Положительный уреазный тест: ᐈ Helicobacter pylori (хелпил-тест) в Санкт-Петербурге

Содержание

13С-уреазный дыхательный тест (13С-УДТ, 13C-Urea Breath test, UBT). Выявление инфекции Helicobacter pylori

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Напоминаем вам, что самостоятельная интерпретация результатов недопустима, и приводимая ниже информация носит исключительно справочный характер.

13С-уреазный дыхательный тест: показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.

Синонимы: 13C-Urea Breath test, UBT; 13С-уреазный дыхательный тест, дыхательный тест с 13С-меченной мочевиной, 13С-УДТ.

Показания для назначения исследования



13С-уреазный дыхательный тест – лабораторный метод диагностики хеликобактериоза (инфекционного заболевания, вызванного бактерией Helicobacter pylori
), основанный на анализе проб выдыхаемого пациентом воздуха.

Этот неинвазивный высокочувствительный и высокоспецифичный тест рекомендуется использовать в целях диагностики Helicobacter pylori, а также подтверждения ее эрадикации (уничтожения) по истечении четырех недель после окончания терапии.

Противопоказания к проведению исследования



13С-уреазный дыхательный тест не проводят людям, у которых были операции на желудке, поскольку результат исследования может быть ложноположительным.

13С-уреазный дыхательный тест имеет возрастные ограничения – его применяют только для пациентов старше 12 лет.

Безопасность проведения 13С-уреазного дыхательного теста во время беременности и в период лактации не исследовалась.

Подготовка к процедуре


  • Тест необходимо проводить утром натощак или не ранее, чем через 6 часов после легкого приема пищи; воду в небольшом количестве пить можно.
  • Накануне следует избегать пищевых перегрузок.
  • Тест можно проводить не ранее, чем через четыре недели после окончания приема антибиотиков, препаратов висмута или сукральфата.
  • После окончания приема ингибиторов протонной помпы (препаратов, снижающих образование соляной кислоты в желудке) должно пройти не менее двух недель.
  • После приема 13С изотопных растворов должно пройти не менее 24 часов.
  • Не следует проводить тест в один и тот же день с эндоскопическим исследованием (гастроскопией) желудка и 12-перстной кишки с биопсией.
  • Рекомендуется исключить прием антацидов и блокаторов Н2-гистаминовых рецепторов за 1-2 дня до исследования.
  • Исключить физические и эмоциональные перегрузки накануне исследования.
  • В течение 1 часа до исследования не следует курить.
  • Исключить прием алкоголя накануне исследования.

Как проходит процедура 13С-уреазный дыхательный тест


  1. Перед началом проведения теста пациенту предлагают выпить 200 мл апельсинового сока (в случае аллергии на апельсины можно использовать яблочный сок).
  2. Через 5 минут после приема кислого напитка проводится сбор выдыхаемого воздуха в специальный контейнер.
  3. Содержимое флакона с 13С-мочевиной растворяют в 50 мл воды (выполняется медицинским персоналом), и пациент выпивает приготовленный раствор.
  4. В течение 30 минут пациенту необходимо находится в спокойном состоянии, ожидая в медицинском офисе.
  5. Строго через 30 минут после приема раствора проводят сбор выдыхаемого воздуха во второй контейнер.

Срок исполнения


До 5 рабочих дней (указанный срок не включает день взятия биоматериала).

Что может повлиять на результаты


К ложноположительному результату (когда тест показывает, что бактерия Helicobacter pylori присутствует, а на самом деле ее нет) могут привести следующие причины:
  • ахлоргидрия — атрофия слизистой оболочки желудка;
  • присутствие других спиралевидных желудочных бактерий с уреазной активностью;
  • нарушение правил подготовки к исследованию и процедуры проведения (в т.ч. выполнение теста вскоре после эзофагогастродуоденоскопии, повторное проведение дыхательного теста в тот же день).
Возможные причины ложноотрицательного результата (когда тест показывает отсутствие Helicobacter pylori, а на самом деле эта бактерия присутствует):
  • использование антибиотиков, ингибиторов протонной помпы, препаратов висмута в течение предшествующих 2 недель;
  • проведение дыхательного теста ранее, чем через 4 недели после окончания терапии, направленной на эрадикацию (уничтожение) Helicobacter pylori;
  • нарушение процедуры (проведение сбора пробы слишком рано или слишком поздно после приема тестового раствора, взятие второй пробы при неглубоком выдохе).

13С-уреазный дыхательный тест

Сдать 13С-уреазный дыхательный тест можно в ближайшем медицинском офисе ИНВИТРО. Список офисов, где принимается биоматериал для лабораторного исследования, представлен в разделе «Адреса». Референсные значения 13С-уреазного дыхательного теста представлены в таблице.

Единицы измерения: DOB, ‰. При проведении 13С-уреазного дыхательного теста с применением 13С-мочевины измеряемым показателем является относительная разница между отношением 13С/12С в пробах выдыхаемого воздуха до и после приема раствора препарата (обозначается как DOB – Delta over Baseline, измеряется в промилле (‰)).

DOB, ‰ Результат пояснение
< 3,0 отрицательный отсутствие Helicobacter pylori
3,0-4,5 сомнительный рекомендуется проведение любого альтернативного дополнительного теста
> 4,5 положительный наличие
Helicobacter pylori

Положительный результат с высокой вероятностью говорит об инфицировании Helicobacter pylori, отрицательный – об отсутствии инфицирования. При получении промежуточных значений от 3,0 до 4,5 ‰ рекомендуется проведение любого альтернативного дополнительного теста, направленного на выявление Helicobacter pylori.

Helicobacter pylori (H. pylori) — это короткие, извитые S-образные бактерии средних размеров, подвижные, имеющие 4-5 жгутиков.

Бактерии Helicobacter pylori

H. pylori

играют существенную роль в развитии острого и хронического гастритов, язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки. Кроме того, инфицирование H. pylori является предрасполагающим фактором развития рака желудка и лимфоцитарной опухоли желудочно-кишечного тракта (мальтомы).

Постоянное присутствие H. pylori в желудке определяется рядом уникальных свойств этой бактерии, обеспечивающих ее приспособление к среде хозяина в сочетании с относительной «недосягаемостью» для иммунной системы человека.

Спиралевидная форма и наличие жгутиков позволяют бактерии, подобно штопору, ввинчиваться в слой желудочной слизи и прилепляться к эпителиальным клеткам желудка. Основным фактором, обеспечивающим выживание H. pylori

в кислой среде желудка, является бактериальный фермент — уреаза, обладающий специфическим свойством — при взаимодействии с водой расщеплять мочевину с образованием диоксида углерода и аммиака. Аммиак нейтрализует ионы водорода и обеспечивает бактерии локальное поддержание комфортного для нее pH.

Именно это свойство Н. pylori лежит в основе 13С-уреазного дыхательного теста. Пациенту предлагают сделать выдох в специальную емкость, которую закупоривают. В этой пробе определят базовое содержание 13С (углерода 13) и 12С (углерода 12). Затем пациент выпивает специальный раствор, в котором содержится мочевина с углеродом

13С (он нерадиоактивен и безопасен). Если в желудке есть H. pylori, то бактерия расщепляет мочевину, и углерод 13С попадает в кровь и выводится через легкие. Поэтому собирают вторую пробу выдыхаемого воздуха и определяют содержание 13С. Если в желудке нет бактерии, то вторая проба не будет отличаться по содержанию углерода 13 от первой пробы.

Источники:

  1. Tsachi Tsadok Perets, Rachel Gingold-Belfer et al. Optimization of 13C-urea breath test threshold levels for the detection of Helicobacter pylori infection in a national referral laboratory.
    J Clin Lab Anal. 2019;33:e22674.
  2. Malfertheiner P, Megraud F, O’Morain CA, et al. Management of Helicobacter pylori infection-the Maastricht V/Florence consensus report. Gut. 2017;66:6‐30.
  3. Li Z‐X, Huang L‐L, Liu C, et al. Cut‐off optimization for 13C‐urea breath test in a community‐based trial by mathematic, histology and serology approach. Sci Rep. 2017;7:2072.
  4. Athanasios Makristathis, Alexander M. Hirschl, Francis Mégraud, Emilie Bessède, Review: Diagnosis of Helicobacter pylori infection, Helicobacter, 10.1111/hel.12641, 24, S1, (2019).
ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.


Информация проверена экспертом

Лишова Екатерина Александровна

Высшее медицинское образование, опыт работы — 19 лет

Диагностическое значение уреазного теста при выявлении helicobacter pylori

Citation: Кулакова Е. А. Диагностическое значение уреазного теста при выявлении Helicobacter pylori / Е. А. Кулакова, Т. Н. Амбросова // Імплементація принципів біоетики у клінічну практику : наукова конференція молодих вчених і студентів, присвячена 210-річчю ХНМУ, Харків, 10 квітня 2015 р. : матеріали конференції. – Харків, 2015. – С. 79.Abstract: В настоящее время Helicobacter pylori является наиболее частой причиной гастрита, гастродуоденита и язвенной болезни. Helicobacter pylori — спиралевидная грамотрицательная микроаэрофильная бактерия, инфицирующая слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. Диагностика инфекции Нelicobacter pylori возможна при микроскопическом исследовании биоптата слизистой оболочки, взятого при эзофагогастродуоденоскопии (ЭГДС). Эзофагогастродуоденоскопия — это современный метод визуализации и последующего обследования стенок слизистой оболочки верхних путей пищеварительного тракта, а именно: пищевода, желудка и проксимальной части двенадцатиперстной кишки. Для проведения ЭГДС специальной подготовки не существует, но для лучшей визуализации необходимо, чтобы желудок и просвет двенадцатиперстной кишки были полностью свободны от остатков какой-либо пищи, поэтому на исследование необходимо приходить натощак. Определить наличие Helicobacter pylori возможно путем исследования фрагментов слизистой желудка, полученной путем биопсии во время эндоскопического исследования. Наиболее оптимальной манипуляцией является уреазный тест. Уреазный тест — это экспресс анализ, позволяющий быстро и недорого определить присутствие в верхних отделах пищеварительного тракта Helicobacter pylori. Основой теста является свойство H. pylori выделять фермент уреазу, которая катализирует процесс преобразования мочевины в аммиак и углекислый газ. В результате реакции кислотно-щелочный баланс желудка (рН среды) сдвигается в щелочную сторону, что фиксируется с помощью индикатора. Полученный биоптат помещается в специальную ячейку с готовыми растворами. Быстрота изменения окраски индикатора с жёлтого на ярко-красный зависит от уреазной активности, которая, в свою очередь, зависит от количества бактерий. Интерпретация результата: количество Helicobacter pylori в биоптате оценивается по интенсивности окраски биоптата. Таким образом, +++ — значительное инфицирование Нelicobacter pylori (Hp), малиновое окрашивание теста появляется в первый час от начала исследования, ++ — умеренное инфицирование Нp, тест становится малиновым спустя 2-3 часа, + — незначительное инфицирование Нp – появление малиновой окраски в течение 24 часов. Отрицательным считается результат, если окрашивание появляется после 24 часов от начала исследования. Основное назначение метода — первичная диагностика наличия Helicobacter pylori у пациентов. Чувствительность и специфичность данного метода составляет 90 %. Метод позволяет получить заключение быстро — от нескольких минут до нескольких часов. Его использование не предполагает наличие специального лабораторного оборудования или подготовленных специалистов и выполняется непосредственно эндоскопистом. Достаточно бюджетный метод диагностики при массовом и индивидуальном применении. В настоящее время разработано большое количество промышленно изготовленных уреазных тестов.

Неlicobacter pylori — статья по теме Гастроэнтерология

Объектом пристального внимания в последнее время стали микроорганизмы Нelicobacter pylori (HP), открытые в 1982 г. австралийскими исследователями В. Marshal и S. Warren. Они впервые высказали мысль о том, что бактерии, обнаруженные на слизистой оболочке желудка, не сапрофиты, а истинно патогенные, повреждающие поверхностный эпителий. В 2005 г ученые за свое открытие получили нобелевскую премию.
Примерно 60% населения планеты инфицированы НР.

В диагностическом отделении «Международного центра охраны здоровья» вы можете пройти полное обследование на наличие данной ифекции в организме. У нас проводится эндоскопическая диагностика: гастроскопия с биопсийным анализом на наличие Нelicobacter pylori (HP). В отделении гастроэнтерологии проводит прием очень опытный специалист, врач гастроэнтеролог, который может назначить лечение и дать свои рекомендации в случае необходимости.

Узнать стоимость услуг эндоскопии, лабораторной диагностики и консультации гастроэнтеролога можно в соответствующем разделе прайс-листа на нашем сайте.

В развивающихся странах до 90 %, а в высокоразвитых не более 30-50 %, что говорит о том, что интенсивность эпидемиологического процесса определяется общим социальным и гигиеническим уровнем населения. По мнению Graham D.I. – НР это самая часто встречающаяся инфекция человека. Путь передачи инфекции орально-оральный, фекально-оральный. В настоящее время имеются научные доказательства связи инфекции с хроническим гастритом, язвенной болезнью желудка и 12-перстной кишки, злокачественными опухолями желудка (аденокарциномой и экстранодальной В-клеточной лимфомой).
Каждый 10 взрослый в России страдает тем или иным заболеванием органов пищеварения (Григорьев А.П.).
Интерес практических врачей к данной инфекции стимулирует появление и дальнейшее усовершенствование методов ее диагностики, на основании обнаружения которой будет построен оптимальный выбор схем для лечения.
НР – грамотрицательные палочки, спирально изогнутые в различной степени, длина варьирует от 1,5-5 мкм, ширина от 0,3 до 1,0 мкм. Палочки с закругленными концами, высоко подвижные, благодаря наличию полярно расположенного жгутика, либо нескольких. В старых культурах образуют сфероидные или кокковидные формы (В.В.Меньшиков, 2003г). Однако, при пападании в благоприятные условия, кокковидные формы вновь приобретают способность к трансформации в вегетативные формы (Д.А.Аникеев, А. А. Нижевич, Р.Ш.Хасанов, 2001г).
НР не является облигатным патогеном, т.е. инфицирование не всегда сопровождается развитием выраженного заболевания.
Методы исследования
Большое количество методов выявления инфекции, создает определенные трудности для врачей-клиницистов и врачей КДЛ в выборе адекватных и достоверных способов ее диагностики. Постулат «Диагностика должна быть комплексной» не ясен – а что же должно входить в этот комплекс? Комплекс методов или метод должен четко решать задачи:

  • выявление НР;
  • выбор эффективной схемы лечения;
  • оценка эффективности проведенного лечения.

Применяемые сегодня методы диагностики имеют свои преимущества и недостатки, поэтому ограничиваться «монодиагностикой» нельзя. «Монодиагностика», особенно первичная, неизбежно приведет к ошибкам как в сторону гипердиагностики (при серодиагностике сыворотки крови – вследствие перекрестного реагирования АТ, при уреазном тесте – из-за контаминации бактерий, обладающих уреазной активностью, при гистологическом исследовании – из-за схожести морфологии ряда микроорганизмов), так и в сторону гиподиагностики (из-за сложностей культивирования НР, при гистохимическом – в случае низкой обсемененности, не попадании в гнездо, при уреазных тестах – из-за снижения уреазной активности НР). Следовательно, успешность диагностики НР зависит от правильного сочетания различных методов (т.е. комплекса методов) и сопоставления полученных данных. Эти положения в полной мере справедливы и в отношении оценки эффективности лечения инфекции.
Успешное лечение НР во многом зависит от правильного выбора лекарственного препарата, поэтому перед началом анти-НР терапии необходимо располагать сведениями о чувствительности НР к химиотерапевтическому препарату. Эта проблема стала актуальной в связи с выявлением резистентности НР к ряду антибактериальных препаратов. Наибольшую тревогу у клиницистов во всем мире вызывает резистентность НР к метронидазолу и кларитромицину.
Все существующие методы диагностики НР можно разделить на прямые и косвенные. Прямые методы позволяют непосредственно выявить НР. Косвенные – регистрируют последствия персистирования НР в организме особенно первичная, неизбежно приведет к ошибкам как в сторону гипердиагностики (при серодиагностике врачей КДЛ в выборе адекв
Можно так же разделить методы определения НР на инвазивные и неинвазивные.
Инвазивные методы
В качестве исследуемого материала, используют биоптат слизистой оболочки желудка, который может быть получен при эндоскопическом исследовании (Л.М.Муштоватова, 2003г). Учитывая гнездовую локализацию НР в слизистой оболочке, пробы берут одномоментно из нескольких точек, исключая дно эрозии или язвы, а так же края, так как здесь отсутствует слизь, а значит и НР, находящиеся под ее защитой (Л. Г.Баженов, 1991г).
Гистологический метод.
Получил широкое распространение, так как позволяет одновременно с обнаружением НР проводить морфологическую оценку состояния слизистой желудка, что является преимуществом этого метода. Гистологический метод – это «золотой стандарт» диагностики инфекции. Чувствительность метода 72-100%, а специфичность 81-97%. Это прямой метод выявления бактерий.
Цитологический метод.
Готовят мазки – отпечатки, которые окрашивают по Романовскому-Гимзе. НР при этом окрашиваются в темно-синий цвет и хорошо видны как на поверхности эпителия, так и в глубине желудочных ямок. Наличие масляной эммерсии значительно повышает выявляемость микроорганизмов и позволяет обнаруживать их классическую конфигурацию
в виде « летящей чайки» или в виде буквы S или C. Минусы: Оценка в плане степени обсеменения ориентировочная, т.к. эндоскопист мог и не попасть в место гнездования. Нет информации о структуре слизистой оболочки желудка. Кокковидные формы НР могут дать ложноотрицательный результат.
Плюсы: Быстр в исполнении. Чувствительность 90 %, специфичность 100%.
Цитологический метод в желудочном соке, полученном натощак, имеет низкую чувствительность и специфичность, в настоящее время не применяется.
Бактериологический метод.
Дает возможность культивировать НР, используя биоптаты слизистой оболочки желудка. Однако исследования очень трудны, т.к. НР крайне чувствителен к высушиванию и/или высоким концентрациям кислорода. Процесс культивирования очень трудоемкий и требует длительности получения конечных результатов.
Минусы: Сложность и дороговизна выполнения ограничивают применение метода, несмотря на неоспоримые преимущества.
Серологические.
Агрессия НР и колонизация слизистой оболочки желудка вызывает системный иммунный ответ. В результате которого у больного появляются АТ Ig A, IgG, IgM против различных бактериальных антигенов, которые могут быть выявлены серологическими методами.
Самым распространенным серологическим методом является ИФА. Метод неинвазивный и косвенный – в крови больного определяют антитела к НР. Чувствительность данного метода 87-98 %, специфичность около 75-100 %. В настоящее время в распоряжении клинической лабораторной диагностики имеются наборы для серологического анализа, позволяющие оценивать патогенность штаммов НР. Такие штаммы характеризуются наличием гена Cag A, на основе которого продуцируется цитотоксический белок. Метод ИФА позволяет обнаружить АТ к этому белку в крови больных. Диагностическая чувствительность тест-систем для обнаружения АТ к белку Cag A НР составляет 90-100 %, специфичность – 76-90 %.
При обнаружении АТ к НР, проводят количественное исследование. На основании снижения титра антител после проведенной терапии судят об эффективности подобранной антибиотикотерапии.
Очень распространены стали экспресс-тесты АТ Ig. Время выполнния 10 минут.
Другим высокоспецифичным методом диагностики НР инфекции является Western-blot – встречная преципитация в геле АТ сыворотки крови больного с различными белками НР, меченными зондами, подвергнутыми разделению по молекулярной массе с помощью электрофореза и нанесенными на нитроцеллюлозу.
Недавней разработкой являются качественные тесты для определения АТ к НР, которые можно выполнить « у постели больного». Они основаны на латекс-агглютинации или твердофазного ИФА и выявляют антитела IgG к НР. Для проведения исследования нужна капля крови, взятая из пальца больного, результат считывается через несколько минут, дополнительных реактивов не нужно. Диагностическая чувствительность 94 %, специфичность – 94 %.
В 1998 году появились тест-системы для количественного определения антигена НР в фекалиях больных методом ИФА, которые имеют большие перспективы. Диагностическая чувствительность 88,9 %, специфичность – 96,4 %.
Полемеразно-цепная реакция (ПЦР)
Современные подходы к диагностике инфекции НР включают методы исследования, которые представляют различные модификации ПЦР с обнаружением генетического материала, специфического для НР. (162-рРНК).
Метод ПЦР позволяет амплифицировать фрагмент ДНК и в считанные часы размножить in vitro специфический участок ДНК (т. е. любой интересующий ген ) более чем в 200 000 раз. Уникальность метода ПЦР состоит не только в высокой чувствительности и специфичности для диагностики НР, но и в том, что материалом для него являются биоптаты СОЖ, и желудочный сок, и смывы ротовой полости, и зубной налет, и копрофильтраты. Диагностическая чувствительность ПЦР метода составляет 88,0-95,4 %, специфичность – 100 %, в копрофильтратах 61,4-93,7 % и 100 % соответственно.
«Аэротест»
Автоматизированный метод, основанный на высокой эндогенной уреазной активности хеликобактеров. Мочевина, транссудируемая из плазмы крови в слизистую оболочку, расщепляется экстрацеллюлярной уреазой НР до аммиака. Образующийся аммиак измеряют (линейно-колористическим методом) в воздушной среде ротовой полости пациента. При выполнении «аэротеста» интегрируется ответ всей слизистой оболочки желудка, а не ограниченного участка (биоптата) (В.В.Меньшиков, 2003).
Аналогичный метод «Хелик-тест» (г.С-Петербург) основанный на кинетической оценке концентрации аммиака в воздухе полости рта, после приема карбамида (500мл) обычного углеродного состава. Этот метод советуют применять детям, где исключена возможность инвазивных методов исследования.
Чувствительность 90-100%, специфичность 30-36 % (вероятность ложноположительных результатов). Диагностическая эффективность 63-65%, т.е. можно использовать для исключения наличия НР, а для подтверждения требуется использование других методов.
В нашей клинике при проведении эндоскопического исследования в обязательном порядке проводится исследование биоптата тест-системой ХЕЛПИЛ (бланк) – экспресс-диагностика хеликобактериоза. Основан на изменении цвета индикаторного диска при при размещении на нем биоптата слизистой оболочки желудка. При наличии в биоптате уреазной активности на поверхности индикаторного диска появляется цветовое пятно с оттенками синего цвета.
Из лабораторных методов исследования рекомендуем метод ИФА. Метод точен, быстр, забор крови производится из вены натощак. Снижение титра антител позволяет судить об эффективности проведенной терапии.

«Экпериментальная и клиническая гастроэнтерология», 2009, №2, с.50

Барышникова Н.В.
Санкт-Петербургская государственная медицинская академия имени И.И. Мечникова
Хеликобактериоз — одна из наиболее серьезных проблем гастроэнтерологии в связи с тем, что распространенность инфицирования Helicobacter pylori прогрессивно возрастает, данное заболевание все чаще выявляется у людей молодого трудоспособного возраста, а также с тем, что данный микроорганизм признан канцерогеном первого порядка. Следовательно, разработка алгоритмов ранней и точной диагностики хеликобактериоза позволит улучшить качество лечения и диспансерного наблюдения данной категории пациентов. Кроме того, все большее внимание уделяется проблеме реинфекции, в связи с тем необходимо уточнение сроков проведения контрольных тестов на H. pylori для дифференцировки реинфицирования и неуспешности эрадикационной терапии.

Несмотря на то, что Маастрихтским соглашением III в качестве рекомендуемых методов диагностики H. pyloriутверждены дыхательный тест с мочевиной, меченной 13С, и иммуноферментный анализ H. pylori в кале [1], существование большого количества различных методов диагностики инфекции H. pylori подтверждает постулат о том, что уникального метода, так называемого «золотого стандарта», для диагностики хеликобактериоза пока не существует. Все многообразие методов диагностики данного микроорганизма можно разделить на инвазивные (требуют проведения фиброгастродуоденоскопии) и неинвазивные (не требуют проведения фиброгастродуоденоскопии), прямые (определение собственно H. pylori) и косвенные (определение продуктов жизнедеятельности H. pylori). Основные и наиболее часто используемые методы диагностики хеликобактериоза представлены в таблице 1.

