Повышенный эпителий в мазке: Повышенный эпителий в мазке — Гинекология — 22.09.2013

Содержание

Микроскопическое исследование отделяемого мочеполовых органов женщин (микрофлора), 2 локализации

Это исследование, называемое также «мазок на флору», позволяет определить состав микрофлоры мочеполовых органов женщины (уретры, влагалища и цервикального канала), количество лейкоцитов, эпителия и их соотношение, количество слизи и морфологический тип бактерий, а также выявить ряд специфических возбудителей, таких как грибы рода Candida, трихомонады и гонококки.

Синонимы русские

Исследование на микробиоценоз влагалища с микроскопией, урогенитальный мазок на микрофлору.

Синонимы английские

Gram’s Stain. Bacterioscopic examination of smears (vaginal, cervical, urethral).

Метод исследования

Микроскопия.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из половых путей женщины.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Женщинам рекомендуется сдавать анализ до менструации или через 2-3 дня после ее окончания.

Общая информация об исследовании

В состав нормальной микрофлоры мочеполовых органов женщины входит около 40 видов бактерий. Доминирующими микроорганизмами у женщин репродуктивного возраста являются молочнокислые бактерии (лактобактерии), которые составляют 95-98  % всей микрофлоры влагалища. За счет продукции перекиси водорода и молочной кислоты лактобактерии подавляют размножение патогенных микроорганизмов и создают кислую реакцию среды (pH = 3,8-4,5). Остальная часть нормальной микрофлоры представлена стафилококками, коринебактериями, клебсиеллами, кишечной палочкой, гарднереллами и анаэробами (бактероидами, превотеллами, микрококками, вибрионами рода Mobilincus, энтерококками, пептококками, пептострептококками, вейлонеллами, клостридиями, эубактериями, кампилобактером, фузобактериями и др.). В небольшом количестве могут встречаться дрожжеподобные грибы рода Candida. Если лактобацилл становится меньше, нарушается баланс микрофлоры и увеличивается количество условно-патогенных микроорганизмов (стрептококков, стафилококков, кишечной палочки и т.

 д.), что может приводить к дисбиозу. Дисбиоз влагалища грозит воспалением матки и ее придатков, бесплодием, внематочной беременностью, выкидышем, рождением недоношенного ребенка. К его развитию приводит несоблюдение правил личной гигиены, гормональные нарушения (недостаток эстрогенов), нарушение обмена веществ, прием антибиотиков широкого спектра действия.

Микроскопическое исследование мазка у женщин позволяет полуколичественно оценить общую микробную обсемененность, состояние эпителия влагалища, наличие и выраженность воспаления (по лейкоцитарной реакции), состав микрофлоры, а также выявить молочницу, трихомониаз и гонорею. Этот метод является «золотым стандартом» для диагностики бактериального вагиноза (чувствительность – 100  %). Норма мазка на флору определяется следующими показателями:

  • должен присутствовать плоский 
    эпителий
    , его отсутствие может быть связано с атрофией эпителиальных клеток, с недостатком эстрогенов или избытком мужских половых гормонов,
  • количество лейкоцитов не должно превышать 15 в поле зрения, его увеличение указывает на воспалительный процесс,
  • слизь,
  • палочки (бациллы) в мазке составляют нормальную микрофлору влагалища,
  • кокки и диплококки – выявление грамотрицательных диплококков в мазке свидетельствует о гонорее,
  • «ключевые», или атипичные, клетки характерны для дисбактериоза влагалища,
  • споры или мицелий грибов свидетельствует о кандидозе (молочнице),
  • наличие подвижных бактерий в нативном мазке (трихомонад) характерно для трихомониаза,
  • ­эритроциты выявляются при кровотечениях из матки, эрозиях или новообразованиях.

Для чего используется исследование?

  • Чтобы оценить состав микрофлоры мочеполовой системы.
  • Для диагностики бактериального вагиноза.
  • Для выявления некоторых специфических инфекций, передающихся половым путем (кандидоза, трихомониаза, гонореи).

Когда назначается исследование?

  • При симптомах дисбиоза или воспалительных заболеваний органов мочеполовой системы.
  • При профилактических осмотрах.

Что означают результаты?

Референсные значения для различных видов микроорганизмов зависят от их локализации (точки взятия биологического материала).

На основании микроскопической картины выделяют 4 типа микробиоценоза влагалища.

Тип микробиоценоза

Общая информация об исследовании

Нормоценоз

Доминирование лактобацилл, отсутствие грамотрицательной микрофлоры, спор, мицелия и псевдогифов, наличие единичных лейкоцитов и «чистых» эпителиальных клеток.

Такой тип мазка у женщин является вариантом нормы.

Промежуточный

Умеренное или сниженное количество лактобацилл, наличие грамположительных кокков и грамотрицательных палочек, лейкоцитов, моноцитов, макрофагов, эпителиальных клеток. Этот тип мазка на флору часто наблюдается у здоровых женщин и редко сопровождается явными симптомами.

Дисбиоз

Незначительное количество или полное отсутствие лактобацилл, обильная полиморфная грамотрицательная и грамположительная палочковая и кокковая микрофлора, наличие «ключевых» клеток, вариабельное количество лейкоцитов, отсутствие или незавершенность фагоцитоза. Вместе с этим часто обнаруживаются гарднереллы, микоплазмы, уреаплазмы, вибрионы рода Mobiluncus, анаэробные кокки.

Вагинит

Полимикробная картина мазка с большим количеством лейкоцитов, макрофагов, эпителиальных клеток, с выраженным фагоцитозом и практически полным отсутствием лактобацилл.

При обнаружении возбудителей специфических инфекций (гонококков, трихомонад, псевдогифов споры) можно предполагать наличие гонореи, трихомониаза или кандидозного вагинита.

Что может влиять на результат?

Местное применение антисептиков, антибактериальных, противогрибковых и противозачаточных препаратов.

Влагалищные выделения и мазок в норме

Все, о чем приходится читать в письмах женщин, это об увлечении врачей лечением лейкоцитов во влагалище, потому что бытует мнение, что лейкоциты – это признак воспаления. Так ли это? Далеко не так! Лейкоцитоз играет огромнейшую роль в репродуктивной функции женщины, в том числе во время беременности. Об этом поговорим чуть позже.

Количество влагалищных выделений
Большинство женщин не знает, какими и в каком количестве должны быть влагалищные выделения в норме. Это приводит к тому, что часто они стараются добиться чуть ли не стерильности влагалища, поглощая большое количество лекарств, спринцуясь, пользуясь разными химическими растворами, гелями, «ионными» прокладками. Дискомфорт из-за выделений нередко создан искусственно как последствие применения слишком большого количества препаратов в борьбе с лейкоцитами, кандидой, уреаплазмой, кокками и палочками (о вреде спринцеваний читайте статью на эту тему).

В норме в течение суток выделяется от 1 до 4 мл влагалищной жидкости, которая в большинстве случаев белесоватая, вязкая и без неприятного запаха. Обычно, к концу дня прокладка на нижнем белье становится влажной. Цвет выделений может быть разных оттенков белого, кремового, желтого, розового.

Качество влагалищных выделений
Влагалищные выделения состоят из слизистого секрета (1), вырабатываемого железами канала шейки матки, слущенных клеток покровного эпителия стенок влагалища и шейки матки (2), микроорганизмов (3), живущих во влагалище, и влагалищного транссудата или выпота 

(4) из прилегающих кровеносных сосудов. Важно понимать, что влагалище не имеет собственных желез, вырабатывающих секрет.
В течение менструального цикла количество и качество выделений меняется (наблюдение за выделениями используется как составная часть контрацепции или, наоборот, при планировании беременности). В первой половине цикла, особенно ближе к овуляции, преобладает слизистый компонент – производное шейки матки. Перед менструацией количество выделений может быть минимальным, хотя некоторые женщины жалуются на мажущие кровянистые выделения, что может быть проявлением нормы или патологии.
Слизь шейки матки содержит также большое количество лейкоцитов, особенно в период овуляции, во второй половине лютеиновой фазы менструального цикла, но больше всего – при беременности.
Молодые женщины часто жалуются на обильные слизистые выделения – это может быть из-за наличия у них физиологической псевдоэрозии (эктопии). Такое состояние лечения не требует, но в редких случаях при выраженном дискомфорте проводится хирургическое лечение шейки матки, хотя оно и не желательно у нерожавших женщин.

От чего зависит количество выделений
От чего зависит количество выделений? Не только от дня менструального цикла, но и многих других факторов. В первую очередь, от комплекции женщины. У худых женщин, у которых не хватает жировой ткани, выделений больше, особенно при половом акте, и они более водянистые. Чтобы понять, почему у худых женщин наблюдается такое явление, важно вспомнить о значении жировой ткани в организме человека.
Жировая ткань участвует в обмене веществ, в том числе половых гормонов (поэтому у худых женщин часто наблюдаются продолжительные менструальные циклы до 40 дней и более, а также ановуляция). Она важна как депо многих питательных веществ, которые организм накапливает в стрессовой ситуации. Жировая ткань является отличной защитной прослойкой между органами и другими структурными частями организма. Она выполняет многие другие функции.

Репродуктивные органы женщины богато снабжены кровеносными сосудами, потому что природе важно обеспечить процесс размножения и вынашивания потомства. Если вспомнить анатомического размещение влагалища и матки, то спереди они соприкасаются с задней стенкой мочевого пузыря, а сзади – с передней стенкой прямой кишки. Все эти органы очень тесно взаимосвязаны, как кровоснабжением, так и нервными волокнами (иннервацией), как, например, связаны глаза, нос и горло. Резкий запах может вызвать слезотечение и дискомфорт в горле. Плач нередко сопровождается заложенностью носа и появлением обильных выделений (краснеют не только глаза, но и нос).
Точно такая же тесная взаимосвязь есть между влагалищем, мочевым пузырем и прямой кишкой. Настолько тесная, что проблема в одном органе, может повлечь за собой проблему в другом. Многие женщины знают, что при воспалении мочевого пузыря (цистите) усиливаются выделения из влагалища; дисбактериоз кишечной флоры (что чаще всего бывает из-за чрезмерного увлечения антибиотиками) практически всегда сопровождается дисбактериозом влагалища; половые инфекции часто поражают не только влагалище и шейку матки, но и уретру и анус, в первую очередь из-за особенностей строения слизистой оболочки этих органов. Интенсивный половой акт может привести к появлению цистита. Половая жизнь при запорах часто сопровождается болью в малом тазу.
Но, чтобы эти органы не прикасались слишком тесно друг к другу, природа позаботилась о защите, предохраняющей от трения, от быстрого обмена внеклеточной жидкости и распространения инфекции, а также о защите кровеносных сосудов и нервов, которыми обильно снабжена эта область тела — она «придумала» жировую прослойку.

У худых женщин, особенно высоких и тонких (модельного типа) жировая прокладка чрезвычайно тонкая. Это приводит к тому, что большее количество плазмы крови просачивается через стенку кровеносных сосудов и попадает во влагалище, формируя жидкие (почти водянистые) влагалищные выделения. Во время полового акта, когда происходит возбуждение, а также трение полового члена о стенки влагалища, усиливается кровоток в сосудах наружных и внутренних половых органов, а поэтому больше жидкой части крови выпотевает во влагалище. Такие женщины нередко жалуются, что во время полового акта у них вырабатывается столько «смазки», что она просто «хлюпает», вводя женщину в состояние стыда и дискомфорта. Помочь женщинам назначением лекарственных препаратов не просто.
У полных женщин тоже может быть повышенное количество выделений, в основном из-за застоя крови в органах малого таза. Запоры также сопровождаются нарушением микрофлоры влагалища – выделения становятся желтовато-зелеными, часто с неприятным запахом.
Усиленная физическая активность и, наоборот, малоподвижность сопровождаются повышенными выделениями. На количество выделений влияют также гигиена наружных половых органов, использование химических растворов для интимной гигиены (далеко не все интимные гели являются натуральными), синтетических гигиенических прокладок (почти все прокладки увеличивают выделения), синтетических стиральных порошков и жидкостей, ношение синтетического белья и колготок, тугих джинсов и штанов.

Методы обследования влагалищных выделений
Влагалищное содержимое можно обследовать различными методами. Наиболее распространенными являются:
• Микроскопическое исследование мазка (свежего нативного некрашеного, окрашенного) – чаще всего такое исследование проводится некачественно из-за наложения на стекло слишком большого количества выделений.
• Цитологический мазок (изучение клеток покровного эпителия) — используют как скрининг на предраковые и раковые состояния шейки матки.
• Определение кислотно-щелочного равновесия (рН) – этот вид исследования простой и информативный, но почти забыт многими врачами.
• Выделение культуры (бактериальные посевы с использование различных сред) – проводится чаще всего неправильно с загрязнением посевного материала микроорганизмами промежности и преддверия влагалища.
• Иммунологическое исследование (ПЦР и др.) – такие методы проводятся на коммерческой основе, поэтому ими начали злоупотреблять, игнорируя более дешевые методы обследования.

Микрофлора влагалища
Микрофлора влагалища представляет собой определенные виды микроорганизмов (бактерии, вирусы, грибки и др.), которые обитают во влагалище или были занесены туда разными способами (травма, инородное тело, оперативное вмешательство, половой акт, и т. д.)
Важно понимать, что область промежности – это самая грязная часть кожи человеческого тела.  При акте дефекации вместе с каловыми массами наружу выходят миллиарды микроорганизмов. Кожа вокруг анального отверстия всегда загрязнена большим количеством бактерий, так называемой, кишечной группы. Это норма жизни, даже если она сопровождается неприятным запахом и скопившимися к концу дня выделениями между ног.

Факторы, влияющие на микрофлору влагалища
Бактериальная флора влагалища женщин зависит от следующих факторов:
• Беременность (кандидоз – это физиологическая норма беременности)
• Возраст
• Гормональный уровень
• Кислотно-щелочное равновесие влагалищной среды (рН)
• Количество сексуальных партнеров
• Курение
• Менструальный цикл
• Метод контрацепции
• Наличие инфекционных заболеваний
• Наличие некоторых общих заболеваний (например, диабет)
• Прием медикаментов
• Спринцевания
• Частота половых отношений

Бактерии, живущие во влагалище
Традиционно, много лет тому назад, считалось, что основными обитателями влагалища должны быть только палочки Дедерлейна из группы лактобактерий. Но с развитием микробиологии ученые пришли к выводу, что во влагалище женщины может обитать до 100 видов микроорганизмов (в основном до 5 у одной женщины), чаще всего из условно-патогенной группы.
Условно-патогенные микроорганизмы – это бактерии, вирусы, грибки и простейшие, которые обитают в организме человека, не принося вреда, но при определенных условиях (понижение защитных сил, хронические заболевания, противораковая терапия и др.) могут привести к возникновению воспалительного процесса. Роль большинства микроорганизмов, живущих на поверхности и внутри организма человека, до сих пор не изучена до конца и не совсем понятна.
Таким образом, у более 50 % здоровых женщин такая влагалищная флора рассматривается как нормальная.

