Повышение аст изолированное: «Почему в крови АСТ повышен, что это значит?» – Яндекс.Кью
Содержание
Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) общая
Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) общая – внутриклеточный гликолитический фермент, который участвует в обратимом превращении лактата в пируват и содержится в большинстве тканей организма.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования.
Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение за 30 минут до исследования.
Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) – цинксодержащий внутриклеточный фермент, который катализирует окисление молочной кислоты в пируват и содержится практически во всех клетках организма. ЛДГ наиболее активна в скелетной мускулатуре, сердечной мышце, почках, печени и эритроцитах.
Существует пять разных форм (изоферментов) ЛДГ, которые отличаются молекулярной структурой и расположением в организме. От того, какая из пяти преобладает, зависит основной способ окисления глюкозы – аэробный (до CO2 и H2O) или анаэробный (до молочной кислоты). Подобное различие обусловлено разной степенью родства того или иного изофермента и пировиноградной кислоты. Для миокарда и мозговой ткани основной является ЛДГ-1, для эритроцитов, тромбоцитов, почечной ткани — ЛДГ-1 и ЛДГ-2. В легких, селезенке, щитовидной и поджелудочной железах, надпочечниках, лимфоцитах преобладает ЛДГ-3. ЛДГ-4 находится во всех тканях с ЛДГ-3, а также в гранулоцитах, плаценте и мужских половых клетках, в которых содержится и ЛДГ-5.
Изоферментная активность в скелетных мышцах (в порядке убывания): ЛДГ-5, ЛДГ-4, ЛДГ-3. Для печени наиболее характерен изофермент ЛДГ-5, меньшая активность у ЛДГ-4. В норме в сыворотке крови все фракции фермента определяются с небольшой активностью в составе суммарного показателя – общей ЛДГ. Их активность в крови распределяется следующим образом: ЛДГ-2 > ЛДГ-1 > ЛДГ-3 > ЛДГ-4 > ЛДГ-5.
При заболеваниях, сопровождающихся повреждением тканей и разрушением клеток, активность ЛДГ в крови повышается. В связи с этим она является важным маркером тканевой деструкции. Несмотря на то что увеличение активности фермента не указывает на какую-то определенную болезнь, его определение в комплексе с другими лабораторными анализами помогает в диагностике инфаркта легкого, мышечной дистрофии и гемолитической анемии. Повышенная активность ЛДГ может выявляться у новорождённых, беременных и после интенсивных физических нагрузок.
Ранее совместные анализы на ЛДГ, аспартатаминотрансферазу и креатинкиназу широко использовались в диагностике инфаркта миокарда. Сейчас для этой цели определяют уровень тропонина как более специфического маркера повреждения сердечной мышцы. Но исследование активности ЛДГ остается вспомогательным анализом при дифференциальной диагностике болевого синдрома в грудной клетке. У больных стенокардией активность фермента не изменяется, но при инфаркте миокарда начинает возрастать через 8-10 часов с максимумом в первые 24-48 часов после сердечного приступа и возвращается к норме через 10-12 дней. Повышение ЛДГ при нормальной активности АСТ через 1-2 дня после боли в грудной клетке указывает на инфаркт легкого.
При дифференциальной диагностике миопатий данный анализ помогает уточнить патофизиологические механизмы заболевания. Так, при нарушении мышечной функции, связанной с нейрогенными заболеваниями, ЛДГ не повышается, но при повреждении мышц из-за эндокринных и метаболических патологий активность ЛДГ увеличивается.
Активность ЛДГ в крови может возрастать вследствие многих злокачественных новообразований, при эффективном лечении она снижается, что иногда применяют для динамического наблюдения за онкологическими больными.
Для чего используется исследование?
Для диагностики острого или хронического повреждения тканей при комплексном обследовании пациента.
Для дифференциальной диагностики заболеваний при резкой боли в грудной клетке (инфаркт миокарда, стенокардия, инфаркт легкого).
Чтобы выявлять заболевания, сопровождающиеся гемолизом эритроцитов.
В целях наблюдения за течением онкологических заболеваний при терапии.
Для исследования патологий печени и почек.
Для диагностики поражений мышечной ткани.
Когда назначается исследование?
При подозрении на острое или хроническое повреждение ткани и клеток в организме.
При комплексном профилактическом обследовании пациента.
При наблюдении за течением некоторых хронических заболеваний (мышечной дистрофии, гемолитических анемий, заболеваний печени, почек), онкологической патологии.
Что означают результаты?
Референсные значения
Возраст, пол
Референсные значения
1 — 3 года
3 — 6 лет
6 — 12 лет
12 — 17 лет
> 17 лет
женский
135 — 214 Ед/л
мужской
135 — 225 Ед/л
Причины повышения активности лактатдегидрогеназы общей:
ЛДГ (L-лактат-НАД-оксидоредуктаза, КФ 1.1.1.27) – цинксодержащий фермент, обратимо катализирует окисление лактата в пируват. ЛДГ является тетрамером, содержит субьединицы М и Н. В цитоплазме клеток и сыворотке крови ЛДГ представлена 5 изоферментами, обозначаемыми в соответствии с их подвижностью к аноду в электрическом поле: ЛДГ-1 (НННН), ЛДГ-2 (НННМ), ЛДГ-3 (ННММ), ЛДГ-4 (НМММ) и ЛДГ-5 (ММММ). ЛДГ представлена практически во всех органах и тканях организма, при этом распределение изоферментов ЛДГ органоспецифично. ЛДГ-4 и ЛДГ-5 преобладают в печени и скелетных мышцах, тканях с преимущественно анаэробным метаболизмом, ЛДГ-1 и ЛДГ-2 – эритроцитах, лейкоцитах, миокарде, почках – тканях с аэробным типом метаболизм, наиболее высокое содержание ЛДГ-3 – в легких, лимфоидной ткани, тромбоцитах и опухолях.
ИМ обычно сопровождается 3–4 кратным повышением общей активности ЛДГ; подобное повышение ЛДГ отмечается при миокардите, нарушениях ритма сердца. При ИМ повышение общей активности ЛДГ в сыворотке крови отмечается спустя 8–10 ч, и достигает максимальной активности через 48–72 ч. Выброс миокардиальных изоферментов ЛДГ при ИМ в кровь ведет к увеличению активности ЛДГ-1и ЛДГ-2. Активность ЛДГ-1 увеличивается через 12–24 ч после возникновения острого ИМ, совпадая во времени с максимумом активности КК-МВ и опережая возникновение пика общей активности ЛДГ (24 ч).
Выявление спектра изоферментов, характерного для ИМ, возможно при застое крови в печени и почках вследствие сердечной недостаточности, при ишемическом поражении некоторых органов в силу резкого снижения сердечного выброса. В настоящее время определение активности ЛДГ и ее изоферментов не входит в число обязательных тестов для диагностики ИМ вследствие недостаточной специфичности.
К повышению активности ЛДГ приводят миопатии, заболевания печени, мегалобластные и гемолитические анемии, острые и хронические заболевания почек. Увеличение активности ЛДГ отмечается при повреждении печени, но это повышение не так велико, как повышение активности АЛТ и АСТ. Особенное повышение (в 10 раз выше верхней границы нормы) отмечают при токсическом гепатите, сопровождающемся желтухой.
Физиологическое повышение уровня ЛДГ в крови происходит во время беременности, у новорожденных, а также после интенсивной физической нагрузки.
Показания к исследованию:
Болезни печени;
выявление поражений миокарда;
миопатии;
гемолитические анемии;
злокачественные новообразования;
легочная эмболия (дифференциальная диагностика с инфарктом миокарда).
Особенности взятия и хранения образцов. Сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин) без признаков гемолиза. Хранение образцов не более 2-х суток при 18–25°C. Хранение проб при 4–8°C или замораживание снижает активность фермента.
Методы исследования.Метод, основанный на рекомендациях IFCC. ЛДГ катализирует окисление лактата в пируват при щелочном рН, одновременно НАД+ восстанавливается до НАДН. Скорость возрастания оптической плотности реакционной смеси при 340 нм, отражающая увеличение концентрации НАДН, пропорциональна активности фермента в образце.
Повышенные значения:
Поражение миокарда;
поражение печени;
повреждение, воспалительные и дегенеративные заболевания скелетных мышц;
эмболия и инфаркт легких;
заболевания почек;
заболевания и состояния, сопровождающиеся распадом клеток;
Пониженные значения: Генетические нарушения или полное отсутствие субъединиц ЛДГ.
Изоферменты ЛДГ-1 и ЛДГ-2
ЛДГ-1 и ЛДГ-2 — изоферменты с высоким содержанием Н-субъединиц, могут использовать в качестве субстрата α -кетобутират и катализировать его превращение в α -гидроксобутират; изофермент ЛДГ-1, обладающий большим сродством к названному субстрату, получил название α -гидроксибутиратдегидрогеназа (α -ГБДГ). Параллельное исследование активности общей ЛДГ и α -ГБДГ может быть использовано для дифференциальной диагностики заболеваний печени и сердца: при поражении сердечной мышцы увеличение активности фермента обусловлено возрастанием ЛДГ-1 (α -ГБДГ), при поражении паренхимы печени – изоформой ЛДГ-5, активность ЛДГ-1 не увеличивается.
Показания к исследованию:
Выявление поражений миокарда;
гемолитические анемии;
злокачественные новообразования;
легочная эмболия (дифференциальная диагностика с инфарктом миокарда).
Особенности взятия и хранения образцов. Сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин) без признаков гемолиза. Хранение образцов не более 2 суток при 18–25°C. Хранение проб при 4–8°C или замораживание снижает активность фермента.
Методы исследования. ЛДГ катализирует превращение α -кетобутирата в α -гидроксибутират, при этом происходит окисление β -НАДН2 до β -НАД. Скорость уменьшения оптической плотности при длине волны 340 нм пропорциональна активности фермента в образце.
Повышенные значения:
Поражение миокарда;
заболевания и состояния, сопровождающиеся распадом клеток крови;
острые заболевания почек.
Пониженные значения:
Генетические нарушения или полное отсутствие субъединиц ЛДГ.
Изолированное повышение АСТ — Вопрос педиатру
Если вы не нашли нужной информации среди ответов на этот вопрос, или же ваша проблема немного отличается от представленной, попробуйте задать дополнительный вопрос врачу на этой же странице, если он будет по теме основного вопроса. Вы также можете задать новый вопрос, и через некоторое время наши врачи на него ответят. Это бесплатно. Также можете поискать нужную информацию в похожих вопросах на этой странице или через страницу поиска по сайту. Мы будем очень благодарны, если Вы порекомендуете нас своим друзьям в социальных сетях.
Медпортал 03online.com осуществляет медконсультации в режиме переписки с врачами на сайте. Здесь вы получаете ответы от реальных практикующих специалистов в своей области. В настоящий момент на сайте можно получить консультацию по 71 направлению: специалиста COVID-19, аллерголога, анестезиолога-реаниматолога, венеролога, гастроэнтеролога, гематолога, генетика, гепатолога, гериатра, гинеколога, гинеколога-эндокринолога, гомеопата, дерматолога, детского гастроэнтеролога, детского гинеколога, детского дерматолога, детского инфекциониста, детского кардиолога, детского лора, детского невролога, детского нефролога, детского офтальмолога, детского психолога, детского пульмонолога, детского ревматолога, детского уролога, детского хирурга, детского эндокринолога, дефектолога, диетолога, иммунолога, инфекциониста, кардиолога, клинического психолога, косметолога, логопеда, лора, маммолога, медицинского юриста, нарколога, невропатолога, нейрохирурга, неонатолога, нефролога, нутрициолога, онколога, онкоуролога, ортопеда-травматолога, офтальмолога, паразитолога, педиатра, пластического хирурга, проктолога, психиатра, психолога, пульмонолога, ревматолога, рентгенолога, репродуктолога, сексолога-андролога, стоматолога, трихолога, уролога, фармацевта, физиотерапевта, фитотерапевта, флеболога, фтизиатра, хирурга, эндокринолога.
Часто у пациентов выявляется повышенный уровень антител к антистрептолизину О, которые выделяются бета‑гемолитическим стрептококком группы А. Однако без соответствующей клинической картины повышение уровня этих антител не может служить диагностическим признаком, и отправлять таких пациентов на консультацию к ревматологу нецелесообразно.
Второй блок обследований, которые необходимо проводить пациентам с подозрением на ревматологические заболевания, – анализы на выявление дополнительных маркеров воспаления: ферритин, кальпротектин, прокальцитонин и D‑димер. И основное внимание традиционно уделяется ферритину.
Ферритин отражает уровень депонирования железа и одновременно служит показателем острой фазы воспаления. Как уже говорилось выше, его повышение более чем в 10 раз в сочетании с лейкоцитозом – характерный признак болезни Стилла. Он также может свидетельствовать о риске синдрома активации макрофагов при болезни Стилла и СКВ. Следует иметь в виду, что повышение ферритина является неспецифическим маркером воспаления и может иметь место не только при СЗСТ (например, инфекционные заболевания, в т. ч. COVID‑19).
Повышение прокальцитонина (>0,5 нг/мл) также должно заставить задуматься об инфекционном процессе.
Рост креатининфосфокиназы в сочетании с небольшим повышением трансаминаз и лактатдегидрогиназы (АЛТ и АСТ) говорит о распаде продольно‑поперечных мышечных волокон, что встречается, например, при воспалительных миопатиях, дерматополимиозитах.
Синдром холестаза, который может наблюдаться у ревматологических больных, включает повышение щелочной фосфатазы и гамма‑глутамилтрансферазы, холестерина и прямого билирубина. Он может возникать на фоне приема ГКС, а также в рамках аутоиммунных заболеваний печени.
Д‑димер – это в первую очередь показатель тромбоэмболических событий, но также и неспецифический маркер, который может повышаться на фоне инфекционных заболеваний, у лиц старшей возрастной группы, при онкологических и воспалительных процессах.
Мочевой синдром – комплекс различных изменений в составе мочевого осадка, служит очень важным показателем для диагностики ревматологических болезней. Однако он всегда требует исключения бактериальной инфекции и оценки степени вовлечения почек в воспалительный процесс.
С этой целью необходимо проанализировать два синдрома – нефротический и нефритический. Нефротический синдром, который характеризуется протеинурией >3,5 г/сут, гравитационно распределительными отеками, может выявляться у пациентов с СКВ и васкулитами, а также при амилоидозе и паранеопластических нефритах. При этом у пациентов не наблюдается эритроцитурия. А вот микро- и макрогематурия появляются при нефритическом синдроме, который также сопровождается протеинурией и развитием острой почечной недостаточности. Этот симптомокомплекс характерен при волчаночном нефрите, ANCA‑ассоциированных нефритах и васкулитах.
— Рекомендуется проведение клинического анализа крови [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится всем пациентам для выявления активности болезни. Может выявляться умеренный лейкоцитоз, редко гипохромная анемия, повышение СОЭ. Одно-, двух или трехростковая цитопения может быть также нежелательным проявлением лечения НПВП и/или метотрексатом, и/или генно-инженерными биологическими препаратами (ГИБП).
— Рекомендуется проведение коагулограммы [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится всем пациентам при наличии проявлений васкулита, нарушений периферического кровообращения (см. выше)
— Рекомендуется проведение анализа мочи клинического, микроскопического исследования осадка мочи, определения белка в моче [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится всем пациентам. Как правило, при ЮАС патологические изменения не выявляются. Наличие протеинурии может свидетельствовать о развитии амилоидоза почек. Наличие изолированной микрогематурии может быть нежелательным проявлением лечения НПВП и/или метотрексатом, а также проявлением IgA-нефропатии.
— Рекомендуется проведение биохимического анализа крови [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится всем пациентам. Определяется концентрации общего белка, альбумина, общего билирубина (прямая и непрямая фракции), креатинина, мочевины, мочевой кислоты, АЛТ, АСТ, ЛДГ, КФК, электролитов, железа, ионизированного кальция, триглицеридов, ферритина. Повышение креатинина и/или мочевины, и/или АЛТ, АСТ может быть нежелательным проявлением лечения НПВП и/или метотрексатом, и/или ГИБП.
— Рекомендуется проведение прокальцитонинового теста [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится пациентам, получающим иммунодепрессанты и/или ГК, и/или ГИБП, при клинических проявлениях острого воспалительного ответа (сепсиса). Прокальцитониновый тест будет положительным при присоединении инфекции и развитии острого воспалительного ответа.
— Рекомендуется проведение иммунологического анализа крови [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится всем пациентам. Определяются концентрации Ig классов G, A, M, СРБ, РФ, антистрептолизина O, АНФ, антител к двуспиральной ДНК, комплемента (Изменения см. выше).
Положительные АНФ и антитела к двуспиральной ДНК у пациентов, получающих ингибиторы фактора некроза опухолей , свидетельствуют о нежелательном явлении — волчаночно-подобной реакции.- Рекомендуется определение иммунофенотипа лимфоцитов [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится всем пациентам, в том числе получающим ГИБП и/или ГК и/или иммунодепрессанты, часто болеющим вирусными, гнойными бактериальными инфекциями, в том числе оппортунистическими, для исключения иммунодефицитного состояния.
— Рекомендуется проведение кожной пробы с туберкулином (реакция Манту), Диаскинтеста [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится всем пациентам 1 раз в 6 месяцев для исключения инфицированности микобактериями туберкулеза перед назначением противоревматической терапии или ее коррекцией, а также пациентам, получающим ГК и/или иммунодепрессанты, и/или ГИБП, для исключения туберкулезной инфицированности.
— Рекомендуется определение антител классов A, M, G в крови к Salmonella enterica, Yersinia enterocolitica, Y. pseudotuberculosis, Chlamydia trachomatis, C. psittaci, C. pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится всем пациентам, перед назначением/коррекцией противоревматической терапии. Пациентам, получающим ГК и/или иммунодепрессанты, и/или ГИБП, а также пациентам с данными о перенесенной в течение последнего месяца кишечной инфекции, и/или клиническими проявлениями кишечной, и/или хламидийной, и/или микоплазменой инфекции. Обследование на хламидийную и микоплазменную инфекцию проводится также пациентам с очаговой и/или интерстициальной пневмонией.
— Рекомендуется проведение молекулярно-биологического исследования (ПЦР) крови, слюны, мочи на вирусы герпетической группы [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится всем пациентам перед назначением/коррекцией противоревматической терапии, пациентам, получающим ГК и/или иммунодепрессанты, и/или ГИБП, пациентам с клиническими проявлениями герпетической инфекции, пациентам с интерстициальной пневмонией.
— Рекомендуется проведение бактериологического исследования слизи с миндалин и с задней стенки глотки на аэробные и факультативно анаэробные микроорганизмы [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится всем пациентам, перед назначением/коррекцией противоревматической терапии, пациентам, получающим ГК и/или иммунодепрессанты, и/или ГИБП, а также пациентам, часто болеющим ОРИ, бронхитами, пневмониями, патологией ЛОР-органов, перед назначением противоревматической терапии.
— Рекомендуется проведение определения антител класса M, G к пневмоцистам [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится пациентам с очаговой и/или интерстициальной пневмонией, получающим ГК и/или иммунодепрессанты, и/или ГИБП.
— Рекомендуется проведение микроскопического исследования смывов из зева/мокроты на пневмоцисты [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится пациентам с очаговой и/или интерстициальной пневмонией, получающим ГК и/или иммунодепрессанты, и/или ГИБП.
