии, развития осложнений, недостаточной эффективности специфической терапии или результат неправильной диагностики [1, 3]. Смертность при кишечном амебиазе не превышает 5 %.

Данное наблюдение демонстрирует многолетний латентный период болезни после вероятного инфицирования (1970–1993) и 5-летний период клинически выраженного заболевания (1993–1998). Относительная редкость амебной дизентерии как среди больных гастроэнтерологического профиля, так и в российской популяции в целом, отсутствие настороженности со стороны врачей и сходство клинико-эндоскопической амебиаза с другими заболеваниями (рак толстой кишки, болезнь Крона) затруднили быструю постановку правильного диагноза. Обращает на себя внимание тот факт, что гистологическая верификация диагноза стала возможной только на поздних стадиях заболевания при повторном исследовании. Приведенное наблюдение свидетельствует о необходимости включения кишечного амебиаза в дифференциальный ряд изолированных язвенных поражений толстой кишки. У таких больных целесообразно более пристальное гистологическое исследование биоптатов и раннее проведение специфических лабораторных тестов на наличие возбудителя.

Иерсиниоз

Труднодиагностируемые случаи иерсиниозного колита связаны с относительной редкостью этой инфекции во всем мире [5]. Инфекции, вызываемые Y. enterocolitica, наиболее широко распространены в Северной Европе и Северной Америке, но встречаются практически во всем мире и составляют приблизительно 1–3 % всех случаев острых бактериальных энтероколитов.

Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis – не ферментирующие лактозу грамотрицательные аэробные бактерии, являются представителями семейства энтеробактерий. Штаммы разных видов иерсиний могут быть дифференцированы между собой на основании серологических реакций и биохимических тестов, а также чувствительности к антибиотикам. Эти виды иерсиний вырабатывают W- и V-факторы вирулентности.

Кроме того, у Y. pseudotuberculosis вирулентность связана со способностью этого микроорганизма к внутриклеточному переживанию. Оба микроба продуцируют энтеротоксин, вызывающий пищевые токсикоинфекции. Хотя источник заболевания зачастую остается неустановленным, имеются сообщения о вспышках иерсиниоза, связанных с приемом пищи или воды. Наиболее часто наблюдается распространение инфекции от человека к человеку и от животных (грызунов) к человеку. В зависимости от возраста заболевшего проявления инфекции варьируются. У младенцев и детей раннего возраста преобладающим симптомом является острая водянистая диарея, продолжающаяся от 3 до 14 дней [7]. У 5 % детей в испражнениях выявляется кровь. У детей более старшего возраста и молодых людей отмечается симптомокомплекс с болями в правом нижнем квадранте брюшной полости, повышением температуры тела и лейкоцитозом, не отличимый от острого аппендицита.

У взрослых лиц, особенно женщин в возрасте старше 40 лет, через 1–2 недели после развития энтероколита может появиться узловатая эритема, которая заставляет проводить дифференциальный диагноз с язвенным колитом, болезнью Крона. У взрослых больных возможно развитие артритов, поражающих какой-либо один сустав (коленный, другие суставы конечностей) и возникающих на фоне энтероколита или независимо от него [5, 7].

Y. enterocolitica часто вызывает бактериемию, главным образом, у лиц, имеющих какое-либо сопутствующее заболевание (сахарный диабет, тяжелую анемию, цирроз или злокачественную опухоль). Для септицемической формы болезни характерны головные боли, лихорадка, боли в брюшной полости с диареей или без нее, развитие абсцессов в разных органах (селезенке, почках, легких, печени и др.) [5, 6].

Псевдотуберкулез, вызываемый Y. pseudotuberculosis, – редкое заболевание, заражение которым происходит от человека, домашних или диких животных, преимущественно при фекально-оральном механизме передачи [5]. Большинство случаев заболевания носит спорадический характер. Пик инфекции наблюдается в зимние месяцы и соответствует сезонному пику заболеваемости животных. После заглатывания возбудитель пенетрирует слизистую оболочку подвздошной кишки, проникает в илеоцекальные лимфатические узлы и вызывает острый мезентериальный аденит, сопровождающийся рвотой, болями в области живота и диареей. Как правило, наблюдаются высокий лейкоцитоз и лихорадка. При лапаротомии червеобразный отросток выглядит нормальным, но могут обнаруживаться увеличенные мезентериальные лимфоузлы и воспаление терминальных отделов подвздошной кишки, что заставляет думать о возможном диагнозе болезни Крона или висцерального туберкулеза. Осложнения у взрослых больных могут проявляться в виде артритов, узловатой эритемы и септицемии.

Для диагностики иерсиниоза используются микробиологические и серологические методы. Наилучшим материалом для диагностических исследований по выявлению возбудителей являются испражнения и сыворотка крови больных энтероколитом, атипичным аппендицитом, узловатой эритемой или реактивными артритами. Титры антител в реакции гемагглютинации достигают пиковых значений к 8–10-му дню болезни и остаются повышенными в течение 18 месяцев после выздоровления [5, 7].

Клинический случай

Больная Н. 16 лет наблюдалась в терапевтическом отделении МОНИКИ с 7.11.2005 с жалобами на повышение температуры тела до 38,2 °С, общую слабость, отсутствие аппетита, боли в левом плечевом суставе, левом подреберье, потерю в весе на 8 кг за 3 месяца.

С декабря 2004 г. отмечала повышение температуры тела до 37,2 °С без видимых причин, умеренное послабление стула. Резкое ухудшение состояния возникло 10 сентября 2005 г., когда появились выраженная слабость, повышение температуры тела до 38 °С, через 5 дней после этого – жидкий стул до 10 раз в сутки; лечилась дома по поводу гриппа. 16 сентября 2005 г. госпитализирована в инфекционное отделение по месту жительства, где на основании серологических тестов установлен диагноз – псевдотуберкулез, абдоминальная форма по типу мезентериального лимфаденита. РПГА с псевдотуберкулезным диагностикумом от 26.09.05 – титр АТ 1 : 800. Получала антибактериальную терапию, на фоне которой жалобы уменьшились, температура понизилась до 37,2 °С. Через неделю после выписки вновь появилась лихорадка до 38 °С, возникли боли в шее, отеки и боли в голеностопных суставах, узловатая эритема на коже голеней. Повторно обследована в инфекционном отделении, где впервые 1.11.05 при ультразвуковом исследовании брюшной полости выявлены очаговые образования в селезенке, однако псевдотуберкулез не подтвержден повторными серологическими методами. Направлена в терапевтическое отделение МОНИКИ, где в связи с отсутствием четких диагностических данных за иерсиниоз проводился дифференциальный диагноз между системным заболеванием соединительной ткани, малярией, туберкулезом, сепсисом с септическими очагами в селезенке, опухолевым поражением селезенки, в т. ч. иерсиниозом. В клиническом анализе крови обращали на себя внимание анемия – 107 г/л, лейкоцитоз – до 15,2 ´ 109/л, палочкоядерный сдвиг, тромбоцитоз – 569,2 тыс., увеличение СОЭ до 29 мм/ч. Биохимический анализ крови: снижение сывороточного железа до 1,2 мкмоль/л, повышение уровня С-реактивного белка до 48 мг/л. Выявлены изменения в иммунном статусе: циркулирующие иммунные комплексы (крупно- и среднемолекулярные) – 0,114 (норма 0,035–0,04), антинуклеарный фактор – 31,1 (норма менее 20 ЕД/мл). Возбудитель малярии не обнаружен. Повторные исследования на титры АТ к иерсиниям дали отрицательные результаты. Анализ кала на дизентерийную группу и простейшие отрицательный. Стернальная пункция: кроветворение нормобластическое. Ревматологические пробы – отрицательные.

Рентген-компьютерная томография (РКТ) брюшной полости от 13.12.05: картина многоочагового поражения селезенки (очаги размерами от 3–4 мм до 1,5 см, не накапливающие контрастное вещество). Высказаться однозначно о его генезе затруднительно. Почки, печень без изменений, лимфоузлы брюшной полости не увеличены.

РКТ органов грудной клетки: очаговых и инфильтративных изменений в легких не определено. Увеличенных лимфатических узлов в средостении и корнях легких не выявлено.

В декабре 2005 г. появился жидкий стул с примесью крови. При ректороманоскопии от 26.12.05 впервые выявлены изменения слизистой оболочки прямой кишки: утолщение, зернистость, отсутствие сосудистого рисунка, небольшая контактная кровоточивость, эрозии, местами сливающиеся в язвенные дефекты, покрытые фибрином.

Переведена в гастроэнтерологическое отделение МОНИКИ, где проводился дифференциальный диагноз между язвенным колитом и постинфекционным колитом на фоне хронической иерсиниозной инфекции. Назначена антибактериальная терапия (пефлоксацин 400 мг ´ 2 раза в день внутривенно капельно, метронидазол 500 мг ´ 3 раза в день внутривенно капельно), метилпреднизолон 250 мг внутривенно капельно 5 дней.

Результат серологического исследования сыворотки крови (в Центре гигиены и эпидемиологии Москвы) от 11.01.06: РПГА со штаммом Y. enterocolitica О5,27 – 1 : 10, остальные показатели отрицательные.

Ректороманоскопия в динамике 11.01.06: эрозивно-язвенного поражения в дистальном отделе толстой кишки не выявлено. РКТ брюшной полости в динамике от 11.01.06: появление “свежих” очагов низкой плотности диаметром от 4 до 7 мм – преимущественно в нижних отделах селезенки, а также отрицательная динамика ранее выявленных очагов в виде их увеличения, тенденции к слиянию или изменению формы очагов, положительная динамика – в виде уменьшения единичных очагов. По остальным паренхиматозным органам без динамики.

Колоноскопия 13.01.06: в толстой кишке и терминальной части подвздошной кишки грубой органической патологии не выявлено. Больная осмотрена фтизиатром и ревматологом, высказано предположение о хронической иерсиниозной инфекции. Достоверных данных за туберкулез органов брюшной полости и грудной клетки, системное заболевание соединительной ткани нет.

После проведенного дообследования в клинике гастроэнтерологии МОНИКИ установлен диагноз: “иерсиниоз”, осложненный септицемией и образованием множественных абсцессов селезенки. Хроническая железодефицитная анемия. На фоне массивной антибактериальной терапии, внутривенной дезинтоксикационной терапии состояние больной значительно улучшилось, нормализовалась температура тела, боли в животе, суставах исчезли, стул – один раз в день, оформленный без примеси крови, узловатой эритемы, отеков нет. В клиническом анализе крови отмечается умеренная анемия, лейкоцитоз – 11,3 ´ 109/л, СОЭ – 6 мм/ч. Больная выписана 17.01.06 для продолжения лечения в стационаре по месту жительства. Повторная консультация в МОНИКИ состоялась через месяц после выписки. При ультразвуковом исследовании брюшной полости очаги в селезенке не выявлены. Ректороманоскопия: в прямой кишке без патологических изменений.

По данным литературы, иерсинии чувствительны invitro к аминогликозидам, левомицетину, тетрациклину, цефалоспоринам третьего поколения, метронидазолу [5]. Однако эффективность антимикробной терапии не установлена, т. к. большинство энтероколитов излечивается самопроизвольно. В то же время больных с тяжелыми формами заболевания или септицемией необходимо лечить, т. к. в этих случаях высока смертность. Адекватное лечение может существенно сократить продолжительность заболевания и период освобождения организма от возбудителя [6, 7].

Приведенный клинический случай представлял значительные трудности для диагностики в связи с многообразием клинических симптомов, характерных для разных заболеваний. Несмотря на типичное для иерсиниоза начало заболевания и обнаружение диагностически значимого титра антител к иерсиниям, впоследствии эти антитела определялись непостоянно и в разных титрах, что затрудняло диагноз. Следует также отметить, что при болезни Крона с высокой частотой выявляются иерсиниозные и псевдотуберкулезные антитела, что с некоторой долей вероятности позволяет предполагать инфекционную природу данного заболевания. Этот факт на определенном этапе диагностического поиска позволил предугадать у больной наличие воспалительного заболевания кишечника. Появление жидкого стула, сопровождающегося эрозивно-язвенным поражением слизистой оболочки толстой кишки, одинаково характерно как для иерсиниоза, так и для язвенного колита и болезни Крона.

Однако быстрое исчезновение дефектов слизистой оболочки (менее чем за 2 недели) даже с учетом применения кортикостероидов не характерно для воспалительных заболеваний кишечника, но вполне типично для инволюции процесса при иерсиниозе на фоне антибактериальной терапии. Осложнения в виде абсцесса селезенки характерны для иерсиниоза в подростковом возрасте.

Таким образом, дифференциальный ряд на разных этапах диагностического поиска включал следующие диагнозы: иерсиниоз, системные заболевания соединительной ткани, язвенный колит и болезнь Крона с системными проявлениями, туберкулез, малярию, сепсис. Комплексная оценка начала заболевания, динамики его развития, лабораторных и инструментальных тестов, характера осложнений, а главное – положительной динамики на фоне антибактериальной терапии позволила в конечном итоге поставить правильный диагноз.

  1. Внутренние болезни / Под ред. Е. Браунвальда и др. М., 1994. С. 273–283.
  2. Хэгглин Р. Дифференциальная диагностика внутренних болезней / Под ред. Е.М. Тареева. М., 1993. С. 535–547.
  3. Руководство по тропическим болезням / Под ред. А.Я. Лысенко. 1983.
  4. Лысенко А.Я., Красильников А.А. Лабораторные методы диагностики паразитарных болезней. 1998.
  5. Внутренние болезни / Под ред. Е. Браунвальда и др. М., 1993. С. 374–375.
  6. Вельтищев Ю.Е., Комаров Ф.И., Навашин С.М. и др. Справочник практического врача / Под ред. А.И. Воробьева. М., 1990. С. 64–70.
  7. Ивашкин В.Т., Шептулин А.А. Синдром диареи. М., 2000. С. 21–25.