Наиболее распространенными микроорганизмами влагалищного содержимого являются следующие бактерии:
• Atopobium vaginae
• Bacteroides sp.
• Candida
• Corynebacteria
• Enterococcus faecalis
• Esherichia coli
• Lactobacillus
• Leptotrichia
• Megasphaera
• Mycoplasma
• Neisseria meningitis
• Neisseria sp.
• Proteus spp.
• Staphylococcus aureus
• Staphylococcus epidermidis
• Streptococcus mitis
• Streptococcus pneumoniae
• Streptococcus pyogenes
• Ureaplasma

Большинство из этих микроорганизмов являются представителями нормальной флоры кишечника и кожи промежности. Между врачами до сих пор идет определенный спор о том, считать ли все эти виды бактерий и других микроорганизмов нормальной или условно-патогенной флорой влагалища. Ведь они могут обитать во влагалище длительный период жизни, не вызывая заболевания.
Каждая женщина может иметь свой индивидуальный набор микроорганизмов, поэтому старые «нормы» влагалищного содержимого давно уже не используются врачами в большинстве стран мира. Определение «нормальности» флоры учитывает наличие жалоб и отсутствие признаков инфекционных заболеваний.

Динамика изменений влагалищной флоры
С рождением ребенка, его контакт с внешним миром (воздух, вода, предметы, люди) приводит к тому, что детский организм быстро заселяется разными видами бактерий, вирусов, грибков и простейших, в основном обитающих на коже промежности, ягодиц, лобка, которые в большинстве случаев совершенно безопасны для ребенка. Чаще всего это коринобактерии, стафилококки, негнойные стрептококки, кишечная палочка и частично палочками Дедерлейна (лактобактерии). Ошибочно искать у девочки в бактериальных посевах выделений и микроскопических мазках лактобактерии и ужасаться при обнаружении бактерий кишечной группы. Лактобактерии появляются во влагалище девочки с появлением менструаций.
С ростом и периодом созревания, а также под влиянием различных факторов, одни виды бактерий замещаются (вытесняются) другими видами бактерий. Даже при строгом соблюдении гигиены тела, при определенных условиях (дефекация, половой акт, прием антибиотиков) происходит постоянное попадание различных микроорганизмов во влагалище женщины. Влагалищная флора нормализуется быстро без дополнительного вмешательства, обычно в течение суток.

Лактобактерии влагалища
Долгий период считалось, что лактобактерии – это единственные «здоровые», то есть полезные, бактерии, обитающие во влагалище и нормализующие влагалищную среду. Однако позже ученые обнаружили, что 10-42% здоровых женщин не имеют лактобактерий или же их количество небольшое. Таким образом, было создано понятие «экосистемы влагалища», которая включает многие факторы, в том числе условно-патогенные микроорганизмы, для поддержания своего равновесия.
Существует около 135 видов лактобактерий, которые могут обитать во влагалище женщины. Название «лактобактерии» происходит от способности этих видов микроорганизмов превращать лактозу (сахар) в молочную кислоту. Обычно во влагалище обитает от одного до нескольких видов лактобактерий.
Все лактобактерии делят на три группы по доминирующей функции (некоторые виды могут выполнять несколько функций): (1) виды, которые вырабатывают перекись водорода — L. acidophilus, L. crispatus, L. gasseri, L.johnsonii, L. vaginalis; (2) виды, которые вырабатывают молочную кислоту— L. salivarius, L. johnsonii, L. acidophilus, L. jensenii; (3) виды, которые прикрепляются к клеткам бактерий, эпителия влагалища — L. agilis, L. jensenii, L. Johnsonii, L. ruminus.
Перекись водорода действует как разрушающий фактор непосредственно на патогенные бактерии и грибки влагалища, молочная кислота создает кислую среду, что тоже влияет губительно на бактерии, а прикрепление (адгезия) лактобактерий к патогенным микроорганизмам (кишечная палочка и другие бактерии кишечной группы) ограничивает распространение инфекции во влагалище и за его пределы.

Триада: кишечник, влагалище, мочевой пузырь Др. Елена Березовская

Лактобактерии не угнетают рост дрожжевых грибков. Они стимулируют иммунную систему организма и обеспечивают нормальное соотношение флоры влагалища, препятствуя чрезмерному росту других 20‑30 видов условно-патогенных бактерий, в норме обитающих во влагалище в небольших количествах.
В большинстве учебников и статей прошлого, посвященных вопросам женского здоровья утверждается, что доминирующими лактобактериями влагалища являются Lactobacillus acidophilus – ацидофильные лактобактерии. Однако это ошибочное утверждение, потому что многочисленные клинические исследования показали, что во влагалище чаще всего обитают следующие виды лактобатерий: L. fermentum, L. crispatus, L. jensenii и L. johnsonii. Это объясняет неэффективность применения коммерческих препаратов лактобактерий для лечения ряда инфекций влагалища и восстановления нормальной флоры – все эти препараты содержат ацидофильные лактобактерии.

Лейкоциты и репродуктивная система
Среди врачей существует немало ошибочных представлений о том, сколько белых кровяных телец (лейкоцитов) должно быть во влагалищном содержимом. Ошибки начинаются с неправильного забора исследуемого материала. Чаще всего врачи накладывают обильное количество выделений на стекло, размазывают эти выделения по поверхности стекла, но результаты таких исследований крайне неинформативны. Влагалищные мазки не должны быть обильными по консистенции, и размазывать содержимое по стеклу несколькими движениями строго не рекомендуется, так как при этом эпителиальные клетки разрушаются. Любые мазки с разных точек влагалища и шейки матки должны браться отдельными инструментами.

Лейкоциты и репродуктивная система женщины – неразделимы. Это далеко не признак воспалительного процесса, а динамический процесс, который наблюдается в организме женщин, и этот процесс полностью зависит от гормонального фона. Количество, как и вид лейкоцитов меняется в зависимости от дня менструального цикла. Физиологический лейкоцитоз наблюдается перед овуляций и во второй половине цикла, особенно перед менструацией. Во время беременности лейкоцитоз – это неотъемлемое и необходимое состояние, без которого беременность не будет протекать нормально.
Лейкоциты есть во влагалищных выделениях, так как они сформированы из просочившейся через стенку влагалище и прилегающих сосудов жидкой части крови и мигрирующих лейкоцитов. Все без исключения виды лейкоцитов могут проникать через стенку капилляров.
Также, шеечная слизь – это депо лейкоцитов, количество которых зависит от гормонального фона. Во время беременности из лейкоцитов и слизи канала шейки матки формируется плотная шеечная пробка (поэтому она белая на вид). В большинстве случаев микроскопию выделений шеечного канала проводить не рекомендуется.

Др. Елена Березовская — О лейкоцитозе

Эндометрий тоже содержит разные лейкоциты: лимфоциты Т и В, макрофаги, нейтрофилы и ряд других. В нем имеется уникальный вид лейкоцитов – маточные натуральные киллеры (uNK), которые появляются в конце лютеиновой фазы и в начале беременности. Без достаточного количества этих лейкоцитов имплантация, плацентация и развитие беременности невозможно. В отличие от других натуральных киллеров, маточные НК отличаются специфическим строением, чувствительны к гормональным колебаниям, поэтому их количество полностью зависит от уровня половых гормонов и прогестерона.
Так как в эндометрии к началу менструации наблюдается увеличение лейкоцитов, повышается количество человеческого лейкоцитарного антигена класса 1 (ЧЛА или HLA 1), что является нормой, особенно на поверхности эндометриальных стромальных клеток. Этот антиген выполняет очень важную роль. Лейкоциты мНК участвуют в процессе гибели и отторжения эндометрия и помогают в расщеплении (лизисе) отслоившихся леток — без этого менструация невозможна. Но они также могут привести к лизису базального слоя эндометрия и стромы. Однако в природе этого не происходит, потому что человеческий лейкоцитарный антиген связывается с этим видом лейкоцитов и предохраняет строму и базальный эндометрий от повреждения.
Маточный пролактин стимулирует выработку лимфоцитов.

Нейтрофилы присутствуют в тканях эндометрия в небольшом количестве почти весь менструальный цикл, но за несколько дней до начала менструации их количество значительно повышается и они доминируют весь период менструального кровотечения.
Считается, что именно быстрое понижения уровня прогестерона со второй половины лютеиновой фазы является пусковым сигналом появления большого количества лейкоцитов в репродуктивных органах.
Основные нейтрофилы матки – это полиморфноядерные лейкоциты (ПЯЛ). Во всех учебниках и публикациях можно найти, что этот вид лейкоцитов появляется в очаге воспаления. Действительно, по количеству именно этих видов лейкоцитов и их соотношению к клетках плоского эпителия во влагалищных выделениях можно заподозрить воспалительный процесс. Подсчет лейкоцитов должен проводиться в соотношении с количеством обнаруженных эпителиальных клеток. В норме соотношение составляет до 10 лейкоцитов на одну эпителиальную клетку. Но в реальности большинством постсоветских лабораторий этот показатель не определяется и не учитывается, а в результатах указано общее количество лейкоцитов в поле зрения, и подсчет грубый и неточный (например, 50-100 лейкоцитов в поле зрения).
Какова роль ПЯЛ во влагалище, полости матки и эндометрии, если воспаления на самом деле нет? Этот вид лейкоцитов участвует не только в борьбе с воспалительным процессом, поглощая (фагоцитируя) микроорганизмы, но и мертвые клетки и обрывки тканей. Во время менструации происходит гибель большого количества клеток эндометрия, также он смешивается с кровью, создавая отличную почву для размножения микроорганизмов, которые могут попадать в полость матки из влагалища. Нейтрофилы становятся санитарами, очищая поверхность участка, на котором произошло отторжение старого эндометрия от его остатков и предотвращает попадание бактерий, вирусов, грибков в ткани эндометрия и матки.

Другой вид лейкоцитов – макрофаги тоже выполняют важную роль в функции эндометрия. Они составляют до 20% всех лейкоцитов, появляющихся в матке к концу лютеиновой фазы, в том числе во влагалищных выделениях. Хотя макрофаги не имеют прогестероновых и эстрогеновых рецепторов, но их количество в эндометрии и других тканях генитального тракта зависит от уровня гормонов и дня менструального цикла. Макрофаги содержат ферменты, которые расщепляют мертвые клетки эндометрия, они также вырабатывают ряд органических веществ, важных в процессах регенерации (восстановления) тканей.

У 10 % женщин наблюдается большое количество лейкоцитов во влагалищных выделениях в течение длительного периода жизни. Лечение антибиотиками, противомикробными препаратами, спринцеваниями обычно не меняют картины мазка, поэтому большинство врачей рекомендуют наблюдать таких женщин без лечения.
Таким образом, лейкоцитоз в любой форме является очень важной стадией физиологической нормы менструального цикла женщины.

Эритроциты во влагалище
В норме в мазке выделений из влагалища могут быть единичные эритроциты. Перед менструацией и после нее количество эритроцитов может быть увеличено, поэтому исследование влагалищных выделений рекомендовано проводить после полного прекращения менструального кровотечения. При грубом взятии мазка инструментом с острыми краями повреждаются микрососуды шейки матки и влагалища, что отразится на качестве мазка, и может быть причиной большого количества эритроцитов в исследуемом материале.

Эпителиальные клетки влагалища
Стенки влагалища покрыты плоским эпителием, который постоянно обновляется. Поэтому во влагалищном содержимом должны присутствовать клетки плоского эпителия. У женщин с низким уровнем эстрогенов и высоким уровнем андрогенов количество эпителиальных клеток понижено. При большом количестве клеток плоского эпителия всегда нужно провести дополнительное обследование для исключения воспалительного процесса.

рН влагалищного содержимого
В норме у большинства женщин рН составляет 4.0-4.5. Кислотно-щелочное равновесие может меняться в зависимости от дня менструального цикла, а также под влиянием других факторов. Определение кислотно-щелочного равновесия влагалищных выделений является важным диагностическим методом в дифференциации дисбактериоза влагалища, кандидоза, трихомониаза и нормальных выделений.

Гигиена наружных половых органов
Гигиена тела – это залог здоровья, в том числе влагалища и влагалищных выделений. Когда-то в недалеком прошлом гигиена наружных половых органов почти отсутствовала. Только аристократия могла позволить себе в туалетах для женщин специальные приспособления – биде. Туалетной бумаги не было (как впрочем, длительный период не было нижнего белья), поэтому женщины подмывались после каждого мочеиспускания и акта дефекации, и вытирались полотенцами. Современные женщины предпочитают туалетную бумагу, но важно помнить, что движения руки после акта дефекации всегда должны быть от влагалища в сторону анального отверстия и межъягодичной складки кзади, а не наоборот. После мочеиспускания, наоборот, движения должны быть от влагалища к лобку.
Перед половым актом и после него необходимо подмыться теплой водой с мылом – это профилактика многих воспалительных процессов репродуктивной системы и органов малого таза.
Теме гигиены наружных половых органов будет посвящена отдельная статья.

Др. Елена Березовская — О кольпитах, цервицитах и т.д.

Поделиться ссылкой:

Почитать еще

Наука, Образование : Медицина : Гинекологический мазок : Д Нестерова : читать онлайн

Гинекологический мазок

Бактериоскопия

Лабораторный метод исследования влагалищного мазка под микроскопом — бактериоскопия — известен большинству женщин как мазок на флору, или общий мазок.

Нормальные показатели анализа представлены в таблице 75.

Плоский эпителий

Количество эпителиальных клеток, покрывающих влагалище и шейку матки, меняется в зависимости от фазы менструального цикла, а также от применяемых гормональных препаратов. В середине цикла, во время беременности и при приеме эстрогенов во влагалищном мазке эпителиальных клеток больше.

Отсутствие эпителия

Отсутствие эпителиальных клеток наблюдается при:

• недостатке эстрогенов;

• избытке мужских половых гормонов;

• атрофии эпителия.

Лейкоциты

Повышенный показатель

Повышение количества лейкоцитов наблюдается при воспалении влагалища, связанном с кольпитом, вагинитом или ЗППП.

Чем больше в мазке лейкоцитов, тем острее протекает заболевание.

Золотистый стафилококк

Повышенный показатель

Повышение количества золотистых стафилококков в мазке наблюдается при:

• воспалительном процессе во влагалище;

• эндометрите.

Палочковая флора

Это нормальная флора, то есть микроорганизмы, которые обязательно должны присутствовать в кислой среде влагалища.

Кокки

Положительный результат

Наличие в мазке кокков наблюдается при:

• гонорее;

• бактериальном вагинозе.

Гарднереллы

Положительный результат

Наличие в мазке гарднерелл наблюдается при:

• гарднереллезе;

• дисбактериозе влагалища.

«Ключевые» клетки

Положительный результат

Наличие в мазке «ключевых» клеток наблюдается при дисбактериозе влагалища.