— Рекомендуется проведение микробиологического исследования крови и мочи [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится всем пациентам, с клиническими и лабораторными признаками острого воспалительного ответа (сепсиса).
— Рекомендуется проведение исследования кала на кальпротектин [2, 3, 4, 5].
Уровень достоверности доказательств D
Комментарии: проводится пациентам, у которых появились клинические проявления воспалительных заболеваний кишечника.
Макроаспартаземия как причина изолированного повышения уровня аспартатаминотрансферазы
Abstract
Цели
Повышение уровня аспартатаминотрансферазы (AST) в сыворотке обычно обнаруживается при заболеваниях печени, сердца, мышц и гемолитических нарушениях красных кровяных телец (RBC). Повышение его активности подозревают при патологических состояниях этих органов. Однако экземпляры без каких-либо из этих условий существуют редко.
Методы
Экспериментальные образцы были получены из гемолизированных эритроцитов нормального человека, пациента с гепатитом и макроаспартатемической женской сыворотки.Их изучали с помощью эксклюзионной хроматографии, электрофореза AST и изменения активности AST за счет полиэтиленгликоля (PEG) и различных условий хранения.
Результаты
1) Характер активности AST при эксклюзионной хроматографии аналогичен гемолизированным эритроцитам и сыворотке гепатита, но отличается изолированным повышением AST.
2) Активность AST при добавлении ПЭГ и различных подтипов антииммуноглобулинов к разным сывороткам несколько снижается при гепатите, но заметно снижается при применении ПЭГ и анти-IgG при макроаспартатемии.
3) Паттерны активности AST при электрофорезе представляют собой одну полосу — цитозомальную AST (cAST) — от гемолизированных эритроцитов и две полосы — митохондриальную AST (mAST) и cAST — от гепатита, главным из которых является cAST и второстепенный mAST. Несмотря на то, что есть две полосы, основная из них атипична, а второстепенная соответствует mAST при макроаспартатемии.
4) Изменения активности AST при хранении в зависимости от времени и температуры показывают стабильность в течение 4 недель при комнатной температуре и в охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии в макроаспартатазе.
Заключение
Исходя из вышеизложенного, макроаспартатемия представляет собой комплекс фермент-иммуноглобулин, состоящий из cAST с IgG. MacroAST может быть более стабильным, чем обычный AST при физических условиях.
Фермент аспартатаминотрансферазы (AST) присутствует в широком спектре тканей, включая сердце, скелетные мышцы, почки, красные кровяные тельца (RBC). , помимо печени 1) .Таким образом, предполагается, что повышение уровня АСТ связано с повреждением вышеупомянутых органов. Даже при их повреждении они обычно связаны с другими аномалиями ферментов или метаболитов, такими как повышение креатинкиназы (CK) и лактатдегидрогеназы (LDH) при инфаркте миокарда. Изолированное и стойкое повышение уровня АСТ иногда может быть обнаружено при запущенной гепатоцеллюлярной карциноме, алкогольной болезни печени и при некоторых лекарственных эффектах при заболеваниях печени 2–4) , но эти случаи очень редки без вышеупомянутых состояний 5–10) .Мы испытали один случай вышеуказанного состояния и решили изучить его.
История болезни
24-летняя женщина посетила наше отделение для оценки функции печени из-за изолированного повышения уровня АСТ. Это началось двумя годами ранее. Никаких других симптомов у нее не было. Она отрицала употребление алкоголя, курение и лекарственные препараты. Ее семейный анамнез не был конкретным, за исключением того, что ее отец страдал лабильной гипертонией. Результаты физикального осмотра не примечательны.
Результаты всех лабораторных исследований были нормальными, за исключением необъяснимого повышения AST на 196 МЕ (норма 16-40). Результаты рентгенологических исследований, таких как обзорная рентгенограмма грудной клетки, сканирование печени, ультразвуковое исследование и компьютерная томография брюшной полости, были без особенностей. Она была расценена как необычный «синдром гипераспартемии» и рекомендована для интервальной проверки функции печени.
5 месяцев спустя она повторно посетила наше отделение для точной оценки функции печени.Результаты всех лабораторных исследований были нормальными, за исключением изолированного повышения АСТ на уровне 223 МЕ (норма 16-40). Ее физическое состояние было следующим; высота 160 см, 53 кг, 100/60 мм рт. Результаты других функциональных тестов печени, включая билирубин, альбумин, протромбиновое время, щелочную фосфатазу (ЩФ) и АЛТ, были нормальными. При повторном тестировании и лабораторных результатах АСТ составлял 217 МЕ, АЛТ 13 МЕ, ЩФ 39 МЕ, ЛДГ 71 МЕ (N: 53–137), креатинин 0,9 мг / дл, азот мочевины крови (АМК) 11 мг / дл, КК 59 МЕ (N: 60– 103) и общий билирубин 0.6 мг / дл. Все серологические маркеры вируса гепатита B, C и E были отрицательными. Антитела IgG к вирусу гепатита А были положительными, а IgM — отрицательными. Общий белок, сывороточное железо, трансферин, общий анализ крови, электролиты, глюкоза и функции щитовидной железы были в норме. Серологическое исследование фактора ревматоидного артрита (РА), клеток LE, ANA, AMA и антител к гладкой мускулатуре было отрицательным. Специальные исследования подтвердили, что у пациента был комплекс АСТ с иммуноглобулином.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1.Субъекты и материалы
Образцы нашего исследования были взяты у пациента с острым вирусным гепатитом (АВГ; из-за HBV), вышеупомянутой женщиной и очищенным цитозольным ферментом из гемолизированных эритроцитов. Цитозольный AST был очищен из эритроцитов нормального человека, как описано ранее Rej et al., 11) .
2. Анализ AST
Рутинный метод и наш единственный случай определения повышенного уровня AST были выполнены как химическая часть клинической патологии на Spectrum EPX (Abbott R , IL).
3. Эксклюзионная хроматография
Эксклюзивная хроматография была сделана для каждого 1 мл образца сыворотки, включая наш изолированный случай повышения AST, пациента с AVH и вышеупомянутый очищенный cAST. Используемая колонка представляла собой колонку размером 1,5 на 45 см с Sephacryl G-300 (Pharmacia, NJ). Элюирование выполняли 0,01 М трис-буфером и 0,15 М NaCl буфером (pH 7,2) при скорости потока 15 мл / ч. Колоночные фракции анализировали непосредственно для анализа AST, как описано в предыдущем абзаце.
4.Электрофорез
Универсальные агарозные пленки и буфер были приобретены у Ciba-Corning Medical (LA). В каждую лунку наносили образцы (1,2 мл) сыворотки пациента и субъекта с АВГ и очищенную CAST. Эти образцы подвергали электрофорезу в течение 35 минут при 100 В в универсальном барбитуратном буфере (pH 8,6).
5. Иммуноглобулиновый электрофорез
Когда электрофорез был завершен, планшеты укладывали и заполняли античеловеческим иммуноглобулиновым комплексом, G, A, M, GMA, каппа и лямбда между промежутками.Затем их инкубировали 24 часа при комнатной температуре и окрашивали.
6. Электрофорез AST
Окрашивание AST проводили, как описано ранее Sakakibara et al. 12) . Чтобы кратко описать это, после завершения электрофореза на планшеты положили пленку из 1 мл смеси реагентов AST [10 мкмоль альфа-кетоглутарата, 200 мкмоль L-цистеинсульфината, 0,1 мг м-PMS, 0,8 мг MTT, 2 мкмоль EDTA, 20 мг декстрана и 100 мкмоль иммидазольного буфера (pH 7,5)] в течение 20 минут инкубации при 37 ° C.Затем чашки с агарозой погружали в 10% раствор уксусной кислоты на 5 минут, промывали водой и затем сушили в печи при 65 ° C. Активность AST визуализировалась по появлению пурпурных полос.
7. Осаждение полиэтиленгликолем (ПЭГ) и идентификация класса антител
В качестве методов скринингового исследования комплекса фермент-иммуноглобулин и определения подкласса его антитела мы использовали методы с небольшой модификацией, ранее описанные Litin et al. 5 ) .Кратко описанный в нашем методе, ПЭГ 6000 был приобретен у химической компании Sigma. Мы добавили 100 мкл 24% раствора ПЭГ 6000 к 100 мкл сыворотки от каждого пациента. Контрольный образец получали заменой 100 мкл фосфатного буферного раствора (PBS) на PEG. Смеси инкубировали при 37 ° C в течение 10 минут и центрифугировали при 3000 × g при комнатной температуре в течение 20 минут. Активность AST определяли по их супернатантам, как описано ранее. Идентификацию иммуноглобулина, связанного с AST, проводили путем отборной преципитации кроличьей антисывороткой против человека.К 20 мкл сыворотки субъекта добавляли 180 мкл антисыворотки и затем встряхивали смесь, осторожно встряхивали и инкубировали при комнатной температуре в течение 60 минут. После инкубации смесь центрифугировали при 3000 × g в течение 15 минут. Активность AST определяли по их супернатантам, как описано ранее.
8. Изменения активности AST в зависимости от температуры и времени хранения
Каждый образец сыворотки был разделен на 3 части в соответствии с интервалом и хранился в замороженном состоянии (-20 ° C), состоянии охлаждения (4 ° C) и комнатной температуре.Затем анализировали активность AST, как описано ранее.
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Эксклюзивная хроматография
Характер активности AST явно отличался от изолированного субъекта с гипераспартатемией и очищенного пациента с CAST и AVH. Паттерны активности AST были подобны очищенному ферменту из гемолизированных эритроцитов и пациента с АВГ, но различались у изолированного субъекта с гипераспартатемией. Активность AST была обнаружена в более ранней фракции изолированного субъекта с гипераспартатозом, а не в двух других группах ().Это означает, что это макромолекула с более высокой молекулярной массой.
Гель-эксклюзионная хроматография (на сефакриле G-300) образцов сыворотки от пациента с острым вирусным гепатитом (○) 25-летнего мужчины, вызванного вирусом гепатита B и изолированного женского пола с повышенным уровнем AST (●), описанных в этом отчете и гемолизированных РБК (◉). Активность AST определяли в каждой из фракций.
2. Электрофорез
1) Электрофорез AST
Была одна полоса из гемолизированных эритроцитов, которая показывает активность AST (cAST) чистого цитосомного типа, но было две полосы у пациента с AVH и изолированного случая повышения AST.В последней группе было две полосы, но картина у каждой различалась. В сыворотке крови пациента с АВГ было 2 полосы, из которых толстая полоса соответствовала активности cAST, а тонкая — митохондриальному (mAST) типу. Это открытие означает, что основная часть циркулирующей активности AST у пациента с АВГ относится к цитосомному типу. В случае макроаспартатемии мы можем найти тонкую полосу, соответствующую mAST без активности cAST, но вместо типа cAST мы можем найти аномальную толстую активность AST, которая находится рядом с щелью начала, что похоже на характерный образец тех упомянутая ранее макроаспартатемия ().Это открытие предполагает, что этот случай гипераспартатемии вызван митохондриальным типом и аномальным типом активности AST. Аномальный тип активности AST может быть цитосомным типом AST из-за других эффектов.
Диаграммы электрофореза образцов [дорожка RH; из очищенной аспартатаминотрансферазы (c-AST) из гемолизированных красных кровяных телец (RBC), дорожка AVII; сыворотка от пациента с острым вирусным гепатитом, вызванным живым гепатитом В, дорожка М; сыворотка от пациента с макроаспартатемией] после окрашивания АСТ по методу Сакакибары.На полосе RH имеется одна полоса (очищенный цитоплазматический AST из RBC; 250 МЕ). В дорожке AVH есть две полосы, одна из которых является основной полосой, соответствующей c-AST в полосе RH, а другая — второстепенной полосой, предполагаемой митохондриальным-AST (m-AST). В переулке M есть две полосы, одна из которых является второстепенной полосой, предлагаемой для m-AST в стране AVH, а другая — основной полосой, которая является новой. См. Текст для дальнейшего обсуждения.
2) Иммуноглобулиновый электрофорез
Паттерн отклонений у пациента с АВГ отсутствует (не показан), и имеется только одно отклонение в иммуноглобулине G ().
Паттерны иммуноглобулинового электрофореза пациентов с макроаспартатемией. Существует атипичная преципитированная дуга общего антииммуноглобулина (анти-Tig), анти-иммуноглобулина G (анти-IgG) и анти-иммуноглобулинового комплекса GMA (анти-IgGMA). Но в антииммуноглобулинах А и М. нет атипичной преципитированной дуги. См. Текст для дальнейшего обсуждения.
3. Осаждение полиэтиленгликолем (ПЭГ) и идентификация класса антител
ПЭГ, как известно, преципитирует комплексы антитело-антиген и был предложен в качестве быстрого скринингового теста на макроаспартатемию.По этой причине эксперименты по преципитации с ПЭГ были предприняты у пациента с АВГ и пациента с макроаспартатемией. Уровни активности AST для каждого супернатанта были разными. Активность AST заметно снизилась с 223 МЕ до 23 МЕ у пациента с макроаспартатемией, но немного снизилась с 430 МЕ до 378 МЕ у пациента с АВГ. Он также хорошо известен как быстрый скрининговый тест для идентификации класса антител путем добавления к классу антииммуноглобулинов при макроаспартатемии. Идентификацию класса антител проводили путем отборной преципитации кроличьими античеловеческими антисывороточными Ig G, A и M.Были незначительные изменения активности AST у пациента с АВГ, но заметные изменения у пациента с макроаспартатемией, особенно в отношении иммуноглобулина G, с 223 МЕ до 24 МЕ (). Даже если и произошло какое-либо изменение его активности, оно не было значительным, как антииммуноглобулин G. Таким образом, изменение активности AST могло быть специфическим для Ig G у нашего пациента с макроаспартатемией.
Таблица 1.
Изменения активности AST (IU) из супернатантов при осаждении путем добавления полиэтиленгликоля (PEG) и кроличьих анти-человеческих антител к IgG, A и M
случай макро-AST
AVH пациент
исходная сыворотка
223
430
H 2 O (пустой)
230
434
9013 908
анти-IgG
28
388
анти-IgA
198
396
анти-IgM
188
346
9182 4 9018.Изменения активности AST в зависимости от температуры и времени
Чтобы оценить характеристики макро-AST из-за любых переменных условий, активность AST анализировали в различных условиях. Мы не смогли провести анализ из-за дефицита сыворотки. Не было изменений активности AST за счет очищенного фермента из гемолизированных эритроцитов в течение 10 дней, сыворотки от гепатита в течение 14 дней, у пациента с макроаспартатемией в течение 6 недель при комнатной температуре и охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии ().
Таблица 2.
Изменения активности AST (МЕ) в зависимости от времени и температуры при различных условиях хранения
день
0
3
7
10
14
21
№
430
434
428
416
412
NS
NS
NS
NS
−20 ° C
9013 9013 4 418
NS
NS
NS
NS
RT
217
220
212
208
207
210
208
167
9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 4
224
214
220
212
216
213
181
−20 ° C
218
218
215
208
212
RH
RT
562
546
538
552
NS
NS
NS
NS
NS
9018 фермент, обнаруженный в самых разных тканях, включая сердце, скелетные мышцы, почки, эритроциты и мозг, а также печень.Предполагается, что это возвышение связано с повреждением вышеупомянутых органов. Повреждение обычно связано с другими аномалиями ферментов или метаболитов, такими как повышение уровня билирубина, щелочной фосфатазы (ЩФ), аланинтрансаминазы (АЛТ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) при повреждениях печени из-за их этиологии 9–10) . Даже если наблюдается повышение уровня АСТ без повышения уровня АЛТ при запущенной гепатоцеллюлярной карциноме, алкогольных заболеваниях печени и нарушениях функции печени с лекарственным действием, они обычно связаны с другими аномалиями ферментов или метаболитов, и их аномалии могут быть обнаружены с другими диагностическими стулами, такими как анамнез и радиологические методы.Однако редко встречаются экземпляры без этих патологических состояний.
Обычный метод определения размера фермента при сохранении его активности — это эксклюзионная хроматография. В этом методе более крупные белки исключаются из пор смолы и, следовательно, появляются в более ранних фракциях, чем более мелкие белки. Можно даже приблизительно определить размер молекул с помощью эксклюзионной хроматографии. В этом зарегистрированном случае изолированное повышение уровня АСТ заставило врачей заподозрить заболевание печени, несмотря на несвязанные данные в анамнезе, а также при физикальных и лабораторных обследованиях.Образцы биопсии печени и скелетных мышц не были получены, чтобы исключить болезненное состояние в нашем случае под микроскопом, и были крайне маловероятными из-за нормальных показателей CK, LDH, ALT и креатинина. Наши хроматографические результаты легко показали, что активность AST очищенного фермента из эритроцитов и пациентов с гепатитом идентична, но отличается от изолированного случая повышения AST. Он также появляется в более ранней фракции в изолированном случае повышения AST. В дополнение к этим результатам и быстрому скрининговому тесту с помощью преципитации ПЭГ, наш случай может быть диагностирован как макроаспартатемия, состоящая из ферментно-иммуноглобулинового комплекса 8) .
В сыворотке крови циркулируют два изофермента AST: один цитоплазматический, а другой митохондриальный 13) по своему происхождению. Изоферменты можно легко разделить электрофоретическими или иммунохимическими методами. Даже митохондриальный изофермент является основной частью при некоторых тяжелых повреждениях тканей 14) , обычно это циркулирующая в сыворотке активность AST, которая возникает из цитоплазматического изофермента. В большинстве отчетов о макро-AST они упоминали, что это комплекс фермент-иммуноглобулин, особенно из-за Ig G или, в редких случаях, Ig G, связанного с IgA, но не упоминали, какие виды изоферментов типа AST комбинируются с иммунобулином, за исключением одного 5,8,10,15). PEG хорошо известен как преципитат комплексов антитело-антиген и был предложен в качестве быстрого скринингового теста на макроаспартатемию. 5,9) . Итак, в нашем случае это может быть комплекс АСТ-иммуноглобулин. В нашем случае комплекс макро-AST может быть изоферментом иммуноглобулин-цитоплазматический AST, поскольку обычно циркулирующий изофермент AST — это cAST 13–4) . Также в нашем электрофорезе AST активность AST не наблюдалась как цитоплазматический тип, а наблюдалась только аномальный тип AST и митохондриальный тип.В одном сообщении об иммуно-комплексном AST, полученном биопсийным материалом из печени и скелетных мышц 9) , электрофотограмма была аналогична нашему исследованию. Изоферменты AST из этих тканей были нормальными. Поскольку активность AST в циркулирующей сыворотке является основной фракцией цитоплазматического типа, предполагается, что нормальный цитоплазматический изофермент AST связывается с иммуноглобулином только после выхода в кровоток 9, 14–5) . Это доказательство было позже подтверждено Стасией и др. С моноклональным антителом 10) .
Тип иммуноглобулина, связанного с комплексом макро-AST, может быть легко идентифицирован с помощью выбранной преципитации с помощью PEG и антисывороточных Ig G, A и M в качестве быстрого скринингового теста, как упоминалось ранее Litin et al. 5) . Но при использовании этого метода активность AST была незначительно снижена из-за неспецифического связывания иммуноглобулина. В нашем случае макро-AST активность AST была заметно снижена, особенно в отношении иммуноглобулина G. Хотя она была немного изменена у пациента с гепатитом и еще больше снизилась в отношении анти-иммуноглобулина A и M, она не была значимой, как анти-иммуноглобулин G. .Также было обнаружено аномальное обнаружение IgG при электрофорезе иммуноглобулина. Итак, изменение активности AST может быть специфическим для Ig G у нашего пациента с макроаспартатемией.