Амебиаз: фон, патофизиология, этиология

  • Притт Б.С., Кларк К.Г. Амебиаз. Mayo Clin Proc . 2008 октябрь 83 (10): 1154-9; викторина 1159-60. [Медлайн].

  • Греку Ф, Булгариу Т, Бланару О, Драгомир С, Лунка С, Стратан I и др. Инвазивный амебиаз. Chirurgia (Bucur) . 2006 сентябрь-октябрь. 101 (5): 539-42. [Медлайн].

  • Haque R, Huston CD, Hughes M, Houpt E, Петри WA младший Amebiasis. N Engl J Med .2003 г., 17 апреля. 348 (16): 1565-73. [Медлайн].

  • Стэнли С.Л. Младший Амебиаз. Ланцет . 2003 22 марта. 361 (9362): 1025-34. [Медлайн].

  • Ширли Д.Т., Фарр Л., Ватанабе К., Муна С. Обзор глобального бремени, новых диагностических средств и современных методов лечения амебиаза. Открытый форум Infect Dis . 2018 5 (7) июля: ofy161. [Медлайн].

  • Равдин Дж. И., Стэнли П., Мерфи К. Ф., Петри В. А. Младший. Характеристика углеводных рецепторов клеточной поверхности для лектина, связанного с адгезией Entamoeba histolytica. Заражение иммунной . 1989 июл.57 (7): 2179-86. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Хименес С., Серритос Р., Рохас Л., Долабелла С., Моран П., Шибаяма М. и др. Амебиаз человека: нарушение парадигмы ?. Int J Environ Res Public Health . 2010 марта 7 (3): 1105-20. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Хак Р., Мондал Д., Дуггал П., Кабир М., Рой С., Фарр Б. М. и др. Инфекция Entamoeba histolytica у детей и защита от последующего амебиаза. Заражение иммунной . 2006 февраль 74 (2): 904-9. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Seydel KB, Stanley SL Jr. Entamoeba histolytica индуцирует гибель клеток-хозяев в амебном абсцессе печени посредством не-Fas-зависимого, не зависимого от фактора некроза опухоли альфа-пути апоптоза. Заражение иммунной . 1998 июн. 66 (6): 2980-3. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Que X, Рид SL. Цистеиновые протеиназы и патогенез амебиаза. Clin Microbiol Ред. .2000 Апрель, 13 (2): 196-206. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Kelsall BL, Ravdin JI. Расщепление человеческого IgA под действием Entamoeba histolytica. J Заразить Dis . 1993 ноябрь 168 (5): 1319-22. [Медлайн].

  • Reed SL, Keene WE, McKerrow JH, Gigli I. Расщепление C3 нейтральной цистеиновой протеиназой Entamoeba histolytica. Дж Иммунол . 1 июля 1989 г. 143 (1): 189-95. [Медлайн].

  • Abhyankar MM, Shrimal S, Gilchrist CA, Bhattacharya A, Petri WA Jr.Индуцируемая сывороткой трансмембранная киназа EhTMKB1-9 Entamoeba histolytica участвует в кишечном амебиазе. Int J Parasitol Drugs Drug Resist . 2012 Декабрь 2: 243-248. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Seydel KB, Li E, Swanson PE, Stanley SL Jr. Клетки кишечного эпителия человека продуцируют провоспалительные цитокины в ответ на инфекцию в модели амебиаза с ксенотрансплантатом мыши и человека SCID. Заражение иммунной . 1997 Май. 65 (5): 1631-9. [Медлайн].[Полный текст].

  • Стенсон В.Ф., Чжан З., Рил Т., Стэнли С.Л. мл. Амебная инфекция в толстой кишке человека индуцирует циклооксигеназу-2. Заражение иммунной . 2001 Май. 69 (5): 3382-8. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Braga LL, Ninomiya H, McCoy JJ, Eacker S, Wiedmer T., Pham C, et al. Ингибирование комплекса атаки мембраны комплемента за счет галактозоспецифической адгезии Entamoeba histolytica. Дж. Клин Инвест . 1992 Сентябрь 90 (3): 1131-7.[Медлайн]. [Полный текст].

  • Фотедар Р., Старк Д., Биб Н., Марриотт Д., Эллис Дж., Харкнесс Дж. Лабораторные методы диагностики видов Entamoeba. Clin Microbiol Ред. . 2007 Jul.20 (3): 511-32, содержание. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Симокава С., Кабир М., Таниучи М., Мондал Д., Кобаяси С., Али И.К. и др. Entamoeba moshkovskii вызывает диарею у младенцев и вызывает диарею и колит у мышей. J Заразить Dis .2012 сен 1. 206 (5): 744-51. [Медлайн].

  • Verkerke HP, Петри В.А. младший, Мари К.С. Динамическая взаимозависимость амебиаза, врожденного иммунитета и недостаточного питания. Семин Иммунопатол . 2012 ноябрь 34 (6): 771-85. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Сваминатан А., Торрези Дж., Шлагенхаф П., Терски К., Уайлдер-Смит А., Коннор Б. А. и др. Глобальное исследование патогенов и факторов риска хозяина, связанных с инфекционными желудочно-кишечными заболеваниями, у вернувшихся международных путешественников. J Заразить . 2009 Июль 59 (1): 19-27. [Медлайн].

  • Гюнтер Дж., Шафир С., Бристоу Б., Сорвилло Ф. Краткий отчет: Смертность, связанная с амебиазом, среди жителей США, 1990-2007 гг. Ам Дж. Троп Мед Хиг . 2011 декабрь 85 (6): 1038-40. [Медлайн].

  • Гюнтер Дж., Шафир С., Бристоу Б., Сорвилло Ф. Краткий отчет: Смертность, связанная с амебиазом, среди жителей США, 1990-2007 гг. Ам Дж. Троп Мед Хиг . 2011 декабрь 85 (6): 1038-40.[Медлайн]. [Полный текст].

  • Валенсуэла О., Моран П., Гомес А., Кордова К., Корралес Н., Кардоза Дж. И др. Эпидемиология амебного абсцесса печени в Мексике: случай Соноры. Энн Троп Мед Паразитол . 2007 сентябрь 101 (6): 533-8. [Медлайн].

  • van Hal SJ, Stark DJ, Fotedar R, Marriott D, Ellis JT, Harkness JL. Амебиаз: текущее состояние в Австралии. Med J Aust . 2007 16 апреля. 186 (8): 412-6. [Медлайн].

  • Хименес К., Моран П., Рохас Л., Валадес А., Гомес А.Переоценка эпидемиологии амебиаза: современное состояние. Заразить Genet Evol . 2009 Декабрь 9 (6): 1023-32. [Медлайн].

  • Stauffer W, Abd-Alla M, Ravdin JI. Распространенность и заболеваемость инфекцией Entamoeba histolytica в Южной Африке и Египте. Arch Med Res . 2006 Февраль 37 (2): 266-9. [Медлайн].

  • Стэнли С.Л. Младший Амебиаз. Ланцет . 2003 22 марта. 361 (9362): 1025-34. [Медлайн].

  • Тенгку С.А., Норхаяти М.Общественное здоровье и клиническое значение амебиаза в Малайзии: обзор. Троп Биомед . 2011 28 августа (2): 194-222. [Медлайн].

  • Caballero-Salcedo A, Viveros-Rogel M, Salvatierra B, Tapia-Conyer R, Sepulveda-Amor J, Gutierrez G, et al. Сероэпидемиология амебиаза в Мексике. Ам Дж. Троп Мед Хиг . 1994 апр. 50 (4): 412-9. [Медлайн].

  • Blessmann J, Van Linh P, Nu PA, Thi HD, Muller-Myhsok B, Buss H, et al. Эпидемиология амебиаза в регионе высокой заболеваемости амебным абсцессом печени в центральном Вьетнаме. Ам Дж. Троп Мед Хиг . 2002 май. 66 (5): 578-83. [Медлайн].

  • Bowley DM, Loveland J, Omar T, Pitcher GJ. Инфекция вируса иммунодефицита человека и амебиаз. Pediatr Infect Dis J . 2006 25 декабря (12): 1192-3. [Медлайн].

  • Brindicci G, Picciarelli C, Fumarola L, Carbonara S, Stano F, Ciracì E, et al. Амебные абсцессы печени у ВИЧ-инфицированного пациента. Уход за больными СПИДом ЗППП . 2006 Сентябрь 20 (9): 606-11.[Медлайн].

  • Chen Y, Zhang Y, Yang B, Qi T, Lu H, Cheng X и др. Распространенность инфекции Entamoeba histolytica у ВИЧ-инфицированных в Китае. Ам Дж. Троп Мед Хиг . 2007 ноябрь 77 (5): 825-8. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Hsu MS, Hsieh SM, Chen MY, Hung CC, Chang SC. Связь между амебным абсцессом печени и инфекцией вируса иммунодефицита человека у тайваньских субъектов. BMC Infect Dis . 2008 16 апреля 8:48.[Медлайн]. [Полный текст].

  • Karp CL, Auwaerter PG. Коинфекция с ВИЧ и тропическими инфекционными заболеваниями. I. Протозойные патогены. Clin Infect Dis . 2007 г. 1. 45 (9): 1208-13. [Медлайн].

  • Park WB, Choe PG, Jo JH, Kim SH, Bang JH, Kim HB и др. Амебный абсцесс печени у ВИЧ-инфицированных, Республика Корея. Emerg Infect Dis . 2007 марта 13 (3): 516-7. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Заражение вирусом иммунодефицита человека-1 не является фактором риска амебиаза. Ам Дж. Троп Мед Хиг . 2006 ноябрь 75 (5): 1023. [Медлайн].

  • Hung CC, Ji DD, Sun HY, Lee YT, Hsu SY, Chang SY и др. Повышенный риск заражения Entamoeba histolytica и инвазивного амебиаза у ВИЧ-инфицированных мужчин, практикующих секс с мужчинами, на Тайване. PLoS Negl Trop Dis . 2008 27 февраля, 2 (2): e175. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Muzaffar J, Madan K, Sharma MP, Kar P. Рандомизированное, простое слепое, плацебо-контролируемое многоцентровое исследование для сравнения эффективности и безопасности метронидазола и сатранидазола у пациентов с амебным абсцессом печени. Dig Dis Sci . 2006 декабрь 51 (12): 2270-3. [Медлайн].

  • Hung CC, Wu PY, Chang SY, Ji DD, Sun HY, Liu WC, et al. Амебиаз среди лиц, обратившихся за добровольным консультированием и тестированием на вирусную инфекцию иммунодефицита человека: исследование случай-контроль. Ам Дж. Троп Мед Хиг . 2011 Январь 84 (1): 65-9. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Acuna-Soto R, Maguire JH, Wirth DF. Гендерное распределение при бессимптомном и инвазивном амебиазе. Ам Дж. Гастроэнтерол .2000 Май. 95 (5): 1277-83. [Медлайн].

  • Нагата Н., Симбо Т., Акияма Дж., Накашима Р., Нишимура С., Яда Т. Факторы риска кишечного инвазивного амебиаза в Японии, 2003-2009 гг. Emerg Infect Dis . 2012 май. 18 (5): 717-24. [Медлайн].

  • Аристизабаль Х., Асеведо Дж., Ботеро М. Фульминантный амебный колит. Мир J Surg . 1991 март-апрель. 15 (2): 216-21. [Медлайн].

  • Андраде Дж. Э., Медерос Р., Риверо Х., Сендзишев М. А., Соаита М., Робинсон М. Дж. И др.Амебиаз проявляется в виде острого аппендицита. South Med J . 2007 ноябрь 100 (11): 1140-2. [Медлайн].

  • Рао С., Солаймани-Мохаммади С., Петри В.А. младший, Паркер СК. Печеночный амебиаз: напоминание об осложнениях. Curr Opin Pediatr . 2009 21 февраля (1): 145-9. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Госвами А., Дадхич С., Бхаргава Н. Поражение толстой кишки в амебном абсцессе печени: имеет ли значение место расположения ?. Энн Гастроэнтерол . 2014 г.27 (2): 156-161. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Хардин Р.Э., Ферзли Г.С., Зенилман М.Э., Гаданги П.К., Боун В.Б. Инвазивный амебиаз и образование амебомы в виде ректального образования: необычный случай злокачественного маскарада в западном медицинском центре. Мир Дж. Гастроэнтерол . 2007 14 ноября. 13 (42): 5659-61. [Медлайн].

  • Лоулерг П., Мир О. Эмпиема плевры вторичная после амебного абсцесса печени. Int J Заразить Dis . 2009 Май. 13 (3): e135-6.[Медлайн].

  • Дхаван В.К., Малик СК. Острая пневмония правой нижней доли. Сундук . 1975 марта 67 (3): 346-7. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Отан Э., Акбулут С., Каяалп С. Амебный острый аппендицит: систематический обзор 174 случаев. Мир J Surg . 2013 Сентябрь 37 (9): 2061-73. [Медлайн].

  • Sodhi KS, Ojili V, Sakhuja V, Khandelwal N. Тромбоз печени и нижней полой вены: сосудистое осложнение амебного абсцесса печени. J Emerg Med . 2008 Февраль 34 (2): 155-7. [Медлайн].