Грибы

Положительный результат

Наличие в мазке грибов наблюдается при кандидозе (молочнице). Если в анализе обнаруживаются споры грибов, это говорит о скрытом кандидозе (бессимптомном).

Трихомонады

Положительный результат

Наличие в мазке трихомонад наблюдается при трихомониазе. Если в мазке обнаружены трихомонады, пациентке обязательно следует сдать анализ на ЗППП, поскольку трихомониаз может «прикрывать» собой гонорею, которая в этом случае протекает параллельно и при бактериоскопии не обнаруживается.

Мазок на «стерильность»

Это мазок на степень чистоты влагалища. Анализ определяет состав его содержимого, который в норме представлен кокковой микрофлорой, секретом и разными клетками эпителия.

Для исследования степени чистоты влагалища используют стерильный тампон, который вводят во влагалище на 8 часов (лучше на ночь), а затем отправляют в лабораторию.

Степень «стерильности» в результатах анализа выражается в цифрах: «1» и «2» — нормальный показатель, «3» и «4» — воспаление влагалища (кольпит).

Мазок на цитологию

Этот анализ позволяет выявить отклонения со стороны клеток шейки матки. Исследуется их количество, размеры, форма и характер расположения.

Мазок считается нормальным (отрицательным), если все клетки имеют нормальные размеры и форму, а атипичные клетки отсутствуют.

Исследование мазка на цитологию рекомендуется проводить всем женщинам старше 20 лет 1 раз в год. Если результат дважды будет отрицательным, можно повторять анализ 1 раз в 3 года.

Для описания аномального мазка используют специальные термины: дисплазия I, II и III степени и атипия. При дисплазии I степени рекомендуется пройти повторное обследование через 3–6 месяцев, поскольку такой результат может быть при недолеченном трихомониазе, хламидиозе или гонорее. При дисплазии II и III степени назначают более серьезное исследование состояния шейки матки — биопсию. При обнаружении атипии необходима консультация онколога.

Мазок на скрытые инфекции

Такой анализ позволяет выявить ЗППП, которые невозможно определить при исследовании мазка на флору. Для анализа используют метод ПЦР (полимеразная цепная реакция), при котором возбудителя инфекции определяют по его ДНК.

Нормальным показателем этого анализа может быть только отрицательный результат. Если в бланке анализа напротив возбудителя инфекции написано «обнаружено» или стоит знак «+», значит, в исследуемом материале найдена ДНК соответствующей бактерии, и человек заражен этой инфекцией.

Цитологическое исследование мазка (соскоба) с купола влагалища (при отсутствии шейки матки): исследования в лаборатории KDLmed

Цитологическое исследование, которое позволяет выявить атипичные клетки в слизистой влагалища и диагностировать рецидив рака шейки матки.

Синонимы русские

Цитология мазка с культи влагалища.

Синонимы английские

Vaginal cuff cytology.

Метод исследования

Цитологический метод.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок с внешней поверхности шейки матки, мазок с внутренней поверхности шейки матки (из цервикального канала).

Как правильно подготовиться к исследованию?

Подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Рак шейки матки (РШМ) по распространенности занимает 3-е место среди всех злокачественных опухолей у женщин (после рака молочной железы и рака толстой кишки).  Частота инвазивного рака шейки матки в мире составляет 15-25 на 100 000 женщин. Новообразования шейки матки возникают в основном в среднем возрасте (35-55 лет), редко диагностируются у женщин моложе 20 лет и в 20 % случаев выявляются после 65 лет.

5-летняя выживаемость при локализованном (местном, in situ) раке шейки матки равна 88 %, в то время как выживаемость при распространенном раке не превышает 13 %.

К факторам риска развития рака шейки матки относятся инфицирование вирусом папилломы человека (онкогенные серотипы HPV-16, HPV-18, HPV-31, HPV-33, HPV-45 и др.), курение, хламидийная или герпетическая инфекция, хронические воспалительные гинекологические заболевания, длительное применение противозачаточных препаратов, неоднократные роды, случаи рака шейки матки в семье, раннее начало половой жизни, частая смена половых партнеров, недостаточное поступление с пищей витаминов А и С, иммунодефициты и ВИЧ-инфекция.

Метод лечения зависит от распространенности процесса, вида опухоли, расположения новообразования на шейке матки, возраста женщины. При ранних стадиях рака (in situ) используют криохирургию, лазерную хирургию, клиновидное удаление части шейки матки. При распространении злокачественного процесса за пределы эпителия шейки матки выполняют более обширные операции – гистерэктомию (удаление матки), в некоторых случаях в сочетании с химио- и лучевой терапией.

После хирургического удаления шейки матки существует вероятность сохранения опухолевых клеток, способных к дальнейшему росту. В связи с этим все женщины, перенесшие операцию (гистерэктомию или экстирпацию матки) по удалению новообразований шейки матки, должны проходить регулярный цитологический контроль для своевременной диагностики и лечения онкологического заболевания (или его рецидива).

Для чего используется исследование?

  • Для цитологического контроля эффективности лечения рака матки / шейки матки.
  • Для диагностики рецидива новообразований органов малого таза.

Когда назначается исследование?

  • При наблюдении за женщинами после удаления шейки матки из-за новообразований ежегодно, 3 года подряд, затем при трехкратных отрицательных результатах каждые 2 года.

Что означают результаты?

I Количество материала

  • Материал полноценный (адекватный) – полноценным материалом считается мазок хорошего качества, содержащий достаточное количество соответствующих типов клеток.
  • Материал недостаточно полноценный (недостаточно адекватный) – скудный клеточный состав.
  • Материал неполноценный (неадекватный) – по материалу невозможно судить о наличии или отсутствии патологических изменений.

II Интерпретация результатов по наличию или отсутствию атипичных клеток.

Большое количество лейкоцитов – признак воспаления.

При подозрении на злокачественное образование необходимо тщательное дообследование.

Что может влиять на результат?

Искаженный результат может быть получен, если:

  • женщина должным образом не подготовлена к исследованию:
    • в препаратах присутствуют сперматозоиды;
    • загрязнение мазка спермицидными и антибактериальными кремами, смазкой с презервативов, гелем для УЗИ;
    • до сдачи цитологического материала проведено бимануальное исследование (загрязнение материала тальком).
  • не соблюдены условия получения материала;
  • небрежно выполнено приготовление мазка.

Важные замечания

  • Нельзя получать мазки в течение 24 часов после полового контакта, в течение 48-72 часов после использования любрикантов, раствора уксуса или Люголя, тампонов или спермицидов, спринцевания, введения во влагалище медикаментов, свечей, кремов, в том числе гелей для выполнения ультразвукового исследования.

Также рекомендуется

  • Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала на атипию
  • Антиген плоскоклеточной карциномы (SCCA)
  • Human Papillomavirus высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы), ДНК без определения типа [ПЦР]
  • CA 125 II
  • Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
  • Лейкоцитарная формула
  • Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)

Кто назначает исследование?

Гинеколог, онкогинеколог.

Литература

  • Danforth’s Obstetrics and Gynecology. 9th Ed. Lippincott Williams and Wilkins, 2003.
  • Videlefsky A, Grossl N, and others. Routine vaginal cuff smear testing in post-hysterectomy patients with benign uterine conditions: when is it indicated? J Am Board Fam Pract. 2000 Jul-Aug;13(4):233-8.
  • Новик В. И. Эпидемиология рака шейки матки, факторы риска, скрининг.
  • Материалы и рекомендации Противоракового общества России.

ЭПИТЕЛИАЛЬНЫЙ РОСТ, ВЫЗВАННЫЙ СТИМУЛЯЦИЕЙ РАЗЛИЧНЫМИ МЕТОДАМИ МАСКА, ПОКАЗАННЫЙ МИТОТИЧЕСКИМ СТАЗОМ С КОЛХИЦИНОМ | Эндокринология

Получить помощь с доступом

Институциональный доступ

Доступ к контенту с ограниченным доступом в Oxford Academic часто предоставляется посредством институциональных подписок и покупок. Если вы являетесь членом учреждения с активной учетной записью, вы можете получить доступ к контенту следующими способами:

Доступ на основе IP

Как правило, доступ предоставляется через институциональную сеть к диапазону IP-адресов. Эта аутентификация происходит автоматически, и невозможно выйти из учетной записи с проверкой подлинности IP.

Войдите через свое учреждение

Выберите этот вариант, чтобы получить удаленный доступ за пределами вашего учреждения.

Технология Shibboleth/Open Athens используется для обеспечения единого входа между веб-сайтом вашего учебного заведения и Oxford Academic.

  1. Щелкните Войти через свое учреждение.
  2. Выберите свое учреждение из предоставленного списка, после чего вы перейдете на веб-сайт вашего учреждения для входа в систему.
  3. Находясь на сайте учреждения, используйте учетные данные, предоставленные вашим учреждением. Не используйте личную учетную запись Oxford Academic.
  4. После успешного входа вы вернетесь в Oxford Academic.

Если вашего учреждения нет в списке или вы не можете войти на веб-сайт своего учреждения, обратитесь к своему библиотекарю или администратору.

Войти с помощью читательского билета

Введите номер своего читательского билета, чтобы войти в систему. Если вы не можете войти в систему, обратитесь к своему библиотекарю.

Члены общества

Многие общества предлагают своим членам доступ к своим журналам с помощью единого входа между веб-сайтом общества и Oxford Academic. Из журнала Oxford Academic:

  1. Щелкните Войти через сайт сообщества.
  2. При посещении сайта общества используйте учетные данные, предоставленные этим обществом. Не используйте личную учетную запись Oxford Academic.
  3. После успешного входа вы вернетесь в Oxford Academic.

Если у вас нет учетной записи сообщества или вы забыли свое имя пользователя или пароль, обратитесь в свое общество.

Некоторые общества используют личные аккаунты Oxford Academic для своих членов.

Личный кабинет

Личную учетную запись можно использовать для получения оповещений по электронной почте, сохранения результатов поиска, покупки контента и активации подписок.

Некоторые общества используют личные учетные записи Oxford Academic для предоставления доступа своим членам.

Институциональная администрация

Для библиотекарей и администраторов ваша личная учетная запись также предоставляет доступ к управлению институциональной учетной записью.Здесь вы найдете параметры для просмотра и активации подписок, управления институциональными настройками и параметрами доступа, доступа к статистике использования и т. д.

Просмотр ваших зарегистрированных учетных записей

Вы можете одновременно войти в свою личную учетную запись и учетную запись своего учреждения. Щелкните значок учетной записи в левом верхнем углу, чтобы просмотреть учетные записи, в которые вы вошли, и получить доступ к функциям управления учетной записью.

Выполнен вход, но нет доступа к содержимому

Oxford Academic предлагает широкий ассортимент продукции.Подписка учреждения может не распространяться на контент, к которому вы пытаетесь получить доступ. Если вы считаете, что у вас должен быть доступ к этому контенту, обратитесь к своему библиотекарю.

Очертания патологии — Нормальные и неопухолевые признаки

Цитология

Нормальные и ненепластические данные



Главный редактор: Debra L. Zynger, MD

Тема

11 мая 2021

Незначительные изменения: 11 мая 2021


Copyright : 2006-2022, Очерки патологии.com, Inc.

Поиск в PubMed : Доброкачественные цитологические признаки шейки матки


Просмотров страниц в 2021 г.: 8 851

Просмотров страниц в 2022 г. на сегодняшний день: 2 372

Цитируйте эту страницу: Рен С. Нормальные и неопухолевые результаты. Сайт PathologyOutlines.com. https://www.pathologyoutlines.com/topic/cervixcytologybenignfeatures.html. По состоянию на 25 марта 2022 г.

Определение / общее

  • Нормальные и неопухолевые результаты в цервикальных компонентах мазка Папаниколау для рутинного скрининга на рак шейки матки
  • Препараты: обычные и на жидкой основе (ThinPrep и SurePath)

Основные характеристики

  • Нормальные клеточные элементы:
    • Плоскоклеточные клетки:
      • Поверхностные клетки
      • Промежуточные элементы
      • парабазальные и базальные клетки
    • Эндоцервикальные клетки, клетки эндометрия и клетки нижнего сегмента матки
  • Неопухолевые признаки:
    • Вариации, реактивные изменения и воспалительные клетки

Код МКБ

  • МКБ-10: Z01.419 — явка на гинекологический осмотр (общий) (плановый) без отклонений от нормы

Цитология — норма

  • Плоскоклеточные клетки: эктоцервикальный многослойный эпителий
    • Поверхностные клетки:
      • Внешний слой
      • Небольшое сильно конденсированное/пикнотическое ядро
      • Обильная, обычно эозинофильная цитоплазма
    • Промежуточные ячейки:
      • Средний слой
      • Более крупное ядро ​​с мелкозернистым хроматином и часто с продольной бороздкой
      • Обильная цитоплазма
    • Парабазальные и базальные клетки:
      • Также называемые незрелыми плоскоклеточными метапластическими клетками
      • Наименее зрелые клетки
      • Глубокий слой
      • Ядра крупнее промежуточных клеток
      • Скудная цитоплазма, более зернистая и плотная
      • Высокое ядерно-цитоплазматическое отношение
      • Признак атрофии:
        • Состояния с низким уровнем эстрогенов: предменархе, послеродовой период, постменопауза, синдром Тернера и постоофорэктомия
  • Эндоцервикальные клетки:
    • Штакетник или сотовая конфигурация
    • Железистые клетки, продуцирующие муцин, с полярностью, ядрами на одном конце и слизью на противоположном конце
    • Ядро немного крупнее ядра промежуточной клетки
    • Ядро с мелкозернистым и ровным хроматином и мелкими ядрышками
    • Вакуолизированная или зернистая цитоплазма
  • Клетки эндометрия и клетки нижнего сегмента матки:
    • Железистые клетки, плотные скопления или изолированные
    • Меньше эндоцервикальных клеток
    • Ядро равно или немного меньше ядра промежуточной клетки, плотный гетерогенный хроматин
    • скудная цитоплазма, плотная или вакуолизированная
    • Исход: отслоившиеся плотные скопления клеток стромы эндометрия с окружающим слоем железистого эпителия