Недавний обзор сывороточного AST указал на двусмысленные и противоречивые сообщения об эффектах его хранения 16) . Как правило, активность AST в сыворотке или плазме была стабильной в течение 2 недель хранения при 4 ° C, 4 недель при –20 ° C и в замороженном состоянии in vitro активность лифофилизированного очищенного AST может поддерживаться в течение 1 года с минимальной потерей активности 17– 8) .В нашем случае макроаспартатемии не было изменений активности AST в течение 4 недель при комнатной температуре и охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии. Это первый отчет о влиянии активности AST на его хранение в различных условиях. Хотя мы не можем подтвердить, что ферментативная активность макро-AST может поддерживаться дольше, чем нормальная AST, эти данные могут предполагать, что ферментная активность макро-AST может быть более стабильной, чем нормальная AST.
Причины повышенной активности ферментов в сыворотке долгое время не предполагаются.Механизм этой повышенной активности лучше всего понят для макроамилазы. Амилаза (период полураспада: около 2 часов), белок с низкой молекулярной массой (MW; -55 000 Да), легко фильтруется и выводится почками, тогда как макроамилаза имеет высокую молекулу и не фильтруется почками 19–21) . Но аспартатаминотрансфераза (EC 2.6.1.1–100 000 Да) больше, чем амилаза. Кроме того, клиренс AST четко не определен, но его фракционная константа скорости катаболизма из плазмы составляет 0,088 ± 0,016 часа -1 (период полувыведения: около 23 часов.) 22) . Обычно молекулярная масса иммунно-ферментного комплекса, определяемая гель-фильтрацией и ультрацентрифугированием, соответствует соотношению два к одному между ферментом и антителом. Кроме того, антитело (особенно IgG; -180 000Da) имеет более крупную молекулу и распознается ретикулоэндотелиальной системой (RES) 21, 23-5) . Было высказано предположение, что связывание антител с ферментом сыворотки препятствует механизму клиренса RES. Как упоминалось в приведенных выше причинах, комплекс макро-AST может очищаться с помощью RES, поэтому его активность может быть выше в сыворотке.
Было описано несколько ферментов, образующих комплекс с иммуноглобулином, и эта группа ферментных нарушений, связанных с иммуноглобулином, была названа «расстройствами ICE» 26) . Эти состояния, по-видимому, вызывают неспецифический диспротеинемический ответ иммунной системы человека. До сих пор известными ферментами в иммунокомплексе являются амилаза, CK, LDH, ALP, ALT, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа, кислая фосфатаза, липаза и AST 20,23,25,27–31) . Некоторые соответствующие клинические состояния и их ферментативная активность, связанная с их активностью болезни, сосуществовали с этими ферментными расстройствами, хотя любая связь между болезненными состояниями и расстройствами ICE является чисто умозрительной 24) .В случае комплекса макро-AST известно, что состояния, связанные с комплексом макро-AST, включают сердечно-сосудистые, желудочно-кишечные, эндокринологические, аутоиммунные и инфекционные заболевания 30–1) . В нашем случае мы не можем обнаружить какое-либо сопутствующее заболевание.
Макроаспартаземия как причина изолированного повышения уровня аспартатаминотрансферазы
Реферат
Цели
Повышение сывороточной аспартатаминотрансферазы (АСТ) обычно обнаруживается в печеночных, сердечных, мышечных заболеваниях и гемолитических нарушениях красных кровяных телец (эритроцитах). .Повышение его активности подозревают при патологических состояниях этих органов. Однако экземпляры без каких-либо из этих условий существуют редко.
Методы
Экспериментальные образцы были получены из гемолизированных эритроцитов нормального человека, пациента с гепатитом и макроаспартатемической женской сыворотки. Их изучали с помощью эксклюзионной хроматографии, электрофореза AST и изменения активности AST за счет полиэтиленгликоля (PEG) и различных условий хранения.
Результаты
1) Характер активности AST при эксклюзионной хроматографии аналогичен гемолизированным эритроцитам и сыворотке гепатита, но отличается изолированным повышением AST.
2) Активность AST при добавлении ПЭГ и различных подтипов антииммуноглобулинов к разным сывороткам несколько снижается при гепатите, но заметно снижается при применении ПЭГ и анти-IgG при макроаспартатемии.
3) Паттерны активности AST при электрофорезе представляют собой одну полосу — цитозомальную AST (cAST) — от гемолизированных эритроцитов и две полосы — митохондриальную AST (mAST) и cAST — от гепатита, главным из которых является cAST и второстепенный mAST. Несмотря на то, что есть две полосы, основная из них атипична, а второстепенная соответствует mAST при макроаспартатемии.
4) Изменения активности AST при хранении в зависимости от времени и температуры показывают стабильность в течение 4 недель при комнатной температуре и в охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии в макроаспартатазе.
Заключение
Исходя из вышеизложенного, макроаспартатемия представляет собой комплекс фермент-иммуноглобулин, состоящий из cAST с IgG. MacroAST может быть более стабильным, чем обычный AST при физических условиях.
Фермент аспартатаминотрансферазы (AST) присутствует в широком спектре тканей, включая сердце, скелетные мышцы, почки, красные кровяные тельца (RBC). , помимо печени 1) .Таким образом, предполагается, что повышение уровня АСТ связано с повреждением вышеупомянутых органов. Даже при их повреждении они обычно связаны с другими аномалиями ферментов или метаболитов, такими как повышение креатинкиназы (CK) и лактатдегидрогеназы (LDH) при инфаркте миокарда. Изолированное и стойкое повышение уровня АСТ иногда может быть обнаружено при запущенной гепатоцеллюлярной карциноме, алкогольной болезни печени и при некоторых лекарственных эффектах при заболеваниях печени 2–4) , но эти случаи очень редки без вышеупомянутых состояний 5–10) .Мы испытали один случай вышеуказанного состояния и решили изучить его.
История болезни
24-летняя женщина посетила наше отделение для оценки функции печени из-за изолированного повышения уровня АСТ. Это началось двумя годами ранее. Никаких других симптомов у нее не было. Она отрицала употребление алкоголя, курение и лекарственные препараты. Ее семейный анамнез не был конкретным, за исключением того, что ее отец страдал лабильной гипертонией. Результаты физикального осмотра не примечательны.
Результаты всех лабораторных исследований были нормальными, за исключением необъяснимого повышения AST на 196 МЕ (норма 16-40). Результаты рентгенологических исследований, таких как обзорная рентгенограмма грудной клетки, сканирование печени, ультразвуковое исследование и компьютерная томография брюшной полости, были без особенностей. Она была расценена как необычный «синдром гипераспартемии» и рекомендована для интервальной проверки функции печени.
5 месяцев спустя она повторно посетила наше отделение для точной оценки функции печени.Результаты всех лабораторных исследований были нормальными, за исключением изолированного повышения АСТ на уровне 223 МЕ (норма 16-40). Ее физическое состояние было следующим; высота 160 см, 53 кг, 100/60 мм рт. Результаты других функциональных тестов печени, включая билирубин, альбумин, протромбиновое время, щелочную фосфатазу (ЩФ) и АЛТ, были нормальными. При повторном тестировании и лабораторных результатах АСТ составлял 217 МЕ, АЛТ 13 МЕ, ЩФ 39 МЕ, ЛДГ 71 МЕ (N: 53–137), креатинин 0,9 мг / дл, азот мочевины крови (АМК) 11 мг / дл, КК 59 МЕ (N: 60– 103) и общий билирубин 0.6 мг / дл. Все серологические маркеры вируса гепатита B, C и E были отрицательными. Антитела IgG к вирусу гепатита А были положительными, а IgM — отрицательными. Общий белок, сывороточное железо, трансферин, общий анализ крови, электролиты, глюкоза и функции щитовидной железы были в норме. Серологическое исследование фактора ревматоидного артрита (РА), клеток LE, ANA, AMA и антител к гладкой мускулатуре было отрицательным. Специальные исследования подтвердили, что у пациента был комплекс АСТ с иммуноглобулином.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1.Субъекты и материалы
Образцы нашего исследования были взяты у пациента с острым вирусным гепатитом (АВГ; из-за HBV), вышеупомянутой женщиной и очищенным цитозольным ферментом из гемолизированных эритроцитов. Цитозольный AST был очищен из эритроцитов нормального человека, как описано ранее Rej et al., 11) .
2. Анализ AST
Рутинный метод и наш единственный случай определения повышенного уровня AST были выполнены как химическая часть клинической патологии на Spectrum EPX (Abbott R , IL).
3. Эксклюзионная хроматография
Эксклюзивная хроматография была сделана для каждого 1 мл образца сыворотки, включая наш изолированный случай повышения AST, пациента с AVH и вышеупомянутый очищенный cAST. Используемая колонка представляла собой колонку размером 1,5 на 45 см с Sephacryl G-300 (Pharmacia, NJ). Элюирование выполняли 0,01 М трис-буфером и 0,15 М NaCl буфером (pH 7,2) при скорости потока 15 мл / ч. Колоночные фракции анализировали непосредственно для анализа AST, как описано в предыдущем абзаце.
4.Электрофорез
Универсальные агарозные пленки и буфер были приобретены у Ciba-Corning Medical (LA). В каждую лунку наносили образцы (1,2 мл) сыворотки пациента и субъекта с АВГ и очищенную CAST. Эти образцы подвергали электрофорезу в течение 35 минут при 100 В в универсальном барбитуратном буфере (pH 8,6).
5. Иммуноглобулиновый электрофорез
Когда электрофорез был завершен, планшеты укладывали и заполняли античеловеческим иммуноглобулиновым комплексом, G, A, M, GMA, каппа и лямбда между промежутками.Затем их инкубировали 24 часа при комнатной температуре и окрашивали.
6. Электрофорез AST
Окрашивание AST проводили, как описано ранее Sakakibara et al. 12) . Чтобы кратко описать это, после завершения электрофореза на планшеты положили пленку из 1 мл смеси реагентов AST [10 мкмоль альфа-кетоглутарата, 200 мкмоль L-цистеинсульфината, 0,1 мг м-PMS, 0,8 мг MTT, 2 мкмоль EDTA, 20 мг декстрана и 100 мкмоль иммидазольного буфера (pH 7,5)] в течение 20 минут инкубации при 37 ° C.Затем чашки с агарозой погружали в 10% раствор уксусной кислоты на 5 минут, промывали водой и затем сушили в печи при 65 ° C. Активность AST визуализировалась по появлению пурпурных полос.
7. Осаждение полиэтиленгликолем (ПЭГ) и идентификация класса антител
В качестве методов скринингового исследования комплекса фермент-иммуноглобулин и определения подкласса его антитела мы использовали методы с небольшой модификацией, ранее описанные Litin et al. 5 ) .Кратко описанный в нашем методе, ПЭГ 6000 был приобретен у химической компании Sigma. Мы добавили 100 мкл 24% раствора ПЭГ 6000 к 100 мкл сыворотки от каждого пациента. Контрольный образец получали заменой 100 мкл фосфатного буферного раствора (PBS) на PEG. Смеси инкубировали при 37 ° C в течение 10 минут и центрифугировали при 3000 × g при комнатной температуре в течение 20 минут. Активность AST определяли по их супернатантам, как описано ранее. Идентификацию иммуноглобулина, связанного с AST, проводили путем отборной преципитации кроличьей антисывороткой против человека.К 20 мкл сыворотки субъекта добавляли 180 мкл антисыворотки и затем встряхивали смесь, осторожно встряхивали и инкубировали при комнатной температуре в течение 60 минут. После инкубации смесь центрифугировали при 3000 × g в течение 15 минут. Активность AST определяли по их супернатантам, как описано ранее.
8. Изменения активности AST в зависимости от температуры и времени хранения
Каждый образец сыворотки был разделен на 3 части в соответствии с интервалом и хранился в замороженном состоянии (-20 ° C), состоянии охлаждения (4 ° C) и комнатной температуре.Затем анализировали активность AST, как описано ранее.
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Эксклюзивная хроматография
Характер активности AST явно отличался от изолированного субъекта с гипераспартатемией и очищенного пациента с CAST и AVH. Паттерны активности AST были подобны очищенному ферменту из гемолизированных эритроцитов и пациента с АВГ, но различались у изолированного субъекта с гипераспартатемией. Активность AST была обнаружена в более ранней фракции изолированного субъекта с гипераспартатозом, а не в двух других группах ().Это означает, что это макромолекула с более высокой молекулярной массой.
Гель-эксклюзионная хроматография (на сефакриле G-300) образцов сыворотки от пациента с острым вирусным гепатитом (○) 25-летнего мужчины, вызванного вирусом гепатита B и изолированного женского пола с повышенным уровнем AST (●), описанных в этом отчете и гемолизированных РБК (◉). Активность AST определяли в каждой из фракций.
2. Электрофорез
1) Электрофорез AST
Была одна полоса из гемолизированных эритроцитов, которая показывает активность AST (cAST) чистого цитосомного типа, но было две полосы у пациента с AVH и изолированного случая повышения AST.В последней группе было две полосы, но картина у каждой различалась. В сыворотке крови пациента с АВГ было 2 полосы, из которых толстая полоса соответствовала активности cAST, а тонкая — митохондриальному (mAST) типу. Это открытие означает, что основная часть циркулирующей активности AST у пациента с АВГ относится к цитосомному типу. В случае макроаспартатемии мы можем найти тонкую полосу, соответствующую mAST без активности cAST, но вместо типа cAST мы можем найти аномальную толстую активность AST, которая находится рядом с щелью начала, что похоже на характерный образец тех упомянутая ранее макроаспартатемия ().Это открытие предполагает, что этот случай гипераспартатемии вызван митохондриальным типом и аномальным типом активности AST. Аномальный тип активности AST может быть цитосомным типом AST из-за других эффектов.
Диаграммы электрофореза образцов [дорожка RH; из очищенной аспартатаминотрансферазы (c-AST) из гемолизированных красных кровяных телец (RBC), дорожка AVII; сыворотка от пациента с острым вирусным гепатитом, вызванным живым гепатитом В, дорожка М; сыворотка от пациента с макроаспартатемией] после окрашивания АСТ по методу Сакакибары.На полосе RH имеется одна полоса (очищенный цитоплазматический AST из RBC; 250 МЕ). В дорожке AVH есть две полосы, одна из которых является основной полосой, соответствующей c-AST в полосе RH, а другая — второстепенной полосой, предполагаемой митохондриальным-AST (m-AST). В переулке M есть две полосы, одна из которых является второстепенной полосой, предлагаемой для m-AST в стране AVH, а другая — основной полосой, которая является новой. См. Текст для дальнейшего обсуждения.
2) Иммуноглобулиновый электрофорез
Паттерн отклонений у пациента с АВГ отсутствует (не показан), и имеется только одно отклонение в иммуноглобулине G ().
Паттерны иммуноглобулинового электрофореза пациентов с макроаспартатемией. Существует атипичная преципитированная дуга общего антииммуноглобулина (анти-Tig), анти-иммуноглобулина G (анти-IgG) и анти-иммуноглобулинового комплекса GMA (анти-IgGMA). Но в антииммуноглобулинах А и М. нет атипичной преципитированной дуги. См. Текст для дальнейшего обсуждения.
3. Осаждение полиэтиленгликолем (ПЭГ) и идентификация класса антител
ПЭГ, как известно, преципитирует комплексы антитело-антиген и был предложен в качестве быстрого скринингового теста на макроаспартатемию.По этой причине эксперименты по преципитации с ПЭГ были предприняты у пациента с АВГ и пациента с макроаспартатемией. Уровни активности AST для каждого супернатанта были разными. Активность AST заметно снизилась с 223 МЕ до 23 МЕ у пациента с макроаспартатемией, но немного снизилась с 430 МЕ до 378 МЕ у пациента с АВГ. Он также хорошо известен как быстрый скрининговый тест для идентификации класса антител путем добавления к классу антииммуноглобулинов при макроаспартатемии. Идентификацию класса антител проводили путем отборной преципитации кроличьими античеловеческими антисывороточными Ig G, A и M.Были незначительные изменения активности AST у пациента с АВГ, но заметные изменения у пациента с макроаспартатемией, особенно в отношении иммуноглобулина G, с 223 МЕ до 24 МЕ (). Даже если и произошло какое-либо изменение его активности, оно не было значительным, как антииммуноглобулин G. Таким образом, изменение активности AST могло быть специфическим для Ig G у нашего пациента с макроаспартатемией.
Таблица 1.
Изменения активности AST (IU) из супернатантов при осаждении путем добавления полиэтиленгликоля (PEG) и кроличьих анти-человеческих антител к IgG, A и M
случай макро-AST
AVH пациент
исходная сыворотка
223
430
H 2 O (пустой)
230
434
9013 908
анти-IgG
28
388
анти-IgA
198
396
анти-IgM
188
346
9182 4 9018.Изменения активности AST в зависимости от температуры и времени
Чтобы оценить характеристики макро-AST из-за любых переменных условий, активность AST анализировали в различных условиях. Мы не смогли провести анализ из-за дефицита сыворотки. Не было изменений активности AST за счет очищенного фермента из гемолизированных эритроцитов в течение 10 дней, сыворотки от гепатита в течение 14 дней, у пациента с макроаспартатемией в течение 6 недель при комнатной температуре и охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии ().
Таблица 2.
Изменения активности AST (МЕ) в зависимости от времени и температуры при различных условиях хранения
день
0
3
7
10
14
21
№
430
434
428
416
412
NS
NS
NS
NS
−20 ° C
9013 9013 4 418
NS
NS
NS
NS
RT
217
220
212
208
207
210
208
167
9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 4
224
214
220
212
216
213
181
−20 ° C
218
218
215
208
212
RH
RT
562
546
538
552
NS
NS
NS
NS
NS
9018 фермент, обнаруженный в самых разных тканях, включая сердце, скелетные мышцы, почки, эритроциты и мозг, а также печень.Предполагается, что это возвышение связано с повреждением вышеупомянутых органов. Повреждение обычно связано с другими аномалиями ферментов или метаболитов, такими как повышение уровня билирубина, щелочной фосфатазы (ЩФ), аланинтрансаминазы (АЛТ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) при повреждениях печени из-за их этиологии 9–10) . Даже если наблюдается повышение уровня АСТ без повышения уровня АЛТ при запущенной гепатоцеллюлярной карциноме, алкогольных заболеваниях печени и нарушениях функции печени с лекарственным действием, они обычно связаны с другими аномалиями ферментов или метаболитов, и их аномалии могут быть обнаружены с другими диагностическими стулами, такими как анамнез и радиологические методы.Однако редко встречаются экземпляры без этих патологических состояний.