Таблица 1.
Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori


Инвазивные методы

Неинвазивные методы

А) бактериологический метод
Б) гистологический метод
В) быстрый уреазный тест (Хелпил-тест)
Г) молекулярно-генетический метод (полимеразная цепная реакция) — исследование биоптатов

А) серологический метод (скрининг)
Б) молекулярно-генетический метод (полимеразная цепная реакция) — исследование кала
В) уреазный дыхательный тест (13С, 14С мочевина)

Прямые

Не прямые (косвенные)

А) бактериологический метод
Б) гистологический метод
В) молекулярно-генетический метод (полимеразная цепная реакция) — исследование биоптатов
Г) молекулярно-генетический метод (полимеразная цепная реакция) — исследование кала

А) быстрый уреазный тест (Хелпил-тест)
Б) уреазный дыхательный тест (13С, 14С мочевина)
В) дыхательный тест (Хелик-тест) с кинетической оценкой концентрации аммиака в воздухе полости рта после приема пациентом порции карбамида
Г) серологический метод (скрининг)

Инвазивные методы, как правило, используются при прохождении пациентом комплекса первичных диагностических мероприятий, т.к. в данном случае назначение фиброгастродуоденоскопии является обязательным. Потенциальные показания для использования неинвазивных методов несколько шире. К ним относятся скрининговое обследование взрослых, обследование детей с жалобами на периодическую абдоминальную боль, оценка успешности эрадикации, научные показания (оценка распространенности инфекции, изучение ассоциации между наличием H. pylori и экстра-пищеварительными нарушениями) [2].

Как уже упоминалось выше, ни один метод диагностики H. pylori нельзя считать универсальным. Каждый метод исследования H. pylori имеет свои преимущества и недостатки, методы различаются по чувствительности и специфичности. Во время проведения многочисленных сравнительных исследований установлено, что результаты различных методов не всегда идентичны, следовательно, чтобы избежать получения ложнонегативных или ложнопозитивных результатов, для более точной диагностики наличия инфекции необходимо использовать как минимум два метода и результат считать положительным или отрицательным при совпадении показателей обоих методов исследования. Некоторые авторы рекомендуют даже использование трех методов для того, чтобы говорить об отсутствии инфекции [3].

К наиболее достоверным методам идентификации микроорганизма традиционно относятся бактериологический, гистологический и молекулярно-генетический методы.

Бактериологический (культуральный) метод является одним из наиболее информативных и специфичных методов. Специфичность его составляет практически 100%, чувствительность более 90% [2, 4]. Основу метода составляет культивирование микроорганизма на специальных питательных средах при определенных температурных условиях. Преимуществом метода является то, что он обеспечивает возможность выделения чистой культуры H. pylori, изучения морфологических, биохимических и биологических свойств микроорганизма, определения антибиотикорезистентности возбудителя [2]. Однако у этого метода существуют и недостатки, к которым относятся: отсроченное получение результатов на 7-10 дней, трудность транспортировки материала для сохранения микроорганизма в жизнеспособном состоянии, высокие требования к условиям культивирования (определенные питательные среды, ограничение доступа кислорода), снижение эффективности выделения H. pylori в случае низкой обсемененности, при отсутствии обострения инфекции и визуальных признаков воспаления. Недостатком данного метода считается его неспособность определять кокковые формы H. pylori [5], тогда как в настоящее время в достаточно высоком проценте случаев у H. pylori-позитивных пациентов в слизистой оболочке желудка преобладают именно кокковые формы возбудителя. В широкой клинической практике данный метод не применяется. В основном он используется в научных целях или при определении резистентности H. pylori к антибиотикам в случае неэффективности терапии первой линии при планировании дальнейшего лечения [6].

Гистологический метод — наиболее объективный метод диагностики H. pylori, ведь используя именно этот метод, Warren и Marshall описали наличие спиралевидной бактерии в слизистой оболочке желудка больных активным хроническим гастритом [7]. Он позволяет обнаружить микроорганизм в гистологических препаратах слизистой оболочки желудка, определить степень обсемененности и расположение микробных тел (поверхностное, внутриэпителиальное), форму микроорганизма (вегетативную или кокковую), а также пути взаимодействия H. pylori с тканями организма человека и наличие морфологических изменений слизистой оболочки желудка, связанных с инвазией микроба (признаки воспаления, атрофия, метаплазия, дисплазия) [8]. В основе метода лежит микроскопическое морфологическое и морфометрическое исследование парафиновых срезов, окрашенных различными способами: гематоксилин-эозином, по Романовскому-Гимзе, генциан-виолетом, по Генту, толуидиновым синим, а также использование иммуногистохимического метода [2, 5]. К преимуществам этого метода диагностики относятся удобство хранения и транспортировки образцов, возможность проведения ретроспективного анализа, проведения оценки взаимосвязи между степенью обсемененности H. pylori и состоянием слизистой оболочки желудка. Недостатками метода являются длительное приготовление парафиновых срезов, некоторая субъективность в определении степени изменения слизистой оболочки желудка, невозможность отдифференцировать виды Helicobacter и тем более их генотип, возможность получения ложнонегативных результатов в связи с неправильным забором гастробиопсийного материала (биопсия только из антрального отдела желудка, скудные биоптаты, не содержащие эпителия и слизи), а также наличия участков кишечной метаплазии, погрешностей окраски [5]. Наряду с собственно гистологическим методом, может использоваться цитологическое исследование мазков со слизистой оболочки желудка, что позволяет существенно уменьшить время получения результатов анализа [2]. Существенное повышение результатов диагностики инфекции достигается при использовании иммуногистохимического метода с моноклональными антителами против H. pylori [9]. Принцип данного метода основан на высокоспецифичном связывании антител к H. pylori, которые в дальнейшем можно визуализировать с помощью химической реакции с антигенами клеточной стенки микроба. В результате прошедшей иммуногистохимической реакции только те бактериальные клетки, которые имеют антигены, специфичные для H. pylori, в том числе и кокковые формы H. pylori, будут иметь характерное окрашивание [5]. К сожалению, широкое использование данного метода ограничено из-за его высокой стоимости и технической сложности [10]. Последним достижением в области гистологического исследования является использование fluorescence in situ hybridization, позволяющий высоко точно и напрямую в залитых в парафин биоптатах определять не только наличие H. pylori, но и штаммов, резистентных к кларитромицину [11].

Молекулярно-генетический метод (полимеразная цепная реакция) является высокочувствительным и специфичным и по диагностической ценности имеет преимущества перед другими методами диагностики H. pylori, включая гистологический и курьтуральный методы [5, 12]. Преимуществами данного метода являются высокая специфичность (обеспечивается подбором праймеров, комплементарных уникальной нуклеотидной последовательности исследуемого микроорганизма), высокая чувствительность (позволяет диагностировать не только острые, но и латентные варианты инфекции, возможно выявление даже единичных бактерий), возможность определения как вегетативных (спиралевидных), так и кокковых форм H. pylori, возможность определения отдельных генов микроорганизма для оценки его патогенности, возможность определения микроорганизма в течение 5-6 часов (экспресс-метод).

Метод состоит из трех этапов: выделение ДНК из клинического образца (биоптата), амплификация специфических фрагментов ДНК, детекция продуктов амплификации. Геном H. pylori содержит около 1600 генов. На сегодняшний день полностью определена нуклеотидная последовательность у двух штаммов микроорганизма: 26695 и J.88 [13, 14]. Существует ряд генов H. pylori, роль которых в продуцировании специфических белков — факторов патогенности микроорганизма — установлена. Именно эти гены — гены острова патогенности H. pylori — определяют при проведении молекулярно-генетического исследования (таблица 2).

Таблица 2
Отдельные гены и факторы патогенности Helicobacter pylori и возможная их роль в патогенезе хеликобактериоза [15 с дополнениями]


Ген

Фактор патогенности (белок)

Свойства факторов патогенности

cagA
(cytotoxin-associated gene)

CagA

Цитотоксин, маркер «острова патогенности» H. pylori, участвует в ремоделировании тканей, ангиогенезе, язвообразовании, развитии атрофии, в процессе деградации и разрушения межклеточного матрикса и базальной мембраны, опухолевой инвазии и метастазировании посредством индукции комплекса uPA (urokinase-type plasminogen activator) и uPAR (urokinase-type plasminogen activator receptor) в раковые клетки в желудке, стимуляции выработки интерлейкина-8, способствует повышению активности антрального гастрита

cagC, cagE
(cytotoxin-associated gene)

CagC, CagЕ

Цитотоксины, стимулируют выработку интерлейкина-8

cagH
(cytotoxin-associated gene)

CagH

Цитотоксин, маркер интактного острова патогенности, стимулирует выработку интерлейкина-8

cagF
(cytotoxin-associated gene)

CagF

Цитотоксин, вовлечен в процесс распознавания и доставки CagA в каналы Т4СС (IV секреторной системы)

vacA
(vacuolating-associated cytotoxin)

VacA

Цитотоксин, фактор адгезии, увеличивает проницаемость мембран по отношению к анионам, достоверно уменьшает скорость реэпителизации экспериментальных язв и пролиферацию эпителиоцитов за счет нарушения функции клетки, связанных с целостностью ее цитоскелета, пассивный транспорт мочевины через эпителиальные клетки желудка, влияет на выживание H. pylori в клетках хозяина, снижает содержание АТФ в эпителиоцитах, стимулирует апоптоз клеток

babA1, babA2
(blood group antigen-binding adhesion)

BabA1, BabA2

Фактор адгезии, рецептор клеток Lewis, предположительно связан с более высокой частотой развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, осложнений инфекции H. pylori, а также с аденокарциномой желудка (BabA2)

oipA
(outer inflammatory protein)

OipA

Поддерживает воспаление СОЖ, связан с секрецией интерлейкина-8 и интерлейкина-6, со степенью обсемененности H. pylori СОЖ, выраженностью нейтрофильной инфильтрацией, с развитием интерстициальной метаплазии

sabA
(sialic acid-binding adhesin)

SabA

Поддерживает воспаление, способствует персистенции инфекции H. pylori

iceA1, iceA2
(induced by contact with epithelium)

IceA1, IceA2

Фактор адгезии

flaA,fla B
(flagellin A- and B-subunit)

FlaA, FlaВ

Обеспечивают подвижность

ure A, ureB, ure C, ureI

Уреаза (UreA, UreB, UreC, UreI)

Является собственно маркером инфекции H. pylori и фактором защиты микроорганизма от действия соляной кислоты, обеспечивает длительное персистирование H. pylori в желудке человека, усиливает воспалительные реакции посредством активации моноцитов, нейтрофилов, секреции цитокинов, образования свободных радикалов и окиси азота. Считается, что большая субъединица уреазы — UreB — действует как аттрактант для лейкоцитов

hopQ, hopP, hopZ
(HP outer membrane protein)

HopQ, HopP, HopZ

Обеспечивает колонизацию и обсемененность слизистой оболочки желудка

hpaA
(adhesion gene of Helicobacter pylori)

HpaA

Фактор адгезии

napA
(neutrophil-activating protein)

NapA

Активатор окислительного стресса, способен индуцировать процесс освобождения свободных радикалов в нейтрофилах, что приводит к повреждению СОЖ человека

rdxA
(oxygen-insensitive NADPH nitroreductase),
frxA
(NADPH flavin oxidoreductase),
fdxB
(ferredoxin-like protein)

RdxA, FrxA, FdxB

ферменты окислительного метаболизма, участвуют в формировании резистентности к метронидазолу

23S rRNA

Точечные мутации A2144G, A2143G, A2143C, A2115C, A2142G, C2182T, T2717C и др.

участвуют в формировании резистентности к кларитромицину

sodB

Супероксидисмутаза

Позволяет H. pylori подавлять иммунный ответ организма хозяина, катализируя реакцию превращения бактерицидных соединений кислорода, высвобождаемых активированными в результате инфекции нейтрофилами, в кислород и воду, являющиеся безвредными для микроба

kat

Каталаза

Позволяет H. pylori подавлять иммунный ответ организма хозяина, катализируя реакцию превращения бактерицидных соединений кислорода, высвобождаемых активированными в результате инфекции нейтрофилами, в кислород и воду, являющиеся безвредными для микроба

Следует заметить, что по данным молекулярно-генетического метода можно косвенно судить о прогнозе заболеваний, ассоциированных с H. pylori. Так, например, если у пациента с язвенной болезнью выявляется микроб, содержащий 1-2 гена острова PAI H. pylori, то с высокой степенью вероятности, прогноз будет благоприятным, с другой стороны, если у молодого практически здорового человека при профилактической фиброгастродуоденоскопии выявляются воспалительно-деструктивные изменения и присутствует H. pylori, содержащий 5-6 генов острова PAI, то прогноз неблагоприятен, если своевременно не провести эрадикационную терапию. Однако не следует забывать, что, согласно Маастрихтскому консенсусу III, различие в штаммах H. pylori, содержащих разное количество и вид генов, не освобождает пациента от прохождения курса антихеликобактерной терапии.

Если говорить о неонвазивных методах диагностики H. pylori, следует уделить особое внимание дыхательным тестам, определению микроорганизма в кале и серологическому методу диагностики.

В основе работы дыхательных тестов лежит биохимический метод определения инфицированности H. pyloriслизистой оболочки желудка по уреазной активности микроорганизма, а именно способности уреазы разлагать мочевину до Nh5+ и HCO3- с последующим образованием из HCO3- СО2, который, попадая в кровоток, затем выделяется через легкие и может быть определен в выдыхаемом воздухе. Радиоизотопный уреазный дыхательный тест с мочевиной, меченной радиоактивным углеродом С13 или С14, считается наиболее точным для диагностики H. pylori из неинвазивных методов и известен с 1987 года [16]. Чувствительность и специфичность радиоизотопного уреазного дыхательного теста достигает 90% по данным большинства исследований, однако для данного теста в ряде случаев отмечены ложноположительные результаты по сравнению с гистологическим методом [2]. Вместе с тем способ проведения этого теста до сих пор четко не стандартизирован, а используемые реактивы достаточно дороги [2]. Возможность использования для проведения дыхательного теста детекции паров аммиака (второй метаболит гидролиза мочевины) в воздухе ротовой полости после приема обследуемым мочевины нормального изотопного состава существенно повысила частоту использования дыхательных тестов, т.к. способствовала удешевлению метода, а также повышению его безопасности, поскольку не используются радиоактивные изотопы. Согласно данному принципу в России в 1997 году ООО «АМА» (Санкт-Петербург) разработан «Хелик-тест», показатели которого не зависят от возраста и характера гастродуоденальой патологии, а свидетельствуют лишь о наличии или отсутствии H. pylori [17]. Следует заметить, что дыхательные тесты не рекомендуется проводить больным, получающим антисекреторную терапию во избежание получения ложноотрицательных результатов с учетом возможного взаимодействия соляной кислоты и аммиака [18]. Особенно актуальным считается использование дыхательных тестов у детей в связи с ограничением применения инвазивных методов диагностики H. pylori в детском возрасте.

Для определения H. pylori в кале используется иммуноферментный анализ выявления антигена H. pylori и полимеразная цепная реакция с детекцией генов острова патогенности H. pylori (ureC, cagA). Иммуноферментный анализ выявления антигена H. pylori в кале является высокочувствительным и специфичным методом и признан стандартом в диагностике H. pylori у детей и взрослых как до, так и после проведения эрадикационной терапии. Единственным ограничением широкого применения данного метода является его высокая стоимость по сравнению с другими способами диагностики H. pylori. Полимеразная цепная реакция с детекцией генов острова патогенности H. pylori — относительно новый экспериментальный метод, чувствительность и специфичность которого четко не определены.

Серологический метод диагностики основан на определении антител IgG к H. pylori и IgG к цитотоксину CagA H. pyloriв крови. Данный метод показан для скрининга в популяции, для первичной диагностики инфекции H. pylori, однако мало информативен у детей в связи со слабым иммунным ответом, с помощью этого метода невозможно различить прошедшую или текущую инфекцию, следовательно, он не рекомендован для оценки эффективности эрадикации H. pylori [19, 20]. Согласно многочисленным литературным данным, оценку эффективности эрадикации следует проводить не ранее, чем через 1,5-2 месяца после окончания терапии и отдавать предпочтение неинвазивным методам исследования, если нет необходимости в проведении контрольной фиброгастродуоденоскопии, что особенно актуально в детском возрасте [2, 13, 15, 17, 18].

Как видно из вышеизложенных данных, все методы диагностики H. pylori имеют свои преимущества и недостатки, следовательно, для получения четкого представлены о наличии H. pylori в организме человека необходимо соблюдать следующие правила диагностики:

  1. Использование 2-х и более методов диагностики H. pylori
  2. Использование сочетания методов из разных групп: инвазивный+неинвазивный, прямой+непрямой для первичной диагностики H. pylori
  3. Использование метода ПЦР как наиболее точного для диагностики H. pylori, а также для определения молекулярно-генетических особенностей микроорганизма для оценки его вирулентности, формирования представления о дальнейшем течении и прогнозе заболевания
  4. Использование для контроля эрадикации H. pylori преимущественно неинвазивных методов не ранее, чем через 1,5-2 месяца после окончания терапии.

При сравнительном анализе эффективности различных методов диагностики H. pylori у взрослых больных H. pylori-ассоциированными заболеваниями, проведенном на кафедре пропедевтики внутренних болезней СПбГМА имени И.И. Мечникова, было установлено, что по данным быстрого уреазного и дыхательного теста H. pylori выявлялся у 100% пациентов, гистологическим методом определялся у 70%, методом ПЦР — у 70% больных. Получение положительных результатов уреазного теста и Хелик-теста при отрицательных — гистологического метода или ПЦР может объясняться не ложноположительными результатами, а тем, что при проведении уреазного и Хелик-теста определяются продукты жизнедеятельности H. pylori, а не сам микроорганизм, который может не попасть в биоптат, исследуемый с помощью гистологического метода или ПЦР. Кроме того, при оценке информативности методов диагностики H. pylori было выявлено, что результаты бактериологического метода в 25% случаев были отрицательными при положительных результатах других методов исследования, что связано со сложностью культивирования H. pylori, следовательно, только на данные бактериологического метода не рекомендуется ориентироваться во избежание ложноотрицательных результатов.

Обращает на себя внимание тот факт, что при проведении ПЦР ген ureC, который традиционно считается маркером наличия инфекции H. pylori, у пациентов Санкт-Петербурга определялся только в 78% случаев, что доказывает высокую изменчивость микроорганизма. Следовательно, необходимо проводить определение не только гена ureC, но и хотя бы еще одного часто встречающегося гена H. pylori, например, гена cagA или ureI, что уже внедрено в практику в некоторых европейских странах.

Также нами была проведена сравнительная оценка результатов различных методов выявления инфекции H. pylori с последующей разработкой алгоритма оптимизации диагностики хеликобактериоза.

Для этого было обследовано 135 пациентов от 17 до 72 лет с патологией верхних отделов пищеварительного тракта (37% больных язвенной болезнью, 63% — с хроническим гастродуоденитом). Пациентам проводилась фиброгастродуоденоскопия с взятием биоптатов из тела и антрального отдела желудка для верификации H. pyloriследующими методами: быстрый уреазный тест, «Хелик-тест», гистологическое исследование, полимеразная цепная реакция (ПЦР) с детекцией ureC и cagA генов острова патогенности микроорганизма, бактериологическое исследование (посев биоптатов слизистой оболочки желудка для выявления роста H. pylori).

При сравнении полученных результатов было установлено, что максимальное количество положительных результатов определялось при использовании быстрого уреазного теста, минимальное количество — при посеве биоптатов (рисунок 1).

Рис. 1. Сравнительная характеристика результатов различных методов диагностики H. pylori

По оси абсцисс — методы исследования
По оси ординат — количество положительных результатов, %

Кроме того, нами был проведен корреляционный анализ в отношении совпадения показателей различных методов диагностики, на основании которого установлена корреляционная связь между результатами быстрого уреазного теста и ПЦР (ген ureC) (рисунок 2), быстрого уреазного теста и гистологического исследования (H. pylori в теле желудка) (рисунок 3), «Хелик-теста» и гистологического исследования (H. pylori в теле желудка) (рисунок 4). На основании этого можно утверждать. Что использование комбинаций этих методов будет наиболее информативно для диагностики инфекции.

Рис. 2. Корреляционная связь между результатами быстрого уреазного теста и ПЦР (ген ureC)

По оси абсцисс — результаты быстрого уреазного теста, баллы 0-3,
По оси ординат — результаты ПЦР (ген ureC) (0—отрицательный, 1—положительный)

Рис. 3. Корреляционная связь между результатами быстрого уреазного теста и гистологического исследования (H. pylori в теле желудка)

По оси абсцисс — результаты быстрого уреазного теста, баллы 0-3
По оси ординат — результаты гистологического исследования (H. pylori в теле желудка), (0-отрицательный, 1—положительный)

Рис. 4. Корреляционная связь между результатами «Хелик-теста» и гистологического исследования (H. pylori в теле желудка)

По оси абсцисс — результаты «Хелик-теста», (0—отрицательный, 1—положительный)
По оси ординат — результаты гистологического исследования (H. pylori в теле желудка), (0—отрицательный, 1—положительный)

На основании полученных данных нами были сделаны следующие выводы разработаны рекомендации:

  1. Получение положительных результатов уреазного теста и «Хелик-теста» при отрицательных — гистологического метода или ПЦР может объясняться не ложноположительными результатами, а тем, что при проведении уреазного и «Хелик-теста» определяются продукты жизнедеятельности H. pylori, а не сам микроорганизм, который может не попасть в биоптат, исследуемый с помощью гистологического метода или ПЦР.
  2. «Хелик-тест» рекомендуется как точный неинвазивный метод при проведении оценки эффективности эрадикационной терапии, особенно в детском возрасте.
  3. Для повышения точности диагностики хеликобактериоза рекомендуется использовать как минимум два, а лучше три, метода исследования, предпочтительно сочетание быстрого уреазного теста или «Хелик-теста» с гистологическим методом исследования (биоптат из тела желудка) или ПЦР (детекция гена ureC).

Диагностика Helicobacter pylori

Обязательными тестами для определения Helicobacter pylori являются гистологический и уреазный.

Цитологическое исследование

Для цитологического исследования используются мазки-отпечатки (1-2 и более), полученные при эндоскопии из биоптатов слизистой оболочки (СО) антрального отдела желудка. Биоптат берется прицельно из участков с наиболее выраженными визуальными отклонениями от нормы (гиперемия, отек), но не из дна язв и эрозий. Высушенные мазки окрашиваются.
Применяемые паноптические методы окраски позволяют выявить морфологические особенности строения ядер и цитоплазмы клеток слизистой оболочки, наличие Helicobacter pylori, ориентировочно оценить количество микроорганизмов. Как правило, НР располагаются в слизи, имеют спиралевидную, изогнутую форму, могут быть S-образными. иметь вид «крыльев летящей чайки».
При изучении в цитологических препаратах можно выделить три степени обсеменённости слизистой оболочки: слабая {+) — до 20. средняя (++) — до 40, высокая (+++) — более 40 микробных тел в поле зрения при увеличении х360.
При обнаружении в мазках-отпечатках Helicobacter pylori выявляется также и клеточная инфильтрация, характеризующаяся наличием лимфоцитов, плазматических клеток, нейтрофилией и эозинофилией.
По преобладанию тех или иных клеточных элементов можно косвенно судить об активности и выраженности воспаления, кроме того, цитологическое исследование позволяет выявить в клетках слизистой оболочки наличие пролиферативных процессов и слепень их выраженности, метаплазии (кишечной в желудке и желудочной в дуоденуме), дисплазии и её степени тяжести, злокачественного новообразования. Однако цитологический метод не дает информации о структуре исследуемой слизистой оболочки.