Цитология — неопухолевые данные

  • Варианты:
    • Мягкое ядерное расширение
    • Плоскоклеточная метаплазия: замещение эндоцервикальных клеток
      • Стимулированные травмой, инфекцией или воспалением
      • Спектр морфологических изменений
      • Незрелые парабазоподобные клетки
      • Промежуточные/поверхностные клетки, подобные плоскоклеточным клеткам
    • Гиперкератоз:
      • безъядерные зрелые полигональные плоскоклеточные клетки
      • Пустые пространства или призрачные ядра
    • Паракератоз:
      • Миниатюрные поверхностные плоскоклеточные клетки с плотной эозинофильной цитоплазмой
      • Мелкие и плотные ядра
    • Тубальная метаплазия (Diagn Cytopathol 1993; 9:98):
      • Замена эндоцервикального эпителия фаллопиевым трубчатым эпителием с ресничками и концевой перемычкой
    • Изменения, связанные с беременностью:
      • Ладьевидные клетки:
        • Вариант промежуточных ячеек в виде лодки
        • Неполное созревание плоского эпителия, связанное с беременностью, послеродовым периодом, использованием противозачаточных средств, андрогенной атрофией и эстрогенами у мужчин (Diagn Cytopathol 2000;23:161, Cancer 2002;96:74)
        • Эллипсовидные (лодочкообразные) плоскоклеточные эпителиальные клетки с цианофильной/эозинофильной цитоплазмой, обусловленной внутрицитоплазматическим гликогеном (золотым, рефрактильным и зернистым)
        • Эксцентрические ядра и утолщенные складчатые границы клеток
        • Может образовывать плотные скопления
      • Децидуальные клетки (Diagn Cytopathol 2013;41:886):
        • Присутствие при беременности, в послеродовом периоде, оральные контрацептивы и внутриматочные спирали, высвобождающие прогестин (ВМС)
        • Полученный из гормонально стимулированной эндоцервикальной или эндометриальной стромы, содержащей большое количество гликогена и гликопротеина
        • Единичные и редко небольшие скопления размером со зрелые плоскоклеточные клетки
        • Нечетко очерченная цитоплазма обильная, зернистая или мелковакуолизированная
        • Ядра с выраженными базофильными ядрышками, мелкозернистым, равномерно распределенным хроматином и гладкой мембраной
      • Цитотрофобласт и синцитиотрофобласт:
        • Цитотрофобластические клетки:
          • Полученный из плаценты на поздних сроках беременности и в послеродовой период
          • Обычно одиночные клетки, иногда в небольших скоплениях
          • Может напоминать мелкие плоскоклеточные метапластические или эндометриальные клетки, а также плоскоклеточные клетки внутриэпителиального поражения высокой степени злокачественности
          • Мелкие клетки с увеличенными ядрами, высоким соотношением ядер и цитоплазмы, гиперхромией с равномерным распределением хроматина
          • Скудная плотная цитоплазма с заметными вакуолями
        • Синцитиотрофобластические клетки:
          • Полученный путем слияния клеток цитотрофобласта на поздних сроках беременности и в послеродовой период
          • Крупные многоядерные клетки, содержащие до 50 и более ядер в центре
          • Нормальные хроматические ядра, равномерное распределение хроматина и неправильные ядерные мембраны
          • Сужение/хвост зернистой цитоплазмы на одном конце клетки
      • Реакция Ариаса-Стелла (Diagn Cytopathol 1996;14:349):
        • В связи с беременностью или иногда у небеременных лиц с гормональной стимуляцией
        • Реактивные изменения, вовлекающие эндоцервикальные или эндометриальные железистые клетки по отдельности или группами на чистом фоне
        • Крупные плеоморфные ядра с неправильным контуром, хроматин от зернистого до размытого, множественные заметные ядрышки, отсутствие или очень редкие митотические фигуры
        • Цитоплазма вариабельная, обильная, секреторная
  • Реактивные изменения. ):
    • Атрофия:
      • Связанный с отсутствием гормональной стимуляции тонкий эпителий, состоящий из незрелых базальных/парабазальных клеток
      • Плоские монослойные клетки с сохраненной ядерной полярностью и небольшим перекрытием ядер
      • Слегка повышенное ядерно-цитоплазматическое отношение, голые ядра, умеренная гиперхромия и удлиненные ядра, равномерно распределенный хроматин и гладкий контур ядра
      • Синие капли
      • Псевдопаракератоз: дегенерированные оранжефильные эозинофильные парабазальные клетки с ядерным пикнозом
    • Восстановление/регенерация при воспалении:
      • Увеличенные сплоченные листы ячеек с архитектурой «косяк рыбы»
      • Вариабельное увеличение ядер, не перекрывающееся, может быть двуядерным или многоядерным
      • Гладкий контур ядра, везикулярные и гиперхроматические ядра, равномерно распределенный хроматин, выступающие ядрышки или голые ядра (потеря цитоплазмы)
      • Цитоплазма с полихромазией, вакуолизацией, перинуклеарными ореолами и четко определенными цитоплазматическими границами
      • «Грязный» фон с воспалительными клетками, зернистым дебрисом и фибрином (Arch Pathol Lab Med 2001; 125:134)
    • Эффект излучения:
      • Заметно увеличенные клетки, могут иметь причудливую форму, без увеличения ядерно-цитоплазматического отношения
      • Вариабельный размер ядер, распространенная двуядерность или многоядерность, дегенеративные изменения ядер с бледностью ядер, сморщиванием или нечеткостью хроматина и ядерной васкуляризацией, ядрышками
      • Цитоплазматическая васкуляризация (самый ранний эффект), полихроматические и внутрицитоплазматические полиморфноядерные лейкоциты
    • Реактивные изменения при внутриматочной контрацепции:
      • Реактивные эндометриальные или эндоцервикальные столбчатые клетки, отслоившиеся поодиночке или в скоплениях на чистом фоне
      • Цитоплазма с крупными вакуолями, смещающими ядро
      • Дегенерированные ядра с морщинистым хроматином и растрескиванием, выступающими ядрышками
      • Обызвествления могут напоминать тела псаммомы
      • Организмы, подобные Actinomyces , присутствуют в 25% случаев
    • Перименопаузальные (PM) клетки:
      • Плоскоклеточные клетки у женщин в перименопаузе
      • Значительная причина гипердиагностики атипичных плоскоклеточных клеток (ASC) у женщин в возрасте 40–55 лет может быть частично связана с артефактом сушки воздухом и тонкими атрофическими изменениями (Cancer 2001;93:100, Am J Clin Pathol 2005;124:58). )
      • Плоскоклеточные клетки с увеличенными, гладкими, мягкими ядрами, без гипохромии
      • В ранней менопаузе наблюдается промежуточный характер созревания клеток (DeMay: Пап-тест, 1-е издание, 2005 г.)
    • Маленькие синие клетки (Nayar: The Bethesda System for Reporting Cervical Cytology, 3-е издание, 2015 г.):
      • Имитация отслоившихся клеток эндометрия, увеличение с возрастом
      • Скопления голых ядер, вероятно, происходящие из парабазальных плоскоклеточных или резервных клеток
      • Некоторый рыхлый контур ядра, равномерно распределенный зернистый хроматин, иногда плесень
  • Воспалительные клетки:
    • Присутствует в различных условиях
    • Нейтрофилы, лимфоциты, плазматические клетки и гистиоциты
  • Артефакт:
    • Тело Барра: темное тело, прикрепленное к ядерной мембране
    • Синие капли: темно-синие, округлые, аморфные массы
      • Конденсированная слизь, дегенерированные голые ядра или преципитация гематоксилина
      • У женщин в постменопаузе представляют собой парабазальные/промежуточные плоскоклеточные клетки с различной степенью дегенерации (Acta Cytol 2000;44:547)
      • Может иметь вид нити жемчуга на ThinPrep при постменопаузальной атрофии (Diagn Cytopathol 2010;38:233)
    • Кукурузные хлопья:
      • Коричневый артефакт из пузырьков воздуха, попавших в поверхностные плоскоклеточные клетки, что приводит к затемнению ядер
      • Чаще встречается на обычных, чем на жидких препаратах
      • Это можно исправить, вернув предметные стекла через ксилол и спирт в воду, а затем закрепив и восстановив скольжение.
    • Артефакт дегенерации/высыхания воздуха:
      • Изменения дегенеративного типа из-за задержки переноса клеток на предметное стекло, воспаления или атрофии
      • Потеря цитоплазмы и поедание молью с вакуолизацией
      • Хроматин комковатый, мутный, нечеткий или нечеткий
      • Хроматиновый ободок имеет различную толщину и неправильные контуры, но без острых углов злокачественного новообразования

Цитологические изображения


Предоставлено Shuyue Ren, M.Д., к.т.н.

Плоскоклеточные клетки, поверхностные

Плоскоклеточные клетки, промежуточные

Плоскоклеточные, парабазальные и базальные клетки

Эндоцервикальные железистые клетки

Клетки эндометрия

Клетки эндометрия: исход


Плоскоклеточные клетки: легкое увеличение

Гиперкератоз

Паракератоз

Трубная метаплазия

Плоскоклеточная метаплазия

Нейтрофилы


Обильная кровь

Статус железистых клеток после гистерэктомии

Реактивные изменения
связанные с
воспалением

Отрицательные красители

  • Доброкачественные плоскоклеточные клетки: p16

Образец отчета о патологии

  • Соответствие образца:
    • Удовлетворительно для оценки; присутствуют эндоцервикальные клетки / компонент зоны трансформации
  • Общая классификация:
    • Отрицательный результат на внутриэпителиальное поражение или злокачественное новообразование

Дополнительные ссылки

  • Модель: диагностическая цитопатология шейки матки, 2-е издание, 1978 г. , Nayar: Система Bethesda для отчетности по цитологии шейки матки, 3-е издание, 2015 г., Cibas: Цитология — диагностические принципы и клинические корреляты, 4-е издание, 2014 г., ДеМей: Искусство и наука цитопатологии, 2-е издание, 2011 г.

Вопрос в стиле обзора №1

35-летняя женщина приходит на плановый гинекологический осмотр, проводится мазок Папаниколау.Какие плоскоклеточные клетки преобладают?
  1. Базальные клетки
  2. Промежуточные элементы
  3. Парабазальные клетки
  4. Клетки поверхностного слоя

Вопрос № 2 в стиле обзора совета директоров


Женщина 40 лет пришла на плановый гинекологический осмотр с мазком по Папаниколау. Отмечается плотное скопление клеток. К 2014 Bethesda System, как вы будете сообщать о кластере ячеек?
  1. Эндоцервикальные клетки, не сообщалось
  2. Эндоцервикальные клетки, зарегистрированные
  3. Клетки эксфолиированного эндометрия, не сообщалось
  4. Клетки эксфолиированного эндометрия, зарегистрированные

Ответ № 2 в стиле обзора совета директоров

C. Клетки эксфолиированного эндометрия, не сообщалось. К 2014 г. система Bethesda должна сообщать о слущивающихся клетках эндометрия у женщин в возрасте 45 лет и старше.

комментарий здесь

Ссылка: Нормальные и неопухолевые результаты

Back to top

Влияние уксусной кислоты на мазок Папаниколау при диспластическом поражении

Реферат

История вопроса: Профилактика рака шейки матки осуществляется путем взятия мазка Папаниколау. Правильное выполнение мазка имеет решающее значение, так как неправильный мазок может привести к гиподиагностике.Вторым средством профилактики рака шейки матки является визуальный осмотр шейки матки уксусной кислотой, при этом нередко сочетаются оба метода. Мы исследовали, влияет ли применение уксусной кислоты на мазок Папаниколау. Пациенты и методы. Всего было проспективно включено 100 пациентов с дисплазией; Мазки Папаниколау были получены до и после применения уксусной кислоты. Результаты. Мы наблюдали изменение результата мазка Папаниколау после применения уксусной кислоты у 41%. Однако эти изменения не привели к тому, что диспластический случай был классифицирован как нормальный мазок или наоборот.Заключение. Применение уксусной кислоты в зоне трансформации шейки матки может усиливать изменения мазка Папаниколау при дисплазии, однако эти изменения затрагивают подгруппы дисплазии и, таким образом, не меняют тактику лечения.

Рак шейки матки является причиной примерно 275 000 смертей в год во всем мире (1). Поскольку 85% из примерно 530 000 ежегодно диагностируемых случаев рака шейки матки приходится на развивающиеся страны (2), необходимо делать упор на дешевые методы скрининга с высокой чувствительностью (3).

После введения специальных программ скрининга во многих странах заболеваемость инвазивным раком шейки матки значительно снизилась, а смертность от рака шейки матки снизилась на 40–90% около десяти лет назад (3–6). В США в 2005 г. 98% женщин сообщили, что когда-либо сдавали мазок Папаниколау, 90% сообщили, что недавно сдавали мазок Папаниколау (в течение трех лет), и 84% придерживались скрининга Целевой группы профилактических служб США (USPSTF) (7) . В промышленно развитых странах скрининг проводится путем индивидуального сочетания визуального осмотра с уксусной кислотой (VIA), цитологического исследования, гистологии, кольпоскопии и тестов на вирус папилломы человека (ВПЧ) (8, 9).В частности, особое внимание следует уделить VIA из-за его высокой чувствительности по сравнению с мазком по Папаниколау (10), цитологией (11) и кольпоскопией (8, 12). Тест Папаниколау имеет низкую чувствительность, но высокую специфичность, в то время как методы визуального обнаружения обладают высокой чувствительностью, а также являются более дешевыми (13-15). Известный метод цитологической диагностики был впервые описан в 1942 г. Джорджем Папаниколау (16), который вскоре применил его для диагностики дисплазии матки и рака (17) и, таким образом, стал пионером вторичной профилактики рака.В 1971 году в Германии был введен так называемый метод мазка Папаниколау для диагностики дисплазии шейки матки как процедура, оплачиваемая больничными кассами один раз в год для женщин старше 19 лет в Германии. Среднегодовой уровень охвата в Германии составляет около 50%, а с учетом 3-летнего интервала, который составляет обычную последовательность скрининга во многих других европейских странах, охват достигает около 80% (18). Но, несмотря на стандартизированные методы скрининга, профилактическое вмешательство и короткие интервалы между обследованиями, в Германии один из самых высоких показателей заболеваемости раком шейки матки в Западной Европе (19).Таким образом, необходимо приложить значительные усилия для оптимизации методов скрининга. Часто кольпоскоп используется для оценки зоны трансформации, непосредственного взятия мазка и дифференциации поражения от нормального эпителия (12). Сегодня даже используются эксперименты с автоматизированным анализом изображений цифровой кольпоскопии для выявления неоплазии шейки матки (15, 20). Система узкоспектральной визуализации (NBI), используемая в эндоскопии, может использоваться для получения высококонтрастных изображений сосудов (21). Исследования в развивающихся странах показали, что VIA без кольпоскопии или даже без цитологического исследования дает удовлетворительные результаты (22). В нашей больнице результаты кольпоскопии по-прежнему интерпретируются врачом. Кольпоскопическое исследование обычно включает пробу с уксусной кислотой и иногда дополнительно раствор Люголя. Незрелый метапластический и диспластический плоский эпителий шейки матки белеет после применения во время осмотра уксусной кислоты. Процесс отбеливания происходит визуально в течение нескольких минут и субъективно помогает отличить диспластическую ткань от нормальной. Уксусная кислота приводит к белому эпителию, если присутствует повышенное отношение ядерного материала к объему цитоплазмы.Уксусная кислота оказывает обезвоживающее действие на клетки и усиливает ядерно-цитоплазматическое соотношение. Таким образом, области с незначительно повышенным ядерно-цитоплазматическим отношением будут выделяться сильнее. Уксусная кислота также обладает муколитическим действием и способствует очистке шейки матки. Использование уксусной кислоты обсуждалось как возможное влияние на результаты мазка Папаниколау: Griffiths et al. выдвинули идею о том, что диагностические эпителиальные клетки могут быть удалены или повреждены при соскобе с помощью устройства для взятия проб, при вагинальном пальцевом исследовании или в результате аппликации уксусной кислоты перед кольпоскопическим исследованием (23).Недавно опубликованное исследование показало, что последовательность применения кислоты и взятия мазка у пациентов без диспластических заболеваний не изменила окончательный результат (24).