Обычный метод определения размера фермента при сохранении его активности — это эксклюзионная хроматография. В этом методе более крупные белки исключаются из пор смолы и, следовательно, появляются в более ранних фракциях, чем более мелкие белки. Можно даже приблизительно определить размер молекул с помощью эксклюзионной хроматографии. В этом зарегистрированном случае изолированное повышение уровня АСТ заставило врачей заподозрить заболевание печени, несмотря на несвязанные данные в анамнезе, а также при физикальных и лабораторных обследованиях.Образцы биопсии печени и скелетных мышц не были получены, чтобы исключить болезненное состояние в нашем случае под микроскопом, и были крайне маловероятными из-за нормальных показателей CK, LDH, ALT и креатинина. Наши хроматографические результаты легко показали, что активность AST очищенного фермента из эритроцитов и пациентов с гепатитом идентична, но отличается от изолированного случая повышения AST. Он также появляется в более ранней фракции в изолированном случае повышения AST. В дополнение к этим результатам и быстрому скрининговому тесту с помощью преципитации ПЭГ, наш случай может быть диагностирован как макроаспартатемия, состоящая из ферментно-иммуноглобулинового комплекса 8) .
В сыворотке крови циркулируют два изофермента AST: один цитоплазматический, а другой митохондриальный 13) по своему происхождению. Изоферменты можно легко разделить электрофоретическими или иммунохимическими методами. Даже митохондриальный изофермент является основной частью при некоторых тяжелых повреждениях тканей 14) , обычно это циркулирующая в сыворотке активность AST, которая возникает из цитоплазматического изофермента. В большинстве отчетов о макро-AST они упоминали, что это комплекс фермент-иммуноглобулин, особенно из-за Ig G или, в редких случаях, Ig G, связанного с IgA, но не упоминали, какие виды изоферментов типа AST комбинируются с иммунобулином, за исключением одного 5,8,10,15). PEG хорошо известен как преципитат комплексов антитело-антиген и был предложен в качестве быстрого скринингового теста на макроаспартатемию. 5,9) . Итак, в нашем случае это может быть комплекс АСТ-иммуноглобулин. В нашем случае комплекс макро-AST может быть изоферментом иммуноглобулин-цитоплазматический AST, поскольку обычно циркулирующий изофермент AST — это cAST 13–4) . Также в нашем электрофорезе AST активность AST не наблюдалась как цитоплазматический тип, а наблюдалась только аномальный тип AST и митохондриальный тип.В одном сообщении об иммуно-комплексном AST, полученном биопсийным материалом из печени и скелетных мышц 9) , электрофотограмма была аналогична нашему исследованию. Изоферменты AST из этих тканей были нормальными. Поскольку активность AST в циркулирующей сыворотке является основной фракцией цитоплазматического типа, предполагается, что нормальный цитоплазматический изофермент AST связывается с иммуноглобулином только после выхода в кровоток 9, 14–5) . Это доказательство было позже подтверждено Стасией и др. С моноклональным антителом 10) .
Тип иммуноглобулина, связанного с комплексом макро-AST, может быть легко идентифицирован с помощью выбранной преципитации с помощью PEG и антисывороточных Ig G, A и M в качестве быстрого скринингового теста, как упоминалось ранее Litin et al. 5) . Но при использовании этого метода активность AST была незначительно снижена из-за неспецифического связывания иммуноглобулина. В нашем случае макро-AST активность AST была заметно снижена, особенно в отношении иммуноглобулина G. Хотя она была немного изменена у пациента с гепатитом и еще больше снизилась в отношении анти-иммуноглобулина A и M, она не была значимой, как анти-иммуноглобулин G. .Также было обнаружено аномальное обнаружение IgG при электрофорезе иммуноглобулина. Итак, изменение активности AST может быть специфическим для Ig G у нашего пациента с макроаспартатемией.
Недавний обзор сывороточного AST указал на двусмысленные и противоречивые сообщения об эффектах его хранения 16) . Как правило, активность AST в сыворотке или плазме была стабильной в течение 2 недель хранения при 4 ° C, 4 недель при –20 ° C и в замороженном состоянии in vitro активность лифофилизированного очищенного AST может поддерживаться в течение 1 года с минимальной потерей активности 17– 8) .В нашем случае макроаспартатемии не было изменений активности AST в течение 4 недель при комнатной температуре и охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии. Это первый отчет о влиянии активности AST на его хранение в различных условиях. Хотя мы не можем подтвердить, что ферментативная активность макро-AST может поддерживаться дольше, чем нормальная AST, эти данные могут предполагать, что ферментная активность макро-AST может быть более стабильной, чем нормальная AST.
Причины повышенной активности ферментов в сыворотке долгое время не предполагаются.Механизм этой повышенной активности лучше всего понят для макроамилазы. Амилаза (период полураспада: около 2 часов), белок с низкой молекулярной массой (MW; -55 000 Да), легко фильтруется и выводится почками, тогда как макроамилаза имеет высокую молекулу и не фильтруется почками 19–21) . Но аспартатаминотрансфераза (EC 2.6.1.1–100 000 Да) больше, чем амилаза. Кроме того, клиренс AST четко не определен, но его фракционная константа скорости катаболизма из плазмы составляет 0,088 ± 0,016 часа -1 (период полувыведения: около 23 часов.) 22) . Обычно молекулярная масса иммунно-ферментного комплекса, определяемая гель-фильтрацией и ультрацентрифугированием, соответствует соотношению два к одному между ферментом и антителом. Кроме того, антитело (особенно IgG; -180 000Da) имеет более крупную молекулу и распознается ретикулоэндотелиальной системой (RES) 21, 23-5) . Было высказано предположение, что связывание антител с ферментом сыворотки препятствует механизму клиренса RES. Как упоминалось в приведенных выше причинах, комплекс макро-AST может очищаться с помощью RES, поэтому его активность может быть выше в сыворотке.
Было описано несколько ферментов, образующих комплекс с иммуноглобулином, и эта группа ферментных нарушений, связанных с иммуноглобулином, была названа «расстройствами ICE» 26) . Эти состояния, по-видимому, вызывают неспецифический диспротеинемический ответ иммунной системы человека. До сих пор известными ферментами в иммунокомплексе являются амилаза, CK, LDH, ALP, ALT, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа, кислая фосфатаза, липаза и AST 20,23,25,27–31) . Некоторые соответствующие клинические состояния и их ферментативная активность, связанная с их активностью болезни, сосуществовали с этими ферментными расстройствами, хотя любая связь между болезненными состояниями и расстройствами ICE является чисто умозрительной 24) .В случае комплекса макро-AST известно, что состояния, связанные с комплексом макро-AST, включают сердечно-сосудистые, желудочно-кишечные, эндокринологические, аутоиммунные и инфекционные заболевания 30–1) . В нашем случае мы не можем обнаружить какое-либо сопутствующее заболевание.
Макроаспартаземия как причина изолированного повышения уровня аспартатаминотрансферазы
Реферат
Цели
Повышение сывороточной аспартатаминотрансферазы (АСТ) обычно обнаруживается в печеночных, сердечных, мышечных заболеваниях и гемолитических нарушениях красных кровяных телец (эритроцитах). .Повышение его активности подозревают при патологических состояниях этих органов. Однако экземпляры без каких-либо из этих условий существуют редко.
Методы
Экспериментальные образцы были получены из гемолизированных эритроцитов нормального человека, пациента с гепатитом и макроаспартатемической женской сыворотки. Их изучали с помощью эксклюзионной хроматографии, электрофореза AST и изменения активности AST за счет полиэтиленгликоля (PEG) и различных условий хранения.
Результаты
1) Характер активности AST при эксклюзионной хроматографии аналогичен гемолизированным эритроцитам и сыворотке гепатита, но отличается изолированным повышением AST.
2) Активность AST при добавлении ПЭГ и различных подтипов антииммуноглобулинов к разным сывороткам несколько снижается при гепатите, но заметно снижается при применении ПЭГ и анти-IgG при макроаспартатемии.
3) Паттерны активности AST при электрофорезе представляют собой одну полосу — цитозомальную AST (cAST) — от гемолизированных эритроцитов и две полосы — митохондриальную AST (mAST) и cAST — от гепатита, главным из которых является cAST и второстепенный mAST. Несмотря на то, что есть две полосы, основная из них атипична, а второстепенная соответствует mAST при макроаспартатемии.
4) Изменения активности AST при хранении в зависимости от времени и температуры показывают стабильность в течение 4 недель при комнатной температуре и в охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии в макроаспартатазе.
Заключение
Исходя из вышеизложенного, макроаспартатемия представляет собой комплекс фермент-иммуноглобулин, состоящий из cAST с IgG. MacroAST может быть более стабильным, чем обычный AST при физических условиях.
Фермент аспартатаминотрансферазы (AST) присутствует в широком спектре тканей, включая сердце, скелетные мышцы, почки, красные кровяные тельца (RBC). , помимо печени 1) .Таким образом, предполагается, что повышение уровня АСТ связано с повреждением вышеупомянутых органов. Даже при их повреждении они обычно связаны с другими аномалиями ферментов или метаболитов, такими как повышение креатинкиназы (CK) и лактатдегидрогеназы (LDH) при инфаркте миокарда. Изолированное и стойкое повышение уровня АСТ иногда может быть обнаружено при запущенной гепатоцеллюлярной карциноме, алкогольной болезни печени и при некоторых лекарственных эффектах при заболеваниях печени 2–4) , но эти случаи очень редки без вышеупомянутых состояний 5–10) .Мы испытали один случай вышеуказанного состояния и решили изучить его.
История болезни
24-летняя женщина посетила наше отделение для оценки функции печени из-за изолированного повышения уровня АСТ. Это началось двумя годами ранее. Никаких других симптомов у нее не было. Она отрицала употребление алкоголя, курение и лекарственные препараты. Ее семейный анамнез не был конкретным, за исключением того, что ее отец страдал лабильной гипертонией. Результаты физикального осмотра не примечательны.
Результаты всех лабораторных исследований были нормальными, за исключением необъяснимого повышения AST на 196 МЕ (норма 16-40). Результаты рентгенологических исследований, таких как обзорная рентгенограмма грудной клетки, сканирование печени, ультразвуковое исследование и компьютерная томография брюшной полости, были без особенностей. Она была расценена как необычный «синдром гипераспартемии» и рекомендована для интервальной проверки функции печени.
5 месяцев спустя она повторно посетила наше отделение для точной оценки функции печени.Результаты всех лабораторных исследований были нормальными, за исключением изолированного повышения АСТ на уровне 223 МЕ (норма 16-40). Ее физическое состояние было следующим; высота 160 см, 53 кг, 100/60 мм рт. Результаты других функциональных тестов печени, включая билирубин, альбумин, протромбиновое время, щелочную фосфатазу (ЩФ) и АЛТ, были нормальными. При повторном тестировании и лабораторных результатах АСТ составлял 217 МЕ, АЛТ 13 МЕ, ЩФ 39 МЕ, ЛДГ 71 МЕ (N: 53–137), креатинин 0,9 мг / дл, азот мочевины крови (АМК) 11 мг / дл, КК 59 МЕ (N: 60– 103) и общий билирубин 0.6 мг / дл. Все серологические маркеры вируса гепатита B, C и E были отрицательными. Антитела IgG к вирусу гепатита А были положительными, а IgM — отрицательными. Общий белок, сывороточное железо, трансферин, общий анализ крови, электролиты, глюкоза и функции щитовидной железы были в норме. Серологическое исследование фактора ревматоидного артрита (РА), клеток LE, ANA, AMA и антител к гладкой мускулатуре было отрицательным. Специальные исследования подтвердили, что у пациента был комплекс АСТ с иммуноглобулином.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1.Субъекты и материалы
Образцы нашего исследования были взяты у пациента с острым вирусным гепатитом (АВГ; из-за HBV), вышеупомянутой женщиной и очищенным цитозольным ферментом из гемолизированных эритроцитов. Цитозольный AST был очищен из эритроцитов нормального человека, как описано ранее Rej et al., 11) .
2. Анализ AST
Рутинный метод и наш единственный случай определения повышенного уровня AST были выполнены как химическая часть клинической патологии на Spectrum EPX (Abbott R , IL).
3. Эксклюзионная хроматография
Эксклюзивная хроматография была сделана для каждого 1 мл образца сыворотки, включая наш изолированный случай повышения AST, пациента с AVH и вышеупомянутый очищенный cAST. Используемая колонка представляла собой колонку размером 1,5 на 45 см с Sephacryl G-300 (Pharmacia, NJ). Элюирование выполняли 0,01 М трис-буфером и 0,15 М NaCl буфером (pH 7,2) при скорости потока 15 мл / ч. Колоночные фракции анализировали непосредственно для анализа AST, как описано в предыдущем абзаце.
4.Электрофорез
Универсальные агарозные пленки и буфер были приобретены у Ciba-Corning Medical (LA). В каждую лунку наносили образцы (1,2 мл) сыворотки пациента и субъекта с АВГ и очищенную CAST. Эти образцы подвергали электрофорезу в течение 35 минут при 100 В в универсальном барбитуратном буфере (pH 8,6).
5. Иммуноглобулиновый электрофорез
Когда электрофорез был завершен, планшеты укладывали и заполняли античеловеческим иммуноглобулиновым комплексом, G, A, M, GMA, каппа и лямбда между промежутками.Затем их инкубировали 24 часа при комнатной температуре и окрашивали.
6. Электрофорез AST
Окрашивание AST проводили, как описано ранее Sakakibara et al. 12) . Чтобы кратко описать это, после завершения электрофореза на планшеты положили пленку из 1 мл смеси реагентов AST [10 мкмоль альфа-кетоглутарата, 200 мкмоль L-цистеинсульфината, 0,1 мг м-PMS, 0,8 мг MTT, 2 мкмоль EDTA, 20 мг декстрана и 100 мкмоль иммидазольного буфера (pH 7,5)] в течение 20 минут инкубации при 37 ° C.Затем чашки с агарозой погружали в 10% раствор уксусной кислоты на 5 минут, промывали водой и затем сушили в печи при 65 ° C. Активность AST визуализировалась по появлению пурпурных полос.
7. Осаждение полиэтиленгликолем (ПЭГ) и идентификация класса антител
В качестве методов скринингового исследования комплекса фермент-иммуноглобулин и определения подкласса его антитела мы использовали методы с небольшой модификацией, ранее описанные Litin et al. 5 ) .Кратко описанный в нашем методе, ПЭГ 6000 был приобретен у химической компании Sigma. Мы добавили 100 мкл 24% раствора ПЭГ 6000 к 100 мкл сыворотки от каждого пациента. Контрольный образец получали заменой 100 мкл фосфатного буферного раствора (PBS) на PEG. Смеси инкубировали при 37 ° C в течение 10 минут и центрифугировали при 3000 × g при комнатной температуре в течение 20 минут. Активность AST определяли по их супернатантам, как описано ранее. Идентификацию иммуноглобулина, связанного с AST, проводили путем отборной преципитации кроличьей антисывороткой против человека.К 20 мкл сыворотки субъекта добавляли 180 мкл антисыворотки и затем встряхивали смесь, осторожно встряхивали и инкубировали при комнатной температуре в течение 60 минут. После инкубации смесь центрифугировали при 3000 × g в течение 15 минут. Активность AST определяли по их супернатантам, как описано ранее.
8. Изменения активности AST в зависимости от температуры и времени хранения
Каждый образец сыворотки был разделен на 3 части в соответствии с интервалом и хранился в замороженном состоянии (-20 ° C), состоянии охлаждения (4 ° C) и комнатной температуре.Затем анализировали активность AST, как описано ранее.
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Эксклюзивная хроматография
Характер активности AST явно отличался от изолированного субъекта с гипераспартатемией и очищенного пациента с CAST и AVH. Паттерны активности AST были подобны очищенному ферменту из гемолизированных эритроцитов и пациента с АВГ, но различались у изолированного субъекта с гипераспартатемией. Активность AST была обнаружена в более ранней фракции изолированного субъекта с гипераспартатозом, а не в двух других группах ().Это означает, что это макромолекула с более высокой молекулярной массой.
Гель-эксклюзионная хроматография (на сефакриле G-300) образцов сыворотки от пациента с острым вирусным гепатитом (○) 25-летнего мужчины, вызванного вирусом гепатита B и изолированного женского пола с повышенным уровнем AST (●), описанных в этом отчете и гемолизированных РБК (◉). Активность AST определяли в каждой из фракций.
2. Электрофорез
1) Электрофорез AST
Была одна полоса из гемолизированных эритроцитов, которая показывает активность AST (cAST) чистого цитосомного типа, но было две полосы у пациента с AVH и изолированного случая повышения AST.В последней группе было две полосы, но картина у каждой различалась. В сыворотке крови пациента с АВГ было 2 полосы, из которых толстая полоса соответствовала активности cAST, а тонкая — митохондриальному (mAST) типу. Это открытие означает, что основная часть циркулирующей активности AST у пациента с АВГ относится к цитосомному типу. В случае макроаспартатемии мы можем найти тонкую полосу, соответствующую mAST без активности cAST, но вместо типа cAST мы можем найти аномальную толстую активность AST, которая находится рядом с щелью начала, что похоже на характерный образец тех упомянутая ранее макроаспартатемия ().Это открытие предполагает, что этот случай гипераспартатемии вызван митохондриальным типом и аномальным типом активности AST. Аномальный тип активности AST может быть цитосомным типом AST из-за других эффектов.
Диаграммы электрофореза образцов [дорожка RH; из очищенной аспартатаминотрансферазы (c-AST) из гемолизированных красных кровяных телец (RBC), дорожка AVII; сыворотка от пациента с острым вирусным гепатитом, вызванным живым гепатитом В, дорожка М; сыворотка от пациента с макроаспартатемией] после окрашивания АСТ по методу Сакакибары.На полосе RH имеется одна полоса (очищенный цитоплазматический AST из RBC; 250 МЕ). В дорожке AVH есть две полосы, одна из которых является основной полосой, соответствующей c-AST в полосе RH, а другая — второстепенной полосой, предполагаемой митохондриальным-AST (m-AST). В переулке M есть две полосы, одна из которых является второстепенной полосой, предлагаемой для m-AST в стране AVH, а другая — основной полосой, которая является новой. См. Текст для дальнейшего обсуждения.
2) Иммуноглобулиновый электрофорез
Паттерн отклонений у пациента с АВГ отсутствует (не показан), и имеется только одно отклонение в иммуноглобулине G ().
Паттерны иммуноглобулинового электрофореза пациентов с макроаспартатемией. Существует атипичная преципитированная дуга общего антииммуноглобулина (анти-Tig), анти-иммуноглобулина G (анти-IgG) и анти-иммуноглобулинового комплекса GMA (анти-IgGMA). Но в антииммуноглобулинах А и М. нет атипичной преципитированной дуги. См. Текст для дальнейшего обсуждения.
3. Осаждение полиэтиленгликолем (ПЭГ) и идентификация класса антител
ПЭГ, как известно, преципитирует комплексы антитело-антиген и был предложен в качестве быстрого скринингового теста на макроаспартатемию.По этой причине эксперименты по преципитации с ПЭГ были предприняты у пациента с АВГ и пациента с макроаспартатемией. Уровни активности AST для каждого супернатанта были разными. Активность AST заметно снизилась с 223 МЕ до 23 МЕ у пациента с макроаспартатемией, но немного снизилась с 430 МЕ до 378 МЕ у пациента с АВГ. Он также хорошо известен как быстрый скрининговый тест для идентификации класса антител путем добавления к классу антииммуноглобулинов при макроаспартатемии. Идентификацию класса антител проводили путем отборной преципитации кроличьими античеловеческими антисывороточными Ig G, A и M.Были незначительные изменения активности AST у пациента с АВГ, но заметные изменения у пациента с макроаспартатемией, особенно в отношении иммуноглобулина G, с 223 МЕ до 24 МЕ (). Даже если и произошло какое-либо изменение его активности, оно не было значительным, как антииммуноглобулин G. Таким образом, изменение активности AST могло быть специфическим для Ig G у нашего пациента с макроаспартатемией.