  • Абд-Алла, доктор медицины, Джексон Т.Ф., Гатирам В., Эль-Хавей А.М., Равдин Д.И. Дифференциация патогенных инфекций Entamoeba histolytica от непатогенных инфекций путем обнаружения антигена адгезивного белка, ингибирующего галактозу, в сыворотке крови и кале. Дж. Клин Микробиол . 1993 31 ноября (11): 2845-50. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Хак Р., Молла Н.Ю., Али И.К., Алам К., Юбэнкс А., Лайерли Д. и др.Диагностика амебного абсцесса печени и кишечной инфекции с помощью тестов TechLab Entamoeba histolytica II и тестов на антитела. Дж. Клин Микробиол . 2000 Сентябрь 38 (9): 3235-9. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Хельми М.М., Рашед Л.А., Абдель-Фаттах Х.С. Обнаружение и дифференциация изолятов Entamoeba histolytica и Entamoeba dispar в клинических образцах с помощью ПЦР. J Egypt Soc Parasitol . 2007 Апрель 37 (1): 257-74. [Медлайн].

  • Singh A, Houpt E, Петри, Вашингтон.Быстрая диагностика кишечных паразитарных простейших с особым вниманием к Entamoeba histolytica. Междисциплинарная перспектива заражения Dis . 2009. 2009: 547090. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Танюксель М., Петри В.А. мл. Лабораторная диагностика амебиаза. Clin Microbiol Ред. . 2003 г., 16 (4): 713-29. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Саидин С., Осман Н., Нордин Р. Последние сведения о лабораторной диагностике амебиаза. евро J Clin Microbiol Infect Dis .2019 января 38 (1): 15-38. [Медлайн].

  • Shamsuzzaman SM, Haque R, Hasin SK, Hashiguchi Y. Оценка непрямого флуоресцентного теста на антитела и иммуноферментного анализа для диагностики печеночного амебиаза в Бангладеш. Дж Паразитол . 2000 июн. 86 (3): 611-5. [Медлайн].

  • Ахмад Н., Хан М., Хок М.И., Хак Р., Мондол Д. Обнаружение ДНК Entamoeba histolytica из аспирата абсцесса печени с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР): диагностический инструмент для амебного абсцесса печени. Bangladesh Med Res Counc Bull . 2007 апр. 33 (1): 13-20. [Медлайн].

  • Фотедар Р., Старк Д., Биби Н., Марриотт Д., Эллис Дж., Харкнесс Дж. ПЦР-определение Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar и Entamoeba moshkovskii в образцах стула из Сиднея, Австралия. Дж. Клин Микробиол . 2007 марта 45 (3): 1035-7. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Khairnar K, Parija SC. Новый анализ вложенной мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) для дифференциального обнаружения Entamoeba histolytica, E.moshkovskii и E. dispar ДНК в образцах стула. BMC Microbiol . 2007 24 мая. 7:47. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Старк Д., ван Хал С., Фотедар Р., Мясник А., Марриотт Д., Эллис Дж. И др. Сравнение наборов для обнаружения антигенов стула с ПЦР для диагностики амебиаза. Дж. Клин Микробиол . 2008 май. 46 (5): 1678-81. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Сингх П., Мирда Б.Р., Ахуджа В., Сингх С. Анализ изотермической амплификации, опосредованной петлей (LAMP), для быстрого обнаружения Entamoeba histolytica в амебном абсцессе печени. Мир J Microbiol Biotechnol . 2013 29 января (1): 27-32. [Медлайн].

  • Мисра С.П., Мисра В., Двиведи М. Илеоцекальные образования у пациентов с амебным абсцессом печени: этиология и лечение. Мир Дж. Гастроэнтерол . 2006 28 марта, 12 (12): 1933-6. [Медлайн].

  • Нагата Н., Симбо Т., Акияма Дж., Накашима Р., Нийкура Р., Нисимура С. и др. Прогностическая ценность эндоскопических данных в диагностике активного кишечного амебиаза. Эндоскопия . 2012 Апрель 44 (4): 425-8. [Медлайн].

  • Гонзалес М.Л., Данс Л.Ф., Мартинес Э.Г. Антиамебные препараты для лечения амебного колита. Кокрановская база данных Syst Rev . 2009 15 апреля. CD006085. [Медлайн].

  • Петри В.А. младший, Сингх У. Диагностика и лечение амебиаза. Clin Infect Dis . 1999 29 ноября (5): 1117-25. [Медлайн].

  • Salles JM, Salles MJ, Moraes LA, Silva MC. Инвазивный амебиаз: обновленная информация о диагностике и лечении. Expert Rev Anti Infect Ther . 2007 Октябрь 5 (5): 893-901. [Медлайн].

  • Кимура М., Накамура Т., Нава Ю. Опыт применения метронидазола внутривенно для лечения амебиаза средней и тяжелой степени в Японии. Ам Дж. Троп Мед Хиг . 2007 августа 77 (2): 381-5. [Медлайн].

  • Moon TD, Оберхельман, РА. Противопаразитарная терапия у детей. Педиатрическая клиника North Am . 2005 июн. 52 (3): 917-48, viii. [Медлайн].

  • Gonzales MLM, Dans LF, Sio-Aguilar J.Антиамебные препараты для лечения амебного колита. Кокрановская база данных Syst Rev . 2019 9 января. 1: CD006085. [Медлайн].

  • Bammigatti C, Ramasubramanian NS, Kadhiravan T, Das AK. Чрескожная пункционная аспирация при неосложненном амебном абсцессе печени: рандомизированное исследование. Троп Докт . 2013 Январь 43 (1): 19-22. [Медлайн].

  • Cordel H, Prendki V, Madec Y, Houze S, Paris L, Bourée P и др. Импортированный амебный абсцесс печени во Францию. PLoS Negl Trop Dis . 2013. 7 (8): e2333. [Медлайн].

  • МакГрегор А., Браун М., Туэй К., Райт С.Г. Фульминантный амебный колит после применения лоперамида. Дж Трэвел Мед . 2007 янв-фев. 14 (1): 61-2. [Медлайн].

  • Athié-Gutiérrez C, Rodea-Rosas H, Guízar-Bermúdez C, Alcántara A, Montalvo-Javé EE. Эволюция хирургического лечения перфорации толстой кишки, связанной с амебиазом. Дж Гастроинтест Сург . 2010 14 января (1): 82-7.[Медлайн].

  • Jha AK, Das G, Maitra S, Sengupta TK, Sen S. Лечение большого амебного абсцесса печени — сравнительное исследование пункционной аспирации и катетерного дренажа. Дж. Индийская медицинская ассоциация . 2012 января 110 (1): 13-5. [Медлайн].

  • Ширли Д.А., Мунах С. Фульминантный амебный колит после терапии кортикостероидами: систематический обзор. PLoS Negl Trop Dis . 2016 10 июля (7): e0004879. [Медлайн].

  • Чаудри О.А., Петри В.А. мл.Перспективы вакцинации от амебиаза. Вакцины Эксперт Рев . 2005 октября, 4 (5): 657-68. [Медлайн].

  • Snow MJ, Stanley SL Jr. Последние достижения в вакцинах от амебиаза. Arch Med Res . 2006 Февраль 37 (2): 280-7. [Медлайн].

  • Стэнли С.Л. мл. Вакцины от амебиаза: барьеры и возможности. Паразитология . 2006. 133 Приложение: S81-6. [Медлайн].

  • Quach J, Сен-Пьер Дж., Чади К.Будущее разработки вакцины против Entamoeba histolytica. Hum Vaccin Immunother . 2014 6 февраля. 10 (6): [Medline].

  • Кикучи Т., Кога М., Симидзу С., Миура Т., Маруяма Х., Кимура М. Эффективность и безопасность паромомицина для лечения амебиаза в Японии. Паразитол Инт . 2013 декабрь 62 (6): 497-501. [Медлайн].

  • Поперечное исследование комплекса Entamoeba histolytica / dispar / moshkovskii в Сальвадоре, Баия, Бразилия

    Эпидемиологические исследования видоспецифичных инфекций Entamoeba немногочисленны из-за морфологического сходства патогенных Entamoeba histolytica и непатогенных E.dispar и E. moshkovskii . Диагноз E. histolytica часто основывается на выявлении копроантигена (специфичный для E. histolytica -Gal / GalNAc, лектин) с помощью иммуноанализа. Однако специфический -лектин E. histolytica не экспрессируется в кистах, которые устраняются бессимптомными индивидуумами, что приводит к ложноотрицательным результатам и недооценке распространенности амебиаза. Было показано, что молекулярные методы, основанные на амплификации ДНК паразита, являются высокочувствительным и специфическим методом, который позволяет обнаруживать различные виды Entamoeba .Это исследование было направлено на оценку встречаемости видов из комплекса E. histolytica / dispar / moshkovskii с помощью молекулярных и иммунологических методов у лиц, посещающих систему здравоохранения в Сальвадоре-Баия, Бразилия. Было проведено поперечное исследование с участием 55 218 человек. Диагноз был поставлен на основании микроскопии, в котором был обнаружен комплекс E. histolytica / dispar / moshkovskii . Дифференциацию видов проводили по E. histolytica -специфическому антигену, серологическую оценку и молекулярные методы.Общая распространенность комплекса E. histolytica / dispar / moshkovskii , определенная с помощью микроскопии, составила приблизительно 0,49% (273/55 218). Обнаружение E. histolytica -специфического антигена и молекулярная характеристика дали 100% отрицательный результат для E. histolytica . Однако серологическая оценка дала положительный результат 8,9% (8/90). В образцах стула, проанализированных с помощью ПЦР, не удалось идентифицировать E. histolytica и E. moshkovskii , хотя циркулирующие IgG анти- E.histolytica .

    1. Введение

    Entamoeba histolytica — обычное патогенное простейшее, широко распространенное во всем мире. Он отвечает за амебную дизентерию и амебный абсцесс печени, что приводит к страданиям и смерти человека. Амебиаз в значительной степени связан с продуктами питания и питьевой водой, загрязненными фекалиями человека, и затрагивает примерно 10% населения мира, при этом ежегодно регистрируется от 50 000 до 100 000 случаев смерти, что делает это существенной причиной смерти от простейших паразитов [1].Распространенность E. histolytica переоценена из-за его эпидемиологического перекрытия с другими морфологически идентичными видами, то есть Entamoeba dispar и Entamoeba moshkovskii , которые в настоящее время составляют E. histolytica / E. dispar / E. Мошковский [2–5]. Кроме того, цисты другой непатогенной амебы Entamoeba hartmanni , даже меньшего размера (> 10 мкм мкм), при паразитологическом исследовании можно спутать с цистами E. histolytica .

    Распространенность каждого вида из этого комплекса недостаточно хорошо охарактеризована во многих географических регионах. Хорошо известно, что только E. histolytica приводит к инвазивным заболеваниям у человека. Хотя в некоторых сообщениях указывается на потенциальную роль как E. dispar , так и E. moshkovskii в провоцировании заболевания у людей, они по-прежнему считаются непатогенными и свободноживущими амебами соответственно [6–10]. Тем не менее, дифференциация всех видов Entamoeba имеет важное значение для предотвращения ненужного и неизбирательного лечения антиамебной химиотерапией, которое может привести к лекарственной устойчивости [11].Всемирная организация здравоохранения рекомендует лечить случаи, в которых установлено наличие E. histolytica , независимо от наличия клинических симптомов [12]. Кроме того, меры контроля можно было бы более эффективно применять в географических районах с хорошо известными эпидемиологическими условиями.

    Что касается низкой жизнеспособности трофозоитов в образцах диареи и нерегулярного выделения фекальных кист у бессимптомных хозяев, для повышения чувствительности идентификации паразитов в образцах фекалий необходимо использовать различные методы диагностики.Иммуноанализы для определения копроантигена специфического лектина E. histolytica -Gal / GalNAc использовались в качестве альтернативных методов диагностики амебиаза [13]. Было показано, что молекулярные методы, основанные на амплификации ДНК паразита, являются высокочувствительным и специфическим методом, который позволяет обнаруживать различные виды Entamoeba [14]. Однако отрицательный результат не исключает присутствия паразита из-за вмешательства ингибиторов ПЦР, присутствующих в фекалиях, которые могут препятствовать амплификации ДНК.

    В Бразилии из-за региональных различий в санитарии и социально-экономических условиях E. histolytica / dispar / moshkovskii комплексное распространение неравномерно: 2,5-11% на юге и юго-востоке, 19% на севере и в районе Амазонки, и примерно 10% на северо-востоке и центральном западе [15]. В городе Сальвадор, столице бразильского штата Баия, присутствие комплекса было показано в некоторых исследованиях, проведенных нашей группой, с распространенностью 5% и 3,2% у лиц, посещавших общественные [16] и частные медицинские учреждения. система соответственно.Более того, 15% (262/1788) положительных проб стула на E. histolytica / E. Комплекс dispar анализировали с помощью ПЦР, и ДНК E. histolytica не амплифицировали. ДНК, амплифицированная для E. dispar , наблюдалась в 86,6% образцов (227/262) [17]. Однако в предыдущем исследовании, также проведенном нашей группой, 4,6% (7/153) госпитализированных детей с диареей из Сальвадора дали положительный результат на специфический лектин E. histolytica -Gal / GalNAc [18].

    Эти данные дополнительно подтверждают доказательства того, что E.histolytica может инфицировать людей в Сальвадоре. Учитывая важность фактической распространенности инфекций E. histolytica , E. disp ar и E. moshkovskii , это исследование было направлено на оценку частоты каждого вида с помощью молекулярных и иммунологических методов у лиц, посещавших общественность. система здравоохранения в Сальвадоре-Баии, Бразилия.