Оценка шейки матки может быть ограничена, если шейка загрязнена e.g. с кровью. Это часто наблюдается при выполнении кольпоскопии после взятия мазка Папаниколау. Однако в процедурах скрининга отсутствуют стандартные методические указания, касающиеся последовательности нанесения уксусной кислоты и взятия цитологического материала.В настоящем исследовании изучалось, изменяется ли диспластический мазок Папаниколау (класс III, IIID, IV и V) (Bethesda коррелирует с плоскоклеточным внутриэпителиальным поражением низкой степени, LGSIL и внутриэпителиальным поражением высокой степени, HGSIL) под действием уксусной кислоты.

Пациенты и методы

В период с сентября 2009 г. по май 2010 г. 100 пациентов с дисплазией, направленных на нашу специальную консультацию по дисплазии, были проспективно включены в это исследование. Протокол исследования был одобрен местным наблюдательным советом (09-141).В исследовании участвовали только пациенты, предоставившие письменное информированное согласие. У каждой пациентки собирали анамнез и последовательно визуализировали шейку матки с помощью двустворчатого зеркала. Затем была проведена кольпоскопия. Определяли зону трансформации и брали мазок по Папаниколау с помощью цитощетки. Затем на зону трансформации наносили 5% раствор уксусной кислоты. Снова была проведена кольпоскопия и через 30 секунд был взят второй мазок Папаниколау. Все мазки и кольпоскопические исследования были выполнены одним и тем же лицом.Два полученных мазка фиксировали непосредственно. После окрашивания их осматривал опытный цитолог, который анализирует всю гинекологическую цитологию в нашей больнице. Мазки были слепыми, и цитолог не знал, в каком порядке были взяты соответствующие мазки. Мазки были классифицированы в соответствии с Мюнхенской номенклатурой II (25). У 92 пациентов образец ткани был взят из зоны трансформации при обнаружении подозрительного участка.

Статистика. Данные (баллы до и после применения кислоты) представлены в виде частот. По результатам гистологического исследования соответствующие отношения (истинно-положительные, ложно-отрицательные и т. д. .) были рассчитаны как меры точности. Все статистические анализы проводились с помощью SAS (SAS Institute Inc., Северная Каролина, США, версия 9.2, 12 июля 2011 г.).

Таблица I.

Изменение качества мазка после применения уксусной кислоты.

Результаты

Обследовано 100 больных, выполнено 200 мазков.Медиана возраста пациентов составила 33,6 года (от 19,8 до 74,5 лет). У всех больных ранее выявленная дисплазия подтвердилась в мазке. У 41 пациента (41%) степень Папаниколау в мазке Папаниколау изменилась после применения уксусной кислоты (табл. 1). В пяти случаях она изменилась с худшей на лучшую степень дисплазии (с ПАП IVa на ПАП IIID), у девяти пациентов с лучшей на худшую степень (с ПАП IIID на ПАП IVa) (табл. 2). У восьми пациентов результат мазка Папаниколау изменился с ясной умеренной дисплазии (PAP IIID) на неясную степень (PAP III).У 18 пациентов он изменился с неустановленной степени ПАП III на диспластическую ПАП IIID; у одного пациента от PAP III до IVa. Класс PAP III (3) по Мюнхенской номенклатуре II означает, что клетки дегенерированы или изменены инфекцией. Однозначное утверждение о дисплазии для этого класса невозможно и поэтому обычно рекомендуется повторить мазок в течение двух недель или получить ткань для гистологического исследования. Мы дополнительно представляем образцы тканей, полученные нами от 92 пациентов. Гистологические результаты с соответствующими мазками показаны в Таблице III.У 29 пациентов после биопсии дисплазии обнаружено не было. Результатами были инфекция, остроконечные кондиломы или нормальная ткань без изменений. Таблица IV демонстрирует соотношение точности мазков и гистологических результатов.

Обсуждение

Рак шейки матки является второй наиболее распространенной женской опухолью в мире, и его заболеваемость непропорционально высока (> 80%) в развивающихся странах. В Соединенных Штатах, где мазок Папаниколау снизил ежегодную заболеваемость примерно до 11 000 случаев рака шейки матки, сообщается, что > 60% случаев происходят среди малообеспеченных с медицинской точки зрения групп населения как часть комплекса заболеваний, связанных с бедностью, расовой/этнической принадлежностью и /или различия в состоянии здоровья (26).Таким образом, Стратегии профилактики требуют низких затрат, осуществимости и эффективности одновременно. Цитология представляет собой экономичный метод вторичной профилактики. Поэтому ложноотрицательные результаты мазка Папаниколау для раннего выявления заболевания должны быть как можно меньше. И цервикальная интраэпителиальная неоплазия I степени (CIN I) (легкая дисплазия), и поражения, вызванные вирусом папилломы человека (ВПЧ), группируются вместе как плоскоклеточные интраэпителиальные поражения низкой степени (LGSIL), в то время как умеренная и тяжелая дисплазия (CIN II и III) относятся к высокой степени. категория плоскоклеточного внутриэпителиального поражения (HGSIL).Атипичные плоскоклеточные клетки неопределенного значения (ASCUS) и атипичные железистые клетки неопределенного значения (AGCUS) нуждаются в дальнейшей квалификации в отношении того, способствуют ли они реактивному или неопластическому процессу (27). В большинстве случаев цитологические результаты по Мюнхенской номенклатуре II соответствуют аналогичным гистопатологическим данным. PAP II плюс инфекция ВПЧ соответствует LGSIL, PAP IIw соответствует ASCUS, соответственно AGCUS при наличии инфекции HPV, PAP IIID и PAP IV соответствуют HGSIL.Для PAP III нет аналога, что означает, что клетки дегенерируют или изменяются в результате инфекции. Констатация дисплазии для этого класса невозможна, поэтому обычно рекомендуется повторить мазок в течение двух недель или получить ткань для гистологического исследования (28). Согласно индивидуальному мазку Папаниколау и анамнезу пациента, рекомендации, основанные на системе Bethesda, предлагают определенные процедуры, например. либо подождать и посмотреть с осмотрами через определенные промежутки времени, либо провести гистопатологическую диагностическую оценку путем конизации шейки матки (27, 29).Таким образом, неправильная интерпретация мазка по Папаниколау из-за технических отклонений, может привести к повторным операциям или неадекватной терапии. Ложноотрицательные результаты мазка Папаниколау можно объяснить несколькими факторами. Среди переменных есть ошибки выборки, например. сбор образцов клеток и ошибки при переносе клеток на предметные стекла, лабораторные ошибки, например. ошибок при окрашивании гематоксилином и ошибок интерпретации, напр. ошибок в индивидуальной интерпретации цитологом (30).Значительное количество ложноотрицательных мазков Папаниколау может быть получено при использовании традиционной методики Папаниколау, в основном из-за ошибок при отборе проб. Совсем недавно использование жидкостных технологий, таких как ThinPrep и AutoCyte Prep, приобрело популярность, отчасти из-за данных, свидетельствующих о снижении частоты неадекватных мазков (31–32). Уксусная кислота оказывает обезвоживающее действие на клетки и усиливает ядерно-цитоплазматическое соотношение. Таким образом, области с незначительно повышенным ядерно-цитоплазматическим отношением будут лучше выделяться при кольпоскопическом исследовании.В этих изменениях макроскопической картины и состоит принцип ВИА. Таким образом, мы предположили, что может быть изменение микроскопической картины, т.е. в мазке Папаниколау из-за изменений клеточной архитектуры и проблем с интерпретацией мазка из-за потери или повреждения клеток. Гриффитс и др. указали на возможные преимущества взятия образцов мазка после кольпоскопии и аппликации уксусной кислоты: во-первых, предотвращение возможного кровотечения, вызванного соскобом с помощью устройства для взятия проб, во-вторых, предотвращение потери эпителиальных клеток и, в-третьих, взятие цитологических образцов точно в местах подозрительных на ацетобелый очаг, выявленных при кольпоскопии (23). ).Авторы обнаружили повышенный уровень ложноотрицательных результатов в мазках после введения уксусной кислоты — 53% по сравнению с 16% в мазках до введения уксусной кислоты. По этим причинам важно знать возможное влияние на цитологический результат. Другие агенты, используемые в ходе кольпоскопического исследования, были исследованы, поскольку считается, что они мешают результатам Пап-теста. Имеются доказательства уровня I, что умеренное смазывание внешней поверхности зеркала не ухудшает цитологическую и инфекционную оценку шейки матки (33).Мы продемонстрировали, что предшествующее лечение уксусной кислотой не влияет на недиспластические мазки Папаниколау (24). В настоящем исследовании 41% всех мазков Папаниколау были явно изменены после применения уксусной кислоты. Несмотря на то, что результаты не были значительными, этот коэффициент поразительности требует дальнейшего анализа. В настоящем исследовании были обнаружены заметные мазки Папаниколау независимо от применения уксусной кислоты. Мазки Папаниколау, показывающие LGSIL или HGSIL, не были заменены уксусной кислотой на нормальные мазки Папаниколау. Таким образом, чувствительность цитологии не изменялась при предварительном применении уксусной кислоты. Принимая во внимание результаты мазков Папаниколау и их конкретные диагностические и терапевтические последствия, можно наблюдать изменения в отношении PAP III, PAP IIID и PAP IVa Мюнхенской номенклатуры. Результат PAP IIID должен быть уточнен через интервал в три месяца, в то время как результат PAP IVa должен быть подвергнут непосредственному гистологическому исследованию, т.е. следует провести биопсию или конизацию. В настоящем исследовании мы считали соответствующий прогностически худший мазок достоверным результатом. Таким образом, когда PAP IIID стал PAP IVa после применения уксусной кислоты и наоборот , был получен гистологический образец.Однако, когда PAP IIID и PAP IVa транскрибируются в классификацию Bethesda, оба становятся HGSIL. Таким образом, не было бы никаких изменений в диагностической процедуре или терапии, если бы применялась классификация Bethesda (28). С другой стороны, мы предположили, что применение уксусной кислоты может затруднить анализ мазка и его отнесение патологоанатома к определенному классу Мюнхенской номенклатуры. Таким образом, доля PAP III, т.е. Ожидалось, что мазки , которые вызывают подозрение, но не поддаются четкому анализу из-за разрушающих факторов, таких как инфекции или менструальная кровь, после применения уксусной кислоты будут повышены по сравнению с нативными мазками.Однако только восемь мазков стали ПАП III, все они были нативными ПАП IIID. Ни PAP II, ни PAP IVa не были заменены на PAP III. Интересно, что, напротив, 20 нативных мазков PAP III были изменены на PAP IIID после применения уксусной кислоты, , например. после применения уксусной кислоты оценка может быть даже лучше. Тем не менее, результаты нашего исследования не являются статистически значимыми, и необходимо провести дальнейшее исследование, чтобы подтвердить, что существует лучшая оценка мазков Папаниколау после применения уксусной кислоты по сравнению с нативными мазками.В общей сложности 23 (25,8%) из 89 гистологических образцов были недиспластической тканью, хотя мазки Папаниколау указывали на дисплазию (независимо от использования уксусной кислоты). Этот результат согласуется с исследованием Szurkus et al. , который выполнил иссечение петли без предварительной биопсии (34). Тем не менее, мы должны критически оценить, были ли образцы ткани взяты из правильной области зоны трансформации шейки матки у этих пациентов. Всем этим пациентам было предложено вернуться для повторного кольпоскопического обследования в течение трех месяцев.Что касается наших результатов, представленных в таблице IV, все мазки коллектива были диспластическими в соответствии с критериями отбора. Таким образом, все диспластические мазки с соответствующими недиспластическими гистологическими результатами в образцах тканей были ложноположительными. Однако эти данные ложноположительных результатов нельзя интерпретировать как количественные данные о корреляции дисплазии в мазках и биоптатах, как конечную точку исследования, направленного на разные доказательства. Очевидное свидетельство связано с критериями отбора и не отражает какой-либо дисквалификации мазка Папаниколау как установленного диагностического метода.

Таблица II.

Изменение мазка после аппликации уксусной кислоты (подгруппы).

Таблица 3.

Гистологические результаты и соответствующий результат мазка.

Таблица 4.

Гистологические результаты и коэффициенты точности.

Заключение

Вторичная профилактика рака шейки матки в медицинской практике осуществляется путем получения цитологических мазков из наружного зева шейки матки, мазка Папаниколау. В Германии обследование проводится один раз в год при незаметном результате, а мазок Папаниколау классифицируется в соответствии с Мюнхенской номенклатурой II.В случае аномального мазка Папаниколау пациента следует направить на специальную диспластическую консультацию, где проводится кольпоскопия и, при необходимости, берется образец ткани. Поскольку результат мазка по Папаниколау служит основой для дальнейших диагностических процедур или терапии, требуется высокая методическая чувствительность. Применение уксусной кислоты представляет собой важный шаг в диагностическом подходе при проведении кольпоскопии VIA. Целью настоящего исследования было выяснить, изменяет ли применение уксусной кислоты результат мазка Папаниколау или нет.Мы уже продемонстрировали, что уксусная кислота не влияет на недиспластические мазки Папаниколау (24). В настоящем исследовании мы наблюдали изменение результата мазка Папаниколау после уксусной кислоты на 41%. Однако эти изменения не изменили диспластический мазок Папаниколау на нормальный результат мазка Папаниколау или , наоборот . Изменения коснулись подклассов (Мюнхнерской номенклатуры II) HGSIL по классификации Bethesda. После применения уксусной кислоты не было ухудшения оценки, еще меньше было мазков, классифицированных как ПАП III (нечеткая степень).Последовательность взятия образца и VIA, по-видимому, не влияет на диагностические и терапевтические процедуры, основанные на результатах мазка Папаниколау. В заключение следует отметить, что нанесение разбавленной уксусной кислоты на шейку матки не способствует систематической неправильной интерпретации мазка Папаниколау и не влияет на диагностическую точность мазка по сравнению с соответствующими гистологическими данными. Необходимо провести дальнейший анализ, чтобы оценить, следует ли проводить VIA даже до взятия мазка, чтобы получить адекватные образцы мазка.

  • Получено 30 декабря 2012 г.
  • Пересмотр получено 2 февраля 2013 г.
  • Принято 4 февраля 2013 г.