Таблица 1.
Изменения активности AST (IU) из супернатантов при осаждении путем добавления полиэтиленгликоля (PEG) и кроличьих анти-человеческих антител к IgG, A и M
случай макро-AST
AVH пациент
исходная сыворотка
223
430
H 2 O (пустой)
230
434
9013 908
анти-IgG
28
388
анти-IgA
198
396
анти-IgM
188
346
9182 4 9018.Изменения активности AST в зависимости от температуры и времени
Чтобы оценить характеристики макро-AST из-за любых переменных условий, активность AST анализировали в различных условиях. Мы не смогли провести анализ из-за дефицита сыворотки. Не было изменений активности AST за счет очищенного фермента из гемолизированных эритроцитов в течение 10 дней, сыворотки от гепатита в течение 14 дней, у пациента с макроаспартатемией в течение 6 недель при комнатной температуре и охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии ().
Таблица 2.
Изменения активности AST (МЕ) в зависимости от времени и температуры при различных условиях хранения
день
0
3
7
10
14
21
№
430
434
428
416
412
NS
NS
NS
NS
−20 ° C
9013 9013 4 418
NS
NS
NS
NS
RT
217
220
212
208
207
210
208
167
9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 4
224
214
220
212
216
213
181
−20 ° C
218
218
215
208
212
RH
RT
562
546
538
552
NS
NS
NS
NS
NS
9018 фермент, обнаруженный в самых разных тканях, включая сердце, скелетные мышцы, почки, эритроциты и мозг, а также печень.Предполагается, что это возвышение связано с повреждением вышеупомянутых органов. Повреждение обычно связано с другими аномалиями ферментов или метаболитов, такими как повышение уровня билирубина, щелочной фосфатазы (ЩФ), аланинтрансаминазы (АЛТ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) при повреждениях печени из-за их этиологии 9–10) . Даже если наблюдается повышение уровня АСТ без повышения уровня АЛТ при запущенной гепатоцеллюлярной карциноме, алкогольных заболеваниях печени и нарушениях функции печени с лекарственным действием, они обычно связаны с другими аномалиями ферментов или метаболитов, и их аномалии могут быть обнаружены с другими диагностическими стулами, такими как анамнез и радиологические методы.Однако редко встречаются экземпляры без этих патологических состояний.
Обычный метод определения размера фермента при сохранении его активности — это эксклюзионная хроматография. В этом методе более крупные белки исключаются из пор смолы и, следовательно, появляются в более ранних фракциях, чем более мелкие белки. Можно даже приблизительно определить размер молекул с помощью эксклюзионной хроматографии. В этом зарегистрированном случае изолированное повышение уровня АСТ заставило врачей заподозрить заболевание печени, несмотря на несвязанные данные в анамнезе, а также при физикальных и лабораторных обследованиях.Образцы биопсии печени и скелетных мышц не были получены, чтобы исключить болезненное состояние в нашем случае под микроскопом, и были крайне маловероятными из-за нормальных показателей CK, LDH, ALT и креатинина. Наши хроматографические результаты легко показали, что активность AST очищенного фермента из эритроцитов и пациентов с гепатитом идентична, но отличается от изолированного случая повышения AST. Он также появляется в более ранней фракции в изолированном случае повышения AST. В дополнение к этим результатам и быстрому скрининговому тесту с помощью преципитации ПЭГ, наш случай может быть диагностирован как макроаспартатемия, состоящая из ферментно-иммуноглобулинового комплекса 8) .
В сыворотке крови циркулируют два изофермента AST: один цитоплазматический, а другой митохондриальный 13) по своему происхождению. Изоферменты можно легко разделить электрофоретическими или иммунохимическими методами. Даже митохондриальный изофермент является основной частью при некоторых тяжелых повреждениях тканей 14) , обычно это циркулирующая в сыворотке активность AST, которая возникает из цитоплазматического изофермента. В большинстве отчетов о макро-AST они упоминали, что это комплекс фермент-иммуноглобулин, особенно из-за Ig G или, в редких случаях, Ig G, связанного с IgA, но не упоминали, какие виды изоферментов типа AST комбинируются с иммунобулином, за исключением одного 5,8,10,15). PEG хорошо известен как преципитат комплексов антитело-антиген и был предложен в качестве быстрого скринингового теста на макроаспартатемию. 5,9) . Итак, в нашем случае это может быть комплекс АСТ-иммуноглобулин. В нашем случае комплекс макро-AST может быть изоферментом иммуноглобулин-цитоплазматический AST, поскольку обычно циркулирующий изофермент AST — это cAST 13–4) . Также в нашем электрофорезе AST активность AST не наблюдалась как цитоплазматический тип, а наблюдалась только аномальный тип AST и митохондриальный тип.В одном сообщении об иммуно-комплексном AST, полученном биопсийным материалом из печени и скелетных мышц 9) , электрофотограмма была аналогична нашему исследованию. Изоферменты AST из этих тканей были нормальными. Поскольку активность AST в циркулирующей сыворотке является основной фракцией цитоплазматического типа, предполагается, что нормальный цитоплазматический изофермент AST связывается с иммуноглобулином только после выхода в кровоток 9, 14–5) . Это доказательство было позже подтверждено Стасией и др. С моноклональным антителом 10) .
Тип иммуноглобулина, связанного с комплексом макро-AST, может быть легко идентифицирован с помощью выбранной преципитации с помощью PEG и антисывороточных Ig G, A и M в качестве быстрого скринингового теста, как упоминалось ранее Litin et al. 5) . Но при использовании этого метода активность AST была незначительно снижена из-за неспецифического связывания иммуноглобулина. В нашем случае макро-AST активность AST была заметно снижена, особенно в отношении иммуноглобулина G. Хотя она была немного изменена у пациента с гепатитом и еще больше снизилась в отношении анти-иммуноглобулина A и M, она не была значимой, как анти-иммуноглобулин G. .Также было обнаружено аномальное обнаружение IgG при электрофорезе иммуноглобулина. Итак, изменение активности AST может быть специфическим для Ig G у нашего пациента с макроаспартатемией.
Недавний обзор сывороточного AST указал на двусмысленные и противоречивые сообщения об эффектах его хранения 16) . Как правило, активность AST в сыворотке или плазме была стабильной в течение 2 недель хранения при 4 ° C, 4 недель при –20 ° C и в замороженном состоянии in vitro активность лифофилизированного очищенного AST может поддерживаться в течение 1 года с минимальной потерей активности 17– 8) .В нашем случае макроаспартатемии не было изменений активности AST в течение 4 недель при комнатной температуре и охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии. Это первый отчет о влиянии активности AST на его хранение в различных условиях. Хотя мы не можем подтвердить, что ферментативная активность макро-AST может поддерживаться дольше, чем нормальная AST, эти данные могут предполагать, что ферментная активность макро-AST может быть более стабильной, чем нормальная AST.
Причины повышенной активности ферментов в сыворотке долгое время не предполагаются.Механизм этой повышенной активности лучше всего понят для макроамилазы. Амилаза (период полураспада: около 2 часов), белок с низкой молекулярной массой (MW; -55 000 Да), легко фильтруется и выводится почками, тогда как макроамилаза имеет высокую молекулу и не фильтруется почками 19–21) . Но аспартатаминотрансфераза (EC 2.6.1.1–100 000 Да) больше, чем амилаза. Кроме того, клиренс AST четко не определен, но его фракционная константа скорости катаболизма из плазмы составляет 0,088 ± 0,016 часа -1 (период полувыведения: около 23 часов.) 22) . Обычно молекулярная масса иммунно-ферментного комплекса, определяемая гель-фильтрацией и ультрацентрифугированием, соответствует соотношению два к одному между ферментом и антителом. Кроме того, антитело (особенно IgG; -180 000Da) имеет более крупную молекулу и распознается ретикулоэндотелиальной системой (RES) 21, 23-5) . Было высказано предположение, что связывание антител с ферментом сыворотки препятствует механизму клиренса RES. Как упоминалось в приведенных выше причинах, комплекс макро-AST может очищаться с помощью RES, поэтому его активность может быть выше в сыворотке.
Было описано несколько ферментов, образующих комплекс с иммуноглобулином, и эта группа ферментных нарушений, связанных с иммуноглобулином, была названа «расстройствами ICE» 26) . Эти состояния, по-видимому, вызывают неспецифический диспротеинемический ответ иммунной системы человека. До сих пор известными ферментами в иммунокомплексе являются амилаза, CK, LDH, ALP, ALT, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа, кислая фосфатаза, липаза и AST 20,23,25,27–31) . Некоторые соответствующие клинические состояния и их ферментативная активность, связанная с их активностью болезни, сосуществовали с этими ферментными расстройствами, хотя любая связь между болезненными состояниями и расстройствами ICE является чисто умозрительной 24) .В случае комплекса макро-AST известно, что состояния, связанные с комплексом макро-AST, включают сердечно-сосудистые, желудочно-кишечные, эндокринологические, аутоиммунные и инфекционные заболевания 30–1) . В нашем случае мы не можем обнаружить какое-либо сопутствующее заболевание.
Макроаспартаземия как причина изолированного повышения уровня аспартатаминотрансферазы
Реферат
Цели
Повышение сывороточной аспартатаминотрансферазы (АСТ) обычно обнаруживается в печеночных, сердечных, мышечных заболеваниях и гемолитических нарушениях красных кровяных телец (эритроцитах). .Повышение его активности подозревают при патологических состояниях этих органов. Однако экземпляры без каких-либо из этих условий существуют редко.
Методы
Экспериментальные образцы были получены из гемолизированных эритроцитов нормального человека, пациента с гепатитом и макроаспартатемической женской сыворотки. Их изучали с помощью эксклюзионной хроматографии, электрофореза AST и изменения активности AST за счет полиэтиленгликоля (PEG) и различных условий хранения.
Результаты
1) Характер активности AST при эксклюзионной хроматографии аналогичен гемолизированным эритроцитам и сыворотке гепатита, но отличается изолированным повышением AST.
2) Активность AST при добавлении ПЭГ и различных подтипов антииммуноглобулинов к разным сывороткам несколько снижается при гепатите, но заметно снижается при применении ПЭГ и анти-IgG при макроаспартатемии.
3) Паттерны активности AST при электрофорезе представляют собой одну полосу — цитозомальную AST (cAST) — от гемолизированных эритроцитов и две полосы — митохондриальную AST (mAST) и cAST — от гепатита, главным из которых является cAST и второстепенный mAST. Несмотря на то, что есть две полосы, основная из них атипична, а второстепенная соответствует mAST при макроаспартатемии.
4) Изменения активности AST при хранении в зависимости от времени и температуры показывают стабильность в течение 4 недель при комнатной температуре и в охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии в макроаспартатазе.
Заключение
Исходя из вышеизложенного, макроаспартатемия представляет собой комплекс фермент-иммуноглобулин, состоящий из cAST с IgG. MacroAST может быть более стабильным, чем обычный AST при физических условиях.
Фермент аспартатаминотрансферазы (AST) присутствует в широком спектре тканей, включая сердце, скелетные мышцы, почки, красные кровяные тельца (RBC). , помимо печени 1) .Таким образом, предполагается, что повышение уровня АСТ связано с повреждением вышеупомянутых органов. Даже при их повреждении они обычно связаны с другими аномалиями ферментов или метаболитов, такими как повышение креатинкиназы (CK) и лактатдегидрогеназы (LDH) при инфаркте миокарда. Изолированное и стойкое повышение уровня АСТ иногда может быть обнаружено при запущенной гепатоцеллюлярной карциноме, алкогольной болезни печени и при некоторых лекарственных эффектах при заболеваниях печени 2–4) , но эти случаи очень редки без вышеупомянутых состояний 5–10) .Мы испытали один случай вышеуказанного состояния и решили изучить его.
История болезни
24-летняя женщина посетила наше отделение для оценки функции печени из-за изолированного повышения уровня АСТ. Это началось двумя годами ранее. Никаких других симптомов у нее не было. Она отрицала употребление алкоголя, курение и лекарственные препараты. Ее семейный анамнез не был конкретным, за исключением того, что ее отец страдал лабильной гипертонией. Результаты физикального осмотра не примечательны.
Результаты всех лабораторных исследований были нормальными, за исключением необъяснимого повышения AST на 196 МЕ (норма 16-40). Результаты рентгенологических исследований, таких как обзорная рентгенограмма грудной клетки, сканирование печени, ультразвуковое исследование и компьютерная томография брюшной полости, были без особенностей. Она была расценена как необычный «синдром гипераспартемии» и рекомендована для интервальной проверки функции печени.
5 месяцев спустя она повторно посетила наше отделение для точной оценки функции печени.Результаты всех лабораторных исследований были нормальными, за исключением изолированного повышения АСТ на уровне 223 МЕ (норма 16-40). Ее физическое состояние было следующим; высота 160 см, 53 кг, 100/60 мм рт. Результаты других функциональных тестов печени, включая билирубин, альбумин, протромбиновое время, щелочную фосфатазу (ЩФ) и АЛТ, были нормальными. При повторном тестировании и лабораторных результатах АСТ составлял 217 МЕ, АЛТ 13 МЕ, ЩФ 39 МЕ, ЛДГ 71 МЕ (N: 53–137), креатинин 0,9 мг / дл, азот мочевины крови (АМК) 11 мг / дл, КК 59 МЕ (N: 60– 103) и общий билирубин 0.6 мг / дл. Все серологические маркеры вируса гепатита B, C и E были отрицательными. Антитела IgG к вирусу гепатита А были положительными, а IgM — отрицательными. Общий белок, сывороточное железо, трансферин, общий анализ крови, электролиты, глюкоза и функции щитовидной железы были в норме. Серологическое исследование фактора ревматоидного артрита (РА), клеток LE, ANA, AMA и антител к гладкой мускулатуре было отрицательным. Специальные исследования подтвердили, что у пациента был комплекс АСТ с иммуноглобулином.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1.Субъекты и материалы
Образцы нашего исследования были взяты у пациента с острым вирусным гепатитом (АВГ; из-за HBV), вышеупомянутой женщиной и очищенным цитозольным ферментом из гемолизированных эритроцитов. Цитозольный AST был очищен из эритроцитов нормального человека, как описано ранее Rej et al., 11) .
2. Анализ AST
Рутинный метод и наш единственный случай определения повышенного уровня AST были выполнены как химическая часть клинической патологии на Spectrum EPX (Abbott R , IL).
3. Эксклюзионная хроматография
Эксклюзивная хроматография была сделана для каждого 1 мл образца сыворотки, включая наш изолированный случай повышения AST, пациента с AVH и вышеупомянутый очищенный cAST. Используемая колонка представляла собой колонку размером 1,5 на 45 см с Sephacryl G-300 (Pharmacia, NJ). Элюирование выполняли 0,01 М трис-буфером и 0,15 М NaCl буфером (pH 7,2) при скорости потока 15 мл / ч. Колоночные фракции анализировали непосредственно для анализа AST, как описано в предыдущем абзаце.
4.Электрофорез
Универсальные агарозные пленки и буфер были приобретены у Ciba-Corning Medical (LA). В каждую лунку наносили образцы (1,2 мл) сыворотки пациента и субъекта с АВГ и очищенную CAST. Эти образцы подвергали электрофорезу в течение 35 минут при 100 В в универсальном барбитуратном буфере (pH 8,6).
5. Иммуноглобулиновый электрофорез
Когда электрофорез был завершен, планшеты укладывали и заполняли античеловеческим иммуноглобулиновым комплексом, G, A, M, GMA, каппа и лямбда между промежутками.Затем их инкубировали 24 часа при комнатной температуре и окрашивали.
6. Электрофорез AST
Окрашивание AST проводили, как описано ранее Sakakibara et al. 12) . Чтобы кратко описать это, после завершения электрофореза на планшеты положили пленку из 1 мл смеси реагентов AST [10 мкмоль альфа-кетоглутарата, 200 мкмоль L-цистеинсульфината, 0,1 мг м-PMS, 0,8 мг MTT, 2 мкмоль EDTA, 20 мг декстрана и 100 мкмоль иммидазольного буфера (pH 7,5)] в течение 20 минут инкубации при 37 ° C.Затем чашки с агарозой погружали в 10% раствор уксусной кислоты на 5 минут, промывали водой и затем сушили в печи при 65 ° C. Активность AST визуализировалась по появлению пурпурных полос.
7. Осаждение полиэтиленгликолем (ПЭГ) и идентификация класса антител
В качестве методов скринингового исследования комплекса фермент-иммуноглобулин и определения подкласса его антитела мы использовали методы с небольшой модификацией, ранее описанные Litin et al. 5 ) .Кратко описанный в нашем методе, ПЭГ 6000 был приобретен у химической компании Sigma. Мы добавили 100 мкл 24% раствора ПЭГ 6000 к 100 мкл сыворотки от каждого пациента. Контрольный образец получали заменой 100 мкл фосфатного буферного раствора (PBS) на PEG. Смеси инкубировали при 37 ° C в течение 10 минут и центрифугировали при 3000 × g при комнатной температуре в течение 20 минут. Активность AST определяли по их супернатантам, как описано ранее. Идентификацию иммуноглобулина, связанного с AST, проводили путем отборной преципитации кроличьей антисывороткой против человека.К 20 мкл сыворотки субъекта добавляли 180 мкл антисыворотки и затем встряхивали смесь, осторожно встряхивали и инкубировали при комнатной температуре в течение 60 минут. После инкубации смесь центрифугировали при 3000 × g в течение 15 минут. Активность AST определяли по их супернатантам, как описано ранее.
8. Изменения активности AST в зависимости от температуры и времени хранения
Каждый образец сыворотки был разделен на 3 части в соответствии с интервалом и хранился в замороженном состоянии (-20 ° C), состоянии охлаждения (4 ° C) и комнатной температуре.Затем анализировали активность AST, как описано ранее.
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Эксклюзивная хроматография
Характер активности AST явно отличался от изолированного субъекта с гипераспартатемией и очищенного пациента с CAST и AVH. Паттерны активности AST были подобны очищенному ферменту из гемолизированных эритроцитов и пациента с АВГ, но различались у изолированного субъекта с гипераспартатемией. Активность AST была обнаружена в более ранней фракции изолированного субъекта с гипераспартатозом, а не в двух других группах ().Это означает, что это макромолекула с более высокой молекулярной массой.
Гель-эксклюзионная хроматография (на сефакриле G-300) образцов сыворотки от пациента с острым вирусным гепатитом (○) 25-летнего мужчины, вызванного вирусом гепатита B и изолированного женского пола с повышенным уровнем AST (●), описанных в этом отчете и гемолизированных РБК (◉). Активность AST определяли в каждой из фракций.