Уреазный тест

По скорости выявления персистирующей Helicobacter pylori в слизистой оболочке цитологическому не уступает уреазный экспресс-метод, основанный на уреазной активности Helicobacter pylori. Teст состоит из геля-носителя, содержащего мочевину, бактериостатический агент и фенол-рол в качестве индикатора рН. Индикатор меняет цвет от желтого к малиновому, когда под действием уреазы происходит гидролиз мочевины с образованием аммиака, сдвигающего рН среды в щелочную сторону. Биоптат слизистой оболочки, полученный при эндоскопии, помещают в тест, Малиновое окрашивание теста, наступившее вслед за этим, свидетельствует о наличии в биоптате Helicobacter pylori. Изменение цвета среды происходит только в том случае, если в биоптате присутствует уреаза, выделенная Helicobacter pylori. Время изменения окраски теста косвенно свидетельствует о количестве жизнеспособных бактерий. Появление малинового окрашивания в течение первого часа соответствует значительной инфицированности слизистой оболочки Helicobacter pylori (+++), в течение последующих двух часов— умеренной (++), к концу суток — незначительной (+). Если же окрашивание наступает в более поздние сроки — результат считается отрицательным
Ложноотрицательные результаты имеют место у больных при слабой обсемененности слизистой оболочки. Ложные результаты исключаются при правильной обработке эндоскопов и биопсийных щипцов, Для повышения достоверности диагностики геликобактериоза рекомендуется сочетание обоих, гистологического и уреазного, методов, особенно важно их проведение не ранее чем через четыре недели после окончания антибактериального лечения, так как наличие персистирующей инфекции является основанием к проведению повторного курса комбинированной антигеликобактерной терапии.
Существует немало модификаций уреазного геста, и любой из них может оказаться полезным для диагностики геликобактериоза (например, ускоренный де-нол-тест фирмы «Яманучи Юроп», CLO-тест, Австралия, и др.).

13С уреазный дыхательный тест

Метод неинвазивен, абсолютно безопасен, позволяет определять степень колонизации слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori и является оптимальным для контроля эрадикационной терапии. Исследование проводится натощак, Вначале в пластиковые пробирки с интервалами в 1 мин берутся две фоновые пробы выдыхаемого воздуха. Затем принимается внутрь легкий пробный завтрак (молоко, сок и др.) и тестовый субстрат (водный раствор мочевины, меченной 13С ). В последующем в течение часа через 15 мин берутся четыре пробы выдыхаемого воздуха.
Содержание стабилизированного изотопа в выдыхаемом воздухе определяется с помощью масс-спектрометра, В соответствии с этим рассматриваются 4 степени инфицированности Helicobacter pylori: легкая — менее 3.5%, средняя — 3,5-6,4%, тяжелая — 6,5-9.4%, крайне тяжелая — более 9,5%. В норме содержание стабилизированного изотопа 13С не превышает 1% общего количества С02 в выдыхаемом воздухе.

Дополнительные методы диагностики Helicobacter pylori

Микробиологический метод.
Материалом исследования для микробиологической диагностики Helicobacter pylori являются биоптаты из слизистой оболочки желудка или двенадцатиперстной кишки, полученной в условиях максимальной стерильности. Инкубация посевов осуществляется я в микроаэрофильных условиях при содержании кислорода не более 5%. Такие условия создаются путем заполнения герметически закрывающихся сосудов газовой смесью (5% кислорода, 10% углекислого газа, 85% азота), при использовании специальных газогенераторных химических пакетов. На кровяной питательной среде геликобактер на 3-5 сут. формирует мелкие круглые, гладкие, прозрачные, росинчатые колонии диаметром 1—3 мм,
В дальнейшем проводится идентификация выделенных культур, определяются их морфологические, тинкториальные свойства, чувствительность к антибиотикам, подвижность и приводятся другие специальные исследования в зависимости от возможностей и задач, стоящих перед исследователем. Воспользоваться этим методом в условиях обычной лаборатории довольно трудно.
Гистологические методы
Гистологические методы получили широкое распространение, так как позволяют быстро обнаружить Helicobacter pylori в биоптатах и одновременно изумить морфологические изменения в слизистой оболочке. Наиболее простым и доступным метолом выявления Helicobacter pylori является окраска по Гимзе без дифференцировки. Helicobacter pylori при этом окрашиваются в темно-синий цвет, они хорошо видны как на поверхности эпителия, так и в глубине ямок. Для оценки состояния слизистой оболочки и обнаружения Helicobacter pylori достаточно двух биоптатов.
Материалом может служить любой участок слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, но при этом обязательно следует исследовать прицельно взятые биоптаты из антрального отдела в 2—3 см от привратника из участка визуально более выраженного воспаления (гиперемия, отёк). но не из дна эрозии и язвы. Частота выявления Helicobacter pylori с помощью гистологического метода хорошо корригирует с другими методами и составляет не менее 75-80%, Результативность метода зависит от многих факторов, в том числе и от способа приготовления и окраски препарата, В последнее время разработаны новые методы, среди которых наиболее чувствителен им муноцитохимический с применением моноклональных антител и комплекса авидин-биотин-пироксидазы.
Весьма обнадеживающие результаты получены при выявлении Helicobacter pylori методом гибридизации ДНК в обычных парафиновых срезах. Методика не только чувствительна, но и высокоспецифична, с ее помощью можно идентифицировать различные штаммы геликобактера и понять природу повторного обнаружения Helicobacter pylori после успешного лечения (новая ли это инфекция или размножение сохранившихся бактерий).
Иммунологические методы.
У всех больных, инфицированных Helicobacter pylori, в слизистой оболочке желудка и соответственно в двенадцатиперстной кишке образуются антитела. Специфический гуморальный иммунный ответ против антигенов геликобактера отчетливо регистрируется через 3—4 недели после инфицирования. Антитела могут быть определены различными методами (в реакции преципитации и др.), но наибольшее значение имеет метод иммуноферментного анализа (ИФА). Этим тестом выявляются антитела IgG, IgA, IgM классов в сыворотке крови, а также секреторные IgA. IgM в слюне и содержимом желудка. В практике используют ИФА по определению IgG и реже IgA-антител в сыворотке крови.
Этот метод в основном используется с целью выявления инфицированности больных с гастродуоденальной патологией и контроля эффективности антибактериального лечения в отдаленные сроки наблюдения. Преимущество метода состоит в том, что он выявляет факт инфицирования не только при манифестных, но и при субклинических формах, а также в стадии ремиссии заболевания. Следует также иметь в виду, что тест остается положительным еще не менее месяца после успешной ликвидации Helicobacter pylori, а на ранней стадии, в течение 2—3 недель с момента инфицирования, тест оказывается отрицательным.
В настоящее время в практику внедряются более совершенные методы определения Helicobacter pylori: полимеразная цепная реакция (ПЦР), определение антигена в кале и др.

Хеликобактер пилори — это бактерия, которая обнаруживается у пациентов с заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки.

Название бактерии хеликобактер пилори происходит от «пилори», указывающего на главное место обитания — пилорический отдел желудка, и «хелико», которое дает характеристику формы бактерии: винтообразный, спиралевидный.

Авторы этого открытия доктор Барри Маршал и Робин Уоррен получили престижную нобелевскую премию в области медицины в 2005 году. Открытие хеликобактер пилори стало революционным по трем причинам:

Было установлено, что бактерия может выживать в кислой среде желудка, что ранее считалось невозможным, а также является причиной большинства заболеваний желудка. Прием антибиотиков в составе терапии может вылечить или предотвратить многие болезни желудка.

Первая особенность хеликобактер пилори заключается в противостоянии чрезвычайно кислой среде желудка. Благодаря высокой кислотности, большинство бактерий и вирусов гибнут в желудке. Хеликобактер сопротивляется кислотности с помощью двух механизмов:

  • c момента попадания в желудок, бактерия, благодаря своим жгутикам, может перемещаться и скрываться в слизи, которая покрывает стенки желудка и защищает клетки.
  • кроме того, хеликобактер усиливает защитную секрецию аммиака, нейтрализующего кислую среду желудка.

Таким образом, бактерия закрепляется на стенке желудка и может там оставаться в течение многих десятилетий.

Вторая особенность хеликобактер пилори заключается в том, что бактерия является причиной болезней желудка и двенадцатиперстной кишки.

По большому счету, размножаясь, бактерия способна разрушать клетки нашего желудка. А именно, высвобождение вредных веществ вызывает хронические воспаления и приводит к гастриту.
Ослабление слизистой оболочки желудка или двенадцатиперстной кишки способствует появлению язвы и повышает риск развития рака желудка. На сегодня известно, что хеликобактер является главной причиной рака желудка.

Третья особенность хеликобактер пилори заключатся в ее уничтожении посредством курса лечения с применением антибиотиков и лекарственных средств, регулирующих уровень кислотности. Сегодня мы можем сказать, что у людей, страдающих заболеваниями желудка, есть три веские причины провериться на наличие хеликобактер пилори.

  • Эта бактерия очень устойчива к кислой среде желудка и может обитать в ней на протяжении многих лет.
  • Хеликобактер пилори влечет за собой иногда очень серьезные заболевания.
  • Эффективное лечение позволяет предотвратить болезни и их осложнения.

ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ АЛГОРИТМ

Какой именно метод выбрать для первичной диагностики инфекции, зависит от конкретной клинической ситуации, возможностей лечебного учреждения, состояния пациента. Полученные результаты во многом зависят от соблюдения правил забора биологического материала, условий и сроков его хранения, консервации и транспортировки в лабораторию для каждого конкретного исследования. Даже при соблюдении этих правил, каждый из методов имеет свои пределы диагностических возможностей, которые отражены в их основных рабочих характеристиках. Точность метода определяется его чувствительностью (инфекция диагностируется, когда она есть) чем она выше, тем меньше процент ложноположительных результатов и специфичностью (инфекция не диагностируется, когда ее нет) чем она выше, тем меньше процент ложноотрицательных результатов.

Если имеются показания к проведению диагностической эндоскопии (язвенная болезнь желудка, язвенное кровотечение, геморрагический гастрит, новообразования желудка и др.), то на фоне прицельной биопсия слизистой оболочки из преддверия привратника (из одного участка) и тела (из двух участков — передняя и задняя стенки) желудка — наиболее предпочтительными методами для выявления Helicobacter pylori считаются:
•проведение гистологического исследования — фиксация и окраска препаратов для гистологического исследования обычно занимают несколько дней
•определение уреазной активности (ускоренные уреазные тесты) — оценка результата уреазного теста занимает несколько часов

По особым показаниям могут быть проведены (перечисленные исследования являются трудоемкими, дорогостоящими и пока еще используются редко):
•посев бактериальной культуры
•полимеразная цепная реакция (ПЦР)
•уреазный дыхательный тест

Если диагноз, например язвенная болезнь желудка, был установлен ранее, во время эзофагогастродуоденоскопии, то методом выбора для выявления инфицирования слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori могут быть (данные методы неинвазивны и достаточно точны):
•серологический (иммунологический) тест
•уреазный дыхательный тест

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ Helicobacter pylori
Наиболее распространенными из них являются цитологический, уреазный и гистологический методы.
ЦИТОЛОГИЧЕСКИЙ метод исследования
Материалом для цитологического исследования служат мазки-отпечатки биоптатов, полученные при эндоскопии из участков слизистой оболочки антрального отдела желудка или двенадцатиперстной кишки с наиболее выраженными морфологическими изменениями (гиперемия, отек и т.п.). Мазки высушивают и окрашивают по Романовскому-Гимзе, по Папенгейму или метанолазурэозиновой смесью. Микроскопия окрашенных мазков-отпечатков позволяет выявить наличие Helicobacter pylori и ориентировочно оценить количество микроорганизмов.

Выделяют три степени обсемененности слизистой оболочки:
I.слабая (+) — до 20 микробных тел в поле зрения
II.средняя (++) — от 20 до 40 микробных тел в поле зрения
III.высокая (+++) — более 40 микробных тел в поле зрения

УРЕАЗНЫЙ ДЫХАТЕЛЬНЫЙ тест

В развитых странах в последние годы стандартным методом контроля за эрадикацией стал уреазный дыхательный тест, который основан на способности уреазы разлагать мочевину до НСО3 ¯ и Nh5 +. Из НСО3¯ образуется СО2, который, попадая в кровоток, затем транспортируется в легкие. Для проведения УДТ необходима мочевина, меченная радиоактивным углеродом ¹³С или 14С. Чаще в клинической практике применяется нерадиоакивный стабильный углерод ¹³С. 14С используется реже, так как является источником излучения низкоэнергетических β-частиц, которые обнаруживаются сцинтилляционным счетчиком. Изотоп количественно определяют газовым хроматомасс-спектрометром или с помощью инфракрасного и лазерного оборудования.

В начале исследования берутся 2 фоновые пробы выдыхаемого воздуха. Далее пациент съедает легкий завтрак и тестовый субстрат; в течение 1 часа, с интервалами в 15 минут, у него берут 4 пробы выдыхаемого воздуха. Уровень радиоактивного изотопа в выдыхаемом воздухе определяют в течение 10-30 минут. Затем пробирки направляются на масс-спектрометрию. Результат выражается как приращение ¹³СО2 – δ¹³СО 2, его экскреция (‰) и считается положительной при значениях выше 5‰.

В ряде стран используется определение изотопного отношения концентраций ¹³СО2/¹²СО2, что позволяет свести к минимуму влияние на конечный результат методических и инструментальных погрешностей.

При использовании дыхательного уреазного теста ложноположительные результаты считаются редкими (4-10%), ложноотрицаельные результаты возможны у пациентов, принимавших перед исследованием антисекреторные и висмутсодержащие препараты, которые ингибируют уреазу бактерий, в связи с чем рекомендуется осуществлять диагностику эрадикации уреазными методами не ранее чем через месяц после приема этих препаратов.

Метод быстрый, удобный, но ограничен в распространении из-за необходимости использовать дорогостоящее оборудование и изотопные препараты. Поскольку уменьшение стоимости изотопа невозможно, были предложены варианты масс-спектрометров на основе лазерного и инфракрасного излучения, стоимость которых существенно ниже. С другой стороны, использование микрокапсул для упаковки мочевины, меченной радиоактивным изотопом, позволило свести к минимуму трудности, связанные с хранением, утилизацией и безопасностью данного изотопа. В США продажа микрокапсул с мочевиной, меченной углеродом, разрешена FDA наравне с обычными лекарственными препаратами через аптечную сеть, что является свидетельством полной безопасности данного изотопа для обследуемых и окружающей среды. Появление такой формы меченной мочевины существенно повышает конкурентноспособность этой методики, т.к. стоимость и самого изотопа, и оборудования для его проведения в среднем меньше в 10 раз, чем масс-спектрометра.

БЫСТРЫЙ УРЕАЗНЫЙ тест

Уреазный тест («кампи-тест») относится к числу экспресс-методов выявления Helicobacter pylori.

Стандартный «кампи-тест» состоит из:
•содержащего мочевину геля-носителя
•раствора азида натрия
•раствора фенол-рота — используется в качестве индикатора рН, который при сдвиге рН среды в щелочную сторону меняет свой цвет от желтого к малиновому; сдвиг рН происходит в том случае, если под действием хеликобактерной уреазы происходит гидролиз мочевины с образованием аммиака

В качестве источника хеликобактерной уреазы используют биоптаты слизистой оболочки, которые помещают в луночку специальной плашки из синтетического материала, заполненную готовой стерильной средой.

Появление малинового окрашивания теста свидетельствует о наличии в биоптате микробных тел Helicobacter pylori.

О количестве Helicobacter pylori в биоптате косвенно судят по времени изменения окраски теста:
•значительное инфицирование слизистой оболочки НР (+++) — малиновая окраска теста появляется в течение 1 часа от начала исследования
•умеренное инфицирование слизистой оболочки НР (++) — окраска индикатора изменяется через 2–3 часа
•незначительное инфицирование слизистой оболочки НР (+) — малиновое окрашивание теста появляется к концу суток

Более позднее окрашивание теста относят к отрицательным результатам.

При проведении уреазного теста нужно учитывать и тот факт, что он может быть положительным у лиц, желудок которых колонизирован Helicobacter heilmanii, имеющим близкое сродство с Helicobacter pylori.

ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ методы («золотой стандарт» диагностики)

Данные методы методы исследования биоптатов, наряду с возможностью детального изучения морфологических изменений в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки, позволяют выявить Helicobacter pylori при обычной окраске по Романовскому–Гимзе. При эндоскопии биоптаты берут прицельно из антрального отдела желудка в 2–3 см от привратника и из участка с наиболее выраженными воспалительными изменениями слизистой.

Различные новые модификации этого метода, в частности, иммуноцитохимический метод с применением моноклональных антител или метод гибридизации ДНК, дают возможность не только существенно повысить чувствительность и специфичность гистологического выявления Helicobacter pylori, но и идентифицировать различные штаммы Helicobacter pylori, что важно для выяснения природы повторного инфицирования слизистой оболочки после эффективного антихеликобактерного лечения.

ФАЗОВО-КОНТРАСТНАЯ микроскопия

Helicobacter pylori может быть обнаружен до микробиологического или гистологического исследования при помощи фазово-контрастной микроскопии. Этот метод весьма удобен для обнаружения Helicobacter pylori, при условии достаточно высокой степени обсеменения.

Преимущества фазово-контрастной микроскопии:
•нет необходимости проводить фиксацию материала и дополнительных окрасок ткани
•исследование можно проводить в обычных лабораторных условиях
•результат может быть получен через 1-2 мин.

Процедура выполнения исследования:
•поместить биоптат на предметное стекло
•измельчить биоптат на стекле и добавить каплю физиологического расвора
•поместить на измельченный биоптат покровное стекло
•оместить приготовленный препарат в фазово-контрастный микроскоп

Микроскопия проводится с увеличением в 100 раз с спользованием иммерсионного масла. В препарате — типичные изогнутые бактерии в хаотичном движении.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ методы

Иммунологические методы основаны на выявлении у больных, инфицированных Helicobacter pylori, специфических антител, которые можно обнаружить в сыворотке крови уже через 3–4 недели после инфицирования. Достаточно высокий титр антител сохраняется даже в периоде клинической ремиссии заболевания. Отрицательным тест становится после успешного антибактериального лечения, что позволяет использовать метод для контроля эффективности такой терапии. Для выявления специфических антител используют различные методики, в частности, метод иммуноферментного анализа (ИФА) с определением антител IgG и IgA классов в сыворотке крови.

При оценке результатов иммунологического анализа следует помнить, что антитела к различным антигенам бактерии могут присутствовать в крови на протяжении года после эрадикации бактерий, что не позволяет применять методы для контроля результатов антигеликобактерного лечения.

Иммуногистохимический метод

Биопсийный материал, фиксированный в формалине и залитый в парафин, обрабатывается моноклональными антителами против Helicobacter pylori. Готовые к применению коммерческие наборы с моноклональными антителами работают при разведении 1:200000 и избирательно окрашивают только Helicobacter pylori. Этот метод хорошо зарекомендовал себя при исключительно низкой степени обсемененности слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori, когда морфологический метод и уреазный тест дают ложноотрицательные или сомнительные результаты. Он также используется для выявления морфологически измененных (кокковых форм) Helicobacter pylori.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ метод

Наибольшую информацию о Helicobacter pylori возможно получить только при выделении его из прижизненных биопсийных образцов. Это единственный метод исследования, обладающий 100% специфичностью. При этом виде исследования возможно не только выделение чистой культуры Helicobacter pylori и ее идентификация, но и изучение морфологических, биохимических и биологических свойств возбудителя.

Бактериологический метод исследования дает возможность определять антибиотикорезистентность у Helicobacter pylori и проводить за ней динамические наблюдения. Без бактериологического метода планировать клиническое испытание лекарственных препаратов, учитывая причины неудачи эрадикации, нельзя, так как основная причина, снижающая процент эрадикации – антибиотикорезистентность Helicobacter pylori.

В эпидемиологической практике выделение чистой культуры Helicobacter pylori необходимо для внутривидового типирования штаммов, что может быть использовано при мониторинге для дифференциации между реинфекцией новым штаммом и рецидивированием, которое может быть обусловлено тем же штаммом.

В научной практике бактериологический метод важен, так как позволяет изучать факторы патогенности Helicobacter pylori, изготовлять препараты для серологической диагностики, создать банк штаммовдля эпидемиологических и других исследований, так как штаммы бактерии в замороженном виде при температуре -70°С могут храниться в течение 5-7 лет. Без этого метода невозможно дальнейшее научное изучение микроорганизма. Однако этот метод достаточно дорогой. Кроме того, он сопряжен с определенными трудностями, обусловленными необходимостью наличия специальных сред, оптимальной температуры, влажности, качества атмосферного воздуха и т.д. Это приводит к тому, что рост колоний микроорганизмов удается получить далеко не всегда. Неудобство метода связано и с тем, что его результатов приходится ждать, как правило, не менее 10-14дней. В клинической практике он применяется в основном вслучаях инфекции Helicobacter pylori, резистентной к обычным схемам антигеликобактерной терапии.

Helicobacter pylori крайне «капризен», требует специальных условий культивирования и дорогостоящего оборудования. Большой шаг вперед в успешном культивировании Helicobacter pylori принадлежит транспортным средам, которые дают возможность продлить сроктранспортировки биоптата из эндоскопического кабинета вмикробиологическую лабораторию до суток (среды Стюарта, Кэри-Блэйера, Био Мерьо).

Посевы инкубируются при температуре 37°С, влажности 98%, в микроаэрофильных условиях в течение 3-10 сут. Helicobacter pylori растет в атмосфере, содержащей 5% кислорода, 5-10% углекислого газа, остальное составляет азот. Для данного микроорганизма губительны как анаэробные условия, так и более высокое содержание кислорода. Для создания микроаэрофильной атмосферы используют газогенераторные пакеты, которые продуцируют газовые смеси после добавления в них воды. Оптимальный рост колоний наблюдают при рН среды от 6,7 до 8,0. Многие штаммы Helicobacter pylori могут расти и развиваться в достаточно широком диапазоне температур при +32°С… +39°С, но не растут при +27°С …+42°С. Время инкубации: первичное исследование – 7 дней, контроль лечения — 14 дней.

На неселективной питательной среде Helicobacter pylori на 3-5 сутки при первичном посеве и на 2 сутки при пересевах чистой культуры формирует мелкие, круглые, гладкие, прозрачные, росинчатые колонии диаметром 1-3 мм. На селективной питательной среде колонии Helicobacter pylori приобретают характерное золотисто-желтое окрашивание, за счет присутствующего в этой среде трифенилтетразолий хлорида. При появлении колоний, сходных по морфологии с Helicobacter pylori (диаметром до 0,5 – 2 мм в виде «капель росы» или при сплошном росте, образующие прозрачную пленку), происходит их идентификация. Предложена методика полуколичественного определения обсеменения слизистой оболочки желудка в зависимости от числа выросших микробных колоний: до 10 колоний в чашке (1+), 10-20 колоний (2+), 20-50 колоний (3+), более 50 колоний (4+).

Для идентификации мазки окрашивают по Граму. Под микроскопом в случае Helicobacter pylori обнаруживают грамотрицательные изогнутые палочки. Проводят биохимическое типирование – уреазная, каталазная, оксидазная активность, Helicobacter pylori не ферментирует глюкозу, не продуцирует нитраты, не образует индол.

ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ (ПЦР)

Метод предназначен для качественного обнаружения ДНК Helicobacter pylori в биологических образцах (биоптаты антрального отдела желудка, биоптаты двенадцатиперстной кишки, биоптаты десен, мазки из зубодесневого кармана, слюна.). Позволяет оценить генотипические и фенотипические характеристики возбудителя. Почти у каждого пациента имеется уникальный штамм Helicobacter pylori. Выявлено, что вирулентность Helicobacter pylori во многом обусловливает клинические проявления инфекции. Существует ряд генов, продукты которых – белки Cag A, Vac A, Ice A, Bab A – полагают факторами патогенности. В зависимости от их наличия выделяютдва типа штаммов Helicobacter pylori. Экспрессирующие Cag A- и Vac A-токсин относятся к первому типу, штаммы второго типа не экспрессируют указанные гены и считаются менее патогенными. Среди большого многообразия гибридизационных методов анализа ДНК, метод ПЦР наиболее широко используется в клинической лабораторной диагностике.