Аномальный мазок Папаниколау Статья

[2]

Курман Р.Дж., Хенсон Д.Е., Хербст А.Л., Ноллер К.Л., Шиффман М.Х., Временные рекомендации по лечению аномальной цитологии шейки матки.Семинар Национального института рака 1992 года. ДЖАМА. 15 июня 1994 г .; [PubMed PMID: 8196145]

[3]

Сигел Р. Л., Миллер К.Д., Джемаль А., Статистика рака, 2019. CA: онкологический журнал для клиницистов. 2019 янв; [PubMed PMID: 30620402]

[4]

Sørbye SW, Suhrke P, Revå BW, Berland J, Maurseth RJ, Al-Shibli K, Точность цитологии шейки матки: сравнение диагнозов 100 мазков Папаниколау, прочитанных четырьмя патологоанатомами в трех больницах Норвегии.Клиническая патология БМК. 2017; [PubMed PMID: 28860942]

[5]

Кунми С., Бычков А., Шуангшоти С., Бхуммичитра К., Химахун В., Каралак А., Рангдаенг С. Ложноотрицательный показатель теста Папаниколау: национальное исследование Тайского общества цитологии. Акта цитологическая. 2017; [PubMed PMID: 28738387]

[6]

Castillo M, Astudillo A, Clavero O, Velasco J, Ibáñez R, de Sanjosé S, Плохая посещаемость скрининга на рак шейки матки и ложноотрицательные результаты. Призыв к организованному просмотру. ПлоС один. 2016; [PubMed PMID: 27547971]

[7]

Wentzensen N, Arbyn M, Скрининг рака шейки матки на основе ВПЧ – факты, вымысел и заблуждения. Профилактическая медицина. 2017 май; [PubMed PMID: 28279260]

[8]

Chatzistamatiou K, Moysiadis T, Vryzas D, Chatzaki E, Kaufmann AM, Koch I, Soutschek E, Boecher O, Tsertanidou A, Maglaveras N, Jansen-Duerr P, Agorastos T, Курение сигарет способствует заражению клеток шейки матки высоким риском Вирусы папилломы человека, но не последующая экспрессия онкопротеина E7.Международный журнал молекулярных наук. 2018 31 января; [PubMed PMID: 29385075]

[9]

Рура Э., Травье Н., Уотербур Т., де Санхосе С., Бош Ф.С., Павлита М. , Пала В., Вейдерпасс Э., Маргалл Н., Диллнер Дж., Грам ИТ, Тьённеланд А, Мунк С, Палли Д., Хав КТ, Овервад К., Клавель-Шапелон Ф., Мерин С., Фурнье А., Фортнер Р.Т., Осе Дж., Штеффен А., Трихопулу А., Лагиу П., Орфанос П., Масала Г., Тумино Р., Сакердот К., Полидоро С., Маттьелло А., Лунд Э., Питерс П. Х., Буэно-де-Мескита Х.Б., Кирос Дж.Р., Санчес М.Дж., Наварро С., Баррикарте А., Ларраньяга Н., Экстрем Дж., Линдквист Д., Идал А., Трэвис Р.С., Мерритт М.А., Гюнтер М.Дж., Ринальди С., Томмасино М., Франчески С., Риболи E, Castellsagué X, Влияние гормональных факторов на риск развития рака шейки матки и предраковых состояний: результаты когорты EPIC.ПлоС один. 2016; [PubMed PMID: 26808155]

[10]

Marks M, Gravitt PE, Gupta SB, Liaw KL, Kim E, Tadesse A, Phongnarisorn C, Wootipoom V, Yuenyao P, Vipupinyo C, Rugpao S, Sriplienchan S, Celentano DD, Связь использования гормональных контрацептивов и распространенности ВПЧ. Международный журнал рака. 2011 г., 15 июня; [PubMed PMID: 20734390]

[11]

Conlon JL, Диэтилстильбэстрол: Потенциальные риски для здоровья женщин, подвергшихся воздействию внутриутробно, и их потомства.JAAPA: официальный журнал Американской академии помощников врача. 2017 февраль; [PubMed PMID: 28098674]

[12]

Garrett LA,McCann CK, Аномальная цитология в 2012 году: лечение атипичных плоскоклеточных клеток, внутриэпителиальной неоплазии низкой степени и внутриэпителиальной неоплазии высокой степени. Клиническое акушерство и гинекология. 2013 март; [PubMed PMID: 23337842]

[13]

Чиаваттини А., Клементе Н., Цироглу Д., Сопракордеволе Ф., Серри М., Делли Карпини Г., Папиччио М., Каттани П. , Последующее наблюдение за женщинами с диагнозом низкосортного плоскоклеточного внутриэпителиального поражения шейки матки (LSIL) при биопсии: как долго оно должно длиться ? Архив гинекологии и акушерства.2017 апрель; [PubMed PMID: 28255767]

[15]

Katki HA, Schiffman M, Castle PE, Fetterman B, Poitras NE, Lorey T, Cheung LC, Raine-Bennett T, Gage JC, Kinney WK, Сравнительный анализ риска CIN 3 как основа для включения ВПЧ и пап-тестов в скрининг шейки матки и руководства по управлению. Журнал заболеваний нижних отделов половых путей. 2013 апрель; [PubMed PMID: 23519302]

[16]

Бойраз Г., Басаран Д., Салман М.С., Ибрагимов А., Ондер С., Акман О., Озгул Н., Юсе К., Гистологическое наблюдение за пациентами с атипичными железистыми клетками в мазках Папаниколау. Журнал цитологии. 2017 г., октябрь-декабрь; [PubMed PMID: 275]

[17]

Geier CS, Wilson M, Creasman W, Клиническая оценка атипичных железистых клеток неопределенного значения. Американский журнал акушерства и гинекологии. 2001 г., январь; [PubMed PMID: 11174481]

[18]

Zhao C, Austin RM, Pan J, Barr N, Martin SE, Raza A, Cobb C, Клиническое значение атипичных железистых клеток в обычных мазках Папаниколау при большом U высокого риска.Южное меньшинство западного побережья. Акта цитологическая. 2009 март-апрель; [PubMed PMID: 19365967]

[19]

Wang SS, Sherman ME, Hildesheim A, Lacey JV Jr, Devesa S, Тенденции заболеваемости аденокарциномой шейки матки и плоскоклеточным раком среди белых и чернокожих женщин в Соединенных Штатах за 1976–2000 годы. Рак. 2004 г., 1 марта; [PubMed PMID: 14983500]

[20]

Такеучи С. Биология и лечение аденокарциномы шейки матки.Китайский журнал исследований рака = Chung-kuo yen cheng yen chiu. 2016 апрель; [PubMed PMID: 27198186]

[21]

Ki EY, Byun SW, Park JS, Lee SJ, Hur SY, Злокачественная аденома шейки матки: отчет о четырех случаях. Всемирный журнал хирургической онкологии. 2013 26 июля; [PubMed PMID: 23885647]

[22]

Chang J, Zhang S, Zhou H, Liang JX, Lin ZQ, [Клинический анализ аденокарциномы шейки матки с минимальным отклонением: отчет о пяти случаях].Ai zheng = Aizheng = китайский журнал рака. 2008 декабрь; [PubMed PMID: 100]

[23]

Баласубраманиам С. Д., Балакришнан В., Ун К.Э., Каур Г., Ключевые молекулярные события в развитии рака шейки матки. Медицина (Каунас, Литва). 2019 17 июля; [PubMed PMID: 31319555]

[24]

Yao YL, Tian QF, Cheng B, Cheng YF, Ye J, Lu WG, Обнаружение мРНК вируса папилломы человека (HPV) E6/E7 в эксфолиированных клетках шейки матки: потенциальная сортировка ВПЧ-позитивных женщин.Журнал Чжэцзянского университета. Наука. Б. март 2017 г.; [PubMed PMID: 28271661]

[25]

Дик Ф.А., Рубин С.М. Молекулярные механизмы, лежащие в основе функции белка RB. Обзоры природы. Молекулярно-клеточная биология. 2013 май; [PubMed PMID: 23594950]

[26]

Милаварапу С., Дас А., Рой М. Роль мутаций BRCA в модуляции ответа на терапию платиной. Границы онкологии. 2018; [PubMed PMID: 29459887]

[27]

Гибб Р.К., Мартенс М.Г. Влияние жидкостной цитологии на снижение заболеваемости раком шейки матки. Обзоры по акушерству     [PubMed PMID: 21617785]

Neisseria gonorrhoeae инфицирует гетерогенный эпителий шейки матки человека, используя разные механизмы

Abstract

Инфекции, передающиеся половым путем, являются серьезной проблемой общественного здравоохранения.Однако механизмы, лежащие в основе инфекций, передающихся половым путем у женщин, и связь между механизмом заражения и широким спектром клинических исходов остаются неясными из-за отсутствия исследовательских моделей, имитирующих человеческую инфекцию in vivo . Мы создали модель эксплантата ткани шейки матки человека для имитации местных инфекций Neisseria gonorrhoeae (GC). Мы обнаружили, что GC предпочтительно колонизируют эктоцервикс, активируя интегрин-β1, который ингибирует отщепление эпителия. GC избирательно проникают в плоскоклеточный переход (TZ) и эндоцервикальный эпителий, индуцируя фосфорилирование β-катенина, что приводит к разборке Е-кадгеринового соединения.Эпителиальные клетки в различных областях шейки матки по-разному экспрессируют молекулы клеточной адгезии, связанные с карциноэмбриональным антигеном (CEACAMs), рецептор хозяина для белков, связанных с непрозрачностью GC (Opa CEA ). Относительно высокие уровни были обнаружены на люминальной мембране экто/эндоцервикальных эпителиальных клеток, но очень низкие внутриклеточные уровни в эпителиальных клетках TZ. Взаимодействие CEACAM-Opa CEA увеличивало экто/эндоцервикальную колонизацию и уменьшало эндоцервикальное проникновение за счет усиления активации интегрина-β1 и ингибирования фосфорилирования β-катенина, соответственно, посредством передачи сигналов CEACAM ниже по течению.Таким образом, внутренние свойства эпителиальных клеток шейки матки и фазовые вариации молекул бактериальной поверхности играют роль в контроле механизмов инфицирования РЖ и инфекционности, предпочтительной колонизации или проникновения, что потенциально может привести к бессимптомной или симптоматической инфекции.

Резюме автора

Гонорея, вызываемая Neisseria gonorrhoeae (GC), является распространенной инфекцией, передающейся половым путем, и вызвала кризис общественного здравоохранения из-за неуклонного роста случаев резистентности к антибиотикам.Каким образом ГК заражают женские половые пути (ЖРТ) и вызывают различные клинические исходы, до сих пор неизвестно. В этом исследовании использовались эксплантаты шейки матки человека для изучения механизма, с помощью которого GC заражает гетерогенную слизистую оболочку шейки матки человека, ворота FRT. Мы показываем, что ГК предпочтительно колонизируют многослойные эпителиальные клетки в вагинально-цервикальной области, усиливая адгезию эпителиальных клеток. ГК избирательно проникают в ткани чешуйчато-столбчатого соединения и цервикально-эндометриальной области, но не в вагинально-цервикальную область, разрыхляя эпителиальные межклеточные соединения.Экспрессия белков, связанных с непрозрачностью, на GC регулирует паттерны инфекции в зависимости от экспрессии рецепторов хозяина на различных типах эпителия и передачи сигналов нижестоящего рецептора. Эти данные свидетельствуют о том, что как внутренние свойства эпителиальных клеток шейки матки, так и фазовые вариации поверхностных молекул бактерий играют роль в определении инфекционности РЖ. Наши результаты могут объяснить, как инфекция GC приводит к бессимптомной или симптоматической инфекции.

Образец цитирования: Yu Q, Wang LC, Di Benigno S, Gray-Owen SD, Stein DC, Song W (2019) Neisseria gonorrhoeae заражает гетерогенный эпителий шейки матки человека, используя разные механизмы.ПЛОС Патог 15(12): е1008136. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136

Редактор: Christoph Tang, Оксфордский университет, СОЕДИНЕННОЕ КОРОЛЕВСТВО

Получено: 13 мая 2019 г.; Принято: 7 октября 2019 г.; Опубликовано: 2 декабря 2019 г.

Copyright: © 2019 Yu et al. Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные содержатся в рукописи и файлах вспомогательной информации.

Финансирование: Эта работа была поддержана грантами Национальных институтов здравоохранения DCS и WS, AI123340 и AI141894. Л.-К.В. была частично поддержана/участвовала в программе «The First-Year Innovation & Research Experience», финансируемой Университетом Мэриленда. С.Д.Г. был поддержан Канадским институтом медицинских исследований MOP-15499. Спонсоры не играли никакой роли в разработке исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Инфекции, передающиеся половым путем (ИППП), остаются серьезной проблемой общественного здравоохранения, отчасти из-за отсутствия вакцин против многих возбудителей ИППП. Гонорея, вызываемая грамотрицательной бактерией Neisseria gonorrhoeae (GC), является распространенной ИППП [1] и вновь возникла как кризис общественного здравоохранения из-за резкого увеличения числа штаммов с множественной лекарственной устойчивостью [2, 3]. Большинство инфицированных женщин протекает бессимптомно [4, 5], что приводит к задержке лечения, бессимптомной передаче и предрасположенности к осложнениям, включая воспалительные заболевания органов малого таза (ВЗОМТ), бесплодие и предрасположенность к опасной для жизни внематочной беременности. Однако то, как возбудители ИППП взаимодействуют с женскими половыми путями человека (FRT) и вызывают широкий спектр клинических исходов, остается неясным. Основным препятствием для лучшего понимания ИППП является отсутствие моделей инфекций, имитирующих заражение человека.

GC инфицируют исключительно людей и инициируют инфекцию в FRT на шейке матки, воротах FRT [6]. Клинические исследования показывают, что колонизация ГК на поверхности слизистой оболочки влагалища и эктоцервикса приводит к бессимптомной местной инфекции [5]. Субэпителиальные РЖ были обнаружены только в биоптатах из эндоцервикса и чешуйчато-столбчатого перехода (трансформационная зона, ТЗ) у пациентов с симптомами [7]. Механизм взаимодействия ГК со слизистой оболочкой шейки матки вызывает симптоматическую или бессимптомную инфекцию, остается неизвестным.

Поверхность слизистой оболочки шейки матки человека значительно различается и обычно делится на три области: эктоцервикс, состоящий из многослойных, неполяризованных, многослойных, плоскоклеточных эпителиальных клеток; эндоцервикс, содержащий однослойные поляризованные столбчатые клетки; и TZ, где эпителиальные клетки постепенно изменяются от многослойных чешуйчатых до столбчатых клеток [8]. Клетки в этих областях имеют разные свойства. В дополнение к клеточной морфологии и полярности, одной из отличительных особенностей клеток плоского и столбчатого эпителия являются их адгезии и апикальные межклеточные соединения, соответственно.Адгезионное соединение образуется за счет гомовзаимодействий Е-кадгерина между соседними клетками, а апикальное соединение состоит как из адгезивов, так и из комплексов плотных контактов [9]. Хотя оба типа соединений имеют решающее значение для функции эпителиального барьера, каждый из них обладает уникальными функциональными и регуляторными свойствами [9]. Как гетерогенность эпителия шейки матки влияет на инфекцию РЖ и клинические исходы, не изучалось.