    2. Материалы и методы
    2.1. Этические соображения

    Одобрение было получено Организационным наблюдательным советом (IRB) по исследованиям человека в Институте Гонсалу Мониза, Фонд Освальдо Круза (FIOCRUZ), Сальвадор, Баия, Бразилия, регистрационный номер 100/2006.Все процедуры проводились в строгом соответствии с принципами, изложенными в Хельсинкской декларации. Информированное согласие было получено от участников, которые согласились участвовать в исследовании. Образцы были анонимно закодированы, чтобы защитить личность каждого участника.

    2.2. Дизайн исследования и популяция

    Поперечное исследование проводилось с февраля 2010 г. по июнь 2014 г. с участием 55 218 человек, посещавших Клиническую лабораторию Фармацевтического колледжа (LACTFAR; Федеральный университет Баии).Эта группа населения в основном характеризуется людьми с низким доходом, которые зависят от системы общественного здравоохранения. Обследование кала проводилось сотрудниками лаборатории. Блок-схема, иллюстрирующая дизайн исследования, представлена ​​на Рисунке 1.


    2.3. Выбор образца

    Двести семьдесят три пациента с диагнозом кисты амебы в кале были приглашены для участия во второй фазе исследования. Один свежий образец фекалий и 5 мл образца крови для сбора сыворотки были получены от 90 человек, которые согласились участвовать в исследовании.Обнаружение копроантигена и IgG-специфических антител и амплификация ДНК с помощью ПЦР были использованы для диагностики видов комплекса.

    2.4. Микроскопическое исследование

    Примерно 3 г фекального материала было обработано методом центрифугирования формалин-этилацетат. Для подтверждения диагноза, ранее установленного методом спонтанной седиментации, был проведен морфологический анализ для выявления наличия четырехъядерных кист. Порцию концентрированного образца 50 мкл л смешивали с йодом, наносили на предметное стекло и закрывали покровным стеклом (24 × 24 мм).Слайды просматривали при 40-кратном увеличении, и результаты выражали как количество кист на грамм фекалий.

    2,5. Культивирование клеток паразита

    Entamoeba трофозоитов были получены в ксенических условиях в модифицированной среде Павловой с бактериальной флорой для тестирования копроантигенов. Вкратце, 1 грамм свежего стула пять раз промывали дистиллированной водой и 500 мкл л осадка инкубировали при 37 ° C в атмосфере 5% CO. 2 в 10 мл среды Павловой в стеклянных пробирках с круглым дном и резьбой. (15 × 1.5 см). Для поддержания жизнеспособности амеб в течение фазы экспоненциального роста использовали субкультуры три раза в неделю. Превращение цист в трофозоиты, а также развитие и жизнеспособность трофозоитов контролировали ежедневно в течение пяти дней.

    2.6.
    E. histolytica — Обнаружение специфического антигена

    Положительные образцы стула сохраняли без фиксатора и хранили при -20 ° C для анализа заднего копроантигена (галактозный адгезин), который выполняли с использованием E.histolytica II (TechLab, Блэксбург, Вирджиния, США). ELISA-тестирование проводилось в соответствии с инструкциями производителя. Поглощение при 450 нм измеряли с использованием микропланшетного ридера Bio-Rad Model 3550-UV (Bio-Rad, Калифорния, США).

    2.7. Серологическая оценка

    Тест RIDASCREEN® Entamoeba (R-Biopharm AG, Дармштадт, Германия) использовался для обнаружения специфических IgG к анти- Entamoeba histolytica в сыворотке крови человека. В методе используются микротитрационные планшеты, покрытые очищенными антигенами.Вкратце, образцы сыворотки загружали в разбавителе для образцов в соотношении 1:50 и инкубировали при комнатной температуре в течение 15 минут. После инкубации микропланшеты промывали промывочным буфером для удаления любых несвязавшихся антител. Конъюгат с белком A добавляли в каждую лунку, и микропланшеты инкубировали в течение 15 мин при комнатной температуре. После пяти промывок иммунные комплексы выявлялись добавлением субстрата пероксидазы мочевины. После 15 мин инкубации при комнатной температуре в темноте реакцию останавливали стоп-раствором и измеряли оптическую плотность при 450 нм с использованием устройства для считывания микропланшетов Bio-Rad Model 3550-UV (Bio-Rad, Калифорния, США).Пороговое значение установлено на OD = 0,3, в соответствии с указаниями производителя.

    2,8. Экстракция геномной ДНК

    Положительные образцы стула сохраняли без фиксатора и хранили при -20 ° C до момента экстракции ДНК. Геномную ДНК экстрагировали непосредственно из всех образцов с использованием набора QIAmp® DNA Mini Kit (QIAGEN, CA, USA) в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, 200 мг образца стула смешивали с 1,4 мл буфера ASL в микроцентрифужной пробирке и встряхивали до тех пор, пока образец не был полностью гомогенизирован.После инкубации при 70 ° C в течение 5 минут образцы центрифугировали при 25 200 g в течение 1 минуты. Затем к образцам добавляли таблетки InhibitEx с последующим встряхиванием и центрифугированием при 25 200 g в течение 3 мин. Затем супернатанты переносили в новые пробирки, а затем добавляли протеиназу К. Пробирки повторно инкубировали при 70 ° C в течение 10 мин. Затем все образцы смешивали с этанолом и переносили на спин-колонки. После отмывки ДНК элюировали в 100 мкл мкл элюирующего буфера и сразу же использовали для анализа ПЦР.

    2.9. Дискриминация
    E. histolytica , E. dispar и E. moshkovskii

    Вложенная мультиплексная ПЦР была проведена в соответствии с протоколом, описанным в другом месте [19], с использованием гена 16S-подобной рРНК для различения E. histolytica , E. dispar и E. moshkovskii . Внешний набор праймеров, E-1 (5′-TAA GAT GCA CGA GAG CGA AA- 3 ‘) / E-2 (5′-GTA CAA AGG GCA GGG ACG TA-3′), специфичен для общего фрагмента и был специально разработан для всех трех видов.Пары внутренних праймеров, EH-1 (5’-AAG CAT TGT TTC TAG ATC TGA G-3 ‘) / EH-2 (5′-AAG AGG TCT AAC CGA AAT TAG-3’), ED-1 (5 ‘ -TCT AAT TCG ATT AGA ACT CT-3 ‘) / ED-2 (5′-TCC CTA CCT ATT AGA CAT AGC-3′) и Mos-1 (5’-GAA CCA AGA GTT TCA CAA AC-3 ‘ ) / Mos-2 (5’-CAA TAT AAG GCT TGG ATG AT-3 ‘), специфичны для скобки длиной 439 п.н. для E. histolytica , 174 п.н. для E. dispar и 553 п.н. для E. moshkovskii соответственно. Амплификацию проводили при общем объеме 25 мкл л, содержащем 0.3 мкМ мкМ каждого праймера, 2,55 мкл мкл 10-кратного буфера для ПЦР (200 мМ Tris-HCl, pH 8,4, 500 мМ KCl), 5,0 мМ каждого dNTP, 25 мМ MgCl2, 1,5 ед. Life Technologies, Калифорния, США) и 2,5 мкл мкл образца ДНК. Первоначальный этап амплификации ДНК выполняли с использованием праймера E-1 / E-2, установленного в термоциклере MyCycler ™ (Bio-Rad, Калифорния, США). За первым циклом, состоящим из 2 мин при 96 ° C, следовали 30 циклов денатурации в течение 1 мин при 92 ° C. Праймеры отжигали 1 мин при 56 ° C и наращивали 1 мин.5 мин при 72 ° C. Дополнительную стадию удлинения проводили при 72 ° C в течение 7 мин. Для вложенной амплификации использовали 2,5 мкл мкл ампликона из первой реакции и наборы праймеров EH-1 / EH-2, ED-1 / ED-2 и Mos-1 / Mos-2 в условиях, идентичных описанным. выше, за исключением температуры отжига 48 ° C. Продукты ПЦР тестируемых образцов и внутренних контролей (ДНК E. histolytica и E. dispar ) анализировали с помощью гель-электрофореза. Фрагменты ДНК разделяли на 1.0% (мас. / Об.) Агарозный гель (Invitrogen Life Technologies, CA, USA), содержащий 0,5 мкг г бромида этидия / мл. Гели фотографировали при ультрафиолетовом освещении (Loccus Biotecnologia, SP, Бразилия).

    2.10. Анализ данных

    Данные анализировали с использованием программного обеспечения для построения графиков разброса (GraphPad Prism v.7, Калифорния, США). Описательная статистика представлена ​​в виде средних значений или медианы ± стандартное отклонение или процентное соотношение для описания характеристик исследуемой популяции, включая распространенность E.histolytica , E. dispar и E. moshkovskii . Тест Шапиро-Уилка использовался для оценки нормальности данных, а тест Левена использовался для оценки однородности дисперсии. Когда эти два предположения были подтверждены, для сравнения выборок использовали ANOVA; в противном случае использовался точный критерий Фишера. Все анализы были двусторонними, и значение p менее 5% считалось значимым (p <0,05).

    3. Результаты
    3.1. Анализ образцов стула

    Обычный паразитологический анализ 55 218 образцов стула под микроскопом выявил E.histolytica -подобные кисты у 273 (~ 0,49%). Распространенность была значительно выше у взрослых (≥ 18 лет). Точно так же наблюдалась значительная разница в распространенности инфекции между мужчинами и женщинами (Таблица 1). Из 273 человек, положительных по комплексу E. histolytica / dispar / moshkovskii , 90 (33%) согласились участвовать в опросе (рис. 1).

    8

    Переменные No.исследовано E. histolyt ica / dispar / moshkovskii комплекс
    No.
    ≤ 12 7,336 19 7,0
    13-18 3,205 12 4,3
    19-29
    30-39 6,926 57 20,9
    40-49 6,964 34 12,5
    17 9017 9017 9017 9017 9017 9017 50,170
    Отсутствующие данные 7,057 23 8,4
    Всего 55,218 273 100
    Пол

    9017

    117 42.9
    Гнездо 32,435 144 52,7
    Отсутствующие данные 7,190 12 4,4
    3.2.
    E. histolytica — Обнаружение специфического антигена

    Определение антигена с помощью анализа E. histolytica II использовалось для идентификации положительных образцов для E.гистолитика . Все 90 протестированных образцов стула были отрицательными для E. histolytica , что было определено как значение оптической плотности ниже 0,05 после вычитания значения отрицательного контроля. правильно сформированный стул. Тридцать три образца были отобраны случайным образом и добавлены в среду Павловой для выращивания видов Entamoeba . Инкубация привела к росту E. histolytica / dispar / moshkovskii в 28 (84.9%) культур. После обнаружения антигена E. histolytica в трофозоитах, трансформированных в культуре, все образцы показали отрицательные результаты.

    3.3. Серологическая оценка

    Из 90 протестированных образцов восемь (8,9%) были положительными и 82 (90,1%) были отрицательными по данным ELISA на антитела RIDASCREEN IgG (рис. 2). Среди положительных результатов ни один участник не имел подозрения на печеночную или внепеченочную инфекцию E. histolytica , и все положительные образцы были положительными на E.dispar при ПЦР-анализе.


    3.4. Молекулярная характеристика
    Entamoeba spp.

    Все 90 положительных образцов фекалий для комплекса E. histolytica / dispar / moshkovskii были использованы в амплифицированных продуктах ПЦР. Фрагмент ДНК длиной 174 п.н. был успешно амплифицирован в 72 образцах (80%), что свидетельствует о положительности для E. dispar (рис. 3). Мультиплексная ПЦР позволила идентифицировать мишень в 42 образцах непосредственно из ДНК. Однако 30 образцов стали положительными только после последовательных разведений (от 1:20 до 1:40).Восемнадцать образцов оставались отрицательными даже после разбавления до 1:80 или более. Среднее геометрическое количество цист на грамм фекалий в амплифицированных образцах (390 ± 99) было выше, чем в неамплифицированных образцах (196 ± 81; p = 0,02). Для видов E. histolytica и E. moshkovskii не было обнаружено продуктов ПЦР.


    4. Обсуждение

    Большинство эпидемиологических исследований инфекции E. histolytica было проведено до характеристики E.histolytica / dispar / moshkovskii комплекс. Соответственно, были проведены новые исследования для различения этих видов и установления правильного распространения инфекции E. histolytica по всему миру. В настоящем отчете мы использовали иммунологические и молекулярные инструменты для определения распространенности инфекций E. histolytica , E. dispar и E. moshkovskii среди лиц, посещавших клиническую лабораторию фармацевтического колледжа в г. Сальвадор (Баия / Бразилия).Уровень распространенности комплекса E. histolytica / dispar / moshkovskii , основанный на исследовании фекалий с помощью оптической микроскопии, составил около 0,49%. Этот вывод свидетельствует о значительном сокращении количества случаев по сравнению с предыдущими исследованиями, проведенными нашей группой. Фактически, в 2010 г. мы продемонстрировали уровень распространенности 3,2% и 5,0% в образцах, взятых из частных и государственных клинических лабораторий, соответственно [16, 17]. Это снижение можно частично объяснить положительным влиянием государственных программ, которые улучшили санитарную инфраструктуру, тем самым уменьшив распространение кишечных паразитов среди жителей столичного региона Сальвадора [20].Более того, недавнее расширение услуг по санитарному просвещению и охране здоровья также могло способствовать раннему выявлению новых случаев E. histolytica и своевременному лечению. Кроме того, оказывается, что E. histolytica чаще встречается на Севере и редко встречается в других регионах, включая Сальвадор [17, 21, 22].