ПЦР (относится к молекулярно-биологическим методам) представляет собой многократное увеличение числа копий (амплификация) специфического участка ДНК катализируемое ферментом ДНК-полимеразой.

Метод ПЦР в средах позволяет идентифицировать Helicobacter pylori без выделения чистой культуры по присутствующим в исследуемом материале фрагментам его генома.

В основе метода ПЦР лежит природный процесс — комплементарное достраивание ДНК матрицы, осуществляемое с помощью фермента ДНК-полимеразы. Эта реакция носит название репликации ДНК. Данный процесс можно использовать для получения копий коротких участков ДНК, специфичных для конкретных микроорганизмов, т.е. осуществлять целенаправленный поиск таких специфических участков, что и является целью генодиагностики для выявления возбудителей инфекционных заболеваний.

Записаться на консультацию можно по телефону: +7 (495) 681-23-45. Ознакомиться с ценами на прием, а также узнать стоимость других процедур вы можете в разделе «Цены» нашего сайта.


Сопоставление диагностических характеристик индикаторной бумаги и селективного уреазного теста для качественного определения Helicobacter pylori

АННОТАЦИЯ

Статья посвящена проблеме диагностики инфекции Helicobacter pylori. До появления уреазных тестов в России в рутинной практике использовалась индикаторная бумага для выявления микроорганизмов. Мировой опыт показывает, что селективные уреазные тесты с разделением слоев обладают более высокой специфичностью. В работе сравнивается диагностическая эффективность селективного уреазного теста AMA RUT Pro и «Индикаторной бумаги для выявления микроорганизмов “Геликобактер тест”». В ходе исследования было выявлено, что чувствительность и специфичность селективного уреазного теста составили 95,5% и 97,6% соответственно, в то время как специфичность индикаторной бумаги для выявления микроорганизмов «Геликобактер тест» составила 10,6%.

ABSTRACT

The article focuses on the problem of Helicobacter pylori detection. Before the urease tests became available, the indicator paper for the detection of microorganisms was routinely used in Russia. International practices acclaim selective urease tests as having higher specificity thanks to the separation of the enzymatic and indicator reactions in the layers of the test. The aim of the study was to compare the diagnostic efficiency of the selective urease test AMA RUT Pro against the indicator paper for the detection of microorganisms «Gelicobacter test». The research data shows the sensitivity and specificity of the selective urease test to be 95,5% and 97,6% respectively, while the specificity of the indicator paper for detecting microorganisms «Gelicobacter test» was 10,6%.

 

Ключевые слова: Helicobacter pylori, селективный уреазный тест, индикаторная бумага для выявления микроорганизмов, диагностика Helicobacter pylori.

Keywords: Helicobacter pylori, selective urease test, indicator paper for the detection of microorganisms, Helicobacter pylori detection.

 

Введение

Helicobacter pylori играет решающую роль в возникновении и рецидивировании язвенной болезни с локализацией дефекта в двенадцатиперстной кишке или желудке, а также в возникновении Н. рylori -индуцированного гастрита, МАЛТ-лимфомы желудка. Эрадикация Н. рylori приводит к существенному снижению уровня рецидивирования язвенной болезни, улучшению состояния слизистой при хроническом гастрите, прерывая цепь событий в канцерогенезе желудка, способствует гистологической ремиссии на ранних стадиях МАЛТ-лимфомы желудка. Доказана роль Н. рylori при необъяснимой железодефицитной анемии и тромбоцитопенической пурпуре.

Согласно положениям консенсуса Маастрихт V (Флоренция, 2015 г.), посвященным вопросам диагностики и лечения инфекции H. pylori, пациентам, которым показана фиброгастродуоденоскопия (ФГДС), рекомендуется дополнять исследование быстрым уреазным тестом для определения наличия инфекции H. pylori [15]. При этом отмечается, что важна именно точность положительного результата, так как именно в этом случае должно быть лечение назначено, а отрицательный результат должен быть подтвержден другими методами. Давая эти рекомендации, авторы говорят о высоких показателях чувствительности и специфичности, ссылаясь на работы, посвященные гелевым тестам, в том числе самому известному – CLO-test [18, 10, 21]. Специфичность определения в гелевых тестах обеспечивается использованием консервантов и буферов [9], которые, повышая точность определения, замедляют реакцию. Однако при хороших диагностических показателях этот тест характеризуется долгим временем срабатывания – до 24 часов, что ограничивает его использование в качестве экспресс-теста. На смену медленным гелевым тестам на мировом рынке появились более быстрые сухие селективные тесты [22, 17]. В таких тестах высокая специфичность обеспечивается механическим разделением слоев с карбамидом и индикатором [20, 24, 19]. Это разделение необходимо для защиты от нецелевых срабатываний и обеспечения достоверности положительного результата.

Переход от гелевой формы к сухой позволил уменьшить время проведения быстрого уреазного теста при одновременном повышении диагностической специфичности и сохранении высокой чувствительности определения инфекции. В исследовании [12] сравнили диагностические характеристики четырех тестов: гелевых CLO-test (США) и HelicotecUT (Тайвань) с селективными HelicotecUTPlus (Тайвань) и ProntoDry (Франция), показатели диагностической эффективности составили: чувствительность (97,0%; 95,5% и 98,5%; 97,0%), специфичность (94,0%; 94,7% и 92,5%; 91,7%). В другом исследовании при сравнении селективного ProntoDry и гелевого CLO-test селективный тест имел преимущество по чувствительности: 93% против 86,2% у CLO-test [22].

В России селективные уреазные тесты долгое время не были доступны, а в рутинной практике использовалась индикаторная бумага [1]. Несмотря на распространенность, некоторые исследователи были обеспокоены низкой специфичностью данного метода. Одним из таких средств диагностики является «Геликобактер тест», который представляет собой гигроскопичный носитель, содержащий субстрат (мочевину) и один из кислотно-основных индикаторов [7]. С появлением AMA RUT Pro стало возможно применить мировой опыт быстрого определения бактерии H. pylori без потери специфичности. Учитывая вышеописанное, целесообразным было определить диагностическую эффективность данных тестов на практике в лечебно-профилактическом учреждении.

Цель исследования: сравнить диагностическую эффективность селективного уреазного экспресс-теста AMA RUT Pro с используемой рутинной индикаторной бумагой для выявления микроорганизмов «Геликобактер тест», используя в качестве референсного метода гистологическое исследование биологических образцов (биоптатов) слизистой оболочки желудка.

Материалы и методы

Исследование проводилось в гастроэнтерологическом отделении Санкт-Петербургского бюджетного учреждения здравоохранения (СПб ГБУЗ) «Городская поликлиника № 38». Все пациенты подписывали информированное согласие до начала исследования в соответствии с Good Clinical Practice (GCP).

Критериями включения в исследование были: возраст старше 18 лет, мужчина или женщина с диспептическими жалобами (неисследованная диспепсия) или с ранее установленным диагнозом «хронический гастрит», язвенная болезнь с локализацией дефекта в луковице двенадцатиперстной кишки или желудке, гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь, функциональная диспепсия (эпигастральный болевой синдром или постпрандиальный дистресс-синдром), согласие пройти все исследования, в том числе эндоскопию верхних отделов желудочно-кишечного тракта.

Критериями исключения были: прием ингибиторов протонной помпы, антибактериальных препаратов, висмут-содержащих препаратов в течение 4 недель до тестирования на H. pylori; отказ от выполнения любой из процедур исследования.

Для определения диагностической эффективности рассматриваемых методов определения уреазной активности пациентам, включенным в исследование, проводили процедуру с забором двух биоптатов антрального отдела и двух биоптатов из тела желудка, далее проводили определение уреазной активности индикаторной бумагой и селективным тестом, после чего биологический материал помещали в пробирки, кодированные специальной маркировкой XXXYZ, где XXX – номер пациента, Y – обозначение отдела, откуда был взят биоптат, каждая пробирка содержала 10%-ный формалин. Препараты подвергали окраске с гематоксилином и эозином с оценкой наличия Helicobacter pylori квалифицированным патоморфологом.

Определение уреазной активности с помощью индикаторной бумаги «Геликобактер тест»

Для определения уреазной активности в биологических образцах (биоптатах) использовалась индикаторная бумага для выявления микроорганизмов «Геликобактер тест» (ООО «Инновационный исследовательский институт», Россия). Анализ в соответствии с инструкцией [2] проводил врач-эндоскопист: биоптат из щипцов помещали на поверхность индикаторного диска, запускали таймер, отсчитывающий 4 минуты. Оценка результатов исследования: отсутствие изменений цвета в течение 4 минут – результат отрицательный, изменение цвета на синий в течение 4 минут – результат положительный.

В качестве положительного результата фиксировались все синие окрашивания вне зависимости от того, в какой временной интервал от 0 до 4 минут появилось изменение цвета.

Определение уреазной активности Helicobacter pylori экспресс-тестом AMA RUT

Для качественного определения уреазной активности Helicobacter pylori экспресс-тестом АМА RUT было использовано исполнение AMA RUT Pro (ООО «Ассоциация медицины и аналитики», Россия). Анализ проводился в соответствии с инструкцией: биоптат был помещен на чувствительный элемент, затем тест надлежащим образом был закрыт, после чего по истечении 5 минут была проведена оценка изменения цвета экспресс-теста. Появление красного или малинового пятна на индикаторной стороне чувствительного элемента свидетельствовало о наличии уреазной активности биоптата.

 Оценка диагностической эффективности

Показатели диагностической эффективности были получены с использованием Open Source Epidemiologic Statistics for Public Health v 3.1, модуль: Diagnostic or Screening Test Evaluation [11]. Статус, определенный по результатам индикаторной бумаги «Геликобактер тест», сопоставляли со статусом, определенным по результатам селективного уреазного теста AMA RUT Pro; при расхождении результатов статус определяли по гистологическому исследованию. Он считался положительным, если было подтверждено присутствие в микробиологическом препарате бациллярных форм более 10%, отрицательной – при полном отсутствии микроорганизмов. Результаты с кокковыми формами более 90% исключались из исследования. Это связано с тем, что при преобладании кокковых форм уреазная активность может быть существенно снижена или отсутствовать [23].

Результаты и обсуждение

В исследовании принял участие 101 пациент в возрасте от 18 до 88 лет, из них 54 женщины и 47 мужчины. Средний возраст пациентов составил 53,1±12,7 года. По результатам исследования у пациентов были выявлены следующие заболевания: хронический гастрит – 47 человек, язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки – 6 человек, язвенная болезнь желудка – 2 человека, функциональная диспепсия – 31 человек, гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь – 15 человек.

Показатели диагностической эффективности AMA RUT Pro составили: чувствительность – 95,5% и специфичность – 97,6%. По данным гистологического исследования и AMA RUT Pro, распространенность инфекции составила 47,5%, близость к статистическим данным для г. Санкт-Петербурга говорит о корректности полученных данных [6]. Расчет чувствительности индикаторной бумаги «Геликобактер тест» осложнен, так как наблюдалось большое количество положительных результатов: только 5 случаев из 101 были отрицательными, распространенность Helicobacter pylori в этом случае составила бы 95%, что значительно превышает уровень инфицированности в 50% H. pylori, зафиксированный в г. Санкт-Петербурге в 2016 г. При этом специфичность определения составила 10,6%.

Избыточное количество положительных результатов индикаторной бумаги могло бы быть объяснено некорректной оценкой результата, однако по фотографиям, представленным в табл. 1 и табл. 2, видно, что изменения цвета индикаторной бумаги при отрицательной гистологии внешне не отличались от срабатываний на фоне гистологически подтвержденного присутствия бактерии в биоптате.

Таблица 1.

Пример окрашиваний индикаторной бумаги: последующее гистологическое исследование подтвердило отсутствие Helicobacter pylori в биоптатах

* – код биоптата для передачи на гистологическое исследование.

Таблица 2.

Пример окрашиваний индикаторной бумаги: последующее гистологическое исследование подтвердило наличие бациллярных форм Helicobacter pylori в биоптатах

* – код биоптата для передачи на гистологическое исследование.

 

Известно, что срабатывание уреазного теста без уреазы H. pylori может происходить, если в биоптате присутствуют другие продуцирующие уреазу организмы, такие как Proteus mirabilis, Citrobacter freundii, Klebsiella pneumoniae и другие, если указанные микроорганизмы присутствуют в достаточном количестве или если один из них контактирует с образцом и средой в течение длительного периода, обычно более 24 часов [4]. Индикаторная бумага «Геликобактер тест», согласно инструкции производителя, предназначена для определения уреазной активности микроорганизмов в общем, без акцента на специфичное определение Helicobacter pylori, поэтому можно допустить ее срабатывание на уреазу флоры, отличной от целевой. По утверждению производителя, «Индикаторная бумага для выявления микроорганизмов “Геликобактер тест”» предназначена для быстрого определения уреазной активности пробы (in vitro). Может применяться в микробиологических, экологических, ветеринарных, научных и прочих исследованиях, определение Helicobacter pylori – частный случай возможного использования этого изделия. В то время как в инструкции к AMA RUT Pro указано, что селективный уреазный тест предназначен для определения уреазной активности именно бактерии H. pylori [3].

Изменение окраски индикатора в щелочную форму в случае, если биоптат непосредственно контактирует с индикатором, может быть вызвано с физиологическими причинами в самом биоптате: на фоне различных факторов рН слизистого эпителия желудка in vitro в среднем варьируется от 6,0 до 7,2 , при этом граница перехода окраски бромтимолового синего, по документам производителя, использующегося в тестах, начинается с 6,5. Кроме того, на ложность результата могут повлиять щелочные агенты, попавшие на биоптат: желчь (рН > 7) [16], продукты реакции автолиза клеток тканей желудка [13], лидокаин, широко применяющийся в форме спрея для местной анестезии, а также подкравливание биоптата (кровь в норме имеет щелочную реакцию) [5, 14].

Специфичность теста особенно важна для выбора правильной стратегии лечения в будущем, так как согласно рекомендациям после положительного быстрого уреазного теста необходимо назначить лечение, которое будет включать в себя антимикробные препараты. Избыточное назначение антибиотиков и связанный с ним рост антибиотикорезистентности является проблемой, которая, по мнению Всемирной организации здравоохранения, достигла мирового масштаба [8]. Актуальность кларитромициновой резистентности H. pylori настолько высока, что H. pylori была внесена в список приоритетных патогенов для изучения и развития новых антибиотиков [26].

Медицина XXI века – это точная медицина (Precision medicine) [25]. В такое понятие для проведения антихеликобактерной терапии входит соответствие правилу 5П: правильный пациент, правильный препарат, правильная доза, правильное время приема препаратов и правильная диагностика. Для выполнения последнего пункта необходимо использовать точные методы диагностики. Селективность AMA RUT Pro к уреазе Helicobacter pylori позволяет проводить определение бактерии с высокой специфичностью – 95% при сохранении чувствительности. Отсутствие реакции на уреазу других микроорганизмов, согласно инструкции, подтверждено микробиологической проверкой, специальная мембрана в конструкции теста предотвращает изменение цвета индикаторного элемента из-за щелочных агентов, не связанных с протеканием целевой реакции [3].

Вывод

Диагностику Helicobacter pylori необходимо проводить тестами, предназначенными для определения уреазы именно этой бактерии. Селективные тесты AMA RUT Pro показали высокие диагностические характеристики: специфичность – 95,5% и чувствительность – 97,6%, что приближается к данным, представленным в инструкции к тестам. Индикаторная бумага, предназначенная для быстрого определения уреазолитических факторов, при выявлении Helicobacter pylori в биоптатах продемонстрировала специфичность в 10,6%.

 

Список литературы:
1. Арямкина О.Л., Мартышева Л.Н., Тарарак Т.Я. Клинические аспекты хеликобактериоза в сочетанной патологии // ВНМТ. – 2007. – № 3. – С. 111–114.
2. Инструкция по применению. Индикаторная бумага для выявления микроорганизмов «Геликобактер тест» по ТУ 9398-003-90814321-2012.
3. Инструкция по применению. Экспресс-тест AMA RUT для качественного определения уреазы Helicobacter pylori хромогенным методом ин витро по ТУ 20.59.52-008-59483502-2017. 2019.
4. Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori. Методические рекомендации / Д.С. Бордин [и др.]. – М. : ГБУЗ «Московский клинический научно-практический центр им. А.С. Логинова ДЗМ», 2019. – 12 с.
5. Продуктовая линейка – Лидокаин / Официальный сайт АО Фармстандарт / [Электронный ресурс]. – Режим доступа: URL: https://pharmstd.ru/index.php?page=129&lid=153 (дата обращения: 21.02.2020).
6. Распространенность хеликобактерной инфекции у пациентов гастроэнтерологического профиля в Санкт-Петербурге / Н.В. Захарова [и др.] // Фарматека. – 2016. – № S5. – С. 33–39.
7. Способ выявления уреазопродуцирующих микроорганизмов «Быстрый уреазный тест Геликобактер тест» и устройство для его применения // Патент России № RU 2013 125 371 A. 2014. № 34 / Плисс М.Г.
8. Antibiotic resistance / World Health Organization / [Электронный ресурс]. – Режим доступа: URL https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/antibiotic-resistance (дата обращения: 25.02.2020).
9. Compositions and methods for the diagnosis of gastrointestinal disorders involving urease // United States Patent № 4,748,113. 1988. / Barry J. Marshall.
10. Confirmation of successful therapy of Helicobacter pylori infection: number and site of biopsies or a rapid urease test / H.M. el-Zimaity [et al.] // Am J Gastroenterol. – 1995. – Vol. 90. – № 11. – P. 1962–1964.
11. Diagnostic or Screening Test Evaluation 1.0 / Open Source Statistics for Public Health / [Электронный ресурс]. – Режим доступа: URL: http://www.openepi.com/DiagnosticTest/DiagnosticTest.htm (дата обращения: 21.02.2020).
12. Dual specimens increase the diagnostic accuracy and reduce the reaction duration of rapid urease test / W.H. Hsu [et al.] // World J Gastroenterol. – 2010. – Vol. 16. – № 23. – P. 2926–2930.
13. Evaluation of a rapid urease test to detect Campylobacter pylori infection / T. Ulf Westblom [et al.] // Journal of clinical microbiology. – 1988. – Vol. 26. – №7. – P. 1393–1394.
14. Hopkins E. Physiology, acid base balance / E. Hopkins, S. Sharma. – Treasure Island (FL): StatPearls Publishing, 2019.
15. Management of Helicobacter pylori infection – the Maastricht V/Florence Consensus Report / P. Malfertheiner [et al.] // Gut. – 2017. – Vol. 66. – P. 6–30.
16. Midolo P., Marshall B.J. Accurate Diagnosis of Helicobacter pylori: Urease Tests // Gastroenterology Clinics of North America. – 2000. – Vol. 29. – № 4. – P. 871–878.
17. Prospective comparison of commercially available rapid urease tests for the diagnosis of Helicobacter pylori / L. Laine [et al.] // Gastrointest Endosc. – 1996. – Vol. 44. – № 5. – P. 523–526.
18. Prospective, multivariate evaluation of CLOtest performance / A.P. Weston [et al.] // Am J Gastroenterol. – 1997. – Vol. 92. – № 8. – P. 1310–1315.
19. Test strip for detecting gastric problems and detecting method thereof // United States Patent № US 2010/0028937 A1. 2010. / Liu et al.
20. Test strip for H. pylori detection // World International Property Organization International Publication Number WO 2012/054545 A1. 2012. / Gulf Coast Medical, Inc.
21. The best gastric site for obtaining a positive rapid urease test / J.S. Woo [et al.] // Helicobacter. – 1996. – Vol. 1. – № 4. – Р. 256–259.
22. Tseng C.A., Wang W.M., Wu D.C. Comparison of the Clinical Feasibility of Three Rapid Urease Tests in the Diagnosis of Helicobacter pylori Infection // Digestive Diseases and Sciences. – 2005. – Vol. 50. – № 3. – P. 449–452.
23. Urease activity and urea gene sequencing of coccoid forms of H. pylori induced by different factors / F. Can [et al.] // Curr Microbiol. – 2008. – № 56. – P. 150–155.
24. Urease test for detecting Helicobacter pylori bacteria // World International Property Organization International Publication Number WO 2011/112106 A2. 2011 / Stanisław Kafel.
25. What is precision medicine? / U.S. National Library of Medicine / [Электронный ресурс]. – Режим доступа: URL: https://ghr.nlm.nih.gov/primer/precisionmedicine/definition (дата обращения: 26.02.2020).
26. WHO publishes list of bacteria for which new antibiotics are urgently needed / World Health Organization / [Электронный ресурс]. – Режим доступа: URL: https://www.who.int/news-room/detail/27-02-2017-who-publishes-list-of-bacteria-for-which-new-antibiotics-are-urgently-needed (дата обращения: 25.02.2020).

 

Хелпил тест два плюса – Telegraph

Хелпил тест два плюса

Хелик-тест

=== Скачать файл ===

Что означает положительный результат уреазного теста?