Бактерии развили множество механизмов преодоления слизистых оболочек.Одним из механизмов является изменение фазы. GC может включать и выключать экспрессию пилина [10] и экспрессировать любую из 11 изоформ белка, ассоциированного с непрозрачностью (Opa) в любое время [11]. Ранние исследования показывают, что pili инициируют контакт GC с эпителиальными клетками [12], а Opa опосредует тесные взаимодействия GC-эпителия путем связывания с рецепторами хозяина [13-15]. Исследования, основанные на первичных клетках человека, биоптатах и ​​культуре фаллопиевых труб, идентифицировали специфические для человека рецепторы для поверхностных молекул GC. Пили связываются с рецептором комплемента 3 (CR3), интегрином β 2 , экспрессируемым на первичных эпителиальных клетках шейки матки, что необходимо для прилипания к GC [16, 17].Большинство изоформ Opa связываются с молекулами адгезии клеток, связанными с карциноэмбриональным антигеном (CEACAMs) (Opa CEA ), в то время как одна связывается с гепарансульфатпротеогликанами (HSPG) (Opa HSPG ) [18–21]. Однако верхняя и нижняя FRT человека экспрессируют разные изоформы CEACAM [22]. CEACAMs могут индуцировать межклеточную адгезию или сигнализировать посредством олигомеризации [23]. Цитоплазматический хвост CEACAM1, единственного трансмембранного CEACAM, который экспрессируется в эпителиальных клетках шейки матки человека, содержит ингибирующий мотив на основе тирозина иммунорецептора (ITIM) [24].ITIM может ингибировать передачу сигналов путем активации нерецепторных тирозинфосфатаз SHP1/2, содержащих домен Sh3 [25, 26]. Роль этого ITIM и нижестоящего SHP в инфицировании GC неясна.

Определение роли взаимодействий между поверхностными структурами GC и их специфическими для человека рецепторами в патогенезе GC было проблематичным, поскольку данные предполагают различную роль в зависимости от используемой модели инфекции и фенотипа GC. GC Opa CEA , но не Opa HSPG , индуцирует активацию интегрина в неполяризованных эпителиальных клеточных линиях человека и эктоцервикальных эпителиальных клетках трансгенных мышей, экспрессирующих CEACAM, ингибируя их выделение и увеличивая колонизацию GC [27, 28]. В то время как экспрессия Opa CEA , как сообщалось, способствует трансцеллюлярному трансцитозу GC через поляризованные эпителиальные клетки толстой кишки [29], мы показали, что экспрессия Opa CEA ингибирует проникновение GC в эндоцервикальный эпителий человека [30]. Поскольку поверхности шейки матки человека и GC неоднородны, разные варианты GC могут вызывать разные реакции хозяина в трех областях шейки матки из-за изменений в рецепторах хозяина, задействованных GC, что приводит к разной инфекционности и клиническим результатам.

Чтобы изучить механизм, с помощью которого GC взаимодействует с гетерогенными поверхностями слизистой оболочки, мы установили эксплантаты ткани шейки матки человека, которые сохраняют различные свойства каждой области шейки матки in vivo и имитируют GC-инфекцию, наблюдаемую в биоптатах пациентов. Эта модель инфекции позволила нам показать, что исход инфекции GC зависит от типа эпителиальных клеток шейки матки, с которыми взаимодействуют бактерии, и варианта экспрессии Opa GC. GC изменяют инфекционность, по-разному регулируя интегрин β1, β-катенин и Е-кадгерин в различных эпителиальных клетках трех областей шейки матки.Наши результаты потенциально обеспечивают механистическое объяснение широкого спектра клинических исходов после инфекции GC у женщин.

Результаты

GC проявляют различную инфекционность на различных поверхностях слизистой оболочки шейки матки человека

Чтобы изучить инфекцию GC в шейке матки человека, мы культивировали ткани шейки человека, хирургически удаленные у женщин 28–40 лет, в качестве модели ex vivo для инфекции GC, используя модифицированную версию опубликованного протокола [31].Мы сравнили морфологию и организацию эпителия шейки матки в эксплантатах до и после культивирования в течение 3 сут, периода подготовки к заражению, с помощью иммунофлуоресценции и трехмерной конфокальной флюоресцентной микроскопии (3D-CFM). Криоконсервированные ткани разрезали как по люминальной, так и по базальной поверхностям эпителия. Эпителиальные клетки идентифицировали с помощью окрашивания цитокератином, а их межклеточные соединения — с помощью окрашивания E-кадгерином (рис. S1). Три области шейки матки были идентифицированы по различным свойствам эпителиальных клеток: 1) многослойные, многослойные и неполяризованные эпителиальные клетки в эктоцервиксе, 2) многослойные и неполяризованные клетки в ПЗ и 3) столбчатые, одиночные -слоистые и поляризованные клетки эндоцервикса.Эти свойства не изменились после 3-дневного периода культивирования (S1 Fig и S1 Video).

Чтобы определить картину инфекции в различных областях шейки матки, мы инкубировали срезы ткани одного и того же человека с GC MS11 или без него, которые были пилейированы и экспрессировали фазовую переменную Opa (Pil+Opa+) в течение 24 часов с начальным MOI ~10 бактерии/люминальные эпителиальные клетки. Каждый срез ткани содержал все три области шейки матки. Инокулированные тканевые эксплантаты промывали через 6 и 12 ч для удаления неассоциированного GC. Срезы ткани, которые пересекали как люминальную, так и базальную поверхности эпителия, окрашивали на GC, F-актин и ядра и визуализировали с помощью CFM (S2 Fig). Мы разработали два метода для количественной оценки колонизации GC с использованием изображений CFM (рис. 1A, стрелки): 1) процент клеток просветного эпителия с окрашиванием GC (рис. 1B) и 2) интенсивность флуоресценции (FI) окрашивания GC на мкм 2 поверхности просвета (рис. 1С). Два метода последовательно показали, что GC колонизировал все три области шейки матки человека, при этом уровни колонизации в эктоцервиксе и TZ были значительно выше, чем в эндоцервиксе (рис. 1B и 1C).Мы разработали аналогичные методы для количественной оценки проникновения GC в субэпителий (рис. 1A, стрелки): 1) процент клеток, связанных с GC, с окрашиванием GC в субэпителии (рис. 1D) и 2) процент GC FI ​​в субэпителии (рис. 1Е). Субэпителиальные GC были обнаружены только в TZ и эндоцервиксе, но не в эктоцервиксе (рис. 1A, 1D и 1E и S2 Video), с более высоким уровнем GC в субэпителии TZ, чем в эндоцервиксе (рис. 1D и 1E). Таким образом, ГК не одинаково взаимодействуют с различными эпителиями.Когда доступна поверхность слизистой оболочки всех трех отделов шейки матки, ГК преимущественно колонизируют эктоцервикс и ЗТ и избирательно проникают в ЗЗ и эндоцервикс.

Рис. 1. GC демонстрируют различные уровни колонизации и субэпителиального проникновения в эктоцервикальный, TZ и эндоцервикальный эпителий.

Эксплантаты ткани шейки матки человека инкубировали с MS11 Pil+Opa+ в течение 24 часов (MOI~10), промывали через 6 и 12 часов после инокуляции и криоконсервировали. Срезы тканей собирали, обрабатывали и анализировали с помощью CFM.(A) Репрезентативные изображения трех областей эксплантатов ткани шейки матки с инфекцией GC или без нее. Масштабная линейка, 20 мкм. Наконечники стрел, колонизирующие GC. Стрелы, проникающие в ГК. См. также Видео S2. (B и C) Количественная оценка колонизации GC процентом (±SEM) просветных эпителиальных клеток с прикреплением GC к поверхности просвета (B, белые пунктирные линии, окружающие отдельные просветные эпителиальные клетки, и желтые пунктирные линии, окружающие GC-ассоциированные эпителиальные клетки просвета) и по интенсивности флуоресценции (FI) (±SEM) окрашивания GC на мкм 2 поверхности просвета (C, желтые пунктирные линии, окружающие площадь поверхности просвета, где измеряли GC FI). Показаны средние значения из 3 независимых анализов тканей шейки матки у 3 человек. (D и E) Количественная оценка проникновения GC в процентах (±SEM) эпителиальных клеток, связанных с GC, с GC в субэпителии (D, белые пунктирные линии, обведенные эпителиальными клетками с колонизацией GC, и желтые пунктирные линии, обведенные клетками с субэпителиальными GC) и по процент (± SEM) GC FI ​​в субэпителии по отношению к общему GC FI ​​в эпителии (E, белые пунктирные линии, окружающие как эпителиальные, так и субэпителиальные области, и желтые пунктирные линии, окружающие субэпителиальную область).Показаны средние значения для 12 изображений каждой области шейки матки, полученных в результате 2-3 независимых анализов 3 шейки матки человека. * р <0,05; ** р <0,01; *** p <0,001, по данным критерия Стьюдента и однофакторного непараметрического дисперсионного анализа (критерий Крускала-Уоллиса).

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.g001

Белки Opa, но не пили, играют различную роль в инфицировании РЖ в различных областях шейки матки человека

Чтобы изучить роль Opa и pili в инфекции шейки матки, мы сравнили инфекционность ворсинчатого (Pil+) и неворсинчатого (Pil-) GC с фазовой вариабельностью Opa (дикий тип, Opa+) или всеми 11 генетически делетированными изоформами Opa (ΔOpa), используя методы, описанные выше.Мы обнаружили, что Pil-Opa+ GC не смог эффективно колонизировать ни один из трех участков слизистой оболочки шейки матки (рис. 2A–2D). Удаление Opa уменьшало колонизацию GC только в экто/эндоцервиксе, но не в TZ (рис. 2A–2D). В субэпителии шейки матки Pil-Opa+ GC не обнаружены (рис. 2А и 2E-2G), а в субэпителии эктоцервикса не обнаружены GC, независимо от того, экспрессируют ли они пили или Opas (рис. 2A и 2E). Делеция Opa увеличивала количество GC, проникающего в эндоцервикальный, но не в эктоцервикальный и эпителий TZ (рис. 2А и 2Е-2G).Эти результаты позволяют предположить, что пили необходимы для колонизации GC всех типов эпителиальных клеток шейки матки, в то время как белки Opa способствуют прикреплению GC к экто/эндоцервиксу, но препятствуют проникновению в ткани эндоцервикса.

Рис. 2. Пили необходимы для колонизации GC, а белки Opa играют разные роли в инфекции GC в разных областях шейки матки человека.

Кусочки ткани шейки матки инокулировали Pil+Opa+, Pil+ΔOpa или Pil-Opa+ GC в течение 24 ч (MOI~10), промывали через 6 и 12 ч после инокуляции и криоконсервировали.Срезы тканей собирали, обрабатывали и анализировали с помощью CFM. (A) Репрезентативные изображения. Наконечники стрел, колонизирующие GC. Стрелы, проникающие в ГК. Масштабная линейка, 20 мкм. (B-D) Уровни колонизации GC в эктоцервиксе (B), TZ (C) и эндоцервиксе (D) были количественно определены с помощью GC FI ​​на мкм 2 (± SEM). Показаны средние значения из 3 независимых анализов тканей шейки матки у 3 человек. (E-G) Уровни проникновения GC в субэпителий эктоцервикса (E), TZ (F) и эндоцервикса (G) в процентах (± SEM) GC FI ​​в субэпителии по отношению к общему GC FI ​​в эпителии.Показаны средние значения для 12 изображений каждой области шейки матки, полученных в результате 2–3 независимых анализов каждой из 3 шейок матки человека. * р <0,05; ** р < 0,01; *** p <0,001, по данным критерия Стьюдента и однофакторного непараметрического дисперсионного анализа (критерий Крускала-Уоллиса).

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.g002

Большинство Opas связываются с CEACAM (Opa CEA ), а один связывается с HSPG (Opa HSPG ) [32].Чтобы определить, по-разному ли две группы Opas регулируют колонизацию и проникновение, мы использовали изогенные штаммы Pil+ GC, которые экспрессируют четко определенные Opa CEA (OpaH) или Opa HSPG (OpaC), которые не могут изменяться по фазе [33, 34]. ]. По сравнению со штаммом ΔOpa, экспрессия Opa CEA значительно повышала уровень колонизации GC на экто/эндоцервиксе, в то время как Opa HSPG этого не делала (рис. 3A, 3B и 3D). Напротив, экспрессия Opa CEA , но не Opa HSPG , исключительно снижала проникновение GC в эндоцервикс (рис. 3G).Opa HSPG GC колонизировался и проникал на тех же уровнях, что и ΔOpa GC, во всех областях шейки матки (рис. 3B–3G). Интересно, что уровни как колонизации GC, так и проникновения в TZ оставались одинаковыми независимо от того, экспрессирует ли GC Opa CEA , Opa HSPG или не Opa (рис. 3C и 3F), что подтверждает наш вывод, сделанный выше, о том, что пилюс сам по себе определяет Колонизация GC и проникновение в TZ (рис. 2C и 2F). Экспрессия четко определенного Opa CEA (OpaH) или Opa HSPG (OpaC) (32, 52) также не способствовала проникновению GC в эктоцервикальный субэпителий (рис. 3E), подтверждая, что отсутствие проникновения, наблюдаемое при родительский штамм дикого типа Pil+Opa+ (фиг. 2E) не был связан с отсутствием экспрессии Opa CEA или Opa HSPG .Эти результаты показывают, что Opa CEA избирательно усиливает колонизацию GC в экто/эндоцервиксе и подавляет проникновение GC в субэпителий эндоцервикса, в то время как Opa HSPG незначительно участвует в колонизации GC шейки матки человека. Таким образом, фазовая переменная экспрессия изоформ Opa по-разному влияет на инфекционность в трех шейных областях.

Рис. 3. Варианты Opa по-разному регулируют инфекционность GC в трех областях шейки матки человека.