    Метод ПЦР показал чувствительность 80% и специфичность 100%. Наши данные согласуются с нашим предыдущим отчетом [17], в котором мы нашли значение чувствительности 86.6%. Фактически, 18 образцов ДНК не амплифицировались даже после последовательных разведений. Это предполагает либо недиагностированные инфекции E. hartmanni , которые не были диагностированы, которые могут быть исключены с помощью морфометрического анализа и / или ПЦР [17, 23], либо неспецифические вещества, присутствующие в фекальном осадке, которые ингибируют амплификацию ДНК [24]. Предыдущие данные нашей группы, проведенной в Сальвадоре-Баия, показали, что неамплифицированные образцы ДНК не были связаны с E. hartmanni [17]. Обнаружение копроантигена E. histolytica показало отрицательные результаты для всех проанализированных образцов, что указывает на отсутствие E.histolytica гетеродимер галактоза / N-ацетилгалактозамин (Gal / GalNac) лектин в образцах фекалий. Сообщалось о значительной вариабельности эффективности анализов обнаружения антигена E. histolytica как в неэндемичных [25, 26], так и в эндемичных районах [27, 28]. И наоборот, серологический анализ показал восемь положительных случаев (8,9%), что свидетельствует о предыдущем контакте с паразитом. Все восемь серологически положительных образцов дали отрицательные результаты для E. histolytica с помощью ПЦР, но положительные для E.Диспар . Антитела остаются обнаруживаемыми в течение многих лет после успешного лечения E. histolytica , поэтому трудно надежно отличить активную инфекцию от перенесенной. Более того, инфекция E. histolytica , подтвержденная лектиновым антигеном, может происходить без обнаружения антител, поскольку поиск антигенов более чувствителен для диагностики E. histolytica [29].

    Важно отметить, что E. dispar имеет тот же путь передачи, что и другие патогенные простейшие, такие как E.histolytica , что указывает на заражение фекалиями. Возможно, продукция IgG anti- E. histolytica связана с иммунологической памятью, указывающей на циркуляцию паразитов в Сальвадоре, Баия, Бразилия, в соответствии с предыдущими данными нашей группы [18]. Хотя некоторые сообщения предполагают потенциальную роль E. dispar в провоцировании кишечных и внекишечных симптомов у людей, его патогенность остается неясной [30]. Распространенность E. dispar в 10 раз выше, чем E.histolytica во всем мире, и лечащий врач должен решить, необходимо ли лечение, основываясь на клинических данных [1].

    5. Выводы

    В этом исследовании уровень распространенности комплекса E. histolytica / dispar / moshkovskii , основанный на исследовании фекалий с помощью оптической микроскопии, составлял около 0,49%. В проанализированных образцах с помощью копроантигена и ПЦР не удалось доказать наличие E. histolytica и E. moshkovskii . Только E.dispar был диагностирован с помощью ПЦР, хотя было обнаружено присутствие циркулирующих IgG анти- E. histolytica .

    Доступность данных

    В статье приведены данные, подтверждающие выводы данной статьи. Наборы данных, созданные и проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

    Благодарности

    Институт Гонсалу Мониша (Fiocruz-BA) поддержал эту работу.

    Тест изотермической амплификации с опосредованной стволовой петлей: сравнительный анализ с классической LAMP и ПЦР при обнаружении Entamoeba histolytica в Кении | BMC Research Notes

  • 1.

    Берку Т.Э., Петри В.А., Бем Дж.В. Амебный колит: новые взгляды на патогенез и лечение. Curr Gastroenterol Rep.2007; 9: 429.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 2.

    Маркелл Е.К., Джон Д.Т., Кротоски В.А. Просвет обитания простейших.В: Озмат С., редактор. Медицинская паразитология Маркелла и Фоге. 8-е изд. Мексика: Saunders Company; 1999. стр. 24–89.

    Google Scholar

  • 3.

    Samie A, Obi LC, Bessong PO, Stroup S, Houpt E, Guerrant RL. Распространенность и видовое распределение E. histolytica и E. dispar в районе Венда, Лимпопо, Южная Африка. Am J Trop Med Hyg. 2006; 75: 565–71.

    CAS PubMed Google Scholar

  • 4.

    Gatei W, Wamae CN, Mbae C, Waruru A, Mulinge E, Waithera T. и др. Криптоспоридиоз: распространенность, анализ генотипа и симптомы, связанные с инфекциями у детей в Кении. Am J Trop Med Hyg. 2006; 75: 78–82.

    PubMed Google Scholar

  • 5.

    Mbae CK, Nokes DJ, Mulinge E, Nyambura J, Waruru A, Kariuki S. Кишечные паразитарные инфекции у детей с диареей в амбулаторных и стационарных условиях в неформальном поселении Найроби, Кения.BMC Infect Dis. 2013; 13: 243.

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 6.

    Всемирная организация здравоохранения. Оценки ВОЗ глобального бремени болезней пищевого происхождения: контрольная группа по эпидемиологии бремени болезней пищевого происхождения. Женева: Всемирная организация здравоохранения; 2015. с. 2007–15.

    Google Scholar

  • 7.

    Саиди С.М., Иидзима Ю., Санг В.К., Мвангудза А.К., Оундо Дж.О., Тага К. и др.Эпидемиологическое исследование инфекционных диарейных заболеваний у детей в прибрежной сельской местности Кении. Microbiol Immunol. 1997. 41: 773–8.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 8.

    Кагира Дж. М., Майна Н., Ньенга Дж., Каранджа С. М., Карори С. М., Нгото Дж. М.. Распространенность и типы коинфекций у больных сонной болезнью в Кении (2000/2009). J Trop Med. 2011. DOI: 10.1155 / 2011/248914.

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 9.

    Истон А.В., Оливейра Р.Г., О’Коннелл Е.М., Кепха С., Мвандавиро С.С., Ньенга С.М. и др. Многопараллельная количественная ПЦР обеспечивает повышенную чувствительность и диагностические возможности для желудочно-кишечных паразитов человека: выводы на основании данных о воздействии массовой дегельминтизации. Векторы паразитов. 2016; 9: 38. DOI: 10.1186 / s13071-016-1314-у.

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 10.

    Matey EJ, Tokoro M, Nagamoto T., Mizuno T., Saina MC, Xiuqiong B, et al.Более низкая распространенность видов Entamoeba у детей с вертикально передаваемой ВИЧ-инфекцией в Западной Кении. СПИД. 2016; 30: 803–5. DOI: 10.1097 / QAD.0000000000001002.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 11.

    Рао С., Солаймани-Мохаммади С., Петри В.А. младший, Паркер СК. Печеночный амебиаз: напоминание об осложнениях. Curr Opin Pediatr. 2009; 21: 145–9.

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 12.

    Всемирная организация здравоохранения. Всемирная организация здравоохранения / Панамериканская организация здравоохранения / Отчет ЮНЕСКО о консультации экспертов по амебиазу. Wkly Epidemiol Rec. 1997; 72: 97–9.

    Google Scholar

  • 13.

    Корпе П.С., Стотт Б.Р., Назиб Ф., Кабир М., Хак Р., Хербейн Дж. Ф. и др. Оценка экспресс-теста на обнаружение фекального антигена в месте оказания медицинской помощи для Entamoeba histolytica . Am J Trop Med Hyg. 2012. 86 (6): 980–1.

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 14.

    Abd-Alla MD, Wahib AA, Ravdin JI. Сравнение метода ELISA с захватом антигена и методов культивирования стула для выявления бессимптомной инфекции видов Entamoeba в Кафер Дауд, Египет. Am J Trop Med Hyg. 2000. 62: 579–82.

    CAS PubMed Google Scholar

  • 15.

    Эвангелопулос А., Легакис Н., Вакалис Н. Микроскопия, ПЦР и ELISA применяются в эпидемиологии амебиаза в Греции. Parasitol Int. 2001; 50: 185–9.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 16.

    Гонин П., Трудел Л. Обнаружение и дифференциация изолятов Entamoeba histolytica и Entamoeba dispar в клинических образцах с помощью ПЦР и иммуноферментного анализа. J Clin Microbiol. 2003. 41: 237–41.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 17.

    Furrows SJ, Moody AH, Chiodini PL. Сравнение методов ПЦР и обнаружения антигена для диагностики инфекции Entamoeba histolytica .J Clin Pathol. 2004. 57: 264–6.

    Артикул Google Scholar

  • 18.

    Visser LG, Verweij JJ, Van Esbroeck M, Edeling WM, Clerinx J, Polderman AM. Методы диагностики для дифференциации Entamoeba histolytica и Entamoeba dispar у носителей: эффективность и клинические последствия в неэндемичных условиях. Int J Med Microbiol. 2006; 296: 397–403.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 19.

    Пиньейро С.М., Карнейро Р.М., Ака И.С., Ирмао Дж. И., Мораис М.А. мл., Коимбра М.Р. и др. Определение распространенности Entamoeba histolytica и E. dispar в штате Пернамбуку на северо-востоке Бразилии с помощью полимеразной цепной реакции. Am J Trop Med Hyg. 2004; 70: 221–4.

    CAS PubMed Google Scholar

  • 20.

    Hamzah Z, Petmitr S, Mungthin M, Leelayoova S, Chavalitshewinkoon-Petmitr P. Дифференциальное обнаружение Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar и Entamoeba moshkovskii методом PCR за один проход.J Clin Microbiol. 2006. 44 (9): 3196–200.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 21.

    Хайрнар К., Парижа SC. Новый анализ вложенной мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) для дифференциального обнаружения ДНК Entamoeba histolytica, E. moshkovskii и E. dispar в образцах стула. BMC Microbiol. 2007; 7: 47.

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 22.

    Notomi T, Okayama H, Masubuchi H, Yonekawa T., Watanabe AN, Hase T. Изотермическая амплификация ДНК, опосредованная петлей. Nucleic Acid Res. 2000; 28: E63.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 23.

    Чахар М., Мишра Н., Анвикар А., Диксит Р., Валеха Н. Создание и применение нового анализа изотермической амплификации для быстрого определения устойчивости к хлорохину (K76T) в Plasmodium falciparum .Научный доклад 2017; 7: 41119. DOI: 10,1038 / srep41119.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 24.

    Тегень Б., Гети С., Лемма В., Мохон А. Н., Пиллай ДР. Применение петлевой изотермической амплификации (LAMP) для диагностики малярии среди беременных женщин с подозрением на малярию в Северо-Западной Эфиопии. Малар Дж. 2017; 16 (1): 34. DOI: 10.1186 / s12936-017-1692-4.

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 25.

    Sun XM, Ji YS, Liu XY, Xiang M, He G, Xie L, Suo JX, Suo X. Улучшение и оценка петлевой изотермической амплификации для быстрого обнаружения инфекции Toxoplasma gondii в образцах крови человека. PLoS ONE. 2017; 12 (1): e0169125. DOI: 10.1371 / journal.pone.0169125.

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 26.

    Lee D, Kim EJ, Kilgore PE, Takahashi H, Ohnishi M, Tomono J, Miyamoto S, Omagari D, Kim DW, Seki M.Новый петлевой анализ изотермической амплификации для идентификации серогрупп Neisseria meningitidis в спинномозговой жидкости. Front Microbiol. 2016; 6: 1548. DOI: 10.3389 / fmicb.2015.01548.

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 27.

    Notomi T, Mori Y, Tomita N, Kanda H. Петлевая изотермическая амплификация (LAMP): принцип, особенности и перспективы на будущее. J Microbiol. 2015; 53: 1–5. DOI: 10.1007 / s12275-015-4656-9.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 28.

    Lee P. Амплификация ДНК в полевых условиях: переходите к ПЦР, вот и LAMP. Мол Экол Ресур. 2017; 17 (2): 138–41. DOI: 10.1111 / 1755-0998.12548.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 29.

    Сирахо Е.А., Эрик А.Л., Мванги И.Н., Майна Дж. М., Кинутия Дж. М., Мутуку М. В., Мугамби Р. М., Мванди Дж. М., Мкоджи Г. М.. Разработка опосредованной петлей изотермической амплификации для диагностики Ascaris lumbricoides в образцах фекалий.J Parasitol Res. 2016; 2016: 7376207.

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 30.

    Wei C, Wen-En L, Yang-Ming L, Shan L, Yi-Ming Z. Диагностическая точность петлевой изотермической амплификации при обнаружении Clostridium difficile в образцах стула: метаанализ . Arch Med Sci. 2015; 11 (5): 927–36. DOI: 10.5114 / aoms.2015.54846.

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 31.

    Mugambi RM, Agola EL, Mwangi IN, Kinyua J, Shiraho EA, Mkoji GM. Разработка и оценка метода петлевой изотермической амплификации (LAMP) для обнаружения анкилостомоза ( Necator americanus ) в образцах фекалий. Векторы паразитов. 2015; 8: 574. DOI: 10.1186 / s13071-015-1183-9.

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 32.

    Liang S, Chan Y, Hsia K, Lee J, Kuo M, Hwa K, et al.Разработка метода петлевой изотермической амплификации для обнаружения Entamoeba histolytica . J Clin Microbiol. 2009; 47: 1892–5.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 33.

    Ривера ВЛ, Онг Вирджиния. Разработка опосредованной петлей изотермической амплификации для быстрого обнаружения Entamoeba histolytica . Азиатский Pac J Trop Med. 2013. 6 (6): 457–61.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 34.