Уреазный дыхательный тест на хеликобактер

Хеликобактер пилори — болезнетворная спиралевидная бактерия, устойчивая к воздействию желудочного сока. Попадая в организм, она поселяется в слизистой желудка и кишечника, приводя к ее воспалению, развитию эрозий, гастрита, язвенной болезни. Своевременное выявление хеликобактерной инфекции — залог успешного лечения этих и других патологий, включая раковую опухоль. Анализ нужен, когда человек жалуется на дискомфорт и боль в желудочно-кишечном тракте. Симптомы, требующие проверки на наличие этой бактерии, таковы:. Лабораторное обследование проводят, если есть подозрение на язвенную болезнь, воспалительные патологии ЖКТ, гастрит, злокачественные опухоли. Показывает присутствие и концентрацию в крови антител к хеликобактер пилори. Их появление — сигнал того, что иммунитет обнаружил возбудителя и начал с ним борьбу. Для каждого типа болезнетворных микроорганизмов вырабатываются свои иммуноглобулины. IgA, IgG и IgM. Они указывают на наличие и этап развития инфекции. ПЦР находит даже ничтожно малое количество бактерий, что помогает прогнозировать заболевание и выявляет склонность к развитию гастрита, рака желудка, кишечника и других патологий, связанных с хеликобактерной инфекцией. Он имеет свойство расщеплять мочевину на два вещества — аммиак и углекислый газ CO2, который выделяется при дыхании и обнаруживается методом уреазного теста. Дыхательный анализ на хеликобактер пилори проводится с использованием раствора мочевины, помеченной изотопами атома углерода. Для детей и беременных женщин применяют менее точный, но безопасный хелик-тест с карбамидом. Этот вид исследования показывает наличие хеликобактер пилори в желудочной слизи. Тест считается положительным при обнаружении хотя бы одной бактерии, а в зависимости от количества H. Для исследования на антитела к H. В пробирке ее сворачивают с помощью специального геля, который отделяет плазму от форменных элементов тромбоцитов, эритроцитов, лейкоцитов. При наличии в организме бактерии H. Анализ крови на хеликобактер пилори сдают в утренние часы, натощак. За сутки до этого нельзя кушать жирную пищу. Анализ кала требует подготовки — в течение 3 дней до его сдачи нельзя употреблять пищу с большим количеством клетчатки овощи, фрукты, злаки , с красящими веществами и солью. В этот период также запрещено ставить клизму, принимать антибиотики, препараты для усиления перистальтики и использовать ректальные суппозитории. Важно, чтобы в трубку не попадала слюна, иначе процедуру придется повторить. За 3 суток до уреазного теста запрещено употреблять алкоголь и продукты, провоцирующие газообразование в кишечнике бобовые, капуста, ржаной хлеб, яблоки и прочие. С 10 часов вечера до самого анализа нельзя кушать, в день сдачи нужно избегать факторов, повышающих слюноотделение жевательная резинка, курение. За час до теста не следует ничего пить. В цитологическом анализе изучают мазки желудочной слизи, взятой во время проведения фиброгастродуоденоскопии это метод осмотра ЖКТ с помощью зонда. Три типа антител к H. При обнаружении хеликобактер пилори проводят количественное исследование, используя масс-спектрометр. При этом в зависимости от процентного содержания изотопа углерода в выдыхаемом воздухе бывает 4 степени инфицирования значения указаны в процентах:. Расшифровка анализов кала и желудочной слизи проста: Лаборатории, проводящие исследования крови на хеликобактер пилори, имеют свои референсные показатели, или значения нормы. Они всегда указываются на бланке. Значение ниже порогового расценивается как отрицательный результат, а выше — как положительный. Чаще заражение Helicobacter pylori несет опасность для развития язвенной болезни и гастрита, поэтому для точной диагностики патологии, наряду с лабораторными анализами, гастроэнтеролог назначает и другие методы исследования. Информация предоставлена в информационно-справочных целях, ставить диагноз и назначать лечение должен профессиональный врач. Консультант — Здоровье On-Line Копирование материалов запрещено. Анализы Медикаменты Беременность Дети Диеты. Консультант Анализы Анализы на Хеликобактер Пилори: Что значат бактерии и включения в анализе мочи? Как разобраться в анализах у ребенка? Особенности проведения МРТ-анализа Специальные анализы, ЭКГ и УЗИ Нормы при беременности и значения отклонений.. Содержание 1 В каких случаях необходим анализ на H. Результат IgA IgG IgM Положительный Указывает на инфицированность бактериями. Присутствие инфекции либо остаточных антител после излечения. Свидетельствует о раннем этапе инфицирования. Отрицательный Ранний период развития инфекции когда она еще не выявляется. Период выздоровления, антибактериальная терапия. Бактерий нет либо заражение произошло недавно. Указывает на отсутствие инфекции при отрицательных IgG и IgA. Анализ кала на дисбактериоз: Анализ кала на скрытую кровь: Аллергический дерматит у взрослых и детей: Популярное Диета 5 стол: Популярные метки ЗППП анализ артрит аутоимунные беременность болезни легких боль воспаление выделения геморрой глаз грибковые инфекции дерматит дети диабет диета диета стол каловые массы киста кожа кровь лишай лор-болезни матка молочная железа моча нервы ноги паразиты позвоночник похудение почки рак руки сердце сосуды спорт суставы шейка матки щитовидная железа яичники. Нет, я постоянно не высыпаюсь Сложно сказать, половина на половину Высыпаюсь только на выходных В основном да, я сплю достаточно Да, я сплю сколько захочется. Симптомы и лечение Почему Биопарокс запрещен в России? Полинейропатия, что это такое? Указывает на инфицированность бактериями. Ранний период развития инфекции когда она еще не выявляется.

Астрология дома в натальной карте

План изучения свойств

Где находится знаменка украина

Николай носков график гастролей 2017

Датчик коленвала лачетти 1.6 где находится

Каталог фильмов на реальных событиях

Как правильно красить глаза подводкой фото

Рисуем карандашом женское тело поэтапно

Как перепрошить андроид 4.2

Энерджи диет результаты после старта отзывы

Выпечка из теста на закваске

Фипи официальный сайт 2017 открытый банк огэ

Схема предохранителей 2121

Таблица брадиса скачать в word

Немецкий язык тема семья перевод

Сталкер возвращение шрама где голова сидоровича

Правила содержания пчел в населенных пунктах

Образец приказа о переименовании должности работника

Как стать человеком пауком

Амвей каталог 2017 новосибирск

Инфицированность Helicobacter pylori и эффективность эрадикации в хирургии желудка

1. Аруин JI. И. Helicobacter pylori в этиологии и патогенезе гастрита и язвенной болезни // Архив патологии. 1990. — № 10. С. 3 — 8.

2. Аруин Л. И. Helicobacter pylori в этиологии и патогенезе язвенной болезни // Русский медицинский журнал. 1997. — Т. 5, № 2. — С. 15 — 17.

3. Аруин JI. И. Оценка обсемененности слизистой оболочки желудка и активности хронического гастрита / Л.И. Аруин, В.А. Исаков // Архив патологии. 1995. — № 3. — С. 75 — 76.

4. Аруин Л.И. Третья сессия Европейской группы по изучению Helicobacter pylori // Архив патологии. 1991. — Т. 53. — № 8. — С. 73 — 75.

5. Атясов Н.И. Сравнительная оценка результатов хирургического лечения язвенной болезни двенадцатиперстной кишки / Н.И. Атясов, А.Н. Беляев, Ю.А. Юшин, С.А. Козлов // Тез. докл. VIII-го Всеросс. съезда хирургов. Краснодар, 1995. — С. 13 — 14.

6. Байбеков И.М. Действие Campylobacter pylori и другой пристеночной микрофлоры на эпителиоциты желудка после ваготомии / И.М. Байбеков, Р.Ш Мовлян Хаджиев // Архив патологии — 1988. — № 12. — С. 51 -54.

7. Блинков И.Л. Проблемы Helicobacter pylori — миф и реальность // Клин. мед. 1997. — № 12. — С. 71 — 74.

8. Буянов В.М. Значение пилорических кампилобактеров в хирургическом лечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки / В.М. Буянов, С.Б. Даутов, М.Р. Ашурова // Сов. мед. 1991. — № 11. -С. 66-68.

9. Васильев Ю.В. Лечение больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Helicobacter pylori (опыт применения одной из схем тройной терапии) /Ю.В. Васильев, Е.В. Коломиец // Экс. клин, гастроэнтерол. 2002. — № 2. — С. 32 — 34.

10. Васильев Ю.В., Звенигородская Л.А. Фромилид (кларитромицин) в эрадикации Helicobacter pylori при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки // Антибиотики и химиотерапия. 2002. — Т. 47, № 5. — С. 16—18.

11. Горбашко А.И. Эндоскопическая оценка рефлюкс гастрита у больных оперированных по поводу язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки / А.И. Горбашко, Н.Н. Иванов // Вест. хир. — 1998. — № 10. -С. 25-26.

12. Григорьев П.Я. Диагностика и лечение язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. М.: Медицина, 1986. 224с.

13. Турин И.Н. Проблемы современной хирургии язвенной болезни желудка /И.Н. Гурин, К.В. Логунов // Вест. хир. 1997. — № 3. — С. 101 — 103.

14. Диксон М.Ф. Морфологические изменения в гастродуоденальной слизистой оболочке вызванные инфицированием Helicobacter pylori // Тер. арх. 1993.- № 1.-С. 83.

15. Дуоденогастральный рефлюкс после органосохраняющих операций с ваготомией // А.В. Федоров, В.А. Ступин, Н.Н. Грошев и др. // Хирургия.-1991.-№ 10.-С. 153-158.

16. Есенин В.И. Материалы по состоянию двигательной и секреторной функции желудка и двенадцатиперстной кишки у больных язвенной болезнью: Авторефер. дис. докт. мед. наук. М., 1971.- 32 с.

17. Есенин В.И. Характеристика двигательной и секреторной функции желудка и двенадцатиперстной кишки у больных язвенной болезнью // Хирургия. 1970. — № 3. — С. 6 — 8.

18. Жуховицкий В.Г. Helicobacter pylori и хеликобактериоз // Международные медицинский обзоры. 1993 — Том. 1, вып. 5. — С. 371 — 377.

19. Зверков И.В. Helicobacter pylori, эндокринные клетки слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки / И.В. Зверков, В.А. Исаков, Л.И. Аруин // Архив патологии 1996. — Т. 58, № 1. — С. 33 — 37.

20. Зверков И.В. Геликобактер эндокринные клетки слизистой оболочки желудка и их функция при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки //Архив патологии — 1996. — № 1. — С. 33 — 37.

21. Земляной А.Г. Опыт лечения язвенной болезни // Вест. хир. — 1986.- №4.-С. 9-16.

22. Иванов Л. А. Изучение роли геликобактер пилори в возникновении постгастрорезекционных расстройств /Л.А. Иванов, В.В. Проничев, Я.М. Вахрушев // Рос. гастроэнтеролог, жур. 1997. — № 4. — С. 129-131.

23. Ивашкин В. Т. Инфекция Helicobacter pylori: современное состояние проблемы / В.Т. Ивашкин, Т.Л. Лапина // Рус. мед. жур. -1996. -Т.4, № 3. -С.21 -26.

24. Ивашкин В.Т. Гастродуоденальная патология и Helicobacter pylori // Рус. мед. жур. 1995 — Т.1, № 2. — С.18 — 19.

25. Ивашкин В.Т. Прогноз развития гастроэнтерологии на ближайшие 10 лет // Рос. жур. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. — 2001. — Т. XI. -№ 1. — С. 7— 13.

26. Избенко Г.С. Двадцатилетние результаты ваготомии / Г.С. Из-бенко, М.Г. Шевчук, В.Г. Избенко // Клин. хир. 1988. — № 8. — С. 1-4.

27. Ильиченко А.А. Сенсорный иммуноглобулин А, и пилорический хеликобактериоз у больных с язвенной болезнью / А.А. Ильиченко, B.C. Городинская, М.М. Зотина // Арх. патол. — 1991. № 3. — С. 35 — 37.

28. Ильиченко А.А. Состояние местного и общего гуморального иммунитета при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки с пилорическим кампилобактериозом / А.А. Ильиченко, М.М. Зотина, Т.И. Серова // Сов. мед. -1990. -№5. -С. 43-45.

29. Иммунологический метод диагностики пилорического хеликобактериоза при язвенной болезни /О.А. Склянская, А.П. Мягкова, Г.Л. Лапина и др. // Сборник научн. труд. Смоленск, 1993. — С. 271 — 274.

30. Инфицированность Helicobacter pylori у больных после резекции желудка / Л.В. Поташов, В.П. Морозов, В.М. Савранский и др. // Вестн. хир. -1996.-№6.-С. 17-20.

31. Исаков В.А. Лечение язвенной болезни ассоциированной с Helicobacter pylori: достижения и нерешенные проблемы // Клин. фарм. и тер. -1997.-№6.-С. 12-17.

32. Исаков В.А. Хронический хеликобактерный гастрит при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки // МОНИКИ им. Владимирского М.Ф; Сборник научн. труд. — М., 1996. — С.20.

33. Классен М. Значение эндоскопических обследований в профилактике и ранней диагностике злокачественных опухолей желудочно — кишечного тракта // Рос. жур. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. — 1997. -№ 6. С. 13-14.

34. Комаров Т.И. Campylobacter pylori, язвенная болезнь и хронический гастрит / Т.И. Комаров, М.В. Серебрянская, С.И. Рапопорт // Клин. мед. -1989.-№8.-С. 44-48.

35. Комаров Ф.И. Campylobacter pylori у больных язвенной болезнью и хроническим гастритом иммунный ответ /Ф.И. Комаров, М.В. Серебрянская, А.П. Погромов // Клин. мед. 1990. -№ 6. — С. 100 — 106.

36. Кузин М.И. Ваготомия в лечении язвенной болезни / М.И. Кузин, П.М. Постолов, Н.М. Кузин // Хирургия. 1982. — № 12. — С. 7 — 14.

37. Лапина Т.Л. рекомендации по диагностике и лечению инфекции Helicobacter pylori у взрослых при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки // Рос. жур. гастроэнтерол., гепалол., колопроктол. 1996. -№ 1.-С. 12-17.

38. Лапина Т.Л. Рекомендации по лечению инфекции Helicobacter pylori // Русский медицинский журнал. 1998. — Т. 5, № 7. — С. 12 — 17.

39. Логинов А.С. Язвенная болезнь и Helicobacter pylori. / А.С. Логинов, Л.И. Аруин, А.А. Ильченко // Новые аспекты патогенетической терапии М.; 1993. 230 с.

40. Ломов С.Ю. Ультраструктурные основы хронического хелико-бактерного гастрита / С.Ю. Ломов, Э.А. .Бахдачьян // Ростов на — Дону: Русь; 1999.-26 с.

41. Масевич Ц.Г. Гастриты // Заболевания органов пищеварения. Часть 1; Под ред. Е.С. Рысса . С.-Пб.: Мед. информ. агенство, 1995. -С. 153-214.

42. Методы выявления Helicobacter pylori / Т.В. Дудик, Н.А. Соловьева, В.Г. Жуховицкий и др. // Рос. гастроэнтерол. жур. 2001. — №2.-С. 77-89.

43. Минушкин О.Н. Язвенная болезнь и Helicobacter pylori // Клинический вестник. Кремлевская медицина. — 1998. № 2. — С.21.

44. Митрохина Т.В. Роль Helicobacter pylori в возникновении рецидивов язвенной болезни двенадцатиперстной кишки после селективной проксимальной ваготомии / Т.В. Митрохина, С.Б. Фитилев, М.В. Павлова // Хирургия. 1996. — № 2. — С. 39 — 42.

45. Морозов И.А. О возможности инвазии Helicobacter pylori в собственную пластинку слизистой оболочки желудка // Архив патологии 1994. — Т. 56, №3.-С. 19-22.

46. Мыш В.Г. Патофизиологическое обоснование резекции желудка // «Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки». Матер. XI Всесоюзной научн. конф. Курган, 1988. — С. 86 — 87.

47. О возможности пребывания Helicobacter pylori в покоящемся состоянии в слизистой оболочки желудка у больных с язвенной болезнью после лечения / А.С. Логинов, В.Г. Решетняк, Г.В. Мукамолова и др. // Тер. архив. -1999.-№2.-С. 13-16.

48. Окороков А.Н. Диагностика болезней внутренних органов: Практ. руководство: В 4 т. Т. 1. М.: Медицинская литература, 1999. — 560 с.

49. Островский И.М. Роль хеликобактериоза в поражении желудка и двенадцатиперстной кишки // Тер. архив. 1998. — № 2. — С. 73 — 76.

50. Оценка результатов хирургического лечения язвенной болезни ассоциированной с Helicobacter pylori // С.В. Лохвицкий, В.В. Дарвин, А.В. Прошин и др. // Вестн. хир. 1998. — № 2. — С. 18 — 20.

51. Пак С.Ф. Значение Helicobacter pylori в механизме кислотно-пептической агрессии при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки: Ав-тореф. дис. канд. мед.наук. — Л. 1990. — 16 с.

52. Панасюк Г.В. Определение Helicobacter pylori на фоне лечения при язвах желудка и двенадцатиперстной кишки / Г.В. Панасюк, Г.Г. Часов-ских // Рос. жур. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1996. — Т. 5, № 3. — С. 62-65.

53. Панцырев Ю.М. Патологические синдромы после резекции желудка и гастрэктомии. М.: — Медицина, 1973. — 327 с.

54. Перкин Э.М. Влияние Helicobacter pylori на результаты органосо-храняющих операций при язвенной болезни двенадцатиперстной кишки / Э.М. Перкин, М.А. Рубцов, Н.И. Рубцова If Хирургия. 1995. — № 6. — С. 23-25.

55. Петров В.П. Дуоденогастральный рефлюкс и его последствия после резекции желудка по способам Бильрот-II и Ру / В.П. Петров, Б.Ш. Баду-ров, А.К. Хабурзания // Хирургия. 1998. -№ 4. — С. 9 — 12.

56. Пигачев А.В. Клинико-функциональная оценка способов хирургического лечения язвенной болезни желудка: Авторефер. дис. канд. мед. наук. Саранск, 1999. — 16 с.

57. Пиксин И.Н. Хирургия язвенной болезни /И.Н. Пиксин, В.И. Да-выдкин // Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2002. — 272 с.

58. Пиксин И.Н. Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки (клиника, диагностика, хирургическое лечение) / И.Н. Пиксин, В.И. Давыдкин // Саранск, Б.И., 1997. 117с.

59. Пострезекционный гастрит в иммунологическом аспекте /С.А Алиев, Н.В. Левашова, Л.Ф. Шабанова и др. // Вестник хирургии. — 1985.-№9.-С. 18-20.

60. Поташов Л.В. Выявление Helicobacter pylori при раке /Л.В. По-ташов, В.П. Морозов, В.М. Савранский // Вопросы онкологии. — 1996. — Т. 42, № 3. С. 34-35.

61. Пути профилактики дуоденального рефлюкса после резекции желудка при язвенной болезни // В.Г. Сахаутдинов, А.Н. Резбаев, А.Г. Хасанов А.Г. и др. // Вестн. хир. 1990. — №. 12. — С. 62 — 65.

62. Рожавин М.А. Патогенные свойства Campylobacter pylori // Клин, мед. 1989. — № 11. — С. 20 — 24.

63. Рысс Е.С. Helicobacter pylori. Результаты обследования патогенной роли / Е.С. Рысс, Ю.И. Фишзон-Рысс // Клин. мед. 1993. — № 6. -С.10- 14.

64. Рысс Е.С. Болезни органов пищеварения /Е.С. Рысс, Б.И. Шулут-ко // СПб.: Ренкор, 1998. 336 с.

65. Рысс Е.С. Современные представления о хроническом гастрите (определение, механизм развития, классификация, клиническая картина, лечение) // Тер. арх. 1999. — № 2. — С. 7 — 13.

66. Салупере В.П. Клиническая гастроэнтерология. Таллин: Валгус, 1988.-282 с.

67. Салупере В.П. Хронический гастрит при язвенной болезни: Ав-тореф. дис. д-ра мед. наук. Тарту, 1969. — 38 с.

68. Сафонова Н.В., Жебрун А.Б. Гастрит, язвенная болезнь и хелико-бактериоз // СПб. НИИЭМ имени Пастера. — 1993. 38с.

69. Сидоренко С.В. Диагностика и лечение инфекций вызываемых Helicobacter pylori // Университеты практического врача. Мед. альманах. Вып. 1. М.; 2002. С. 125 -140.

70. Современные аспекты лечения хеликобактериоза /Бахдачьян Э.А., Камнева Н.В., Харланова Н.Г. и др. // Экспериментальная и клиническая терапевтическая гастроэнтерология. — 2003. № 2. — С. 22 — 28.

71. Спесивцев В.Н. Диагностические возможности иммунологического метода выявления Helicobacter pylori / В.Н. Спесивцев, А.В. Калинин, В.А. Седлецкий // Клин. мед. 1992. — № 11-12. — С. 55 — 57.

72. Ткачев А.В. Осложненные формы язвенной болезни: программа лечения и реабилитации, клинико — экономический анализ: Автореф. дисс. д-ра мед. наук. — Ростов-на-Дону, 2001. — 48 с.

73. Ультраструктурные изменения клеток поверхностного эпителия желудка при хроническом хеликобактерном гастрите / Э.А. Бахдачьян, С.Ю.

74. Ломов, Н.Г. Харланова и др. // Архив патологии — 2002. — Т. 64, № 3. -С. 11-16.

75. Физшон-Рысс Ю.И. Гастриты. Л.: Медицина, 1974. 67 с.

76. Фишелева Е.Л. Helicobacter pylori и злокачественные опухоли желудка // Рос. жур. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол., 1996. — Т. 6,№ 1. -С. 14-15.

77. Чайка Н.А. Кампилобактерный гастрит // Журнал микробиол. эпид. иммун. 1989. — № 4. — С. 96 — 103.

78. Чернышов В.Н. Классификация язв желудка и выбора способа операции / В.Н. Чернышов, И.К. Александров // Хирургия. — 1992. № 2. — С. 4-9.

79. Шапошников А.В. Хирургия язвенной болезни. Что осталось? // Актуальные вопросы патологии желудка и двенадцатиперстной кишки. -Ростов на — Дону, 2000. — С. 23 — 25.

80. Шептулин А.А Язвенная болезнь с локализацией в желудке консервативная терапия или хирургическое лечение? // Хирургия. 1995. — № 2. -С. 9-12.

81. Шептулин А.А. Базисная лекарственная терапия язвенной болезни // Рус. мед. жур. 1996. — № 4. — С. 24 — 31.

82. Шептулин А.А. Обзор докладов 2-ой Российской гастроэнтерологической недели // Российский журнал гастроэнтерологии. —1997.—Т. 7,№3.— С. 35-38.

83. Эседова Э.М. Роль ферментной антиоксидантной системы и инфекции Helicobacter pylori в патогенезе язвенной болезни и их влияние на эффективность лечения / Э.М. Эседова, В.Р. Мурадович, С.Н. Мамаева // Тер. Арх. 1998. — № 2. — С. 19-22.

84. Helicobacter pylori у больных с осложненной язвенной болезнью / М.Г. Гончар, Е.И. Дельцова, Я.М. Кучирка и др. // Хирургия. 1999. — №. 6. -С. 25 — 27.

85. A new quadriple therapy for Helicobacter pylori using tripostassium dicitrato bismuthate, furazolidone, josamycin and famotidine / W.Z. Lui, S.D. Xiao, P.J. Hu et al. //Aliment. Pharmacol. Ther. 2000. — Vol. 14, N. 11.-P. 1519- 1522.

86. A new quadriple therapy for Helicobacter pylori: influence resistant strains of treatment outcome / M. Okada, H. Nishimura, M. Kawashima et al. // Aliment. Pharmacol. Ther. 1999. — Vol. 13, N. 6. — P. 769 — 774.

87. Antibacterial action of bile acids against Helicobacter pylori and changes in its ultrastructural morphology: effect of unconjugated dihydroxy bile acid / M. Iton, K. Wada, S. Tan et al. // J. Gastroenterol. 1999. — Vol. 34, N. 5. -P. 571-576.

88. Antral gastrin produsing G-cells and somatostatin-produsing D-cells in different states of gastric acid secretion / R. Arnold, M.V. Hulst, C.H. Neunof et al. // Gut. 1982. — Vol. 23, N.4. — P. 285 — 291.

89. Are performated gastroduodenal ulcers related to Helicobacter pylori infection? / J.C. Debongnie, E. Wibin, M. Timmermans et al. // Acta Gastroenterol. Belg. 1995. — Vol. 58. — P. 208 — 212.

90. Assosiation between infection with Helicobacter pylori and risk of gastric cancer: evidence from a prospective investigation / D. Forman, D.J. Newell, F. Fullerton et al. // B.M.J. 1991. — Vol. 302. — P. 1302 — 1305.

91. Attar B. Immunologic examination of gastric mucosa in Campylobacter positive gastritis / B. Attar, H. Levendoglu, V. Nadimpalli // Gastroenterol. — 1989.-Vol. 196.-P. 17.

92. Babiur E.M. Oxygen dependent killing by phagocytes //N. Engl. J. Med. 1978. — Vol. 298. — P. 659 — 668.

93. Bathel J.S. Gastritis volunteers / J.S. Bathel, T.U. Westblon, A. D. Havey//Arch. Int. Med.-1988.-Vol. 148.-P. 1149-1151.

94. Bestad A.E. Epitelium related desposition of activated complement in Helicobacter pylori associated gastritis / A.E. Bestad, P. Brandtzaeg, R. Stave, T.S. Halstensen // Gut. 1997. — Vol. 40. — Suppl. 2. — P. 196 — 203.

95. Bestad K. Review Helicobacter pylori infection in peptic ulcer disease / K. Bestad, A. Bastad // Scan. J. Gastroenterol. 1993. — Vol. 28 — P. 561 — 567.

96. Blaser M.J. In a world of black and white Helicobacter pylori is grey // Ann. Inter. Med. 1999. — Vol. 130, N. 8. — P. 695 — 697.

97. Bode G. The coccoid forms of Helicobacter pylori criteria for their viability / G. Bode, F. Mauch, P. Maltertheiner // Epidemiol. Infect. 1993.-Vol 111. -P. 483-490.