2. Электрофорез
1) Электрофорез AST
Была одна полоса из гемолизированных эритроцитов, которая показывает активность AST (cAST) чистого цитосомного типа, но было две полосы у пациента с AVH и изолированного случая повышения AST.В последней группе было две полосы, но картина у каждой различалась. В сыворотке крови пациента с АВГ было 2 полосы, из которых толстая полоса соответствовала активности cAST, а тонкая — митохондриальному (mAST) типу. Это открытие означает, что основная часть циркулирующей активности AST у пациента с АВГ относится к цитосомному типу. В случае макроаспартатемии мы можем найти тонкую полосу, соответствующую mAST без активности cAST, но вместо типа cAST мы можем найти аномальную толстую активность AST, которая находится рядом с щелью начала, что похоже на характерный образец тех упомянутая ранее макроаспартатемия ().Это открытие предполагает, что этот случай гипераспартатемии вызван митохондриальным типом и аномальным типом активности AST. Аномальный тип активности AST может быть цитосомным типом AST из-за других эффектов.
Диаграммы электрофореза образцов [дорожка RH; из очищенной аспартатаминотрансферазы (c-AST) из гемолизированных красных кровяных телец (RBC), дорожка AVII; сыворотка от пациента с острым вирусным гепатитом, вызванным живым гепатитом В, дорожка М; сыворотка от пациента с макроаспартатемией] после окрашивания АСТ по методу Сакакибары.На полосе RH имеется одна полоса (очищенный цитоплазматический AST из RBC; 250 МЕ). В дорожке AVH есть две полосы, одна из которых является основной полосой, соответствующей c-AST в полосе RH, а другая — второстепенной полосой, предполагаемой митохондриальным-AST (m-AST). В переулке M есть две полосы, одна из которых является второстепенной полосой, предлагаемой для m-AST в стране AVH, а другая — основной полосой, которая является новой. См. Текст для дальнейшего обсуждения.
2) Иммуноглобулиновый электрофорез
Паттерн отклонений у пациента с АВГ отсутствует (не показан), и имеется только одно отклонение в иммуноглобулине G ().
Паттерны иммуноглобулинового электрофореза пациентов с макроаспартатемией. Существует атипичная преципитированная дуга общего антииммуноглобулина (анти-Tig), анти-иммуноглобулина G (анти-IgG) и анти-иммуноглобулинового комплекса GMA (анти-IgGMA). Но в антииммуноглобулинах А и М. нет атипичной преципитированной дуги. См. Текст для дальнейшего обсуждения.
3. Осаждение полиэтиленгликолем (ПЭГ) и идентификация класса антител
ПЭГ, как известно, преципитирует комплексы антитело-антиген и был предложен в качестве быстрого скринингового теста на макроаспартатемию.По этой причине эксперименты по преципитации с ПЭГ были предприняты у пациента с АВГ и пациента с макроаспартатемией. Уровни активности AST для каждого супернатанта были разными. Активность AST заметно снизилась с 223 МЕ до 23 МЕ у пациента с макроаспартатемией, но немного снизилась с 430 МЕ до 378 МЕ у пациента с АВГ. Он также хорошо известен как быстрый скрининговый тест для идентификации класса антител путем добавления к классу антииммуноглобулинов при макроаспартатемии. Идентификацию класса антител проводили путем отборной преципитации кроличьими античеловеческими антисывороточными Ig G, A и M.Были незначительные изменения активности AST у пациента с АВГ, но заметные изменения у пациента с макроаспартатемией, особенно в отношении иммуноглобулина G, с 223 МЕ до 24 МЕ (). Даже если и произошло какое-либо изменение его активности, оно не было значительным, как антииммуноглобулин G. Таким образом, изменение активности AST могло быть специфическим для Ig G у нашего пациента с макроаспартатемией.
Таблица 1.
Изменения активности AST (IU) из супернатантов при осаждении путем добавления полиэтиленгликоля (PEG) и кроличьих анти-человеческих антител к IgG, A и M
случай макро-AST
AVH пациент
исходная сыворотка
223
430
H 2 O (пустой)
230
434
9013 908
анти-IgG
28
388
анти-IgA
198
396
анти-IgM
188
346
9182 4 9018.Изменения активности AST в зависимости от температуры и времени
Чтобы оценить характеристики макро-AST из-за любых переменных условий, активность AST анализировали в различных условиях. Мы не смогли провести анализ из-за дефицита сыворотки. Не было изменений активности AST за счет очищенного фермента из гемолизированных эритроцитов в течение 10 дней, сыворотки от гепатита в течение 14 дней, у пациента с макроаспартатемией в течение 6 недель при комнатной температуре и охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии ().
Таблица 2.
Изменения активности AST (МЕ) в зависимости от времени и температуры при различных условиях хранения
день
0
3
7
10
14
21
№
430
434
428
416
412
NS
NS
NS
NS
−20 ° C
9013 9013 4 418
NS
NS
NS
NS
RT
217
220
212
208
207
210
208
167
9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 4
224
214
220
212
216
213
181
−20 ° C
218
218
215
208
212
RH
RT
562
546
538
552
NS
NS
NS
NS
NS
9018 фермент, обнаруженный в самых разных тканях, включая сердце, скелетные мышцы, почки, эритроциты и мозг, а также печень.Предполагается, что это возвышение связано с повреждением вышеупомянутых органов. Повреждение обычно связано с другими аномалиями ферментов или метаболитов, такими как повышение уровня билирубина, щелочной фосфатазы (ЩФ), аланинтрансаминазы (АЛТ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) при повреждениях печени из-за их этиологии 9–10) . Даже если наблюдается повышение уровня АСТ без повышения уровня АЛТ при запущенной гепатоцеллюлярной карциноме, алкогольных заболеваниях печени и нарушениях функции печени с лекарственным действием, они обычно связаны с другими аномалиями ферментов или метаболитов, и их аномалии могут быть обнаружены с другими диагностическими стулами, такими как анамнез и радиологические методы.Однако редко встречаются экземпляры без этих патологических состояний.
Обычный метод определения размера фермента при сохранении его активности — это эксклюзионная хроматография. В этом методе более крупные белки исключаются из пор смолы и, следовательно, появляются в более ранних фракциях, чем более мелкие белки. Можно даже приблизительно определить размер молекул с помощью эксклюзионной хроматографии. В этом зарегистрированном случае изолированное повышение уровня АСТ заставило врачей заподозрить заболевание печени, несмотря на несвязанные данные в анамнезе, а также при физикальных и лабораторных обследованиях.Образцы биопсии печени и скелетных мышц не были получены, чтобы исключить болезненное состояние в нашем случае под микроскопом, и были крайне маловероятными из-за нормальных показателей CK, LDH, ALT и креатинина. Наши хроматографические результаты легко показали, что активность AST очищенного фермента из эритроцитов и пациентов с гепатитом идентична, но отличается от изолированного случая повышения AST. Он также появляется в более ранней фракции в изолированном случае повышения AST. В дополнение к этим результатам и быстрому скрининговому тесту с помощью преципитации ПЭГ, наш случай может быть диагностирован как макроаспартатемия, состоящая из ферментно-иммуноглобулинового комплекса 8) .
В сыворотке крови циркулируют два изофермента AST: один цитоплазматический, а другой митохондриальный 13) по своему происхождению. Изоферменты можно легко разделить электрофоретическими или иммунохимическими методами. Даже митохондриальный изофермент является основной частью при некоторых тяжелых повреждениях тканей 14) , обычно это циркулирующая в сыворотке активность AST, которая возникает из цитоплазматического изофермента. В большинстве отчетов о макро-AST они упоминали, что это комплекс фермент-иммуноглобулин, особенно из-за Ig G или, в редких случаях, Ig G, связанного с IgA, но не упоминали, какие виды изоферментов типа AST комбинируются с иммунобулином, за исключением одного 5,8,10,15). PEG хорошо известен как преципитат комплексов антитело-антиген и был предложен в качестве быстрого скринингового теста на макроаспартатемию. 5,9) . Итак, в нашем случае это может быть комплекс АСТ-иммуноглобулин. В нашем случае комплекс макро-AST может быть изоферментом иммуноглобулин-цитоплазматический AST, поскольку обычно циркулирующий изофермент AST — это cAST 13–4) . Также в нашем электрофорезе AST активность AST не наблюдалась как цитоплазматический тип, а наблюдалась только аномальный тип AST и митохондриальный тип.В одном сообщении об иммуно-комплексном AST, полученном биопсийным материалом из печени и скелетных мышц 9) , электрофотограмма была аналогична нашему исследованию. Изоферменты AST из этих тканей были нормальными. Поскольку активность AST в циркулирующей сыворотке является основной фракцией цитоплазматического типа, предполагается, что нормальный цитоплазматический изофермент AST связывается с иммуноглобулином только после выхода в кровоток 9, 14–5) . Это доказательство было позже подтверждено Стасией и др. С моноклональным антителом 10) .
Тип иммуноглобулина, связанного с комплексом макро-AST, может быть легко идентифицирован с помощью выбранной преципитации с помощью PEG и антисывороточных Ig G, A и M в качестве быстрого скринингового теста, как упоминалось ранее Litin et al. 5) . Но при использовании этого метода активность AST была незначительно снижена из-за неспецифического связывания иммуноглобулина. В нашем случае макро-AST активность AST была заметно снижена, особенно в отношении иммуноглобулина G. Хотя она была немного изменена у пациента с гепатитом и еще больше снизилась в отношении анти-иммуноглобулина A и M, она не была значимой, как анти-иммуноглобулин G. .Также было обнаружено аномальное обнаружение IgG при электрофорезе иммуноглобулина. Итак, изменение активности AST может быть специфическим для Ig G у нашего пациента с макроаспартатемией.
Недавний обзор сывороточного AST указал на двусмысленные и противоречивые сообщения об эффектах его хранения 16) . Как правило, активность AST в сыворотке или плазме была стабильной в течение 2 недель хранения при 4 ° C, 4 недель при –20 ° C и в замороженном состоянии in vitro активность лифофилизированного очищенного AST может поддерживаться в течение 1 года с минимальной потерей активности 17– 8) .В нашем случае макроаспартатемии не было изменений активности AST в течение 4 недель при комнатной температуре и охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии. Это первый отчет о влиянии активности AST на его хранение в различных условиях. Хотя мы не можем подтвердить, что ферментативная активность макро-AST может поддерживаться дольше, чем нормальная AST, эти данные могут предполагать, что ферментная активность макро-AST может быть более стабильной, чем нормальная AST.
Причины повышенной активности ферментов в сыворотке долгое время не предполагаются.Механизм этой повышенной активности лучше всего понят для макроамилазы. Амилаза (период полураспада: около 2 часов), белок с низкой молекулярной массой (MW; -55 000 Да), легко фильтруется и выводится почками, тогда как макроамилаза имеет высокую молекулу и не фильтруется почками 19–21) . Но аспартатаминотрансфераза (EC 2.6.1.1–100 000 Да) больше, чем амилаза. Кроме того, клиренс AST четко не определен, но его фракционная константа скорости катаболизма из плазмы составляет 0,088 ± 0,016 часа -1 (период полувыведения: около 23 часов.) 22) . Обычно молекулярная масса иммунно-ферментного комплекса, определяемая гель-фильтрацией и ультрацентрифугированием, соответствует соотношению два к одному между ферментом и антителом. Кроме того, антитело (особенно IgG; -180 000Da) имеет более крупную молекулу и распознается ретикулоэндотелиальной системой (RES) 21, 23-5) . Было высказано предположение, что связывание антител с ферментом сыворотки препятствует механизму клиренса RES. Как упоминалось в приведенных выше причинах, комплекс макро-AST может очищаться с помощью RES, поэтому его активность может быть выше в сыворотке.
Было описано несколько ферментов, образующих комплекс с иммуноглобулином, и эта группа ферментных нарушений, связанных с иммуноглобулином, была названа «расстройствами ICE» 26) . Эти состояния, по-видимому, вызывают неспецифический диспротеинемический ответ иммунной системы человека. До сих пор известными ферментами в иммунокомплексе являются амилаза, CK, LDH, ALP, ALT, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа, кислая фосфатаза, липаза и AST 20,23,25,27–31) . Некоторые соответствующие клинические состояния и их ферментативная активность, связанная с их активностью болезни, сосуществовали с этими ферментными расстройствами, хотя любая связь между болезненными состояниями и расстройствами ICE является чисто умозрительной 24) .В случае комплекса макро-AST известно, что состояния, связанные с комплексом макро-AST, включают сердечно-сосудистые, желудочно-кишечные, эндокринологические, аутоиммунные и инфекционные заболевания 30–1) . В нашем случае мы не можем обнаружить какое-либо сопутствующее заболевание.
Макроаспартаземия как причина изолированного повышения уровня аспартатаминотрансферазы
Реферат
Цели
Повышение сывороточной аспартатаминотрансферазы (АСТ) обычно обнаруживается в печеночных, сердечных, мышечных заболеваниях и гемолитических нарушениях красных кровяных телец (эритроцитах). .Повышение его активности подозревают при патологических состояниях этих органов. Однако экземпляры без каких-либо из этих условий существуют редко.
Методы
Экспериментальные образцы были получены из гемолизированных эритроцитов нормального человека, пациента с гепатитом и макроаспартатемической женской сыворотки. Их изучали с помощью эксклюзионной хроматографии, электрофореза AST и изменения активности AST за счет полиэтиленгликоля (PEG) и различных условий хранения.
Результаты
1) Характер активности AST при эксклюзионной хроматографии аналогичен гемолизированным эритроцитам и сыворотке гепатита, но отличается изолированным повышением AST.
2) Активность AST при добавлении ПЭГ и различных подтипов антииммуноглобулинов к разным сывороткам несколько снижается при гепатите, но заметно снижается при применении ПЭГ и анти-IgG при макроаспартатемии.
3) Паттерны активности AST при электрофорезе представляют собой одну полосу — цитозомальную AST (cAST) — от гемолизированных эритроцитов и две полосы — митохондриальную AST (mAST) и cAST — от гепатита, главным из которых является cAST и второстепенный mAST. Несмотря на то, что есть две полосы, основная из них атипична, а второстепенная соответствует mAST при макроаспартатемии.
4) Изменения активности AST при хранении в зависимости от времени и температуры показывают стабильность в течение 4 недель при комнатной температуре и в охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии в макроаспартатазе.
Заключение
Исходя из вышеизложенного, макроаспартатемия представляет собой комплекс фермент-иммуноглобулин, состоящий из cAST с IgG. MacroAST может быть более стабильным, чем обычный AST при физических условиях.
Фермент аспартатаминотрансферазы (AST) присутствует в широком спектре тканей, включая сердце, скелетные мышцы, почки, красные кровяные тельца (RBC). , помимо печени 1) .Таким образом, предполагается, что повышение уровня АСТ связано с повреждением вышеупомянутых органов. Даже при их повреждении они обычно связаны с другими аномалиями ферментов или метаболитов, такими как повышение креатинкиназы (CK) и лактатдегидрогеназы (LDH) при инфаркте миокарда. Изолированное и стойкое повышение уровня АСТ иногда может быть обнаружено при запущенной гепатоцеллюлярной карциноме, алкогольной болезни печени и при некоторых лекарственных эффектах при заболеваниях печени 2–4) , но эти случаи очень редки без вышеупомянутых состояний 5–10) .Мы испытали один случай вышеуказанного состояния и решили изучить его.
История болезни
24-летняя женщина посетила наше отделение для оценки функции печени из-за изолированного повышения уровня АСТ. Это началось двумя годами ранее. Никаких других симптомов у нее не было. Она отрицала употребление алкоголя, курение и лекарственные препараты. Ее семейный анамнез не был конкретным, за исключением того, что ее отец страдал лабильной гипертонией. Результаты физикального осмотра не примечательны.
Результаты всех лабораторных исследований были нормальными, за исключением необъяснимого повышения AST на 196 МЕ (норма 16-40). Результаты рентгенологических исследований, таких как обзорная рентгенограмма грудной клетки, сканирование печени, ультразвуковое исследование и компьютерная томография брюшной полости, были без особенностей. Она была расценена как необычный «синдром гипераспартемии» и рекомендована для интервальной проверки функции печени.
5 месяцев спустя она повторно посетила наше отделение для точной оценки функции печени.Результаты всех лабораторных исследований были нормальными, за исключением изолированного повышения АСТ на уровне 223 МЕ (норма 16-40). Ее физическое состояние было следующим; высота 160 см, 53 кг, 100/60 мм рт. Результаты других функциональных тестов печени, включая билирубин, альбумин, протромбиновое время, щелочную фосфатазу (ЩФ) и АЛТ, были нормальными. При повторном тестировании и лабораторных результатах АСТ составлял 217 МЕ, АЛТ 13 МЕ, ЩФ 39 МЕ, ЛДГ 71 МЕ (N: 53–137), креатинин 0,9 мг / дл, азот мочевины крови (АМК) 11 мг / дл, КК 59 МЕ (N: 60– 103) и общий билирубин 0.6 мг / дл. Все серологические маркеры вируса гепатита B, C и E были отрицательными. Антитела IgG к вирусу гепатита А были положительными, а IgM — отрицательными. Общий белок, сывороточное железо, трансферин, общий анализ крови, электролиты, глюкоза и функции щитовидной железы были в норме. Серологическое исследование фактора ревматоидного артрита (РА), клеток LE, ANA, AMA и антител к гладкой мускулатуре было отрицательным. Специальные исследования подтвердили, что у пациента был комплекс АСТ с иммуноглобулином.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1.Субъекты и материалы
Образцы нашего исследования были взяты у пациента с острым вирусным гепатитом (АВГ; из-за HBV), вышеупомянутой женщиной и очищенным цитозольным ферментом из гемолизированных эритроцитов. Цитозольный AST был очищен из эритроцитов нормального человека, как описано ранее Rej et al., 11) .
2. Анализ AST
Рутинный метод и наш единственный случай определения повышенного уровня AST были выполнены как химическая часть клинической патологии на Spectrum EPX (Abbott R , IL).
3. Эксклюзионная хроматография
Эксклюзивная хроматография была сделана для каждого 1 мл образца сыворотки, включая наш изолированный случай повышения AST, пациента с AVH и вышеупомянутый очищенный cAST. Используемая колонка представляла собой колонку размером 1,5 на 45 см с Sephacryl G-300 (Pharmacia, NJ). Элюирование выполняли 0,01 М трис-буфером и 0,15 М NaCl буфером (pH 7,2) при скорости потока 15 мл / ч. Колоночные фракции анализировали непосредственно для анализа AST, как описано в предыдущем абзаце.
4.Электрофорез
Универсальные агарозные пленки и буфер были приобретены у Ciba-Corning Medical (LA). В каждую лунку наносили образцы (1,2 мл) сыворотки пациента и субъекта с АВГ и очищенную CAST. Эти образцы подвергали электрофорезу в течение 35 минут при 100 В в универсальном барбитуратном буфере (pH 8,6).
5. Иммуноглобулиновый электрофорез
Когда электрофорез был завершен, планшеты укладывали и заполняли античеловеческим иммуноглобулиновым комплексом, G, A, M, GMA, каппа и лямбда между промежутками.Затем их инкубировали 24 часа при комнатной температуре и окрашивали.
6. Электрофорез AST
Окрашивание AST проводили, как описано ранее Sakakibara et al. 12) . Чтобы кратко описать это, после завершения электрофореза на планшеты положили пленку из 1 мл смеси реагентов AST [10 мкмоль альфа-кетоглутарата, 200 мкмоль L-цистеинсульфината, 0,1 мг м-PMS, 0,8 мг MTT, 2 мкмоль EDTA, 20 мг декстрана и 100 мкмоль иммидазольного буфера (pH 7,5)] в течение 20 минут инкубации при 37 ° C.Затем чашки с агарозой погружали в 10% раствор уксусной кислоты на 5 минут, промывали водой и затем сушили в печи при 65 ° C. Активность AST визуализировалась по появлению пурпурных полос.