    Njiru ZK. Петлевой изотермический усилитель: к диагностике на месте. PLoS Negl Trop Dis. 2012; 6 (6): e1572. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0001572.

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 35.

    Gandelman O, Jackson R, Kiddle G, Tisi L. Петлевая амплификация, ускоренная стеблевыми праймерами. Int J Mol Sci. 2011; 12: 9108–24.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 36.

    Njiru ZK, Mbae CK, Mburugu GN. Петлевой изотермический тест амплификации для Trypanosoma gambiense группа 1 со стволовыми праймерами: тест молекулярного ксеномониторинга сонной болезни. J Trop Med. 2017. DOI: 10.1155 / 2017/8630708.

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 37.

    Nagamine K, Hase T, Notomi T. Ускоренная реакция посредством петлевой изотермической амплификации с использованием петлевых праймеров. Зонды Mol Cell.2002; 16: 223–9.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 38.

    Чизбро М. Практика районной лаборатории в тропических странах часть 1. 2-е изд. Кембридж: Синдикат прессы; 2005. с. 196–8.

    Книга Google Scholar

  • 39.

    Хубер М., Коллер Б., Гитлер С., Мирельман Д., Ревель М., Розенблатт С. и др. E. histolytica. гены рибосомной РНК переносятся на палиндромных кольцевых молекулах ДНК.Мол Биохим Паразитол. 1989. 32: 285–96.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 40.

    Cobb BD, Clarkson JM. Простая процедура оптимизации полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием модифицированных методов Тагучи. Nucleic Acids Res. 1994; 22: 3801–5.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 41.

    Monis PT, Giglio S, Saint CP.Сравнение SYTO9 и SYBR Green I для полимеразной цепной реакции в реальном времени и исследование влияния концентрации красителя на амплификацию и анализ кривой плавления ДНК. Анальная биохимия. 2005; 340: 24–34.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 42.

    Njiru ZK, Mikosza AS, Matovu E, Enyaru JC, Ouma JO, Kibona SN, et al. Африканский трипаносомоз: чувствительное и быстрое обнаружение подрода Trypanozoon с помощью петлевой изотермической амплификации (LAMP) ДНК паразита.Int J Parasitol. 2008; 38: 589–99.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 43.

    Njiru ZK, Yeboah-Manu D, Stinear TP, Fyfe JA. Быстрое и чувствительное обнаружение Mycobacterium ulcerans с помощью петлевой изотермической амплификации. J Clin Microbiol. 2012; 50 (5): 1737–41. DOI: 10.1128 / JCM.06460-11.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • Сравнение методов ПЦР и обнаружения антигенов для диагностики инфекции Entamoeba histolytica

    Протозойный паразит Entamoeba histolytica является возбудителем амебной дизентерии и амебного абсцесса печени. 1, 2 Это основная причина заболеваемости и смертности в развивающихся странах, и с увеличением количества путешествий амебные инфекции теперь чаще встречаются в Великобритании. Световая микроскопия кала, традиционный метод диагностики, не позволяет отличить цисты E histolytica от непатогенной амебы E dispar . 3, 4 Таким образом, новые методы, включая обнаружение антигена и полимеразную цепную реакцию (ПЦР), проходят оценку в качестве диагностических инструментов.Мы стремились оценить обнаружение антигена и два разных метода ПЦР для использования в диагностической лаборатории.

    «С увеличением количества путешествий амебные инфекции стали более частыми в Великобритании»

    МЕТОДЫ

    Мы изучили 101 образец, отправленный в отделение клинической паразитологии Больницы тропических болезней, Лондон, Великобритания, для исследования амеб в течение года до мая 2003 г. Они включали 94 положительных при микроскопии стула (у двух были трофозоиты, у 92 — кисты) и семь образцов гноя из абсцессов печени или легких неизвестной этиологии.

    Световая микроскопия была проведена на концентратах формол-эфир стула. Обычно образцы гноя не исследуются под микроскопом на наличие паразитов, поскольку известно, что этот метод нечувствителен. 5

    Обнаружение антигена

    было выполнено на всех образцах стула и на двух образцах гноя с использованием набора Techlab E histolytica II (Techlab, Блэксбург, Вирджиния, США), метода иммуноферментного анализа (ELISA), основанного на обнаружении галактозный адгезин E histolytica .Образцы свежего стула или гноя помещали в буфер в день получения и обрабатывали в течение одной недели. Были протестированы только два из семи образцов гноя, потому что остальные были заморожены и поэтому не считались подходящими для анализа. Анализ проводился в соответствии с инструкциями производителя и считывался на планшет-ридере.

    Все образцы подверглись экстракции ДНК перед ПЦР. Некоторые образцы хранились в течение определенного периода времени перед экстракцией. Из 94 стула 13 были извлечены из свежего стула с использованием набора стула Qiagen (Hilden, Германия) в соответствии с инструкциями производителя.Десять образцов стула были заморожены при -20 ° C перед экстракцией с использованием набора для стула Qiagen в соответствии с инструкциями производителя. Семьдесят один образец стула хранился в виде концентратов формол-эфир при 4 ° C перед экстракцией, которую проводили с использованием модификации протокола мини-набора для крови Qiagen следующим образом. Концентрат формол-эфир центрифугировали при 6500 об / мин в течение двух минут в настольной мини-центрифуге. Супернатант отбрасывали и осадок замораживали при -80 ° C в течение 10 минут, после чего к осадку добавляли 180 мкл ATL-буфера (набор Qiagen) и 20 мкл протеиназы K, который инкубировали при 56 ° C в течение двух часы.Затем добавляли 200 мкл буфера AL (набор Qiagen) и смесь инкубировали при 70 ° C в течение 10 минут. Затем смесь центрифугировали при 13000 об / мин в течение одной минуты, супернатант сохраняли и переносили в свежую 1,5-миллилитровую микроцентрифужную пробирку и добавляли 200 мкл этанола (96–100%). Последующую очистку проводили на спин-колонках Qiagen в соответствии с инструкциями производителя.

    Из семи образцов гноя один был извлечен во время получения образца, а остальные были заморожены при -20 ° C перед экстракцией с использованием мини-набора для крови Qiagen в соответствии с инструкциями производителя.

    Использовали два отдельных метода ПЦР. Иммуноферментный анализ с гибридизацией в растворе ПЦР (SHELA) 6, 7 был разработан Лондонской школой гигиены и тропической медицины, Лондон, Великобритания, для обнаружения и дифференциации E histolytica и E dispar с использованием отдельные праймеры, специфичные для каждого вида. Он использует колориметрический метод ELISA для обнаружения продуктов ПЦР, так что окончательные результаты могут быть прочитаны на планшет-ридере или на глаз.ПЦР-SHELA была проведена на всех 101 образце. Artus RealArt PCR (LC-PCR; Artus, Гамбург, Германия) — это коммерчески доступный набор, запускаемый на Lightcycler (Roche, Мангейм, Германия), который амплифицирует область 230 п.н. генома E histolytica : это количественный ПЦР с флуорометрическим детектированием и включает внутренний контроль. В настоящее время производители советуют использовать его только на экстрактах свежего или замороженного стула. По финансовым причинам использование LC-PCR было ограничено 34 образцами, включая все образцы, которые были положительными на E histolytica в другом анализе.

    РЕЗУЛЬТАТЫ

    Микроскопия кала была положительной во всех случаях как критерий включения в наше исследование. В таблицах 1 и 2 представлены дополнительные сведения о результатах.

    Таблица 1

    Сводка результатов

    Таблица 2

    Сводка положительных результатов для Entamoeba histolytica

    Пятнадцать из 101 образца дали положительный результат на E histolytica одним или несколькими методами.Эти положительные результаты включали пять образцов гноя в печени и 10 образцов стула. В целом, методы были хорошо согласованы, но пять образцов стула дали противоречивые результаты. Один был отрицательным по ELISA на Techlab, но положительным в отношении E histolytica по результатам ПЦР-ШЕЛА и ЖХ-ПЦР. Второй был положительным с помощью ELISA Techlab, но был идентифицирован как E dispar с помощью ПЦР-SHELA, а ЖХ-ПЦР была отрицательной. Третий был положительным по данным Techlab ELISA и LC-PCR, но отрицательным по результатам PCR-SHELA. Четвертый и пятый образцы были положительными по данным Techlab ELISA и PCR-SHELA, но отрицательными по данным LC-PCR.

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Десять из 96 протестированных образцов дали положительный результат с помощью анализа Techlab для обнаружения антигенов. Одним из этих положительных результатов был образец гноя печени от пациента с подозрением на амебный абсцесс печени, подтверждающий, что анализ иногда может работать на нефекальных образцах, 8 , несмотря на рекомендацию производителя проводить этот анализ только на свежем забуференном стуле. . Остальные девять положительных результатов были образцами стула от пациентов с подозрением на кишечную амебную инфекцию.Все, кроме одного, были подтверждены как E histolytica по крайней мере еще одним методом. Анализ Techlab E histolytica II технически прост, относительно недорог и занимает около двух часов. Предыдущие исследования 9 показали, что его чувствительность составляет 85% по сравнению с анализом посевов и изоферментов, что приближается к чувствительности ПЦР. Производитель заявляет, что анализ не вступает в перекрестную реакцию с другими фекальными патогенами, такими как Giardia lamblia или Entamoeba coli .

    Двенадцать из 34 образцов были положительными при ЖХ-ПЦР. Все они были также положительны в отношении E histolytica по крайней мере еще одним методом. Преимущества этого анализа заключаются в его простоте и скорости: настройка ЖХ-ПЦР занимает несколько минут, а запуск — менее часа, после чего результаты становятся доступны немедленно, без необходимости нанесения геля. Таким образом, весь процесс, включая выделение ДНК, можно выполнить в течение дня. Включение внутреннего контроля является еще одним преимуществом, позволяющим пользователю обнаруживать ингибирование в отдельной реакционной пробирке.Система флуоресцентного обнаружения означает, что пробирки не нужно открывать после амплификации, что снижает риск заражения лаборатории продуктами ПЦР. Результаты архивируются в компьютерной системе для облегчения поиска. Основным недостатком этого анализа является необходимость в установке Lightcycler PCR. Другой проблемой является отсутствие информации об анализе, который работает как «черный ящик» с небольшим количеством информации о целевой последовательности ДНК.

    При использовании ПЦР-SHELA 10 образцов были положительными только для E histolytica , три были положительными для обоих E histolytica и E dispar , 64 были положительными только для E dispar и 24 образца были отрицательными.Этот анализ является высокочувствительным, поскольку праймеры основаны на последовательностях повторяющихся элементов в многочисленных (несколько сотен на трофозоит) эписомах рибосомной ДНК размером 25 т.п.н.: Бриттен и др. предполагают предел обнаружения 10 -1 трофозоитов для каждого грамм фекалий для E histolytica и от одного до 10 трофозоитов на каждый грамм фекалий для E dispar . 7 Анализ более чувствителен к E histolytica , чем к E dispar , потому что последовательность повторяющегося элемента E dispar не позволяет оптимизировать дизайн праймера.Анализ надежен и может управляться с помощью базового оборудования для ПЦР. Основным недостатком этого анализа является длительность необходимого времени: весь процесс, включая выделение ДНК, занимает полтора дня. Однако это может не быть проблемой для лабораторий, которые «производят партии» образцов и обрабатывают их через определенные промежутки времени.

    Пять из 101 образца дали противоречивые результаты при анализе разными методами (таблица 2). Есть несколько возможных объяснений этих различий.

    1. Время между получением образца и анализом.ELISA Techlab проводили в «идеальных» условиях, когда образец стула помещали в буфер в день получения и анализировали в течение одной недели. Однако многие экстракты ДНК, используемые для ПЦР, были приготовлены из образцов стула, хранимых до года: из пяти образцов стула, дающих противоречивые результаты, три были сохранены в виде концентратов формол-эфир при 4 ° C (для двух, пяти, и девять месяцев), и два были заморожены при -20 ° C (в течение четырех месяцев и 12 месяцев) перед экстракцией ДНК.

    2. Характер пробы.Некоторые образцы стула хранили при -20 ° C, тогда как некоторые хранились в виде концентратов формол-эфир при 4 ° C. Qiagen рекомендует использовать свежий или замороженный стул для экстракции и не рекомендует экстракцию из концентратов формол-эфир: однако большинство таких образцов успешно экстрагируются и амплифицируются. Из 71 экстракта концентратов формол-эфир 56 амплифицировали в PCR-SHELA. Остальные 15 не смогли усилить, но отсутствие внутреннего контроля экстракции не позволяет сказать, было ли это неудачей экстракции или просто отрицательным результатом.

    3. Наличие ингибирующих веществ. Образцы стула часто содержат ингибиторы ПЦР и вещества, повреждающие ДНК, но их влияние следует минимизировать путем использования таблеток InhibitEX (которые адсорбируют вещества, повреждающие ДНК и ингибиторы ПЦР) в процедуре Qiagen для выделения ДНК из свежего или замороженного стула. Ингибирование ПЦР можно определить с помощью LC-PCR, которая включает внутренний контроль, но не с помощью PCR-SHELA. Чтобы уменьшить возможное влияние ингибиторов на ПЦР-ШЕЛА, все экстракты ДНК были добавлены в смесь для ПЦР как в чистом виде, так и в разведении 1/10, что должно снизить концентрацию ингибиторов в конечной смеси для ПЦР, но за счет уменьшение количества целевой ДНК в смеси для ПЦР.Это не повлияло на обнаружение инфекции E histolytica в чистом виде, но из 64 инфекций, вызванных чистым E dispar , девять были обнаружены только с чистым экстрактом, 15 — только с разведением 1/10, а 40 были положительными с обоими препаратами. чистые образцы и разведения 1/10. Как присутствие ингибиторов, так и уменьшение целевой ДНК может иметь более неблагоприятный эффект на ПЦР E dispar , поскольку дизайн праймера для E dispar является неоптимальным.