98. Bonagyra A.F. Helicobacter pylori infection. The impotance of eradication in patients with gastric disease / A.F. Bonagyra, M.A. Dabezies // Postgraduate medicine. 1996. — Vol. 100, N 5. — P. 115 -129.

99. Bork H. Rifabitin-based triple therapy after failure of Helicobacter pylori eradication treatment preliminary experience / H. Bork, H. Koop, M. Heep // J. Clin. Gastroenterol. 2000. — Vol. 31, N. 3. — P. 222 — 225.

100. Campylobacter pylori and gastroduodenal disease / X. Chen, P. Correa, J. Offerhous et al. // Amer. J. Clin. Pathol. 1986. — Vol. 62. -P. 575 — 582.

101. Cell proliferation in the gastric corpus in Helicobacter pylori assoti-ated gastritis and after gastric resection / D.A. Lynch, N.P. Mapstone, A.M. Clarke et al. // Gut. 1995. — Vol. 36, N. 3. — P. 351 — 353.

102. Changes in the intragastie distribution of Helicobacter pylori during treatment with omeprazole / R.P.H. Logan, M.M. Walker, I.I. Misiewicz et al. // Gut. 1995. — Vol. 36. — P. 12 — 16.

103. Coghlar L.G. Campylobacter pylori and recurrence of duodenal ulcer. A. 12 mounths follow-up study // L.G.Coghlar, D. Cilligan, H. Humphreys // Lancet. 1987.-Vol. 11-P. 1109-1111.

104. Correa P. Cronic gastritis: a clinico-pathological classification // Amer. J. Gastroenter. 1988. — Vol. 83. — P. 504 — 509.

105. Covacci A. Did he inheritance of a pathogenity island modify the virulence of Helicobacter pylori? / A. Covacci, S. Falcow, D.E. Berg // Trends of microbiology. 1997. — Vol. 5. — Suppl. 5. — P. 205 — 208.

106. Current concepts in the in the management of Helicobacter pylori infection / P. Malfertheiner, F. Megraund, С. O* Morain et al. the Maastricht 2 -2000 Consensus Report // Ibid. — 2002 — Vol. 16, N. 2. — P. 167 — 180.

107. Current European concepts in the management of Helicobacter pylori infection. The Maastricht Consensus Report//Gut. 1997. — Vol, 41, N. 1. -P. 8-13.

108. Czinn S.J. Susceptibility of Campylobacter pylori to the newer cephalosporin antibiotics / S.J. Czinn, Carr H. //Chemotha-.-1989.-VoL35.-P. 164-167.

109. De Cross A. J. Role of Helicobacter pylori in peptic ulcer disease / A. J. De Cross, D. A Puera. // Contemporary Gastroenterology. 1992. — May. -P. 18-28.

110. Deltenre M.A.L. Economics of Helicobacter pylori eradication therapy // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 1997. — Vol. 9. — Suppl.l. — P. 23 — 26.

111. Detergent affact of bile acids an Helicobacter pylori grouth / Khulusi S., Ahmed H.A., Patel P., et al. // Endoscopy. 1995. -N. 27. -P.l 1.

112. Disinfectant activity against different morphological forms of Helicobacter pylori: first results / J. Gebel, V. Vacata, K. Sigler et al. // J. Hosp. Infect. — 2001. Vol. 48. — Suppl. A. — P. 58 — 63.

113. Dixon F. Helicobacter pylori and the risk of gastric carcinoma // Eu-rop. J. Gastroenterol. Hepatol. 1992. — Vol. 4. (Suppl. 2). — P. 861

114. Dohara T. Intestinal metaplasia of the regenerative epitelia in 549 gastric ulcers / T. Dohara, H. Tohma, G. Aono // Hum. Pathol. -1983.- Vol. 14.-P. 1066-1067.

115. Drumm B. Assotiation of Campylobacter pylori on the gastric mucosa with gastritis in children / B. Drumm, P. Sherman, E. Cutz // N. Eng. J. Med. — 1987. V. 316. — P. 1557 — 1561.

116. Du M.Q. Gastric MALT lymphoma from aetiology to treatment / M.Q. Du, P.Q. Isaccson // Lancet Oncol. 2002. — Vol. 3, N. 2. — P. 97 — 104.

117. Dun B. Analyses of human immynologic response to Campylobacter pyloridis using tuo-dimentional gel electophoresis and immunobloting // ICAAG. — Zalzburg, 1987. P. 234 — 237.

118. Edidt S. Primary gastric B-cells lymphoma and Helicobacter pylori gastritis / S. Edidt, M. Stolte, R. Fisher // Acta. Gastroenterol. Belg. 1993. -Vol. 56.-P.62.

119. Edit S. Prevalence of intestinal metaplasis in the antral and body mucosa in Helicobacter pylori gastritis / S. Edidt, M. Stolte, R. Fisher // Acta Gastro-interol. Belg. 1993. — Vol. 56. — P. 56.

120. Effect of eradication of Helicobacrter pylori on gastritis in duodenal ulcer patients / E. Solcia, L. Villani, R. Fiocca et al. // Scand. J. Gastroenterol. -1994. Vol. 29, Suppl. 201. — P. 28 — 35.

121. Effectiveness of two quadriple, tetracycline or claritromycin-containing, second-line. Helicobacter pylori eradication therapies / S.D. Geogr-gopoulus, S.D. Ladas, S. Kataranis et al. // Aliment. Pharmacol. Ther. — 2002. -Vol. 16, N. 3. — P. 569-575.

122. Engstrand L. Inducedex pression of class II transplantacion antigens on gastric epithelial cells in patients with Campylobacter pylori positive gastric biopsies / L. Engstrand, A. Scheynius, L. Crimelius // J. Gastroenterol. 1998. -Vol. 94.-P. 115.

123. Epidemiology of Helicobacter pylori in an asymptomic population in the United States / D.Y. Graham, H.M. Malaty, D.G. Evans et al. // Gastroenterology. 1991.-Vol. 100.-P. 1495-1501.

124. Evidence for the occurance of the same strain of Campylobacter pylori / H.M. Mitchell, A. Lee, M. Bohan et al. // Campylobacter pylori and hastro-duodenal disease. Oxford: Blackwell. 1989. — P. 178-181.

125. Fernandes E. Endoscopie examination of the operated stomach: A review and a systematic approach / E. Fernandes, G. Devis // J. Gastroenterol. — 1994. Vol. 29. — P. 792 — 796.

126. Fixa B. Helicobacter pylori in the operated stomach / B. Fixa, O. Ko-markova, J. Krejsek // Acta Gastroenterol. Belg. 1993. — Vol. 56. — P. 88.

127. Gastric adenocarcinoma location and Helicobacter pylori infection / D. Martin, C. Argila, D. Boixede et al. // Gut. 1996. — Suppl. 3. — Vol. 39. — P. 167.

128. Gastric carcinoma: the Helicobacter pylori trial / M. Delterne, C. Jonas, M. Buset et al. // Acta Gastroenterol.Belg.-1995.-Vol. 58,N. 2.-P. 193-200.

129. Gastric metaplasia is the major risk factor for duodenal ulcer desease in children colonized by Helicobacter pylori / S.M. Gormally, B. Kierse, L. Daly et al. // Acta Gastroenterol. Belg. 1993. — Vol. 56. — P. 111.

130. Genta R.M. The immunobiology of Helicobacter pylori gastritis // Seminars in Gastroduodenal Disease. 1997. — Vol. 8, N. 2. — P. 2 — 11.

131. Goodwin C.S. Campylobacter pylori correlation with gastric mucosa / C.S. Goodwin, P. Blake, G. Peteson // J. Infec. Dis. 1987. — Vol. 155. — P. 488 -494.

132. Graham D.Y. Campylobacter pylori and peptic ulcer disease // Gastroenterology. 1989. — Vol. 96. — P. 1495 — 1501.

133. Graham D.Y. Should I search for Campylobacter pylori in my patients? / D.Y. Graham, P.A. Michalez // Am. J. Gastroenterol. 1988. — Vol. 83 (5).-P. 581-583.

134. Graig P.M. Helicobacter pylori secretes a ctemotactic factor for monocytes and neutrophyles / P.M. Graig, W.E. Carnes, M.C. Territo, J.H. Walsh // Gastroenterol. 1989. — Vol. 5. — P. A33.

135. Grigoriev P.Y. De-nol plus oxacillin in HP-positive duodenal ulcers. Effect on relapse / P.Y. Grigoriev, L.A. Aruin, V.A. Isakow // Rev. Esp. Enf. Digest. 1990.-Vol. 78. — Suppl. l.-P. 129-132.

136. Halter F. Traitement de l’ulcere duodenal et gastrique chronique // Gastroenterologie. Paris: Ellipses, 1992. — P. 325 — 331.

137. Helicobacter pylori and gastric cancer / E. De Coster, M. Buset, E. Fernandes et al. // 5th Bienal conference on chemoter of inf. and malign, on behalf of Eur. soc. for Biomodul. and Chemoter. Zalzburg, Austria, 1997.-P. 196-198.

138. Helicobacter pylori and gastric lymphoma: a nested case-control study / L.V. Rodrigies, S. Hansen, A. Gelb et al. // Acta Gastroenterol. Belg. 1993, N. 6.-Vol. 56.-P. 47.

139. Helicobacter pylori colonization in surgical patients / F. E. Ludtke, S. Maierhof, H. Kohler et al. // Chirurg. 1991. -Vol. 62. — P. 932-938.

140. Helicobacter pylori criminal or innocent bystander? / T. Arakawa, K. Higuchi, E. Fijiwara et al. // J. Gastroenterol. 2000. — Vol. 35. (Suppl. 12). -P. 42 -46.

141. Helicobacter pylori entry into human gastric epithelial cells. A pro-tential determinant of virulernce, persistence and treatment failures / B. Bjorkholm, V. Zhukhovitsky, C. Lofman et al. // Helicobacter. 2000. — Vol. 5, N. 3. -P. 148-154.

142. Helicobacter pylori in peptic ulcer desease / T. Yamada, D. Ahenene, D.H. Alpers et al. // J. Amer. Ass. 1994. — Vol. 272. — P. 65 -69.

143. Helicobacter pylori in perforated peptic ulcer disease / M. Sebastuan, V.P. Chandran, Y.I. Elashaal et al. // Br. J. Surg. 1995. — Vol 82,N.3.-P.360-362.

144. Helicobacter pylori infection and risk of gastric canrcinoma / J. Par-sonet, G.D. Friedman, N. Orentreich et al. // N. Engl. J. Med. 1991. — Vol. 325. -P. 1127-1131.

145. Helicobacter pylori infection in early and advanced gastric adenocarcinoma: A seroprevalence study in 143 taiwanese patients / Y.T. Lin, Y.T. Wang, Т.Н. Wang et al. // Hepato-Gastroenterol. 1993. — Vol. 40. — P. 596 — 599.

146. Helicobacter pylori reinfection and rapid relapse of low-grade B-cell gastric lymphoma / G. Cammarota, M. Montalto, A. Tursi et al. // Lancet. — 1995. -Vol. 345, N8943.-P. 192.

147. High dose omeprazole treatment combined with amoxicillin eradicates Helicobacter pylori / E. Bayerdoffer, G.A. Mannes, A. Sommer et al. // European J. of Gastroenterol, and Hepatol. 1992. — Vol. 11. — P. 697 — 702.

148. Hill M. The microbiology of Helicobacter pylori // Biomedicine and Farmacotherapy. 1997. — Vol. 51, N. 4. — P. 161 — 163.

149. Hirschl A.M. Serodiagnosis of Helicobacter pylori infections: suitability of various antigens preparations / A.M. Hirschl, Rotter M.L // Malferther P., Dilschuneuit H. (eds). Helicobacter pylori, gastritis and peptic ulcer // Berlin, 1990.-P. 141-146.

150. Histopathological features of gastritis before and after treatment for Helicobacter pylori / J. Jaric Razumovich, D. Tentor, V. Kusek et al. // Croat. Med. J. — 2000. — Vol. 41, N 2. — P. 159 — 162.

151. Hulst R. W. M. Treatment of Helicobacter pylori infection. Review of the world literature / R. W. M. Hulst, J. J. van der Keller, E. A. J. Rauws, G. Tytgat N. J. // Helicobacter. 1996. — Vol. 1. — P. 6 — 19.

152. Hupertz V. Susceptibility of Campylobacter pylori isolated from pediatric and adult patients to seven new quinolone antibiotics and nalidixic acid / V. Hupertz, H. Carr // Chemother. 1988. — Vol. 34 — P. 314 — 344.

153. Hurt W. Новая гипотеза, объясняющая роль инфекции Н. Pylori в развитии язвы двенадцатиперстной кишки // Русский медицинский журнал. — 1997.-Т. 5,№2.-С. 32-35.

154. Immunization with recombinant Helicobacter pylori urease decreases colonization levels following experimental infection of rhesus monkey / C.K. Lee, K. Soike, J. Hill et al. // Vaccine. 1999. — Vol. 17, N. 11-12. — P. 1493 — 1505.

155. Increase incidence of Helicobacter pylori in gastric cancer / D. Bi-oxede, A.L. San Roman, J. Erdozain et al. // Rev. Esp. Enf. Dagest. 1990. — Vol. 78. — Suppl. l.-P. 92.

156. Intestinal and diffuse gastric cancer arise in a different gene involvement / E. Solcia, R. Fiocca, D. Luinetti et al. // Amer. J. Gastroenterolog. — 1995. — Vol. 20, Supp. l.-P. 8-22.

157. Kaldor J. Immunoblot confimation of immune response to Campylobacter pyloridis in patients with duodenal ulcers / J. Kaldor, W. Tee, C. Nicolaco-polous // Med. J. Aust. 1986. — Vol. 145. — P. 133 — 135.

158. Kamsteed H. Preservation and transport conditions for Campylobacter pylori / H. Kamsteed, F.TJ. Van Rijn, M.P. Beks // Eur. Campylobacter pylori study Groop. Bordeaux, 1988. — P. 1.

159. Kasper G. Isolation from gastric epithelium of Campylobacter — like bacteria that are distrinct from «Campylobacter pyloridis» / G. Kasper, N. Dickgi-esser // Lancet. 1995. — Vol. 1. — P. 111 — 112.

160. Kawano S. The role of ammonia in Campylobacter pylori indused gastric mucosal damage / S. Kawano, M. Thujii, N. Sato // Gastroenterol. 1989. -Vol. 96.-P. 256-260

161. Knutton S. Intestinal colonization by enteropathogenic Esherichia coli // Moleclar pathogenesis of gastrointestinal infections; Ed. Wadstron. T. 4 New York, 1991.-P. 93-103.

162. Kobayashi K. The mechanisms of gastrointestinal mucosal injury and repair / K. Kobayashi, K. Kashima, K. Higuchi, T. Arakava //Nippon Rinsho. -1998.-Vol. 56-P. 2215-2217.

163. Koop H. Evaluation of four short-term amoxicillin, tinidazole regiments for eradication of Helicobacter pylori // Pharmamedicum. -1995, N. 3.-P. 13 -14.

164. Kozol R.A. Surgery for peptic ulcer in the Helicobacter pylori era // Arch. Surg. -1995. Vol. 130, N. 10. — P. 104 — 110.

165. Kubota T. Helicobacter pylori infection delays the healing of acetic acid-induced gastric ulcer in Japanese monkeys / T. Kubota, M. Nasu // J. Gastroenterol. Hepatol. 1996. — Vol. 11. — P. 1097 — 1102.

166. Kuipers E. J. Helicobacter pylori and the risk and management of associated diseases: gastritis, ulcer disease, atrophic gastritis and gastric cancer // Aliment. Pharmacol. Ther. 1997. — Vol. 11.- Suppl. 1. — P. 71 — 88.

167. Labenz J. Highly significant change of the clinical course of relapsing and complicated peptic ulcer disease after cure of Helicobacter pylori infection / J. Labenz, G. Borsh// Amer. J. Gastroenterol. 1994. — Vol. 89, N. 10. -P. 1785-1788.

168. Labenz J. Helicobacter pylori eradication prevents peptic ulcer bleeding relapse / J. Labenz, G. Borsh // Acta Gastroenterol. Belg. 1993. — Vol. 56. -P. 138.

169. Lambert J.R. C. pylori gastroduodenal pathogen or opportunistic bystander? / J.R.Lambert, N.D. Yeomans // Austr. N. Z. J. Med. — 1988. — Vol. 18. -P. 555-556.

170. Langenberg M. L. Campylobacter like organisms in the stomach of patients and healthy individuals / M. L. Langenberg, G.N.J. Tytgart, M.E.J. Schip-per // Lancet. — 1984. — P. 1348.

171. Laroszewicz W. Helicobacter pylori infection and metaplasia intesti-nalis in gastric ulcer patients / W. Laroszewicz, A. Gabrtelewicz, P. Sipponen, M. Suirala // Acta Gastroenterol. Belg. 1993. — Vol. 56. — P. 56.

172. Lee A. Helicobacter pylori: techniques for clinical diagnosis and basic reseach / A. Lee, F. Megraund // Saunders. London. — 1996. — 27 p.

173. Li H. Aratmodel of chronic Helicobacter pylori infection. Studies of epithelial cell turnover and gastric ulcer healing / H. Li, I. Kalies, B. Mellgard, H.F. Helander // Skand. J. Gastroenterol. 1998. — Vol. 33. — P. 370 — 378.

174. Lymhocitic gastritis, gastric adenocarcinoma and primary gastric lymphoma Helicobacter pylori / A.P. Griffits, J. Wiatt, A.S. Jack et al. // J. Clin. Pathol. 1994. — Vol. 47, N 12. — P. 1123 — 1124.

175. Marshall B. J. Helicobacter pylori // Am. J. Gastroenterol. 1994. -Vol. 89. — Suppl: II. — P. 6 — 28.

176. McNulty C. Campylobacter pylori and associated gastritis investi-gater blind, placebocontrolled trial of bismuthsaicylate and erytromycin enthylsuc-cinate /C. McNulty, J.C. Gearty, B. Grupp // Brit. Med. J. 1986. — Vol. 293. -P. 645-649.

177. McNulty C. Susceptibility of clinical isolated of Campylobacter pylori to 11 antimicrobial agents / C. McNulty, J. Dent, R. Wise // Chemother. 1985. -Vol. 28.-P. 837-838.

178. Modilin J.M. Acid related diseases. Biology and treatment / J.M. Mo-dilin, G. Sachs // Shnetztor Verlag. GmbH.D. — Konstanz. Milan. — 1998.121 p.

179. Mollencopf C. Gastritis: Immunohistochemister Nachweis der spezi-fischen und unspezifishen Immunabwer gegen Helicobacter pylori / C. Mollencopf, H. Staininger, G. Waineck, M. Meyer // Z. Gastroenterol. 1990. — Bd. 29. -P. 327-324. Morris A.

180. Morris A. / Campylobacter pylori: human ingestion studies / A. Morris, G. Nicolson // Campylobacter pylori and gastroduodenale disease; Rathbone B.J., Heatley R.V. (eds). Oxford: Blackwell. 1989. — P. 185 — 189.

181. Nawar R. Getting the bugs worked out // Science . 1995. — Vol. 267, N. 5195. — P. 172-174.

182. Newell D. Antigenic for serodiagnosis of Campylobacter pylori infection / D. Newell, A.R. Stasey // Clin. Biol. 1989. — Vol. 13. — P. 37B — 41B.

183. Newell D. Identification of the outer membrane proteins of Campylobacter pyloridis and antigenic cross -reactivity between Campylobacter pyloridis and Campylobacter jejuni // Gen. Microbiol. 1987. — Vol. 133. — P. 163 — 170.

184. Occurrence and significance of Helicobacter pylori infection as a risk factor in gastric cancerr Serological and Histological studies / A. Bahnacy, P. Kupcsulic, Z. Eles et al. // J. Gastroenterol. 1997. — Vol. 32. — P. 286 — 294.

185. Olbe L. A mechanism by which Helicobacter pylori infection of the antrum contributes to the development of duodenal ulcer / L. Olbe, A. Hamlet, J. Dalenbck, F. Andriks // Gastroenterology. 1996. — Vol. 110. — P. 1386-1394.

186. Pantoprazole, azitromycin and tinidazol: short duration triple therapy for eradication of Helicobacter pylori infection / C. Calabrese, G. Di Fabio, A. Areni et al. // Aliment. Pharmacol. Ther. 2000. — Vol. 14, N. 12.1. P. 1613-1617.

187. Parkish S.S. Heterotropic gastritis mucosa and Helicobacter pylori infection in Meckels diverticulum in Indian subjects / S.S. Parkish, S. Ranganathan, S.R. Prabhu, R.H. Karlo // J. Ass. Phys. Ind. 1993. — Vol. 41, N 10.-P. 647 — 648.

188. Penston J.G. Review article: clinical aspects of Helicobacter pylori eradication treatment in peptic ulcer disease // Aliment. Pharmacol. Ther. — 1996. — Vol. 10-P. 469-487.

189. Perez-Perez G.I. Campylobacter pylori antibodies in humans / S.S. Parkish, B.M. Dworkin, J.E. Chodos, M.J. Blaser // Ann. Int. Med. 1988. — Vol. 109, Suppl. 1.-P. 11 — 17.

190. Peterson W.L. Helicobacter pylori and gastric adenocarcinoma // Aliment. Pharmacol. Ther. 2002. — Vol. 16, Suppl. 1. — P. 40 — 46.

191. Pieramico О. Relationship among reflux-like symptoms, esophageal pH-metry and Helicobacter pylori / O. Pieramico, P. Farbitius, P. Malferthainen // Rev. Eps. Enfermed. Dig. 1990. — Vol. 78, Suppl. 1. — P. 8.

192. Prevalence of Helicobacter pylori in patients with cancer / D. Vaira, M. Miglioli, M. Menegatti et al. // Amer. J.’ Gastroenterolog. 1994. — Vol 89, N8.-P. 1360.

193. Prospective doubleblind trial of duodenal ulcer relapse after eradication from Campylobacter pylori / B.J. Marshall, J.R. Warren, E.D. Blicow et al. // Lancet.-1988.-Vol. 11.-P. 1437-1442.

194. Rathbon B.J. Campylobacter pyloridis: a new factor in peptic ulcer disease / B.J. Rathbon, J.I. Wyatt, R.V. Heatley // Gut. 1986. — Vol. 6, N. 6. -P. 635-641.

195. Rathbone B.J., Heartley R.V. Campylobacter pylori and gastroduode-nal disease. Oxford: Blackwell. — 1989. 25 p.

196. Rauws E.A.J. Campylobacter pylori / E.A.J. Rauws, G.N.J Tytgart // Amsterdam, 1989. 186 p.

197. Rauws E.A.J. Campylobacter pyloridis — associated chronic active gastritis //Gastroenterology. 1988. — Vol. 94. — P. 33 -40.

198. Rauws E.A.J. Familial clastering of peptic ulcer disease colonized with Campylobacter pylori of the same DNA composition / E.A.J. Rauws, W. Langerberg, J. Qudbier // Gastroenterol. 1989. — Vol. 96. — P. 409.

199. Regression of atypical lymphoid hyperplasia after eradication of Helicobacter pylori / T. Tanahasi, Y. Tatsumi, N. Sawai et al. // Gastroenterolog. -1997. Vol. 32, N 4. — P. 543 — 547.

200. Regression of primary low-grade B-cell gastric lymphoma of MALT after eradication of Helicobacter pylori / G. Cammarota, G. Fedeli, A. Tursi et al. // Amer. J. Gastroenterolog. 1994. — Vol. 89, N 8. — P. 1356.

201. Relation between ulcer reccurence 9-18 years after proximal gastric vagotomy to H. pylori infection and acid secretion / H. Hyvarien, K. Seppala, S. Anisimova et al. // Amer. J. Gastroenterol. 1994. — Vol. 89. — P. 1398.

202. Relationship between progession of gastric mucosal atrophy and Helicobacter pylori infection: retrospective long-term endoscopic follow-up study / N. Sakaki, T. Arakawa, H. Katon et al. // J. Gastroenterol. 1997. — Vol. 32, N. 1. -P. 19-23.