7. Осаждение полиэтиленгликолем (ПЭГ) и идентификация класса антител
В качестве методов скринингового исследования комплекса фермент-иммуноглобулин и определения подкласса его антитела мы использовали методы с небольшой модификацией, ранее описанные Litin et al. 5 ) .Кратко описанный в нашем методе, ПЭГ 6000 был приобретен у химической компании Sigma. Мы добавили 100 мкл 24% раствора ПЭГ 6000 к 100 мкл сыворотки от каждого пациента. Контрольный образец получали заменой 100 мкл фосфатного буферного раствора (PBS) на PEG. Смеси инкубировали при 37 ° C в течение 10 минут и центрифугировали при 3000 × g при комнатной температуре в течение 20 минут. Активность AST определяли по их супернатантам, как описано ранее. Идентификацию иммуноглобулина, связанного с AST, проводили путем отборной преципитации кроличьей антисывороткой против человека.К 20 мкл сыворотки субъекта добавляли 180 мкл антисыворотки и затем встряхивали смесь, осторожно встряхивали и инкубировали при комнатной температуре в течение 60 минут. После инкубации смесь центрифугировали при 3000 × g в течение 15 минут. Активность AST определяли по их супернатантам, как описано ранее.
8. Изменения активности AST в зависимости от температуры и времени хранения
Каждый образец сыворотки был разделен на 3 части в соответствии с интервалом и хранился в замороженном состоянии (-20 ° C), состоянии охлаждения (4 ° C) и комнатной температуре.Затем анализировали активность AST, как описано ранее.
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Эксклюзивная хроматография
Характер активности AST явно отличался от изолированного субъекта с гипераспартатемией и очищенного пациента с CAST и AVH. Паттерны активности AST были подобны очищенному ферменту из гемолизированных эритроцитов и пациента с АВГ, но различались у изолированного субъекта с гипераспартатемией. Активность AST была обнаружена в более ранней фракции изолированного субъекта с гипераспартатозом, а не в двух других группах ().Это означает, что это макромолекула с более высокой молекулярной массой.
Гель-эксклюзионная хроматография (на сефакриле G-300) образцов сыворотки от пациента с острым вирусным гепатитом (○) 25-летнего мужчины, вызванного вирусом гепатита B и изолированного женского пола с повышенным уровнем AST (●), описанных в этом отчете и гемолизированных РБК (◉). Активность AST определяли в каждой из фракций.
2. Электрофорез
1) Электрофорез AST
Была одна полоса из гемолизированных эритроцитов, которая показывает активность AST (cAST) чистого цитосомного типа, но было две полосы у пациента с AVH и изолированного случая повышения AST.В последней группе было две полосы, но картина у каждой различалась. В сыворотке крови пациента с АВГ было 2 полосы, из которых толстая полоса соответствовала активности cAST, а тонкая — митохондриальному (mAST) типу. Это открытие означает, что основная часть циркулирующей активности AST у пациента с АВГ относится к цитосомному типу. В случае макроаспартатемии мы можем найти тонкую полосу, соответствующую mAST без активности cAST, но вместо типа cAST мы можем найти аномальную толстую активность AST, которая находится рядом с щелью начала, что похоже на характерный образец тех упомянутая ранее макроаспартатемия ().Это открытие предполагает, что этот случай гипераспартатемии вызван митохондриальным типом и аномальным типом активности AST. Аномальный тип активности AST может быть цитосомным типом AST из-за других эффектов.
Диаграммы электрофореза образцов [дорожка RH; из очищенной аспартатаминотрансферазы (c-AST) из гемолизированных красных кровяных телец (RBC), дорожка AVII; сыворотка от пациента с острым вирусным гепатитом, вызванным живым гепатитом В, дорожка М; сыворотка от пациента с макроаспартатемией] после окрашивания АСТ по методу Сакакибары.На полосе RH имеется одна полоса (очищенный цитоплазматический AST из RBC; 250 МЕ). В дорожке AVH есть две полосы, одна из которых является основной полосой, соответствующей c-AST в полосе RH, а другая — второстепенной полосой, предполагаемой митохондриальным-AST (m-AST). В переулке M есть две полосы, одна из которых является второстепенной полосой, предлагаемой для m-AST в стране AVH, а другая — основной полосой, которая является новой. См. Текст для дальнейшего обсуждения.
2) Иммуноглобулиновый электрофорез
Паттерн отклонений у пациента с АВГ отсутствует (не показан), и имеется только одно отклонение в иммуноглобулине G ().
Паттерны иммуноглобулинового электрофореза пациентов с макроаспартатемией. Существует атипичная преципитированная дуга общего антииммуноглобулина (анти-Tig), анти-иммуноглобулина G (анти-IgG) и анти-иммуноглобулинового комплекса GMA (анти-IgGMA). Но в антииммуноглобулинах А и М. нет атипичной преципитированной дуги. См. Текст для дальнейшего обсуждения.
3. Осаждение полиэтиленгликолем (ПЭГ) и идентификация класса антител
ПЭГ, как известно, преципитирует комплексы антитело-антиген и был предложен в качестве быстрого скринингового теста на макроаспартатемию.По этой причине эксперименты по преципитации с ПЭГ были предприняты у пациента с АВГ и пациента с макроаспартатемией. Уровни активности AST для каждого супернатанта были разными. Активность AST заметно снизилась с 223 МЕ до 23 МЕ у пациента с макроаспартатемией, но немного снизилась с 430 МЕ до 378 МЕ у пациента с АВГ. Он также хорошо известен как быстрый скрининговый тест для идентификации класса антител путем добавления к классу антииммуноглобулинов при макроаспартатемии. Идентификацию класса антител проводили путем отборной преципитации кроличьими античеловеческими антисывороточными Ig G, A и M.Были незначительные изменения активности AST у пациента с АВГ, но заметные изменения у пациента с макроаспартатемией, особенно в отношении иммуноглобулина G, с 223 МЕ до 24 МЕ (). Даже если и произошло какое-либо изменение его активности, оно не было значительным, как антииммуноглобулин G. Таким образом, изменение активности AST могло быть специфическим для Ig G у нашего пациента с макроаспартатемией.
Таблица 1.
Изменения активности AST (IU) из супернатантов при осаждении путем добавления полиэтиленгликоля (PEG) и кроличьих анти-человеческих антител к IgG, A и M
случай макро-AST
AVH пациент
исходная сыворотка
223
430
H 2 O (пустой)
230
434
9013 908
анти-IgG
28
388
анти-IgA
198
396
анти-IgM
188
346
9182 4 9018.Изменения активности AST в зависимости от температуры и времени
Чтобы оценить характеристики макро-AST из-за любых переменных условий, активность AST анализировали в различных условиях. Мы не смогли провести анализ из-за дефицита сыворотки. Не было изменений активности AST за счет очищенного фермента из гемолизированных эритроцитов в течение 10 дней, сыворотки от гепатита в течение 14 дней, у пациента с макроаспартатемией в течение 6 недель при комнатной температуре и охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии ().
Таблица 2.
Изменения активности AST (МЕ) в зависимости от времени и температуры при различных условиях хранения
день
0
3
7
10
14
21
№
430
434
428
416
412
NS
NS
NS
NS
−20 ° C
9013 9013 4 418
NS
NS
NS
NS
RT
217
220
212
208
207
210
208
167
9013 9013 9013 9013 9013 9013 9013 4
224
214
220
212
216
213
181
−20 ° C
218
218
215
208
212
RH
RT
562
546
538
552
NS
NS
NS
NS
NS
9018 фермент, обнаруженный в самых разных тканях, включая сердце, скелетные мышцы, почки, эритроциты и мозг, а также печень.Предполагается, что это возвышение связано с повреждением вышеупомянутых органов. Повреждение обычно связано с другими аномалиями ферментов или метаболитов, такими как повышение уровня билирубина, щелочной фосфатазы (ЩФ), аланинтрансаминазы (АЛТ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) при повреждениях печени из-за их этиологии 9–10) . Даже если наблюдается повышение уровня АСТ без повышения уровня АЛТ при запущенной гепатоцеллюлярной карциноме, алкогольных заболеваниях печени и нарушениях функции печени с лекарственным действием, они обычно связаны с другими аномалиями ферментов или метаболитов, и их аномалии могут быть обнаружены с другими диагностическими стулами, такими как анамнез и радиологические методы.Однако редко встречаются экземпляры без этих патологических состояний.
Обычный метод определения размера фермента при сохранении его активности — это эксклюзионная хроматография. В этом методе более крупные белки исключаются из пор смолы и, следовательно, появляются в более ранних фракциях, чем более мелкие белки. Можно даже приблизительно определить размер молекул с помощью эксклюзионной хроматографии. В этом зарегистрированном случае изолированное повышение уровня АСТ заставило врачей заподозрить заболевание печени, несмотря на несвязанные данные в анамнезе, а также при физикальных и лабораторных обследованиях.Образцы биопсии печени и скелетных мышц не были получены, чтобы исключить болезненное состояние в нашем случае под микроскопом, и были крайне маловероятными из-за нормальных показателей CK, LDH, ALT и креатинина. Наши хроматографические результаты легко показали, что активность AST очищенного фермента из эритроцитов и пациентов с гепатитом идентична, но отличается от изолированного случая повышения AST. Он также появляется в более ранней фракции в изолированном случае повышения AST. В дополнение к этим результатам и быстрому скрининговому тесту с помощью преципитации ПЭГ, наш случай может быть диагностирован как макроаспартатемия, состоящая из ферментно-иммуноглобулинового комплекса 8) .
В сыворотке крови циркулируют два изофермента AST: один цитоплазматический, а другой митохондриальный 13) по своему происхождению. Изоферменты можно легко разделить электрофоретическими или иммунохимическими методами. Даже митохондриальный изофермент является основной частью при некоторых тяжелых повреждениях тканей 14) , обычно это циркулирующая в сыворотке активность AST, которая возникает из цитоплазматического изофермента. В большинстве отчетов о макро-AST они упоминали, что это комплекс фермент-иммуноглобулин, особенно из-за Ig G или, в редких случаях, Ig G, связанного с IgA, но не упоминали, какие виды изоферментов типа AST комбинируются с иммунобулином, за исключением одного 5,8,10,15). PEG хорошо известен как преципитат комплексов антитело-антиген и был предложен в качестве быстрого скринингового теста на макроаспартатемию. 5,9) . Итак, в нашем случае это может быть комплекс АСТ-иммуноглобулин. В нашем случае комплекс макро-AST может быть изоферментом иммуноглобулин-цитоплазматический AST, поскольку обычно циркулирующий изофермент AST — это cAST 13–4) . Также в нашем электрофорезе AST активность AST не наблюдалась как цитоплазматический тип, а наблюдалась только аномальный тип AST и митохондриальный тип.В одном сообщении об иммуно-комплексном AST, полученном биопсийным материалом из печени и скелетных мышц 9) , электрофотограмма была аналогична нашему исследованию. Изоферменты AST из этих тканей были нормальными. Поскольку активность AST в циркулирующей сыворотке является основной фракцией цитоплазматического типа, предполагается, что нормальный цитоплазматический изофермент AST связывается с иммуноглобулином только после выхода в кровоток 9, 14–5) . Это доказательство было позже подтверждено Стасией и др. С моноклональным антителом 10) .
Тип иммуноглобулина, связанного с комплексом макро-AST, может быть легко идентифицирован с помощью выбранной преципитации с помощью PEG и антисывороточных Ig G, A и M в качестве быстрого скринингового теста, как упоминалось ранее Litin et al. 5) . Но при использовании этого метода активность AST была незначительно снижена из-за неспецифического связывания иммуноглобулина. В нашем случае макро-AST активность AST была заметно снижена, особенно в отношении иммуноглобулина G. Хотя она была немного изменена у пациента с гепатитом и еще больше снизилась в отношении анти-иммуноглобулина A и M, она не была значимой, как анти-иммуноглобулин G. .Также было обнаружено аномальное обнаружение IgG при электрофорезе иммуноглобулина. Итак, изменение активности AST может быть специфическим для Ig G у нашего пациента с макроаспартатемией.
Недавний обзор сывороточного AST указал на двусмысленные и противоречивые сообщения об эффектах его хранения 16) . Как правило, активность AST в сыворотке или плазме была стабильной в течение 2 недель хранения при 4 ° C, 4 недель при –20 ° C и в замороженном состоянии in vitro активность лифофилизированного очищенного AST может поддерживаться в течение 1 года с минимальной потерей активности 17– 8) .В нашем случае макроаспартатемии не было изменений активности AST в течение 4 недель при комнатной температуре и охлажденном состоянии и 9 недель в замороженном состоянии. Это первый отчет о влиянии активности AST на его хранение в различных условиях. Хотя мы не можем подтвердить, что ферментативная активность макро-AST может поддерживаться дольше, чем нормальная AST, эти данные могут предполагать, что ферментная активность макро-AST может быть более стабильной, чем нормальная AST.
Причины повышенной активности ферментов в сыворотке долгое время не предполагаются.Механизм этой повышенной активности лучше всего понят для макроамилазы. Амилаза (период полураспада: около 2 часов), белок с низкой молекулярной массой (MW; -55 000 Да), легко фильтруется и выводится почками, тогда как макроамилаза имеет высокую молекулу и не фильтруется почками 19–21) . Но аспартатаминотрансфераза (EC 2.6.1.1–100 000 Да) больше, чем амилаза. Кроме того, клиренс AST четко не определен, но его фракционная константа скорости катаболизма из плазмы составляет 0,088 ± 0,016 часа -1 (период полувыведения: около 23 часов.) 22) . Обычно молекулярная масса иммунно-ферментного комплекса, определяемая гель-фильтрацией и ультрацентрифугированием, соответствует соотношению два к одному между ферментом и антителом. Кроме того, антитело (особенно IgG; -180 000Da) имеет более крупную молекулу и распознается ретикулоэндотелиальной системой (RES) 21, 23-5) . Было высказано предположение, что связывание антител с ферментом сыворотки препятствует механизму клиренса RES. Как упоминалось в приведенных выше причинах, комплекс макро-AST может очищаться с помощью RES, поэтому его активность может быть выше в сыворотке.
Было описано несколько ферментов, образующих комплекс с иммуноглобулином, и эта группа ферментных нарушений, связанных с иммуноглобулином, была названа «расстройствами ICE» 26) . Эти состояния, по-видимому, вызывают неспецифический диспротеинемический ответ иммунной системы человека. До сих пор известными ферментами в иммунокомплексе являются амилаза, CK, LDH, ALP, ALT, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа, кислая фосфатаза, липаза и AST 20,23,25,27–31) . Некоторые соответствующие клинические состояния и их ферментативная активность, связанная с их активностью болезни, сосуществовали с этими ферментными расстройствами, хотя любая связь между болезненными состояниями и расстройствами ICE является чисто умозрительной 24) .В случае комплекса макро-AST известно, что состояния, связанные с комплексом макро-AST, включают сердечно-сосудистые, желудочно-кишечные, эндокринологические, аутоиммунные и инфекционные заболевания 30–1) . В нашем случае мы не можем обнаружить какое-либо сопутствующее заболевание.
Функциональные тесты печени • LITFL • Исследования CCC
Общий анализ тестов функции печени (LFT)
Трансаминит: Аминотрансферазы (AST, ALT)
Обычно ассоциируется с гепатоцеллюлярным повреждением
Обычно не связано с холестазом
Соотношение AST и ALT может быть использовано в дифференциале
ALT более специфичен для повреждения печени, чем AST
AST: ALT = 1
Связано с ишемией (CCF, ишемический некроз и гепатит)
AST: ALT> 2.5
Ассоциированный с алкогольным гепатитом
Алкогольный дефицит пиридоксальфосфата
AST: ALT <1
Высокий рост АЛТ, специфичный для гепатоцеллюлярного повреждения
9 Парацетамол ODc
29 некроз, токсический гепатит
Возвышение с холестазом (ALP, GGT)
ALP — , в первую очередь связанный с холестазом и злокачественной инфильтрацией печени
Маркер быстрого обновления костной ткани и обширных костных метастазов
GGT — , чувствительный к употреблению алкоголя
Маркер гепатоцеллюлярного повреждения, но неспецифический
повышение, связанное с обструкцией желчевыводящих путей и печени
Аспартатаминотрансфераза (AST)
Аспартатаминотрансфераза (AST) катализирует превращение азотистой части аминокислоты.Это важно для производства энергии в цикле Кребса.
AST высвобождается в сыворотку пропорционально клеточному повреждению и наиболее увеличивается в острой фазе клеточного некроза.
Обнаруживается при снижении уровней в: (Относительно низкая органоспецифичность)
Аланинаминотрансфераза (ALT) катализирует обратимый перенос аминогруппы в цикле Кребса.
В отличие от AST, он в основном находится в клетках печени и является относительно специфическим индикатором гепатоцеллюлярного повреждения. Он высвобождается на ранних стадиях поражения печени и остается повышенным в течение недель
Интерпретация уровней АЛТ
** Уровни НЕ связаны со степенью некроза клеток печени
** Абсолютное значение NO прогностическое значение
Очень высокий уровень АЛТ в сыворотке
гепатоцеллюлярное повреждение
обычно связано со значительным более низким повышением АСТ
, классически ассоциированный с алкогольной болезнью печени
печень: острое гепатоцеллюлярное поражение
алкогольный гепатит
активный цирроз
Лекарства, вызывающие повышение уровня АЛТ
парацетамол и передозировка
парацетамол хлорпромазин
барбитураты
тетрациклин, изониазид, нитрофурантоин
морфин, кодеин (повышение внутрибилиарного давления) (АСТ и АЛТ)
Щелочная фосфатаза (ЩФ)
Щелочная фосфатаза — это на самом деле до 60 различных изоферментов, вместе измеряемых как ЩФ.Электрофорез необходим для определения точного типа возвышения, особенно если изолированное возвышение
Влияние ЩФ: кальцификация костей и транспорт липидов и метаболитов
ЩФ продуцируется
Мембрана желчных канальцев гепатоцитов
Кость, плацента, тонкий кишечник
Повышенный уровень ЩФ часто связан с обструкцией желчных путей и холестазом. до повышения билирубина
Интерпретация уровней ЩФ
Причины повышенного уровня ЩФ
Печень (обычно указывает на холестаз или обструкцию) — Чувствительный индикатор легкой обструкции желчных путей
Опухоль печени (SOL)
Вирусный гепатит
Инфекционный мононуклеоз
15
15 (непатологический) — Выделяется в сыворотку из плаценты на поздних сроках беременности
Кость (у детей обычно непатологическая)
Остеомаляция
Костные метастазы
Костная болезнь Педжета
индуцированный дефицитом рахит
с быстрым ростом костей
Группа крови O и B (непатологическая) — выделяется из тонкой кишки после жирной еды
Наиболее частые причины значительного повышения ЩФ
Полная непроходимость желчевыводящих путей
Обширная костные метастазы — панкреатические, связанные с изолированными Повышение ЩФ (без АЛТ)
Гиперпаратиреоз
Причины изолированного повышения ЩФ
CCF (часто ассоциируется с повышением уровня АСТ и АЛТ)
Ходжкина
IBD
9227
Диабет
IBD Причины низкого уровня ЩФ
Гипомагниемия, гипофосфатемия
Дефицит белка
Гамма-глутамилтрансфераза (GGT)
Гамма-глутамилтрансфераза (GGT) связана с переносом аминокислот через клеточные мембраны
GGT наиболее полезен при поиске гепатоцеллюлярных повреждений
Более чувствителен, чем ALP и AST, но гораздо менее специфичен
Особенно чувствителен к воздействию алкоголя на печень
Повышенное производство GGT как протоковый энзимоз, с повышенным уровнем ферментов, продуцируемых в ответ на гепатоцеллюлярное повреждение
Повышенные уровни GGT в сыворотке
Печень
Ответ на любое гепатоцеллюлярное повреждение
После употребления алкоголя (нет необходимости в гепатоцеллюлярном повреждении)
Другое
Панкреатит, опухоли головного мозга, почечная недостаточность, заболевание предстательной железы
Сердечное заболевание через 5-10 дней после AMI)
Быстрое увеличение GGT
Механическая желтуха
Метастатическая инфильтрация в печень (обычно с непроходимостью)
Лактатдегидрогеназа (ЛДГ)
Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) катализирует обратимое превращение молочной кислоты в пировиноградную кислоту.Заключительный этап на пути Эмбдена – Мейерхоф – Парнас, обеспечивающий мост к циклу Кребса и, таким образом, к клеточной энергии
ЛДГ наиболее полезен при мониторинге травм сердца, печени, легких, гематологических нарушений
Он обнаружен в большинстве тканей организма и включает 5 основных изоферментов, которые могут быть полезны с диагностической точки зрения
Врач скорой помощи МА (Оксон) МБЧБ (Эдин) ФАЦЕМ ФФСЭМ со страстью к регби; история болезни; медицинское образование; и асинхронное обучение евангелист #FOAMed.Соучредитель и технический директор Life in the Fast lane | Эпонимы | Книги | Twitter |
Связанные
Повреждение печени при COVID-19: клинические особенности и тактика лечения | Журнал вирусологии
1.