    4. Перекрестная реактивность между видами Entamoeba .Важно, чтобы не происходила перекрестная реактивность, потому что, если другие виды Entamoeba ошибочно идентифицированы как E histolytica , будут выданы ложноположительные результаты. Хотя большая часть исследований была сосредоточена на различении E histolytica от E dispar , другие виды, такие как E moshkovskii , также напоминают E histolytica . 10 ELISA Techlab разработан так, чтобы быть специфичным для E histolytica , но на практике иногда наблюдается перекрестная реактивность между E histolytica и E dispar . 9 Это было продемонстрировано в случае 2, где ELISA Techlab был положительным, LC-PCR был отрицательным, а PCR-SHELA обнаружил E dispar . В ПЦР-SHELA используются отдельные видоспецифические праймеры и зонды для E histolytica и E dispar . Следовательно, перекрестной реакции возникать не должно. Ошибок перекрестного заражения следует избегать с помощью надлежащей лабораторной практики. 11 Праймеры LC-PCR разработаны так, чтобы быть специфичными для генома E histolytica (S Patel, Artus, личное сообщение, 2003), но дополнительная информация о дизайне праймеров недоступна.

    В заключение, существует хорошая общая корреляция между методами. Все три анализа на E histolytica , использованные в нашем исследовании, оказались сопоставимыми по чувствительности и специфичности. Время, необходимое для проведения анализов, составляло от двух часов до 1,5 дней. Требуемое оборудование варьировалось от базовых пипеток, вортекс и планшет-ридера для Techlab ELISA до полного молекулярного лабораторного оборудования, включающего Lightcycler. Выбор метода анализа, вероятно, будет зависеть от доступного лабораторного оборудования, требуемого «времени обработки» для лаборатории и количества проб, которые могут быть обработаны.Очевидно, что Techlab ELISA был самым простым и быстрым анализом и, следовательно, наиболее подходящим для полевых лабораторий в развивающихся странах. ПЦР-ШЕЛА также может быть подходящим вариантом для развивающихся стран, поскольку необходимое молекулярное оборудование является относительно простым, а реагентов, хотя и дорогих для первоначальной покупки, достаточно для тестирования сотен образцов. PCR-SHELA также имеет преимущества проверки образцов, отличных от кала, и способность идентифицировать E dispar .

    Забрать домой сообщения
    • Мы сравнили чувствительность и специфичность трех анализов для обнаружения инфекции Entamoeba histolytica — иммуноферментного анализа для обнаружения антигена, полимеразной цепной реакции (ПЦР) -SHELA и коммерческого ПЦР Lightcycler — с использованием 101 образца стула и гноя

    • Все три метода выполняются сравнимо, поэтому выбор анализа, вероятно, будет зависеть от доступного лабораторного оборудования, требуемого «времени обработки» для лаборатории и количества образцов, которые, вероятно, будут обработаны

    Многие лаборатории в Великобритании редко обнаруживают цисты энтамоебы в образцах стула, поэтому их предпочтительный вариант — направить эти образцы в референс-лабораторию.Референс-лаборатория должна иметь надежный, воспроизводимый и в идеале недорогой анализ. Преимущество ПЦР в воспроизводимости состоит в том, что экстракты ДНК можно хранить, поэтому экстракт можно повторно протестировать позднее, если потребуется; кроме того, продукт ПЦР может храниться неограниченное время и даже может быть секвенирован, если результат вызывает сомнения. И PCR-SHELA, и Artus LC-PCR являются подходящими ПЦР-анализами для референс-лаборатории.

    ССЫЛКИ

    1. Петри WA , Singh U.Диагностика и лечение амебиаза. Clin Infect Dis, 1999; 29: 1117–25.

    2. Ayeh-Kumi PF , Петри, Вашингтон. Диагностика и лечение амебиаза. Infect Med2002; 19: 375–82.

    3. Ackers JP . Диагностические последствия разделения Entamoeba histolytica и Entamoeba dispar. J Biosci, 2002; 27: 573–8.

    4. Diamond LS , Clark CG.Повторное описание Entamoeba histolytica Schaudinn 1903 (с поправками Walker 1911), отделяющее его от Entamoeba dispar Brumpt 1925. J Eukaryot Microbiol1993; 40: 340–4.

    5. Aguirre A , Warhurst DC, Guhl F, et al. Иммуноферментный анализ с гибридизацией с полимеразной цепной реакцией и раствором (ПЦР-SHELA) для дифференциальной диагностики патогенных и непатогенных Entamoeba histolytica.Trans R Soc Trop Med Hyg 1995; 89: 187–8.

    6. Britten D , Wilson SM, McNerney R, et al. Усовершенствованный колориметрический метод ПЦР для обнаружения и дифференциации Entamoeba histolytica и Entamoeba dispar в кале. J Clin Microbiol 1997; 35: 1108–11.

    7. Haque H , Mollah NU, Ali IKM, et al. Диагностика амебного абсцесса печени и кишечной инфекции с помощью тестов TechLab Entamoeba histolytica II и тестов на антитела.J Clin Microbiol 2000; 38: 3235–9.

    8. Haque R , Ali IKM, Akther S, et al. Сравнение результатов ПЦР, анализа изоферментов и обнаружения антигенов для диагностики инфекции Entamoeba histolytica. J Clin Microbiol 1998; 36: 449–52.

    9. Али IKM , Hossain MH, Roy S, et al. Инфекции Entamoeba moshkovskii у детей в Бангладеш. Emerg Infect Dis 2003; 9: 580–4.

    10. Борозды SJ , Ridgway GL. «Надлежащая лабораторная практика» в лабораториях молекулярной диагностики. Clin Microbiol Infect 2001; 7: 227–9.

    Полевые исследования амебиаза в Бангладеш — Просмотр полного текста

  • Исследования стимуляции интерлейкина (ИЛ) -1β мононуклеарных клеток периферической крови [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они это сделают нет E.histolytica и не вызывают диарейных заболеваний. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции ИЛ-2 мононуклеарных клеток периферической крови [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза E.histolytica инфекция или заболевание.


  • Исследования стимуляции ИЛ-4 мононуклеарных клеток периферической крови [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции ИЛ-5 мононуклеарных клеток периферической крови [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, у которых нет E.histolytica и не вызывают диарейных заболеваний. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции ИЛ-6 мононуклеарных клеток периферической крови [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза E.histolytica инфекция или заболевание.


  • Исследования стимуляции ИЛ-7 мононуклеарных клеток периферической крови [Срок: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции ИЛ-8 мононуклеарных клеток периферической крови [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда у них нет E.histolytica и не вызывают диарейных заболеваний. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции ИЛ-10 мононуклеарных клеток периферической крови [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза E.histolytica инфекция или заболевание.


  • Исследования стимуляции мононуклеарных клеток периферической крови IL-12 (p70) [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диареей болезнь. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции мононуклеарных клеток периферической крови IL-12 (p40) [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда у них нет E.histolytica и не вызывают диарейных заболеваний. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции ИЛ-13 мононуклеарных клеток периферической крови [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза E.histolytica инфекция или заболевание.


  • Исследования стимуляции ИЛ-17 мононуклеарных клеток периферической крови [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции интерфероном-γ мононуклеарных клеток периферической крови [Срок: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда у них нет E.histolytica и не вызывают диарейных заболеваний. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции колониестимулирующего фактора гранулоцитов-макрофагов мононуклеарных клеток периферической крови [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют брать кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и свободны от них диарейное заболевание.Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции фактора некроза опухоли-α мононуклеарных клеток периферической крови [Срок: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями . Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза E.histolytica инфекция или заболевание.


  • Исследования стимуляции фактора некроза опухоли-β мононуклеарных клеток периферической крови [Срок: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями . Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции гранулоцитов и колониестимулирующего фактора мононуклеарных клеток периферической крови [Срок: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда у них нет E.histolytica и не вызывают диарейных заболеваний. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Мононуклеарные клетки периферической крови, макрофаги, воспалительный белок (MIP) -1 исследования β-стимуляции [Срок: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. без диарейных заболеваний.Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции MIP-1 α мононуклеарных клеток периферической крови [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза E.histolytica инфекция или заболевание.


  • Исследования стимуляции хемотаксического протеина-1 моноцитов мононуклеарных клеток периферической крови [Срок: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями . Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции эотаксином мононуклеарных клеток периферической крови [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда у них нет E.histolytica и не вызывают диарейных заболеваний. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Основные исследования стимуляции фактора роста фибробластов мононуклеарных клеток периферической крови [Срок: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями.Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции фактора роста эндотелия сосудов мононуклеарами периферической крови [Срок: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза E.histolytica инфекция или заболевание.


  • Исследования стимуляции мононуклеарных клеток периферической крови, «регулируемые при активации, нормальные экспрессии и секреции Т» (RANTES) [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, у которых нет E. yhistolytica и не вызывают диарейных заболеваний. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции лептина мононуклеарными клетками периферической крови [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции мононуклеарных клеток периферической крови, эпителиального активирующего нейтрофила пептида (ENA) -78 [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, у которых нет E.histolytica и не вызывают диарейных заболеваний. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Исследования стимуляции фактора роста нервов мононуклеарными клетками периферической крови [Срок: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза E.histolytica инфекция или заболевание.


  • Исследования стимуляции протеина-10, индуцируемого мононуклеарными клетками периферической крови [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Исследователи планируют получить кровь для анализа цитокинов у детей, когда они не инфицированы E. histolytica и не страдают диарейными заболеваниями. Исследователи также планируют получить кровь для анализа на цитокины у детей в течение 48 часов после постановки диагноза инфекции или заболевания E. histolytica.


  • Фекальный иммуноглобулин-A [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Образцы будут собраны в виде пар.Один образец будет взят из каждого эпизода диареи с амебиазом и будет сопряжен со стулом этого ребенка, если у него не обнаружен амебиаз в стуле и нет острой диареи.


  • Детерминанта анти-перекрестной реакции иммуноглобулина-G фекалий [Временные рамки: от рождения до 5 лет]

    Эти образцы будут собраны в виде пар. Один образец будет взят из каждого эпизода диареи с амебиазом и будет сопряжен со стулом этого ребенка, если у него не обнаружен амебиаз в стуле и нет острой диареи.


  • Анализ однонуклеотидного полиморфизма врожденного и адаптивного иммунитета [Временные рамки: Один раз; между рождением и 7-м днем ​​жизни. ]
  • Полногеномное сканирование ассоциации [Временные рамки: один раз, в возрасте 5 лет]
  • Определение фекального микробиома с помощью 16-секундной рибосомной дезоксирибонуклеиновой кислоты (рДНК) [Временные рамки: от рождения до 5 лет]
  • Длина / высота в сантиметры [Временные рамки: от рождения до 5 лет]
  • Вес в граммах [Временные рамки: от рождения до 5 лет]
  • Endolimax Nana — обзор

    Кишечные паразиты

    Желудочно-кишечные паразиты обычно обнаруживаются при скрининговых исследованиях стула иммигрантов и беженцы.Часто встречающиеся непатогены: Endolimax nana, Entamoeba coli, Entamoeba hartmanni, Iodamoeba butschlii, Chilomastix mesnili и Blastocystis hominis . За исключением, возможно, Blastocystis hominis , эти организмы считаются непатогенными и не подлежат лечению. Обычные организмы, считающиеся патогенами, включают Giardia lamblia, Entamoeba histolytica, Trichuris trichiura, Hymenolepis nana, Ascaris lumbricoides , анкилостомоз, Strongyloides stercoralis, Schistosoma видов и Dientamoeba fragilis (Таблица 12.7). Иногда выявляются и другие, более необычные паразитарные инфекции, такие как инфекции двуустки (например, Ophisthorchis spp.).

    Распространенность паразитов у детей-беженцев в Буффало, штат Нью-Йорк, составила 21,8% (19/87), 13 , что аналогично тому, что наблюдали у беженцев всех возрастов в Миннесоте (22%, 462/2129). 25 Более высокий процент был обнаружен среди детей-беженцев в Портленде, штат Мэн, 43,7% (38/87). 12 Примерно у трети (31,1%, 75/241) детей-беженцев в округе Майами-Дейд, Флорида, были обнаружены патогены в стуле O&P. 33

    Эмпирическое лечение альбендазолом перед отъездом за границу для беженцев в странах Африки к югу от Сахары проводится с 1999 года (за исключением беременных женщин и лиц младше 2 лет). Снижение выявления кишечных паразитов было замечено в исследовании до и после прибытия беженцев в Массачусетс. 34 Наблюдалось значительное сокращение как гельминтов, так и простейших, включая анкилостомоз, Trichuris, Ascaris и Entamoeba histolytica .Следует отметить, что в этой популяции эозинофилия часто возникает после паразитарной инфекции до отъезда. Фактически, эозинофилия в этой предварительно обработанной группе имеет только 12% положительную прогностическую ценность для последующего обнаружения потенциально патогенного паразита в стуле. Новые рекомендации по комплексной схеме лечения, направленные на эмпирическое лечение Strongyloides stercoralis и Schistosoma spp. может расширить зарубежное лечение и эмпирически лечить большинство паразитов цестод, нематод и трематод.