203. Riew P.N. Prospeative study of the effect of gastroectomy of Campylobacter pylori serology in peptic ulcer patients / P.N. Riew, W. Van Duijn, G. J. Offerhaus // Gastroenterol. 1996. — Vol. 96. — P. 416.

204. Role of Helicobacter pylori in the pathogenesis of complications of Meckels diverticula / W.A. Bemelman, A. Bosma, P.H. Wiersma et al. // Eur. J. Surg.-1993.-Vol. 159,N. 3.-P.171 175.

205. Rolfe R.D. The role of probiotic cultures in the control of gastrointestinal health // J. Nutr. 2000. — Vol. 130. — P. 396 — 402.

206. Saita H. Effect of exposure of Campylobacter pylori to gastric mucosa in rats on the restitution on surface epithelial cells / H. Saita, M. Muracami, S. Teramura // Gastroenterol. 1989. — Vol. 96. — P. 435.

207. Salmon P.R. Comparison of treatment regimens for Campylobacter pylori associated duodenal ulcer: prilimnary resalts / P.R Salmon, D. Vaira, J.A.

208. Holton //13 Int. Congr. Gastroenterol. Abstr. Book. Rome etc. Int. Univers. Press.-1988.-P. 553.

209. Serum antibody response to the superficial and released components of Helicobacter pylori / M. Bazillou, C. Fendi, O. Castee et al. // Clin. Immunol. -1994,N. 1.-P. 310-317.

210. Shimada T. Chemokine expression in Helicobacter pylori-infected gastric mucosa/ T. Shimada, A. Terano // Gastroenterology. 1998. — Vol. 33. -P. 613-617.

211. Shimoyama T. Clinical significance of Campylobacter pylori in upper gastrointestinal tract / T. Shimoyama, T. Miwa // Gastroenterol. 1991. — Vol. 26, N. l.-P. 119-120.

212. Sidebothman R. L. Hypothesis: Helicobacter pylori urease, mucus, and gastric ulcer / R. L. Sidebothman, J. N. Baron // Lancet. 1990. — Vol. 27 -P. 193 — 195.

213. Slomiany B. L. Evidence for proteolytic disption of gastric mucus coat by Campylobacter pylori / B. L. Slomiany, N. J. Sarosie, J. Bilsky // S. Afr. Med. J.-1988.-Vol. 74.-P.40-41.

214. Smiss A.C. A comparison of ranitidine andtripotassium dicitrato-bismus in relapse rates of duodenal ulcer. The role of CP / A.C. Smiss, A.B. Price, P. Borrielo // Gastroenterology. 1998. — Vol. 94. — P.431.

215. Sorbye H. Gastric mycosal protection against penetration of carcinogens into the mucosa / H. Sorbye, K. Svanes // Scan. J. Gastroenterolog. 1995. -Vol. 30,N10.-P. 929-934.

216. Stolte M. Campylobacter pylori in heterotropic Magenschleimhaut in Mekelschen Divertikele / M. Stolte, E. Lauer // Leber. Magen. Darm. 1989. Bd. 2. — S. 209-210.

217. Talley N.J.A. A critiqui of therapeutic trials in Helicobacter pylori -positive functional dyspepsia // Gastroenterol. Hepatol. 1994. — Vol. 106. — P. 1174-1183.

218. Talley R. Campylobacter pylori colonization of Barrets esophagus / R. Talley, W.M. Weinstein, M. Marin-Sorensen // Gastroenterol. 1988. — Vol. 94. -P. 454.

219. The design of vaccines against Helicobacter pylori and their development / G. Del Giudice, A. Covacci, J.L. Telford et al. // Annu. Rev. Immunol. — 2001.-Vol. 19.-P. 523-563.

220. The EUROGAST Stady Group An international associated between Helicobacter pylori infection and gastric cancer // Lancet. — 1993. — Vol. 341.— P. 1127-1131.

221. The pathogenic mechanisms of Helicobacter pylori a short overview / T. Wadstrom, J.L.Guruge, S. Wei et al. // Molecular Pathogenesis of Gastrointestinal Infections; Edit. By Wadstrom T. et al. // New York, 1991. — P. 249 — 255.

222. The relationship between Helicobacter pylori infection and stomal ulcer in patients with anterectomy for duodenal ulcer / E. Pop, D. Pop, C. Chira et al. // Amer. J. Gastroenterol. 1994. — Vol. 89, N. 8. — P. 1353.

223. Third line for Helicobacter pylori a prospective, culture-guided study in peptic ulcer patients / F. Comotion, B. Sicilia, J.A. Ducons et al. // Aliment. Pharmacol. Ther. 2000, № Ю. — P. 1335 — 1338.

224. Treatment failure of ofloxacin in Campylobacter pylori infection / Y. Lpupoztnski, M. Labbe et al. // Lancet. 1987.-Vol. L.-SuppL 8541.-P. 1096-1099.

225. Treatment of Helicobacter pylori infection / R. W. M. Hulst, J. J. van der Keller, E. A. J. Rauws et al. // Ned. Tijdschr. Geneeskd. 1996. — Vol. 140. -P. 967-970.

226. Tytgat G.N.J. Duodenal ulcer disease // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 1996. — Vol. 8. — P. 829 — 834.

227. Von Wulffen H. Immunoblot analyses of immune response to Campylobacter pyloridis and its clinical associations / H.Von Wulffen, H. Grote, S. Gatermann // J. Clin. Pathol. 1988. — Vol. 41. — P. 653 — 659.

228. Warren J.R. Campylobacter pylori infection // Lancet. — 1983. VoL 1. -P. 1273.

229. Water extracts of Helicobacter pylori delay healing of chronic gastric ulcers in rats: role of citokines and gastrin-somatostatin link / T. Brzozowski, P.O. Konturek, S.J. Konturek et al. // Digestion. 1999. — Vol.60. — P. 22 — 33.

230. Yoshimura H.H. Helicobacter pylori strains from duodenal ulcer pa-tiens differ at the genomic level from those from patiens with simple gastritis / H.H. Yoshimura, D.G. Evans D.Y. Graham // Rev. Esp. Enf. Digest. -1990. -Vol. 78, Suppl. l.-P.l.

Тест на уреазу

— принцип, среда, процедура и результат

Агар с мочевиной

был разработан Кристенсеном в 1946 году для дифференциации кишечных бацилл. Тест на уреазу используется для определения способности организма расщеплять мочевину за счет производства фермента уреазы.

Принцип теста уреазы

Мочевина является продуктом декарбоксилирования аминокислот . Гидролиз карбамида дает аммиака и CO2 .Образование аммиака подщелачивает среду, и сдвиг pH определяется по изменению цвета фенолового красного от светло-оранжевого при pH 6,8 до пурпурного (розового) при pH 8,1. Микроорганизмы с быстрым положительным действием на уреазу превращают всю среду в розовый цвет в течение 24 часов.

Для слабо положительных организмов может потребоваться несколько дней, а для отрицательных организмов цвет не меняется или желтый в результате производства кислоты .

Быстрый тест на уреазу (RUT)

Быстрый тест на уреазу (RUT) — популярный диагностический тест для диагностики Helicobacter pylori. Это быстрый, дешевый и простой тест, который определяет присутствие уреазы в слизистой оболочке желудка или на ней. Он также известен как тест CLO (тест на организм, подобный Campylobacter). В этом тесте используется процедура, называемая эндоскопией желудка и биопсией, для сбора клеток слизистой оболочки желудка.

Тест проводится во время гастроскопии. Биопсия слизистой оболочки берется из антрального отдела желудка и помещается в среду, содержащую мочевину и такой индикатор, как феноловый красный.Уреаза, продуцируемая H. pylori , гидролизует мочевину до аммиака, что повышает pH среды и изменяет цвет образца с желтого (ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ) на красный (ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ).

Тест также может использоваться для неформальной оценки точности результатов гистопатологии, а расхождения должны побуждать к пересмотру гистопатологии и обсуждениям с патологом.

Дыхательный тест с мочевиной

Дыхательный тест с мочевиной — это обычный неинвазивный тест для обнаружения Helicobacter pylori , также основанный на активности уреазы.Это очень чувствительный и специфический тест.

Пациент проглатывает радиоактивно меченой мочевины (радиоактивный углерод-14 или нерадиоактивный углерод-13). Если инфекция присутствует, уреаза, продуцируемая Helicobacter pylori , гидролизует мочевину с образованием аммиака и обозначенного бикарбоната , который выдыхается как CO2. Меченый CO2 обнаруживается либо сцинтилляционным счетчиком (углерод-14) и масс-спектрометрией с соотношением изотопов , либо масс-корреляционной спектрометрией (углерод-13).

Использование теста уреазы

  1. Этот тест используется для дифференциации организмов на основе их способности гидролизовать мочевину ферментом уреазой.
  2. Этот тест может быть использован как часть идентификации нескольких родов и видов Enterobacteriaceae, включая Proteus, Klebsiella и некоторые виды Yersinia и Citrobacter , а также около видов Corynebacterium .
  3. Также полезно идентифицировать Cryptococcus spp., Brucella , Helicobacter pylori и многие другие бактерии, продуцирующие фермент уреазу.
  4. Непосредственно этот тест проводится на образцах биопсии желудка для обнаружения H. pylori .

Среда, используемая в тесте уреазы

Агар мочевины Кристенсена

Состав

Ингредиенты на литр деионизированной воды: *

0 г
Мочевина 20,012 г
Монокалийфосфат 2,0 г
Пептон 1,0 г
Декстроза 1,0 г
9012 9012 9012 9012 9012 9012 9012 9012 9012 9012 9012

Конечный pH 6,7 +/- 0,2 при 25 ° C

Подготовка

  1. Растворите ингредиенты в 100 мл дистиллированной воды и стерилизуйте фильтрованием (0.Размер пор 45 мм).
  2. Развести агар в 900 мл дистиллированной воды, вскипятить до полного растворения.
  3. Автоклав при 121 градусе Цельсия и давлении 15 фунтов на квадратный дюйм в течение 15 минут.
  4. Охладите агар до 50-55 ° C.
  5. В асептических условиях добавьте 100 мл стерилизованной фильтрованием основы мочевины к охлажденному раствору агара и тщательно перемешайте.
  6. Распределите от 4 до 5 мл на стерильную пробирку (13 x 100 мм) и наклоните пробирки во время охлаждения до затвердевания.

Процедура теста на уреазу

  1. Нанесите штриховку на поверхность скошенного агара с мочевиной частью хорошо изолированной колонии или засевайте скос 1-2 каплями из культурального бульона с инфузией мозга и сердца в течение ночи.
  2. Не закрывайте крышку и инкубируйте пробирку при температуре 35–37 ° C на воздухе в течение 48 часов — 7 дней.
  3. Проверяйте на проявление розового цвета в течение 7 дней.

Результат Интерпретация теста на уреазу

Положительная реакция: Появление от интенсивного пурпурного до ярко-розового цвета в течение от 15 минут до 24 часов.
Примеры: Proteus spp, Cryptococcus spp, Corynebacterium spp, Helicobacter pylori , Yersinia spp, Brucella spp и т. Д.

Отрицательная реакция: Без изменения цвета.
Примеры: Escherichia, Shigella, Salmonella и т. Д.

Контроль качества теста на уреазу

Положительный результат: Proteus vulgaris (ATCC13315)
Слабый положительный результат: ATCC19887 (Klebsiella pneumoniae ) (Klebsiella pneumoniae ) Отрицательный:
Escherichia coli (ATCC25922)

Ограничения теста на уреазу

  1. Некоторые организмы быстро расщепляют мочевину ( Brucella и H.pylori ), тогда как другие реагируют медленно.
  2. Рекомендуется проводить биохимические и / или серологические тесты на колониях из чистой культуры для полной идентификации.
  3. Для облегчения роста и реакции гидролиза мочевины не используйте инокулят из бульонной суспензии.
  4. После продолжительной инкубации может наблюдаться ложноположительная щелочная реакция. Чтобы исключить это явление, проверьте тест с контролем (незасеянная пробирка с агаром с мочевиной) вместе с засеянной пробиркой во время длительной инкубации.
  5. Не нагревайте скошенный мочевинный агар, так как мочевина очень легко разлагается при нагревании.
  6. Чтобы обнаружить видов Proteus , агар мочевины, косые скосы необходимо исследовать в течение 6 часов после инокуляции на предмет реакции.
  7. Агар с мочевиной не следует использовать для определения количественной скорости уреазной активности, поскольку организмы различаются по способности и скорости гидролиза.
  8. Невыполнение инкубации этой среды с незакрепленными крышками может привести к получению ошибочных результатов.
  9. Мочевина чувствительна к свету и может подвергаться автогидролизу.Хранить при температуре от 2 до 8С в темноте.

Ссылки

  1. Библиотека микробов ASM: Протокол тестирования уреазы
  2. Диагностическая микробиология Bailey & Scott 13-е издание: Тест на уреазу (метод Кристенсена)
  3. Справочник по процедурам клинической микробиологии 2-е издание: Тест на уреазу
  4. Стандарты Великобритании для микробиологических исследований: уреаза Тест
  5. Виртуальные лаборатории в Амрите Вишва Видьяпитам
  6. Такахиро Уотани и Дэвид Ю. Грэм: Диагностика Helicobacter pylori с помощью экспресс-теста на уреазу
  7. Bermejo F, et al.: Экспресс-тест на уреазу для диагностики инфекции Helicobacter pylori при язвенной болезни желудка.
  8. Общественный колледж Остина
  9. Allina Health
  10. MedicineNet, Inc
  11. Microbe Online
  12. Hardy Diagnostics
  13. Центр болезней органов пищеварения
  14. Википедия

% PDF-1.5 % 2 0 obj > эндобдж 1 0 объект >>> / BBox [0 0 792 612] / Длина 160 >> поток Икс 0FC HXlN0CiINz = 12VHRevЉ! D eh # H ؏ գ UCapSHtD1MzZR:% m 嫷 + l7C конечный поток эндобдж 3 0 obj >>> / BBox [0 0 792 612] / Длина 160 >> поток Икс 0FC HXlN0CiINz = 12VHRevЉ! D eh # H ؏ գ UCapSHtD1MzZR:% m 嫷 + l7C конечный поток эндобдж 7 0 объект >>> / BBox [0 0 792 612] / Длина 160 >> поток Икс 0FC HXlN0CiINz = 12VHRevЉ! D eh # H ؏ գ UCapSHtD1MzZR:% m 嫷 + l7C конечный поток эндобдж 8 0 объект >>> / BBox [0 0 792 612] / Длина 160 >> поток Икс 0FC HXlN0CiINz = 12VHRevЉ! D eh # H ؏ գ UCapSHtD1MzZR:% m 嫷 + l7C конечный поток эндобдж 6 0 obj >>> / BBox [0 0 792 612] / Длина 160 >> поток Икс 0FC HXlN0CiINz = 12VHRevЉ! D eh # H ؏ գ UCapSHtD1MzZR:% m 嫷 + l7C конечный поток эндобдж 4 0 obj >>> / BBox [0 0 792 612] / Длина 160 >> поток Икс 0FC HXlN0CiINz = 12VHRevЉ! D eh # H ؏ գ UCapSHtD1MzZR:% m 嫷 + l7C конечный поток эндобдж 5 0 obj >>> / BBox [0 0 792 612] / Длина 160 >> поток Икс 0FC HXlN0CiINz = 12VHRevЉ! D eh # H ؏ գ UCapSHtD1MzZR:% m 嫷 + l7C конечный поток эндобдж 9 0 объект > поток 2019-08-12T17: 30: 19Z2016-03-30T16: 41: 33-04: 002019-08-12T17: 30: 19ZAcrobat PDFMaker 10.1 для Worduuid: f98d1539-a698-43a2-a211-61a5fe412a0buuid: 73be277a-e46d-452d-a746-82f7ff77cc1f

  • 4
  • application / pdf
  • Кевин Готье
  • Adobe PDF Library 10.0; изменено с помощью iText 2.1.7 пользователем 1T3XTD: 20160330174023 Microsoft конечный поток эндобдж 10 0 obj > поток x + * T0T0

    Тест на уреазу: цель, принцип, процедура и результат

    Цель

    • , чтобы проверить, может ли организм вырабатывать фермент уреазу для разложения мочевины.

    Принцип анализа уреазы:

    Мочевина является обычным продуктом метаболизма протеина у большинства позвоночных, токсичным для большинства живых организмов. Уреаза катализирует расщепление мочевины на аммиак и диоксид углерода. Тестируемый организм культивируют в среде, содержащей мочевину и индикаторный фенол красный. Если бактериальный штамм продуцирует уреазу, фермент гидролизует мочевину с образованием аммиака и диоксида углерода. При выделении аммиака среда становится щелочной, о чем свидетельствует изменение цвета индикатора на красновато-розовый.

    Мочевина + h3O ———– фермент уреаза ———> Аммиак + CO2

    Этот тест проводится для определения способности определенного микроорганизма вырабатывать фермент уреазу. Это один из полезных диагностических средств для выявления бактерий, особенно Proteus , от других грамотрицательных бактерий.

    Основным принципом этого теста является проверка изменения цвета индикатора фенолового красного, используемого в среде, вызванного разложением мочевины и образованием основного продукта i.е Nh4. Изменение цвета среды с оранжевого на розово-красный из-за повышения pH указывает на положительный тест, в то время как неизменный цвет среды указывает на отрицательный результат.

    Требования

    • Бульон мочевины Кристенсена или среда MIU (индол-мочевина)
    • Бактериальная культура; Proteus и E.coli

    Методика определения уреазы:

    1. Приготовьте бульон мочевины, растворив 2,95 г порошка мочевины в 150 мл дистиллированной воды.Добавьте мочевину после автоклавирования носителя, чтобы предотвратить первоначальное разложение мочевины.
    2. Асептически засеять данный образец микроорганизмов проволочной петлей.
    3. Инкубируйте пробирки при 37 ° C в течение 24 часов.
    4. Наблюдайте за результатом

    Результат:

    Тест на уреазу Положительный: Красно-розовый цвет ( Proteus vulgaris)

    Тест на уреазу Отрицательный: Без розового цвета ( E. coli )

    Бактерии, продуцирующие уреазу:

    • Протеус spp
    • Клебсиелла spp
    • Морганелла spp
    • Providentia виды
    • Serratia spp
    • Staphylococcus saprophyticus
    • Bacillus spp
    • Микоплазма
    • Ureaplasma urealyticum
    • Нокардия
    • Corynebacterium urealyticum
    • Хеликобактер пилори

    Тест на уреазу: цель, принцип, процедура и результат

    Экспресс-тест на уреазу (RUT) для оценки активности уреазы в бактериях полости рта in vitro и в наддесневом зубном налете ex vivo | BMC Oral Health

    Бактерии

    Как видно из таблицы 1, бактериальные штаммы, использованные для оценки RUT in vitro, включали как лабораторные эталонные штаммы (Коллекция культур, Университет Гетеборга, CCUG, Швеция; Американская коллекция типовых культур, ATCC), так и собственные штаммы. клинические изоляты (Oral Microbiology, Гетеборг, Швеция, OMGS). Campylobacter ureolyticus , H. pylori, Staphylococcus epidermidis штаммов использовали в качестве положительных контролей, а Enterococcus faecalis, Escherichia coli , Pseudomonas aeruginosa и Pseudomonas aeruginosa и отсутствовали у штаммов Staphylococcus aureus, известных как отрицательная активность штаммов Staphylococcus aureus, в соответствии с их известной отрицательной активностью и Staphylococcus aureus. [14]. Кроме того, виды бактерий полости рта, например Были включены A. naeslundii, H. parainfluenzae и S. salivarius с документально подтвержденной уреолитической способностью [3, 4].Кроме того, мы также включили ряд штаммов, обычно связанных с наддесневым и поддесневым зубным налетом (см. Таблицу 1). Свежие клинические изоляты A. naeslundii, H. parainfluenzae и S. salivarius из образцов слюны в оральной микробиологической диагностической лаборатории отделения, идентифицированные с использованием общепринятых лабораторных методов [14], были использованы для оценки вариабельности бактериальных штаммов ( Таблица 2).

    Таблица 1 Виды бактерий, протестированные на уреазную активность с помощью теста RUT, считывание через 1 час инкубации при 36 ° C. Таблица 2 Реакции клинических пероральных изолятов методом RUT, считывание через 1 час.Клетки получали с чашек с агаром путем соскоба (1 мкл).

    Уреазный тест

    Микрометод NCTC (Национальная коллекция типовых культур, NCTC, Общественное здравоохранение Англии, Великобритания) RUT, используемый для обнаружения H. pylori в желудке. образцы [15, 16] были преобразованы в формат микропланшетов и использованы для оценки уреазоположительных бактерий. Уреазный бульон (лаборатория Bakt, больница Sahlgrenska, Гетеборг, Швеция) использовали в объемах 100 мкл в 96-луночных микротитровальных планшетах (Nunc, Копенгаген, Дания).Питательный бульон содержал 2% мочевины, pH 6,8 и феноловый красный в качестве индикатора. Бульон имеет оранжевый цвет, который становится желтым при более низком pH и розовым или красным, а затем пурпурным при щелочном pH.

    Оценка активности уреазы в штаммах бактерий in vitro

    Штаммы бактерий, представленные в таблице 1 (включая штаммы положительного и отрицательного контроля по уреазе), выращивали на чашках с агаром с бруцеллой и кровью в аэробных условиях в течение 2 дней или, в случае анаэробных видов. , анаэробно в течение 5-7 дней при температуре 36 o C.Колонии с планшетов собирали соскабливанием с петли (1 мкл инокуляционной петли, Sarstedt, Nümbrecht, Германия) клеток колоний, которые суспендировали в бульоне с мочевиной и инкубировали при 36 ° C. Изменение цвета считывалось через 15 минут, 30 минут и 1 и 2 часа. Визуальное изменение цвета оценивалось как отсутствие реакции (0) за отсутствие изменения цвета (или отмечено как «изменилось на желтый в результате образования кислоты»), + обозначало слабую реакцию с переходом в розовый цвет, ++ обозначало умеренное реакция со сдвигом в сторону красного и +++ сильная реакция с прозрачным пурпурным цветом.

    S. epidermidis (OMGS 3949), C. ureolyticus (CCUG 7319), S. salivarius (OMGS 3945) и A. naeslundii (OMGS 2466) были использованы в качестве положительного контроля, а E coli (OMGS 3935) в качестве отрицательного контроля в серии экспериментов, проведенных с целью дальнейшей оценки зависимости метода от времени и температуры. Чтобы проверить зависимость от времени, планшеты оставили на столе и считывали каждый час в течение следующих 4 часов и, наконец, через 24 часа.Температурную зависимость тестировали в аналогичные моменты времени после инкубации планшетов при температуре 20, 25 и 36 ° C. Все эксперименты проводили в трех повторностях.

    Те же бактериальные штаммы использовали для тестирования RUT на зависимость от глюкозы и пониженного pH во время роста бактерий перед инокуляцией в тест-бульон с мочевиной. Штаммы инкубировали в пептонном бульоне, содержащем 0,1, 0,5 или 1,0% глюкозы, в течение 1-2 дней. Конечный pH был измерен, и бактериальные клетки были собраны центрифугированием, а затем количество петли (1 мкл) было использовано для тестирования активности уреазы методом RUT.За реакцией следили и считывали через 1 час.

    Изменчивость уреазной активности штамма была протестирована с использованием свежих клинических изолятов S. salivarius (8 штаммов), A. naeslundii (8 штаммов) и H. parainfluenzae (5 штаммов) и с использованием обеих полученных клеток. из чашек с агаром (1 мкл) и из осадка (1 мкл) после культивирования в бульоне.