Li G, Fan Y, Lai Y, Han T, Li Z, Zhou P, Pan P, Wang W, Hu D, Liu X, Zhang Q, Wu J. Коронавирусные инфекции и иммунные ответы. J Med Virol. 2020; 92 (4): 424–32.
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google ученый
2.
Гуань В.Дж., Ни З.Й., Ху Y, Лян У.Х., Ou CQ, Хе Дж.Х., Лю Л., Шан Х., Лей Ц.Л., Хуэй ДСК, Ду Б, Ли Л.Дж., Цзэн Дж., Юэнь Ки, Чен Р.С., Тан Ц.Л., Ван Т, Чен ПЙ, Сян Дж., Ли Си, Ван Дж. Л., Лян З. Дж., Пэн YX, Вэй Л., Лю Ю, Ху YH, Пэн П, Ван Дж. М., Лю Джи, Чен З, Ли Г, Чжэн З. Дж., Цю С. К., Ло Дж, Е Си Джей, Чжу С.Ю., Чжун Н.С. Клиническая характеристика коронавирусной болезни 2019 в Китае. N Engl J Med. 2020; 382 (18): 1708–20.
CAS
Статья
Google ученый
3.
Cai Q, Huang D, Yu H, Zhu Z, Xia Z, Su Y, Li Z, Zhou G, Gou J, Qu J, Sun Y, Liu Y, He Q, Chen J, Liu L, Xu L. COVID -19: аномальные функциональные пробы печени. J Hepatol. 2020; 73 (3): 566–74.
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google ученый
4.
Справочник по профилактике и лечению пневмонии, вызванной новым коронавирусом (2019-nCoV).
5.
Блум П.П., Мейеровиц Э.А., Рейнус З., Дайдон М., Густафсон Дж., Ким А.Й., Шефер Э., Чанг Р.Т.Биохимия печени у госпитализированных пациентов с COVID-19. Гепатология (Балтимор, Мэриленд). 2020; 73: 890–900.
Артикул
CAS
Google ученый
6.
Zhang Y, Zheng L, Liu L, Zhao M, Xiao J, Zhao Q. Нарушение функции печени у пациентов с COVID-19: ретроспективный анализ 115 случаев из одного центра в городе Ухань, Китай. Liver Int. 2020; 40 (9): 2095–103.
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google ученый
7.
Xie H, Zhao J, Lian N, Lin S, Xie Q, Zhuo H. Клинические характеристики госпитализированных пациентов с коронавирусной болезнью 2019 и повреждением печени, не находящихся в отделении интенсивной терапии: ретроспективное исследование. Liver Int. 2020; 40 (6): 1321–6.
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google ученый
8.
Хао Г.Р., Ли Дж.К., Ли С., Ли КБ, Чжан Чж, Ли Х. Количественная оценка нагрузки загрязнения из неточечных источников PN / PP на основе модели RUSLE: тематическое исследование в бассейне реки Бейлуо в Китае.Environ Sci Pollut Res Int. 2020; 27 (27): 33975–89.
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google ученый
9.
Chen N, Zhou M, Dong X, Qu J, Gong F, Han Y, Qiu Y, Wang J, Liu Y, Wei Y, Xia J, Yu T, Zhang X, Zhang L. Эпидемиологические и клинические характеристики 99 случаев новой коронавирусной пневмонии 2019 г. в Ухане, Китай: описательное исследование. Ланцет (Лондон, Англия). 2020; 395 (10223): 507–13.
CAS
Статья
Google ученый
10.
Хуан Ц, Ван И, Ли Х, Рен Л, Чжао Дж, Ху Y, Чжан Л, Фан Г, Сюй Дж, Гу Х, Ченг З, Ю Т, Ся Дж, Вэй И, Ву В, Се Х, Инь W, Ли Х, Лю М, Сяо И, Гао Х, Го Л., Се Дж, Ван Г, Цзян Р., Гао З, Цзинь Кью, Ван Дж, Цао Б. Клинические особенности пациентов, инфицированных новым коронавирусом 2019 года в Ухане, Китай. Ланцет (Лондон, Англия). 2020; 395 (10223): 497–506.
CAS
Статья
Google ученый
11.
Чжу Дж., Цзи П, Панг Дж., Чжун З, Ли Х, Хе С, Чжан Дж., Чжао К.Клиническая характеристика 3062 пациентов с COVID-19: метаанализ. J Med Virol. 2020; 92 (10): 1902–14.
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google ученый
12.
Чжан Ц., Ши Л., Ван Ф.С. Травма печени при COVID-19: управление и проблемы. Ланцет Гастроэнтерол Гепатол. 2020; 5 (5): 428–30.
PubMed
PubMed Central
Статья
Google ученый
13.
Мао Р., Цю Ю., Хе Дж. С., Тан Дж. Й., Ли XH, Лян Дж., Шен Дж., Чжу Л. Р., Чен И., Якуччи М., Нг СК, Гош С., Чен М. Х. Проявления и прогноз поражения желудочно-кишечного тракта и печени у пациентов с COVID-19: систематический обзор и метаанализ. Ланцет Гастроэнтерол Гепатол. 2020; 5 (7): 667–78.
PubMed
PubMed Central
Статья
Google ученый
14.
Генри Б.М., де Оливейра М.Х.С., Бенуа С., Плебани М., Липпи Г. Нарушения гематологических, биохимических и иммунных биомаркеров, связанные с тяжелым заболеванием и смертностью при коронавирусной болезни 2019 (COVID-19): метаанализ.Clin Chem Lab Med. 2020; 58 (7): 1021–8.
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google ученый
15.
Сингх С., Хан А. Клинические характеристики и исходы коронавирусного заболевания 2019 г. среди пациентов с ранее существовавшим заболеванием печени в США: исследование многоцентровой исследовательской сети. Гастроэнтерология. 2020; 159 (2): 768-771.e3.
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google ученый
16.
Malekhosseini SA, Nikoupour H, Gholami S, Shamsaeefar A, Arasteh P, Kazemi K, Dehghani M, Eghlimi H, Shahraki HR, Roozbeh J, Rezaianzadeh A, Nikeghbalian S. Сообщение о 85 случаях COVID-19 и абдоминальной трансплантации единый центр: каковы факторы, связанные со смертью пациентов после трансплантации органов. Трансплантация. 2020; 105: 90–9.
Артикул
Google ученый
17.
Зарин СК. Быстро, быстрее и быстрее: наука в бегах во время драмы о COVID-19 »-« не забывайте о печени.Hepatol Int. 2020; 14 (4): 454–5.
CAS
PubMed
Статья
Google ученый
18.
Chai X, Hu L, Zhang Y, Han W, Lu Z, Ke A, Zhou J, Shi G, Fang N, Fan J, Cai J, Lan F. Специфическая экспрессия ACE2 в холангиоцитах может вызывать печень повреждение после заражения 2019-nCoV. bioRxiv (2020).
19.
Wu Y, Guo C, Tang L, Hong Z, Zhou J, Dong X, Yin H, Xiao Q, Tang Y, Qu X, Kuang L, Fang X, Mishra N, Lu J, Shan H , Цзян Г, Хуан Х.Длительное присутствие вирусной РНК SARS-CoV-2 в образцах фекалий. Ланцет Гастроэнтерол Гепатол. 2020; 5 (5): 434–5.
PubMed
PubMed Central
Статья
Google ученый
20.
Сан Дж., Агемо А., Форнер А., Валенти Л. COVID-19 и заболевание печени. Liver Int. 2020; 40 (6): 1278–81.
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google ученый
21.
Ли Дж., Гонг Х, Ван З., Чен Р., Ли Т., Цзэн Д., Ли М.Клинические особенности семейной кластеризации у пациентов, инфицированных новым коронавирусом 2019 г., в Ухане, Китай. Virus Res. 2020; 286: 198043–4.
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google ученый
22.
Мехта П., Маколи Д.Ф., Браун М., Санчес Е., Таттерсолл Р.С., Мэнсон Дж. COVID-19: рассмотрите синдромы цитокинового шторма и иммуносупрессию. Ланцет (Лондон, Англия). 2020; 395 (10229): 1033–4.
CAS
Статья
Google ученый
23.
Лю Дж, Ли С, Лю Дж, Лян Би, Ван Х, Ван Х, Ли В, Тонг Q, Йи Дж, Чжао Л, Сюн Л, Го С, Тянь Дж, Ло Дж, Яо Дж, Пан Р, Шен Х, Пэн Ц, Лю Т, Чжан Цюй, Ву Дж, Сюй Л., Лу С, Ван Б, Вен Ц, Хань Ц, Чжу Х, Чжоу Р, Чжоу Х, Чен Х, Е П, Чжу Б, Ван Л, Чжоу В, Хе С, Хе И, Цзе С, Вэй П, Чжан Дж, Лу И, Ван В, Чжан Л., Ли Л, Чжоу Ф, Ван Дж, Диттмер У, Лу М, Ху И, Ян Д., Чжэн Х • Продольные характеристики ответов лимфоцитов и цитокиновых профилей в периферической крови пациентов, инфицированных SARS-CoV-2.EBioMedicine. 2020; 55: 102763.
PubMed
PubMed Central
Статья
Google ученый
24.
Мантовани А., Беатрис Дж., Далбени А. Коронавирусная болезнь 2019 и распространенность хронических заболеваний печени: метаанализ. Liver Int. 2020; 40 (6): 1316–20.
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google ученый
25.
Zheng KI, Gao F, Wang XB, Sun QF, Pan KH, Wang TY, Ma HL, Chen YP, Liu WY, George J, Zheng MH.Письмо в редакцию: Ожирение как фактор риска серьезности COVID-19 у пациентов с метаболически ассоциированной жировой болезнью печени. Metab Clin Exp. 2020; 108: 154244–5.
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google ученый
26.
Da BL, Im GY, Schiano TD. Похмелье, связанное с COVID-19: растущая волна алкогольных расстройств и связанных с алкоголем заболеваний печени. Гепатология (Балтимор, Мэриленд). 2020; 72: 1102–8.
CAS
Статья
Google ученый
27.
Сюй З, Ши Л, Ван И, Чжан Дж, Хуан Л, Чжан Ц, Лю С., Чжао П, Лю Х, Чжу Л, Тай И, Бай Ц, Гао Т, Сон Дж, Ся П, Дун Дж, Чжао J, Ван Ф.С. Патологические данные COVID-19, связанные с синдромом острого респираторного дистресс-синдрома. Ланцет Респир Мед. 2020; 8 (4): 420–2.
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google ученый
28.
Тиан С., Сюн Й, Лю Х, Ню Л., Го Дж, Ляо М., Сяо С.Ю. Патологическое исследование нового коронавирусного заболевания 2019 г. (COVID-19) с помощью посмертной основной биопсии.Мод Pathol. 2020; 33 (6): 1007–14.
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google ученый
29.
Li Y, Xiao SY. Поражение печени у пациентов с COVID-19: патология, патогенез и клинические последствия. J Med Virol. 2020; 92: 1491–4.
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google ученый
30.
Ван Д, Ху Б, Ху Ц, Чжу Ф, Лю Х, Чжан Дж, Ван Б, Сян Х, Ченг З, Сюн Й, Чжао Y, Ли И, Ван Х, Пэн З.Клинические характеристики 138 госпитализированных пациентов с пневмонией, инфицированной новым коронавирусом 2019 г., в Ухане. Китайская Джама. 2020; 323 (11): 1061–9.
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google ученый
31.
Кардосо Ф.С., Перейра Р., Джермано Н. Повреждение печени у тяжелобольных пациентов с COVID-19: серия случаев. Crit Care (Лондон, англ.). 2020; 24 (1): 190.
Артикул
Google ученый
32.
Wang Q, Zhao H, Liu LG, Wang YB, Zhang T, Li MH, Xu YL, Gao GJ, Xiong HF, Fan Y, Cao Y, Ding R, Wang JJ, Cheng C, Xie W. Картина повреждения печени у взрослых пациентов с COVID-19: ретроспективный анализ 105 пациентов. Mil Med Res. 2020; 7 (1): 28.
PubMed
PubMed Central
Google ученый
33.
Ян RX, Чжэн RD, Fan JG. Этиология и лечение поражения печени у пациентов с COVID-19. Мир Дж. Гастроэнтерол. 2020; 26 (32): 4753–62.
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google ученый
34.
Lei F, Liu YM, Zhou F, Qin JJ, Zhang P, Zhu L, Zhang XJ, Cai J, Lin L, Ouyang S, Wang X, Yang C, Cheng X, Liu W, Li H , Xie J, Wu B, Luo H, Xiao F, Chen J, Tao L, Cheng G, She ZG, Zhou J, Wang H, Lin J, Luo P, Fu S, Zhou J, Ye P, Xiao B, Mao W, Лю Л., Ян И, Лю Л., Чен Дж, Ли Х, Хуанг Х, Чжан Б. Х., Юань Ю. Продольная связь между маркерами повреждения печени и смертностью от COVID-19 в Китае.Гепатология (Балтимор, Мэриленд). 2020; 72 (2): 389–98.
CAS
Статья
Google ученый
35.
Джи Д., Цинь Э., Сюй Дж., Чжан Д., Лау Г. Значение неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП) у пациентов с COVID-19: предварительный анализ. J Hepatol. 2020; 73: 451–3.
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google ученый
36.
Ван Б., Ли Р., Лу З., Хуанг Ю.Повышает ли сопутствующая патология риск пациентов с COVID-19: данные метаанализа. Старение. 2020; 12 (7): 6049–57.
CAS
PubMed
PubMed Central
Статья
Google ученый
37.
Jiao G, Jingyi O, Xueping Q, Yusheng J, Yaqiong C, Lianxiong Y, Jing C, Mingkai T, Wenxiong X, Fang Z. Инструмент для раннего прогнозирования тяжелой коронавирусной болезни 2019 (COVID-19 ): многоцентровое исследование с использованием номограммы риска в Ухане и Гуандуне.Китай, Clin Infect Dis. 2020; 71: 833–40.
Артикул
CAS
Google ученый
38.
Хуанг Дж., Ченг А., Кумар Р., Фанг Й, Чен Дж, Чжу Й, Лин С. Гипоальбуминемия предсказывает исход COVID-19 независимо от возраста и сопутствующих заболеваний. J Med Virol. 2020; 92: 2152–8.
CAS
PubMed
Статья
PubMed Central
Google ученый
39.
Кулкарни А.В., Кумар П., Теветия Х.В., Премкумар М., Араб Дж. П., Кандия Р., Талукдар Р., Шарма М., Ци Х, Рао П. Н., Редди Д. Н..Систематический обзор с метаанализом: печеночные проявления и исходы COVID-19. Алим Фармакол Терапия. 2020; 52 (4): 584–99.
CAS
Статья
Google ученый
40.
Zhang B, Zhou X, Qiu Y, Feng F, Feng J, Jia Y, Zhu H, Hu K, Liu J, Liu Z. Клинические характеристики 82 случаев смерти от COVID-19. MedRxiv. 2020; 3: 1279.
Google ученый
41.
Хуанг И, Чжоу Х, Ян Р., Сюй И, Фэн Х, Гонг П., Клинические характеристики 36 выживших с COVID-19 в Ухане, Китай.MedRxiv (2020).
42.
Fix OK, Hameed B, Fontana RJ, Kwok RM, McGuire BM, Mulligan DC, Pratt DS, Russo MW, Schilsky ML, Verna EC, Loomba R, Cohen DE, Bezerra JA, Reddy KR, Chung RT . Рекомендации по передовой клинической практике для гепатологов и поставщиков трансплантатов печени во время пандемии COVID-19: консенсусное заявление экспертной группы AASLD. Гепатология (Балтимор, Мэриленд). 2020; 72 (1): 287–304.
Сейчас для этой цели определяют уровень тропонина как более специфического маркера повреждения сердечной мышцы. Но исследование активности ЛДГ остается вспомогательным анализом при дифференциальной диагностике болевого синдрома в грудной клетке. У больных стенокардией активность фермента не изменяется, но при инфаркте миокарда начинает возрастать через 8-10 часов с максимумом в первые 24-48 часов после сердечного приступа и возвращается к норме через 10-12 дней. Повышение ЛДГ при нормальной активности АСТ через 1-2 дня после боли в грудной клетке указывает на инфаркт легкого.
д.),
Увеличение активности ЛДГ отмечается при повреждении печени, но это повышение не так велико, как повышение активности АЛТ и АСТ. Особенное повышение (в 10 раз выше верхней границы нормы) отмечают при токсическом гепатите, сопровождающемся желтухой.
Метод, основанный на рекомендациях IFCC. ЛДГ катализирует окисление лактата в пируват при щелочном рН, одновременно НАД+ восстанавливается до НАДН. Скорость возрастания оптической плотности реакционной смеси при 340 нм, отражающая увеличение концентрации НАДН, пропорциональна активности фермента в образце.
Параллельное исследование активности общей ЛДГ и α -ГБДГ может быть использовано для дифференциальной диагностики заболеваний печени и сердца: при поражении сердечной мышцы увеличение активности фермента обусловлено возрастанием ЛДГ-1 (α -ГБДГ), при поражении паренхимы печени – изоформой ЛДГ-5, активность ЛДГ-1 не увеличивается.
Скорость уменьшения оптической плотности при длине волны 340 нм пропорциональна активности фермента в образце.
Однако без соответствующей клинической картины повышение уровня этих антител не может служить диагностическим признаком, и отправлять таких пациентов на консультацию к ревматологу нецелесообразно.