    Регулярное обследование кала на предмет наличия яйцеклеток и паразитов (O&P стула) в настоящее время рекомендуется лицам, прибывающим из развивающихся стран или проживающим в лагерях беженцев или районах, где санитарные услуги были нарушены из-за стихийных бедствий или политических условий. Любой человек с симптомами, указывающими на наличие желудочно-кишечного паразита, независимо от его предыдущих условий жизни, также должен пройти обследование. Эозинофилия также сильно свидетельствует о заражении паразитами. Специфичность эозинофилии у нелеченых беженцев (абсолютное количество эозинофилов выше 400–500 / микролитр) превышает 95%. 35 Хотя несколько образцов стула увеличивают вероятность обнаружения патогена, оптимальное количество неясно. 36–38 В большинстве случаев достаточно от одного до трех образцов. Strongyloides присутствует во многих частях мира, и его трудно обнаружить в стуле O&P: даже три правильно собранных исследования кала выявляют только половину инфицированных. Аутоинфекция может привести к инфекции, продолжающейся десятилетия. Это вызывает беспокойство из-за риска распространения инфекции и смерти, когда пациенты становятся подавленными из-за инфекции вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), злокачественных новообразований или лекарств (стероидов, химиотерапии).У большинства инфицированных людей будет эозинофилия. Этого паразита следует учитывать, если у пациента есть эозинофилия, источник которой не идентифицирован в стуле. В этом случае серологическое обследование может выявить инфекцию и привести к соответствующему лечению.

    Кисты Entamoeba dispar нельзя отличить от E. histolytica с помощью микроскопии. Бессимптомный беженец, у которого выявлено комплекса E. histolytica / dispar , должен пройти серологическое обследование и / или анализ стула на антиген и пройти лечение только при диагнозе E.histolytica подтверждается. Во многих условиях эти тесты могут быть недоступны, и некоторые эксперты предпочитают лечить этих пациентов 7-дневным курсом паромомицина, чтобы гарантировать ликвидацию потенциально опасных кист.

    Сбор стула будет производиться дома, а контейнеры для образцов содержат токсичный консервант. Пациентам следует давать четкие инструкции на их родном языке через переводчика, если необходимо, чтобы избежать получения непригодных для использования образцов и непреднамеренного воздействия консерванта.

    Недавно Центры по контролю и профилактике заболеваний разработали рекомендации по предполагаемому лечению стронгилоидоза и шистосомоза для суданских беженцев. 39 Эти рекомендации были основаны на результатах серологического исследования, показавшего, что почти 70% потерянных мальчиков и девочек в Судане дали положительный результат на шистосомоз или стронгилоидоз, и более 20% дали положительный результат на оба этих заболевания. Текущие рекомендации предполагают лечение всех суданских беженцев, которые не беременны или не кормят грудью и не имеют признаков нейроцистицеркоза.Для тех, кто не тестировался на Loa loa, рекомендуемое лечение — это 7-дневный курс альбендазола (400 мг два раза в день) для лиц старше 1 года и две дозы празиквантела (20 мг / кг с интервалом 6-8 часов) для тех, кто От 4 лет и старше. Тем, у кого был отрицательный результат теста на Loa loa и который весил более 15 кг, для лечения стронгилоидоза рекомендовали ивермектин (200 мкг / кг, одна доза). Лицам старше 1 года также рекомендовалось получить одну дозу альбендазола (600 мг) для лечения других кишечных паразитов и указанную выше дозу празиквантела для лечения шистосомоза.Тестирование на шистосомоз и стронгилоидоз доступно в Центрах по контролю и профилактике заболеваний для лиц, которые соответствуют критериям исключения для предполагаемого лечения. В настоящее время неясно, соблюдаются ли эти рекомендации теми, кто видит беженцев и иммигрантов из Судана, или же эти рекомендации могут быть обобщены для включения других групп иммигрантов. Многие эксперты, занимающиеся скринингом беженцев, предпочитают ставить конкретные диагнозы и составлять целевые планы лечения, одновременно отслеживая течение эозинофилии с течением времени.Наиболее важным результатом этих исследований может быть побуждение клиницистов рассмотреть возможность скрининга бессимптомных лиц с высоким риском, даже без эозинофилии, на паразитарные заболевания, особенно стронгилоидоз.

    (PDF) Сравнение наборов для определения антигена стула с ПЦР для диагностики амебиаза

    lytica ПЦР позволила обнаружить продукт ПЦР в образце

    , содержащем один трофозоит на реакцию.

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Было обнаружено, что ПЦР E. histolytica является как чувствительной, так и специфичной для обнаружения и дифференциации комплекса E.

    Кроме того, было обнаружено, что ПЦР имеет нижний предел обнаружения

    примерно один трофозоит на лунку. Напротив,

    оба набора антигенов стула (набор Entamoeba CELISA PATH

    и набор TechLab E. histolytica II) показали низкую чувствительность

    28 и 0% соответственно по сравнению с ПЦР с этими

    .

    результатов, представляющих первую опубликованную стандартизированную оценку

    набора Entamoeba CELISA PATH по сравнению с ПЦР.

    Было разработано несколько наборов для ELISA, о которых было сообщено на номер

    , которые обладают высокой чувствительностью и специфичностью (7, 10, 12, 16). Тем не менее,

    эта оценка показала, что оба набора ELISA показали

    плохо по сравнению с ПЦР при тестировании рутинной микроскопии —

    положительных образцов стула, отправленных в две диагностические паразитологические лаборатории

    в Австралии. Количественное определение в условиях культивирования клеток Ly-

    показало, что набор Entamoeba CELISA PATH был более чувствительным, чем набор

    , со способностью обнаруживать приблизительно 1000

    трофозоитов на лунку по сравнению с TechLab E.histolytica II

    , который требовал в 10 раз большей нагрузки, примерно

    10 000 трофозоитов на лунку для положительного теста. Оба набора используют

    одну и ту же мишень, моноклональные антитела против Gal /

    GalNAc-специфического лектина (молекулы адгезина) E. histolytica.

    Различия в характеристиках двух ELISA

    можно отнести к количеству антител, используемых для покрытия лунок

    планшетов для ELISA. Уровень обнаружения, наблюдаемый с системами на основе антител

    , был в 1000 раз менее чувствителен, чем уровень

    , который может быть достигнут с помощью амплификации ПЦР, нацеленной на рДНК

    .Поскольку ни один из ПЦР-положительных образцов не был количественно определен,

    неясно, является ли это единственной причиной более низкого уровня обнаружения

    . Однако это может объяснить разницу в характеристиках двух наборов для ELISA.

    Набор антигенов TechLab использовался в течение нескольких лет в

    различных лабораториях для обнаружения E. histolytica в

    регионах мира, где он эндемичен или неэндемичен. Результаты

    , полученные с помощью набора антигенов TechLab, противоречат результатам

    исследований, проведенных в странах, где E.histo-

    lytica является высокоэндемичным, сообщая о высокой чувствительности от

    95 до 100% (9, 11, 14). Однако недавнее исследование, проведенное в

    регионе северного Эквадора, где E. histolytica является высоко эндемичным

    , показало, что тест TechLab E. histolytica II на

    сформирован плохо, с зарегистрированной чувствительностью 14,3% и

    . специфичность 98,4% по сравнению с изоферментным анализом (6). В

    регионах с низкой эндемичностью было зарегистрировано, что TechLab ELISA имеет более низкую чувствительность, чем у микроскопии (7).

    Аналогичные результаты были получены, когда TechLab ELISA составил

    по сравнению с ПЦР в реальном времени в качестве эталонного теста в настройке микрочности с низким значением

    (19). Mirelman et al. (1997) смогли количественно определить разницу в чувствительности в

    , используя набор TechLab ⬎100

    раз менее чувствительный, чем ПЦР (12). Все эти предыдущие открытия

    подтверждаются нашими результатами, которые показали, что набор ELISA TechLab

    не был таким чувствительным или специфичным, как ПЦР.Кроме того,

    набор TechLab ELISA был в 1000 раз менее чувствителен, чем

    ПЦР. Gatti et al. предположил, что низкая эффективность

    наборов ELISA может быть связана с тем фактом, что анализы распознают

    антигенов только на вегетативных формах, которые обычно

    обнаруживаются в образцах диарейного стула во время острой амебной инфекции. не в кистозной стадии паразита (6). В нашем исследовании у

    , по крайней мере, у половины пациентов были симптомы, и в большинстве случаев присутствовали как трофозоиты, так и кисты, что доказано микроскопией

    , но наборы ELISA по-прежнему работали плохо.Однако следует отметить, что в этом исследовании использовались лизаты клеток

    E. histolytica для расчета аналитической чувствительности

    ELISA, и неясно, имеют ли ELISA сопоставимые

    пределы обнаружения трофозоитов, цист, и клеточные лизаты.

    В заключение, обнаружение антигена с помощью ELISA технически

    просто выполнить, быстро и дешевле, чем молекулярные методы

    ods; однако, учитывая низкую эффективность обоих коммерческих наборов для ИФА

    , можно утверждать, что они не должны использоваться в качестве основного средства диагностики E.histolytica. Кроме того, еще

    , если используются эти тесты, они должны сначала пройти обширную локальную оценку

    по сравнению с ПЦР в качестве «золотого стандарта», чтобы

    определить уровень ложноотрицательных результатов, ожидаемых в этой популяции

    при использовании ELISA для Диагноз: E. histo-

    lytica. Оба набора ELISA были специфичными и, следовательно,

    все еще могут иметь место в дифференциации видов комплекса E

    , когда большое количество цист и / или трофозоитов обнаруживается

    под микроскопом.Это исследование ясно демонстрирует преимущества

    ПЦР над наборами на основе ELISA как по чувствительности, так и по специфичности. Кроме того, преимуществом ПЦР является то, что она нацелена на

    и выявляет E. histolytica, E. dispar и E. moshkovskii в

    клинических образцах. Учитывая повышение стоимости ПЦР

    и появление автоматизации и упрощения токолов ПЦР

    , мы считаем, что все функции обнаружения и дифференциации

    Entamoeba spp.следует проводить методом ПЦР.

    СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

    1. Али, И. К., М. Б. Хоссейн, С. Рой, П. Ф. Айе-Куми, В. А. Петри, младший, Р. Хак,

    и К. Г. Кларк. 2003. Entamoeba moshkovskii инфекции у детей, Ban-

    gladesh. Emerg. Заразить. Дис. 9: 580–584.

    2. Кларк Г. и Л. Даймонд. 2002. Методы культивирования люминальных пара-

    ситических протистов, имеющих клиническое значение. Clin. Microbiol. Откр. 15: 329–341.

    3. Даймонд, Л. С., и К.Г. Кларк. 1993. Переописание Entamoeba

    histolytica Schaudinn, 1903 (исправлено Walker, 1911), отделяющее его от

    Entamoeba dispar Brumpt, 1925. J. Eukaryot. Microbiol. 40: 340–344.

    4. Фотедар Р., Д. Старк, Н. Биби, Д. Марриотт, Дж. Эллис и Дж. Харкнесс. 2007.

    ПЦР-определение Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar и Entamoeba

    moshkovskii в образцах стула из Сиднея, Австралия. J. Clin. Microbiol.

    45: 1035–1037.

    5. Фотедар Р., Д. Старк, Н. Биби, Д. Марриотт, Дж. Эллис и Дж. Харкнесс. 2007.

    Обзор лабораторных диагностических методов для видов Entamoeba. Clin.

    Microbiol. Откр. 20: 511–532.

    6. Гатти, С., Г. Сверчински, Ф. Робинсон, М. Ансельми, Дж. Корралес, Дж. Морейра,

    Г. Монтальво, А. Бруно, Р. Мазерати, З. Бисофи и М. Скалья. 2002. Ame-

    bic-инфекции, вызванные комплексом Entamoeba histolytica-Entamoeba dispar: исследование

    заболеваемости в отдаленной сельской местности Эквадора.Являюсь. J. Trop. Med.

    Hyg. 67: 123–127.

    7. Гонин П., Трудель Л. 2003. Обнаружение и дифференциация изолятов Entamoeba

    histolytica и Entamoeba dispar в клинических образцах с помощью ПЦР и иммуноферментного анализа

    . J. Clin. Microbiol. 41: 237–241.

    8. Гонсалес-Руис, А., Р. Хак, А. Агирре, Г. Кастанон, А. Холл, Ф. Гул, Г.

    Руис-Паласиос, М. А. Майлз и Д. К. Уорхерст. 1994. Значение микроскопии

    в диагностике дизентерии, связанной с инвазивным Entamoeba histolytica.

    J. Clin. Патол. 47: 236–239.

    9. Хак, Р., А.С.Г. Фарук, П. Хан, Д. Лайерли и У. А. Петри, младший, 1997 г.

    Инфекция Entamoeba histolytica и Entamoeba dispar у детей в

    Бангладеш. J. Infect. Дис. 175: 734–736.

    10. Хак Р., И. К. Али, С. Актер и В. А. Петри мл. 1998. Сравнение ПЦР, анализа изоферментов

    и обнаружения антигенов для диагностики инфекции Entamoeba histo-

    lytica. J. Clin. Microbiol.36: 449–452.

    11. Хак Р., Л. М. Невилл, П. Хан и В. А. Петри мл. 1995. Быстрая диагностика

    инфекции Entamoeba с использованием стула Entamoeba и Entamoeba histolytica

    наборов для обнаружения антигенов. J. Clin. Microbiol. 33: 2558–2561.

    12.

    Leave a Reply

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    2021 © Все права защищены.