    Ex vivo оценка активности уреазы в зубном налете

    Восемнадцать добровольцев (11 женщин и 7 мужчин, средний возраст ± стандартное отклонение 37.3 ± 15.4, диапазон 25–69) среди студентов и сотрудников лаборатории Института одонтологии Университета Гетеборга, участвовавших в тестировании. У них был DMFT ± SD (разрушение пропущенных заполненных зубов ± стандартное отклонение) 9,7 ± 5,54. Никаких дополнительных конкретных критериев включения не было сочтено необходимыми для оценки метода RUT на зубном налете ex vivo. Испытуемых проинструктировали не чистить зубы за 2 дня до теста и не есть и не пить ничего, кроме воды за 2 часа до теста. Все они участвовали добровольно и дали информированное согласие.

    Отдельные образцы наддесневых бляшек были собраны путем соскабливания кюреткой с интерпроксимальных участков между нижними резцами (участок 31/41), между верхними резцами (участок 11/21), между верхним левым первым моляром и вторым премоляром (участок 26). / 25), а также между вторым нижним правым премоляром и моляром (участок 45/46) у 18 взрослых. Количество (1 мкл) бляшек с каждого соответствующего сайта добавляли к 100 мкл бульона мочевины в 96-луночном планшете и оставляли при комнатной температуре.Цветную реакцию считывали через 1 час, и ее оценивали аналогично бактериальным тестам in vitro.

    Статистический анализ

    Непараметрический тест Манна-Уитни был использован для анализа разницы уреазной активности межзубной наддесневой бляшки между участками. Статистический анализ проводился с использованием Microsoft® Excel® для Mac (версия 14.4.8, 2011 г.) и KaleidaGraph® (версия 4.1.2, Synergy Software. 2011 г.). Статистически значимым считалось, если значение p было <0.05.

    Экспресс-тест на уреазу — обзор

    Диагноз

    Нет никаких специфических симптомов или совокупности признаков и симптомов, которые предсказывают наличие гастрита или язвенной болезни у детей. Более того, большинство из инфекций H. pylori и ассоциированного гастрита остаются бессимптомными. Тем не менее, дети с предупреждающими симптомами или тревожными признаками, такими как сильная хроническая боль в животе, анорексия и неспособность нормально развиваться, или постоянная рвота, нуждаются в обследовании.Присутствие скрытой крови в кале, особенно при железодефицитной и / или железодефицитной анемии, требует расследования. Выраженность симптомов определяет необходимость эндоскопии; эндоскопия и биопсия выполняются для определения причины симптомов, а не просто для выявления инфекции H. pylori . 174,175

    Две группы недавно обновили рекомендации по ведению больных, основанные на достоверных доказательствах. Обновленные рекомендации канадской исследовательской группы H. pylori 175 : (1) Популяционный скрининг на H.pylori у бессимптомных детей для предотвращения рака желудка нецелесообразно. (2) Тестирование на H. pylori у детей следует рассматривать, если в семейном анамнезе имеется рак желудка. (3) Целью диагностических вмешательств должно быть определение причины появления желудочно-кишечных симптомов, а не наличия инфекции H. pylori . (4) Рецидивирующие боли в животе в детстве не являются показанием для тестирования на инфекцию H. pylori . (5) Х.pylori не требуется пациентам с впервые диагностированной ГЭРБ. (6) Тем не менее, тестирование H. pylori может быть рассмотрено перед использованием длительной терапии ингибиторами протонной помпы. (7) Следует рассмотреть возможность тестирования на инфекцию H. pylori у детей с рефрактерной железодефицитной анемией, когда не было обнаружено других причин. (8) Когда показано обследование педиатрических пациентов со стойкими или тяжелыми симптомами со стороны верхних отделов брюшной полости, предпочтительным вариантом является эндоскопия верхних отделов брюшной полости с биопсией.(9) Дыхательный тест с содержанием С-мочевины 13 в настоящее время является лучшим неинвазивным диагностическим тестом на инфекцию H. pylori у детей. (10) В настоящее время недостаточно доказательств, чтобы рекомендовать тесты на антигены в кале в качестве приемлемых диагностических инструментов для инфекции H. pylori . (11) H. pylori серологические тесты на антитела не рекомендуются в качестве инструментов диагностики инфекции у детей. 174

    Руководящие принципы ESPGHAN-NASPGHAN, включая классификацию доказательств, рекомендуют: (1) Основная цель клинического исследования желудочно-кишечных симптомов — определить основную причину симптомов, а не только наличие H.pylori инфекция. (2) Диагностическое тестирование на инфекцию H. pylori не рекомендуется у детей с функциональной болью в животе. (3) У детей, у которых есть родственники первой степени родства с раком желудка, можно рассмотреть возможность тестирования на H. pylori . (4) У детей с рефрактерной железодефицитной анемией, у которых исключены другие причины, можно рассмотреть возможность тестирования на инфекцию H. pylori . (5) Для диагностики инфекции H. pylori во время эзофагогастродуоденоскопии (ЭГД) необходимо получить биопсию желудка (антрального отдела и тела) для гистопатологии.(6) Первоначальный диагноз инфекции H. pylori может быть основан либо на положительном гистопатологическом исследовании плюс положительный экспресс-тест на уреазу, либо на положительном посеве. (7) Дыхательный тест с С-мочевиной 13 (UBT) — надежный неинвазивный тест для определения эрадикации H. pylori . (8) Подтвержденный иммуноферментный анализ (ИФА) на антиген H. pylori в стуле является надежным неинвазивным тестом для определения эрадикации H. pylori . (9) Тесты на обнаружение антител (IgG, IgA) против H.pylori в сыворотке, цельной крови, моче и слюне не являются надежными для клинического использования. (10) Клиницистам необходимо подождать не менее 2 недель после прекращения терапии ингибиторами протонной помпы (ИПП) и 4 недели после прекращения приема антибиотиков для выполнения биопсийных и неинвазивных тестов (UBT, анализ стула) для H. pylori .

    Золотым стандартом диагностики инфекции H. pylori является идентификация микроорганизма в культуре и гистологическое исследование образцов биопсии желудка.По сравнению с гистологическими изменениями у взрослых дети имеют более высокую плотность H. pylori в ямках и на поверхности эпителиальных клеток и более умеренную степень инфильтрации нейтрофилами, плазматическими клетками и эозинофилами; 206 аналогичная степень инфильтрации мононуклеарными клетками и атрофией; 206 207 и реже язвы и кишечная метаплазия. 207 У детей изъязвление слизистой оболочки находится в двенадцатиперстной кишке и редко встречается в теле желудка, но может быть обнаружено в антральном отделе желудка. 208 Окрашивание желудочного секрета гематоксилином и эозином не так чувствительно, как другие методы, такие как окрашивание серебром Вартина – Старри, акридиновым оранжевым или окраской Гимзы; Чувствительность окрашивания желудочного секрета гематоксилином и эозином составляет 77% по сравнению с 88% для образцов биопсии, взятых при эндоскопии. 175,208 Поскольку H. pylori является привередливым организмом, биопсийный материал можно транспортировать в физиологическом растворе, если он должен быть обработан в течение 3 часов, в противном случае необходимо использовать транспортную среду, а образец следует хранить на льду перед инокуляцией.Материал биопсии желудка можно проверить с помощью экспресс-теста на уреазу, в котором используется фермент уреаза H. pylori , и его можно выполнить в эндоскопическом кабинете. 209 В энтеро-тесте, неинвазивном методе получения образца для культивирования H. pylori, проглатывается капсула, прикрепленная к нейлоновой нити с высокой абсорбирующей способностью. Было продемонстрировано, что амплификация нескольких генов (уреаза, 16S РНК, 29-kd антиген, cag, и vacA ) с помощью ПЦР является успешной альтернативой культуре и гистологии для диагностики. 210 Хотя 16S РНК может быть более чувствительной для обнаружения H. pylori , амплификация генов cag или vacA дает больше информации о заражающем штамме. 133,211,212 Образцы биопсии из антрального отдела и тела желудка инокулируют на обогащенный агар с лошадиной или овечьей кровью с добавлением антибиотиков (ванкомицин, амфотерицин B и цефоперазон) и инкубируют при 37 ° C в микроаэрофильной атмосфере с 7% азота. Немногие лаборатории клинической микробиологии имеют возможность производить посев на H.pylori .

    UBT с использованием таких методов, как новый лазерный анализ соотношения (LARA) — 13 C, и тесты на антигены стула (особенно моноклональные тесты нового поколения) широко изучались как у взрослых, так и у детей. 96,171,174,175,213–217 Исследования четко продемонстрировали полезность этих тестов у детей как для диагностики, так и в качестве теста на излечение в более широком диапазоне возрастных групп. 213 218 219 Для детей младше 6 лет требуется дальнейшая валидация этих анализов.Тест на поликлональные антигены стула продемонстрировал изменчивую эффективность и имел менее благоприятную точность по сравнению с UBT и тестами на моноклональные антигены стула нового поколения. 215,220

    Другой метод диагностики инфекции H. pylori у детей — это обнаружение специфических антител в сыворотке, моче или слюне. 221 222 Наиболее широко используется определение сывороточного иммуноглобулина (Ig) G с помощью EIA и вестерн-блоттинга (WB). 223 224 Однако чувствительность большинства имеющихся в продаже ОВОС у детей намного ниже, чем у взрослых. 225 Недавно разработанные ИФА с использованием рекомбинантных антигенов CagA и VacA требуют дальнейшей оценки у детей. Более того, три оригинальных педиатрических руководства H. pylori 226–228 , а также пересмотренных канадских рекомендаций и рекомендаций ESPGHAN-NASGPHAN для детей 175 однозначно не рекомендуют клиническое использование серологии.

    «Струнный тест» — это новый, относительно неинвазивный метод (требующий глотания, времени выдержки в течение 1 часа и извлечения), который может обеспечить как изоляцию организма для типирования, так и определение чувствительности к антимикробным препаратам. 229–234 В недавнем исследовании струнный тест сравнивался с эндоскопией и биопсией для выявления и анализа инфекции H. pylori у 44 человек с желудочными жалобами. В дополнение к культивированию и стандартной гистологической оценке, молекулярные анализы (т. Е. Случайным образом амплифицированная полиморфная ДНК, RAPD и ПЦР для гена уреазы B) были выполнены как на биоптатах, так и на образцах для тестирования нитей. 230 H. pylori культивировали из 80% цепочек и детектировали с помощью ПЦР из 91% цепочек участников, чьи биопсии были положительными по культуре, ПЦР и гистологии.Штаммы, полученные из нитей и образцов биопсии, дали идентичные или тесно связанные профили RAPD в каждом из 24 протестированных случаев. 230 Генотипы H. pylori , полученные от членов 62 домохозяйств из трущоб в Перу, сравнивали с использованием культур и / или анализов ДНК с помощью струнного теста. 233 Отпечатки RAPD 70% пар ребенок-мать не совпадали, как и последовательности диагностических генов (разница последовательностей ДНК> 1%), независимо от возраста ребенка (диапазон от 1 до 39 лет).Большинство штаммов от братьев и сестер или других парных членов семьи также не были родственниками. Данные показывают, что инфекций H. pylori и в исследуемом обществе часто являются внебольничными. Это небольшое, но новое исследование показывает, что для эффективной профилактики инфекции H. pylori и связанного с ней гастродуоденального заболевания потребуются меры по борьбе с H. pylori , применяемые в масштабах всего сообщества. Хотя оба исследования имеют небольшой размер, они предоставляют доказательства того, что струнный тест полезен в клинической практике, особенно в таких условиях, как сельские общины или районы, где нет детских гастроэнтерологов.

    Экспресс-тест на уреазу для диагностики инфекции H. pylori у пациентов с кровотечением из пептической язвы — Просмотр полного текста

    Экспресс-тест на уреазу (RUT) является наиболее часто используемым методом биопсии для диагностики инфекции Helicobacter pylori (Hp) из-за его простые, быстрые и точные символы. Однако недавно сообщалось, что его чувствительность снижается во время язвенного кровотечения. Поэтому важно избежать ложноотрицательных результатов у этих пациентов. Siddique et al. Сообщили, что чувствительность RUT может быть увеличена при увеличении количества биопсий с 1 до 4.Другие исследования показали, что дополнительная биопсия из тела желудка повысит чувствительность RUT у пациентов с язвенным кровотечением. Поэтому мы планируем это исследование, чтобы увидеть, может ли увеличенное количество биопсий или другое место биопсии повысить чувствительность RUT у пациентов с кровотечением из язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.

    После получения объяснения и согласия эти пациенты с кровотечением из язвы желудка или двенадцатиперстной кишки, диагностированного после эндоскопического обследования, будут включены в исследование. Те, кто нестабилен, получали антибиотики или продолжительное лечение ингибиторами протонной помпы в течение 4 недель или которым противопоказано проведение эндоскопической биопсии, будут исключены.Мы возьмем 1 кусок, 4 образца биопсии из препилорического антрального отдела желудка и 1 образец из тела желудка с помощью стандартных щипцов для биопсии у пациентов после того, как они согласятся пройти тест RUT. Затем мы поместили эти образцы в 3 отдельных набора RUT соответственно. Мы используем 13C-UBT в качестве золотого стандарта для диагностики инфекции Hp. Он запланирован: (1) если состояние этого пациента не подходит для дыхательного теста сразу после эндоскопического исследования, 13C-UBT будет проведен в течение 2 дней, (2) в противном случае он будет выполнен через 1 час после исследования.Мы планируем включить в это исследование 100 пациентов. Мы применим тест МакНамера, чтобы изучить разницу в чувствительности RUT для разных биоптатов. Для определения чувствительности RUT из разных мест мы используем метод статистики каппа, чтобы проанализировать их согласованность.

    Оценка одноминутного сверхбыстрого теста на уреазу для диагностики Helicobacter pylori

    Существует несколько методов диагностики инфекции Helicobacter pylori .1 Тот факт, что бактерия вырабатывает уреазу, расщепляющую мочевину, был использован для разработки нескольких экспресс-тестов на уреазу .Хотя некоторые из них имеются в продаже, 2 они относительно дороги и поэтому могут быть доступны не всем клиницистам, особенно в развивающихся странах. Однако существует несколько тестов на уреазу местного производства, которые очень легко приготовить и стоят недорого.3-5 Однако есть сомнения в чувствительности и специфичности этих тестов. В большинстве наших исследований мы использовали одноминутный сверхбыстрый тест на уреазу (URUT) 3. Это исследование было предпринято для оценки надежности URUT по сравнению с гистологией.

    Сначала мы провели пилотное исследование 20 биопсий желудка, чтобы выяснить, можно ли использовать одну и ту же биопсию желудка для URUT, отпечатков мазков и гистологии. Результаты этого пилотного исследования показали, что одна и та же ткань биопсии может быть использована для выполнения URUT и подготовки мазков-отпечатков без неблагоприятного воздействия на ткань для последующего гистологического исследования.

    Пациенты и методы

    Обследована тысяча пациентов, перенесших эндоскопию верхних отделов желудочно-кишечного тракта.Пациенты, получавшие ингибиторы протонной помпы, антибиотики или висмутсодержащие агенты, и пациенты, получавшие терапию, направленную на эрадикацию H. pylori , были исключены из исследования. Были взяты четыре биопсии слизистой оболочки желудка: две из антрального отдела в пределах 4 см от привратника (одна из большего, а другая из малого искривления) и две из тела желудка.

    Одноминутный сверхбыстрый тест на уреазу был свежеприготовлен, как описано Thillainayagam et al .3 Вкратце, каждую ткань биопсии немедленно помещали в закрытую пробирку Эппендорфа, содержащую 0,5 мл свежеприготовленного раствора 10% мочевины в деионизированной воде, к которому были добавлены две капли 1% фенолового красного в качестве индикатора pH. О положительном результате свидетельствует изменение цвета раствора с оранжевого на розовый в течение первой минуты .

    После считывания результатов URUT ткань биопсии была удалена из раствора мочевины, и были сделаны мазки-отпечатки путем легкого перекатывания ее на чистое предметное стекло с помощью иглы для подкожных инъекций.Мазок оттиска сушили на воздухе и фиксировали в абсолютном спирте. Затем биопсию зафиксировали в 10% формалине и отправили на гистопатологическое исследование.

    Отпечаток мазков окрашивали метиленовым синим по методу Лёффлера, как описано ранее.6 Мазки были прочитаны патологом, который не знал личности пациента, клинического диагноза или результата URUT.

    Материал биопсии обрабатывали в обычном порядке и делали срезы толщиной 3-5 мкм. Срезы окрашивали метиленовым синим Лёффлера6 и кодировали.Их прочитал тот же патолог, который читал мазки отпечатков.

    Мазки-отпечатки и гистологические срезы были тщательно исследованы на наличие H. pylori . Степень серьезности колонизации H. pylori оценивалась как: 0 — бактерии не обнаружены; 1 — видны спорадические бактерии; 2, многие бактерии видны в большинстве микроскопических полей; 3 — скопления бактерий во всех исследованных полях.

    Результаты

    Средний (± SD) возраст пациентов составлял 31 (± 10.2) лет, мужчин — 664 (66%).

    АНТРАЛЬНАЯ БИОПСИЯ

    Обе биопсии дали положительный результат на H. pylori у 858 пациентов. Одна из биопсий антрального отдела была положительной, а другая — отрицательной у девяти пациентов, и обе биопсии были отрицательными на наличие H pylori у 133 пациентов. Таким образом, распространенность H. pylori в антральном отделе желудка составила 86,7%. Мазки отпечатков показали почти идеальную корреляцию с гистологией, и все, кроме одной из биопсий, показывающих присутствие H. pylori , также показали H. pylori на мазках-отпечатках.В одном образце биопсии со степенью 1 H pylori мазок с отпечатком был ложноотрицательным; у этого пациента другой отпечаток, сделанный из другой антральной ткани, показал H pylori . Ни один мазок отпечатка не дал ложноположительного результата.

    Из 1725 биопсий, положительных на H. pylori по гистологическим данным, 1583 (91,8%) дали положительные результаты по URUT. Из 858 пациентов, у которых обе биопсии (всего 1716) были положительными, URUT был положительным в 1576 биоптатах. Он был положительным у семи из девяти пациентов, у которых одна из биопсий была положительной.Все биопсии, которые не показали присутствия H pylori при гистологическом исследовании, оказались отрицательными с помощью URUT. Чувствительность, специфичность, положительная и отрицательная прогностическая ценность и общая диагностическая точность URUT для диагностики инфекции H pylori в антральном отделе желудка составляли 92%, 100%, 100%, 66% и 93% соответственно. Из 142 ложноотрицательных URUT у 140 была степень 1 H pylori , а у оставшихся двух — 2 степень H. pylori . Ни одна из биопсий с колонизацией 3 степени не дала ложноотрицательных результатов URUT.

    БИОПСИИ ИЗ ЖЕЛУДОЧНОГО ТЕЛА

    Обе биопсии дали положительный результат на H. pylori у 470 пациентов. Одна из двух биопсий была положительной у 63, а обе биопсии были отрицательными у остальных 467 пациентов. Распространенность H. pylori в теле составила 53,3%. Мазки отпечатков дали ложноотрицательные результаты в двух биоптатах от двух пациентов. Обе биопсии показали наличие 1 степени H. pylori . Ни один из мазков отпечатков не дал ложноположительных результатов.

    Из 1003 биопсий, показывающих H. pylori , 832 (83%) были положительными по результатам исследования URUT.URUT был положительным у 776 (82,5%) из 940 биопсий от 470 пациентов, у которых обе биопсии показали H. pylori и 56 (44%) из 126 биопсий у 63 пациентов, у которых только одна из двух биопсий показала . Х. пилори . Ни одна из биопсий, которые не показали H pylori на гистологическом исследовании, не дали положительных результатов URUT. Чувствительность, специфичность, положительная и отрицательная прогностическая ценность и общая диагностическая точность URUT для диагностики инфекции H pylori в теле желудка составляли 83, 100%, 100%, 85% и 91% соответственно.Из 171 ложноотрицательного URUT 168 имели степень 1 H pylori , а остальные три — 2 степень H. pylori . Ни одна из биопсий с колонизацией 3 степени не дала ложноотрицательных результатов URUT.

    Обсуждение

    Для сравнения тестов на основе биопсии в большинстве исследований использовались разные наборы биопсий желудка для сравнения различных тестов. В более раннем исследовании, сравнивающем тест CLO, мазки отпечатка и гистологию, мы также использовали разные наборы биопсий для теста CLO и разные наборы для отпечатка и гистологии.7 В другом недавнем исследовании были использованы разные наборы биопсий желудка для сравнения локально сделанного RUT с гистологией.5 Это могло привести к ошибочным результатам, поскольку хорошо известно, что распределение H pylori носит неоднородный характер. 10 Чтобы избежать этой путаницы, мы спланировали настоящее исследование таким образом, чтобы тот же образец биопсии был изучен URUT, цитологией отпечатка и гистологией, что дало идеальное сравнение.

    Результаты этого исследования показывают, что URUT является полезным тестом для обнаружения H pylori с высокой чувствительностью и 100% специфичностью, особенно в отношении присутствия H pylori в антральном отделе желудка.Эти наблюдения аналогичны наблюдениям первоначальных исследователей, 3 и отмеченным в другом недавнем исследовании, в котором использовалась слегка измененная версия теста.5 Чувствительность теста улучшилась бы еще больше, если бы мы читали URUT в течение более длительного времени, но это также могли привести к ложноположительным результатам. Более того, дизайн нашего исследования (изготовление отпечатков того же образца биопсии) не позволял нам считывать результаты URUT в течение более длительного времени. Преимущество одноминутного URUT заключается в том, что результат доступен еще до того, как пациент покинет эндоскопический кабинет.Таким образом, клиницист может спланировать соответствующую терапию практически сразу, и пациенту не придется еще раз посетить больницу для прохождения лечения.

    Хотя это исследование не оценивалось, хорошо известно, что уреазный тест заметно снизил чувствительность при обнаружении присутствия H pylori у пациентов, получающих препараты, направленные на уничтожение микроорганизма.5 В более раннем исследовании мы отметили чувствительность CLO-тест должен быть только 9% у пациентов, получавших лечение против H pylori .7

    Распространенность H pylori в нашей группе пациентов, перенесших эндоскопию верхних отделов желудочно-кишечного тракта, кажется очень высокой. Однако это тенденция в развивающихся странах, где инфекция выявляется почти у всех людей к среднему возрасту.11 В более ранних исследованиях мы наблюдали распространенность 78% в группе из 90 здоровых добровольцев, принадлежащих к среднему классу12. у пациентов, перенесших эндоскопию верхних отделов желудочно-кишечного тракта, составила 90% .7

    В этом исследовании было отмечено, что цитология отпечатка почти так же чувствительна и специфична, как и гистология, при обнаружении H pylori .Это похоже на более ранние наблюдения, сделанные несколькими работниками, в том числе и нами. 13-14 Ранее мы показали, что при тщательной подготовке мазков-отпечатков качество биопсийного материала не ухудшается, и его можно использовать для гистологии.

    Учитывая высокую чувствительность, низкую стоимость и простоту URUT, мы рекомендуем его в ситуациях, когда пациенту необходимо пройти эндоскопию и необходимо исследовать статус H pylori . Поскольку биопсии уже получены, исследование мазков с отпечатков ткани приведет к дальнейшему улучшению чувствительности URUT.Результат мазков-отпечатков также может быть получен довольно быстро.6 Гистологическое исследование биопсийного материала, однако, также может быть выполнено, если требуется понимание других гистологических деталей.

    Медицинский юбилей

    Жорж Фернан Видаль, 9 марта 1862 г.

    Жорж Фернан Видаль (1862–1929) родился в Алжире, в семье врача, который был медицинским инспектором в армии. Он изучал медицину в Париже, стал профессором патологии и, в конце концов, был назначен на кафедру клинической медицины в Hôpital Cochin; это обучение сделало его надежным связующим звеном между прикроватной тумбочкой и клинической лабораторией.Его статья о серодиагностике брюшного тифа появилась в Lancet , 1896 г .; 2 : 1371–2. Он также внес особый вклад в лечение гемолитической анемии, пароксизмальной холодовой гемоглобинурии, анафилаксии и крапивницы.

    Leave a Reply

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    2021 © Все права защищены.