Кусочки ткани шейки матки человека инкубировали с Pil+ Opa CEA , Opa HSPG и ΔOpa GC в течение 24 ч (MOI~10), промывали через 6 и 12 ч после инокуляции и криоконсервировали. Срезы тканей собирали, обрабатывали и анализировали с помощью CFM. (A) Репрезентативные изображения. Наконечники стрел, колонизирующие GC. Стрелы, проникающие в ГК. Масштабная линейка, 20 мкм. (B-D) Уровни колонизации GC в эктоцервиксе (B), TZ (C) и эндоцервиксе (D) были количественно определены с помощью GC FI ​​на мкм 2 . Показаны средние значения случайно выбранных изображений из 3 независимых анализов каждой из 3 шейок матки человека.(E-G) Уровни проникновения GC в субэпителий эктоцервикса (E), TZ (F) и эндоцервикса (G) в процентах (± SEM) GC FI ​​в субэпителии по отношению к общему GC FI ​​в эпителии. Показаны средние значения для 12–18 изображений на шейную область, полученных в результате 3 независимых анализов каждой из 3 шейок матки человека. ** р < 0,01; *** p <0,001, по данным критерия Стьюдента и однофакторного непараметрического дисперсионного анализа (критерий Крускала-Уоллиса).

https://дои.org/10.1371/journal.ppat.1008136.g003

Гетерогенные уровни экспрессии CEACAM на эпителиальных клетках шейки матки регулируют инфекционность РЖ

Различные эффекты Opa CEA на инфекционность GC в различных областях шейки матки человека привели нас к гипотезе о том, что эпителиальные клетки в разных областях шейки матки человека не экспрессируют одинаковые уровни CEACAM. Чтобы проверить это, мы окрашивали ткани шейки матки человека моноклональными антителами, которые реагируют с CEACAM1, 3 и 6 [35].Изображения CFM показали сильное окрашивание люминальной поверхности и точечное цитоплазматическое окрашивание CEACAM в эктоцервиксе и сильное окрашивание только апикальной поверхности в эндоцервиксе. Однако в цитоплазме эпителиальных клеток TZ наблюдались только редкие точки окрашивания CEACAM (рис. 4A и видео S3). Мы оценили уровни экспрессии CEACAM, измерив средние значения CEACAM FI на эпителиальную клетку. Среди трех областей эктоцервикальные эпителиальные клетки демонстрировали самый высокий уровень экспрессии CEACAM.Эпителиальные клетки эндоцервикального и TZ имели ~ 50% и ~ 11% CEACAM FI в качестве эктоцервикальных клеток соответственно (рис. 4B). Очень низкая экспрессия и цитоплазматическое расположение CEACAM в эпителиальных клетках TZ объясняет отсутствие реакции инфекционности GC в TZ на экспрессию Opa CEA .

Рис. 4. Гетерогенные уровни экспрессии CEACAM на эпителиальных клетках шейки матки регулируют инфекционность GC.

(A) Показаны репрезентативные CFM-изображения неинфицированных эксплантатов ткани шейки матки человека, окрашенных анти-CEACAM-антителом (реагирующим с CEACAM 1, 3 и 6).См. также Видео S3. (B) Уровни экспрессии CEACAM измеряли по среднему значению (±SEM) CEACAM FI на клетку, полученному из 21 изображения на область шейки матки, полученных в результате 2–4 независимых анализов 3 шейки матки человека. (C-D) Тканевые эксплантаты инокулировали Opa CEA с ворсинками, Opa HSPG и ΔOpa GC в течение 24 часов (MOI ~ 10), промывали через 6 и 12 часов после инокуляции и криоконсервировали. Срезы тканей собирали, обрабатывали, окрашивали для GC и CEACAM и анализировали с использованием CFM. Показаны репрезентативные изображения CFM (C).Микроколонии Arrowhead, GC колокализуются с скопившимся под ними окрашиванием CEACAM. Пространственное соотношение GC с CEACAM было количественно определено процентом микроколоний GC с накоплением окрашивания CEACAM под или рядом с использованием профилей линий FI GC и CEACAM (D). Показаны средние значения из 2 независимых анализов тканей шейки матки у 3 человек. (EF) Клетки HEC-1-B были временно трансфицированы CEACAM1L или 1S или без них и инфицированы Pil+Opa CEA или Pil+∆Opa GC (MOI~10) в течение 6 ч в отсутствие или в присутствии SHP1/2. ингибитор NSC878777 (20 мкМ).Показаны репрезентативные изображения CFM (E). Белые пунктирные линии обводят CEACAM-экспрессирующие клетки. Желтые пунктирные линии обводят клетки, которые не экспрессируют CEACAM. Уровни прилипания GC к клеткам, экспрессирующим CEACAM1L или 1S, сравнивали с теми, которые не экспрессировали CEACAM, по соотношению MFI (±SEM) GC на CEACAM-положительных клетках по сравнению с CEACAM-отрицательными клетками на тех же изображениях (F). Показаны средние значения 45 CEACAM1-положительных областей и соответствующих CEACAM1-отрицательных областей на 15 изображениях, полученных в 3 независимых экспериментах.(G-I) Эксплантаты ткани шейки матки инокулировали Pil + Opa CEA GC в присутствии или в отсутствие ингибитора SHP NSC87877 (20 мкМ) в течение 24 часов, а срезы ткани окрашивали на GC, F-актин и ДНК. Показаны репрезентативные изображения CFM (G). Наконечники стрел, колонизирующие ГК, и стрелы, проникающие в ГК. Количественно определяли уровни колонизации ГК на эктоцервиксе, ТЗ и эндоцервиксе с помощью GC FI ​​на мкм 2 (±SEM) люминальной поверхности (Н), а уровни проникновения ГК в субэпителий эктоцервикса, ТЗ и эндоцервикса измеряли как процент (±SEM) GC FI ​​в субэпителии (I).Показаны средние значения из тканей шейки матки 3 человек, как описано на рис. 1. Масштабная линейка, 20 мкм. ** р < 0,01; *** p <0,001, по данным критерия Стьюдента и однофакторного непараметрического дисперсионного анализа (критерий Крускала-Уоллиса).

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.g004

Чтобы определить, регулирует ли Opa CEA инфекционность через CEACAM хозяина, мы определили процент колоний GC, рекрутирующих CEACAM в прикрепляющихся участках, используя изображения CFM (рис. 4C) и профили линий FI окрашивания GC и CEACAM на поверхности просвета (рис. 4D, левые панели).Мы наблюдали накопление окрашивания CEACAM только под микроколониями, экспрессирующими Opa CEA , в эндоцервикальных эпителиальных клетках (рис. 4C, нижняя левая панель, рис. 4D и видео S4, правая панель). Не наблюдалось значительного накопления CEACAM в эндоцервиксе, инфицированном GC, экспрессирующим Opa HSPG или не экспрессирующим Opa (рис. 4C, нижняя средняя и правая панели и рис. 4D), или в TZ, экспрессирующем низкий уровень CEACAM (рис. 4C). , средние панели роликов, рис. 4D, и S4 Video, средняя панель).Эти результаты предполагают возможное прямое взаимодействие между Opa CEA и CEACAM. Однако GC, включая штамм, экспрессирующий Opa CEA , не рекрутировал CEACAM в эктоцервиксе, даже несмотря на то, что просветная экспрессия CEACAM сохранялась в инфицированном эктоцервиксе (рис. 4C, верхние панели и S4 Video, левая панель).

Чтобы определить влияние экспрессии CEACAM на инфекционность GC, мы сравнили уровни прилипания GC к эпителиальным клеткам эндометрия человека, HEC-1-B, которые экспрессируют или не экспрессируют CEACAM [36].Среди CEACAM, экспрессируемых в эпителиальных клетках, CEACAM1 является единственным, имеющим цитоплазматический домен. Его длинная сплайсированная изоформа (CEACAM1L) содержит ITIM в цитоплазматическом домене, тогда как короткая изоформа (CEACAM1S) его не содержит [37]. Мы временно экспрессировали каждую из двух изоформ в клетках HEC-1-B и сравнивали приверженность GC, используя отношения GC MFI между экспрессирующими CEACAM1 и неэкспрессирующими клетками на тех же изображениях и с одинаковым размером областей. Мы обнаружили, что экспрессия CEACAM1L, но не CEACAM1S, значительно увеличивала прилипание Pil+Opa CEA GC после 6-часовой инкубации (рис. 4E и 4F).Напротив, экспрессия CEACAM1L или 1S не оказывала существенного влияния на уровень прилипания ΔOpa GC (рис. 4E и 4F). Эти данные предполагают, что роль Opa CEA в инфекционности GC требует экспрессии CEACAM1L.

Наше обнаружение того, что экспрессия CEACAM1L, но не CEACAM1S, в эпителиальных клетках усиливает прилипание Opa CEA GC, указывает на роль ITIM в цитоплазматическом домене CEACAM1L. Поскольку CEACAM1L активирует тирозинфосфатазы SHP1/2 через свой ITIM [24, 26, 38], мы исследовали эффект ингибирования ферментативной активности SHP1/2 с помощью проникающего в клетку соединения 7-аза-8-гидроксихинолина, NSC-87877. , на инфекционность GC.Обработка ингибитором SHP устраняла усиливающие эффекты экспрессии CEACAM1L в клетках HEC-1-B на прилипание GC (рис. 4E и 4F). Кроме того, ингибирование SHP также устраняло усиливающий эффект Opa CEA на колонизацию GC экто/эндоцервикса (рис. 4G и 4H), а также ингибирующий эффект Opa CEA на проникновение GC в эндоцервикс (рис. 4G и 4I). ), без изменения скорости роста ШС (S3 рис.). Напротив, ингибирование SHP не изменило уровни колонизации и проникновения Pil+Opa CEA в TZ (рис. 4G-4I).Аналогично, обработка ингибитором блокировала опосредованное Opa CEA ингибирование трансмиграции GC через поляризованные эпителиальные клетки толстой кишки человека T84, которые экспрессируют эндогенные CEACAMs [29] (S4 Fig). Эти данные свидетельствуют о том, что Opa CEA усиливает колонизацию GC и ингибирует проникновение GC в субэпителий шейки матки, вероятно, путем индукции CEACAM1L-опосредованной активации SHP.

Гетерогенные свойства эпителиальных клеток шейки матки регулируют уровни эпителиального отслоения, вызванного GC

Отторжение эпителиальных клеток — это механизм, с помощью которого хозяин удаляет колонизирующие бактерии.Было показано, что GC ингибирует отщепление эпителия за счет CEACAM-зависимой активации интегрина в клеточных линиях человека и CEACAM-трансгенных мышах [28]. Чтобы изучить взаимосвязь между инфекционностью GC и выделением различных типов эпителиальных клеток, мы спросили, вызывает ли GC отслоение эпителия в каждой из трех областей шейки матки. С помощью CFM мы наблюдали, что Pil+ GC, независимо от того, какая изоформа Opa экспрессировалась или были ли белки Opa переменными по фазе, индуцировала отщепление эпителия во всех областях шейки матки человека через 24 часа после инокуляции по сравнению с контролем без GC (рис. 5A, 5D и 5Ф).Многослойные эпителиальные клетки эктоцервикального и TZ в основном отслаиваются слоями (рис. 5A и 5D), в то время как однослойные эпителиальные клетки эндоцервикального отслаиваются индивидуально (рис. 5F, стрелки). Мы оценили уровни эпителиального шеддинга в эктоцервиксе и TZ, измерив толщину и количество слоев эпителиальных клеток, которые остались в инфицированных тканях, по сравнению с контролем без инокуляции (рис. 5A-5E). Уровень отторжения эндоцервикальных эпителиальных клеток оценивали путем визуального подсчета процента эпителиальных клеток, выходящих из эпителия (рис. 5F, стрелка и рис. 5G).По сравнению с контролем без GC, эктоцервикальный и TZ-эпителий в тканевых эксплантатах, инокулированных Pil+ΔOpa GC, теряют> 60% и> 50% их толщины и клеточных слоев, соответственно (рис. 5A–5E), в то время как эндоцервикс теряет> 30%. их эпителиальных клеток (рис. 5F и 5G). Поскольку некоторые из отслоившихся эндоцервикальных эпителиальных клеток могут быть отделены от поверхности просвета, наш метод, вероятно, недооценил отслоение эпителия в эндоцервиксе. В эксплантатах ткани шейки матки, инфицированных Pil-GC, значительного отслоения эпителия не наблюдалось.Экспрессия Opa CEA или Opas с переменной фазой (Opa+, wt MS11), но не Opa HSPG , значительно снижала отщепление эпителиальных клеток в экто/эндоцервиксе (фиг. 5C и 5G). Однако экспрессия Opa CEA , Opa HSPG, или Opas с переменной фазой не влияли на отщепление эпителиальных клеток TZ (фиг. 5E). Аналогичные результаты для тканей шейки матки, инфицированных Opa+ GC- и Opa CEA GC, согласуются с представлением о том, что большинство из 11 изоформ Opa связываются с CEACAM.Таким образом, экспрессия Opa CEA или Opas переменной фазы, которые усиливают колонизацию GC экто/эндоцервикса и ингибируют проникновение GC в эндоцервикальный субэпителий, подавляют GC-индуцированное отщепление эпителия в двух областях шейки матки человека. Экспрессия Opa CEA , Opa HSPG или фазовая переменная Opas, которые не изменяют инфекционность GC в TZ, также не влияли на GC-индуцированное эпителиальное отщепление.

Рис. 5. Гетерогенные свойства эпителиальных клеток шейки матки регулируют уровни отслоения эпителия, вызванного GC.

(AG) Тканевые эксплантаты инокулировали с или без Pil+Opa+, Opa CEA , Opa HSPG или ΔOpa GC в течение 24 ч (MOI ~10), промывали через 6 и 12 ч после инокуляции и криоконсервировали . Срезы тканей собирали, обрабатывали и анализировали с помощью CFM. Показаны репрезентативные изображения эктоцервикальной (A), TZ (D) и эндоцервикальной (F) областей тканевых эксплантатов с Pil+ΔOpa GC или без него. Стрелки, сбрасывающие клетки. (B) Репрезентативные линейные профили F-actin FI вдоль пунктирных линий на A, указывающие на количество оставшихся эпителиальных слоев и толщину эпителия.(C и E) Уровни отслоения эпителия в эктоцервиксе (C) и TZ (E) количественно определяли по проценту (±SEM) толщины эпителия и количеству оставшихся слоев эпителия. Показаны средние значения для 12 (С) или 30 (Е) изображений, полученных для каждой области шейки матки в результате 2-3 независимых анализов 3 шейки матки человека. (G) Уровни эпителиального шеддинга в эндоцервиксе, количественно определяемые процентом (± SEM) эпителиальных клеток, перемещающихся над эпителиальным монослоем. Показаны средние значения из 18 изображений, полученных в результате 2-3 независимых анализов 3 шейки матки человека.(H-I) Монослои клеток HEC-1-B, трансфицированные CEACAM1L или 1S или без них, инкубировали с или без Pil+Opa CEA или Pil+∆Opa GC и ингибитором SHP1/2 в течение 6 часов. Показаны репрезентативные изображения (H). Штриховые линии — поверхность монослоев. Стрелки, клетки, движущиеся над эпителиальным монослоем. Выпадение клеток HEC-1-B количественно определяли по проценту (±SEM) клеток, перемещающихся над монослоями, из 15 изображений 3 независимых экспериментов (I). (J-M) Эксплантаты ткани шейки матки человека инокулировали Pil+Opa CEA GC с ингибитором SHP NSC-87877 (20 мкМ) или без него в течение 24 часов.Показаны репрезентативные изображения (J). Стрелки, сбрасывающие клетки. Уровни отслоения эпителия в эктоцервикальной (K), TZ (L) и эндоцервикальной (M) областях определяли количественно, как указано выше. Масштабная линейка, 20 мкм. * р <0,05; ** р < 0,01; *** p <0,001, по данным критерия Стьюдента и однофакторного непараметрического дисперсионного анализа (критерий Крускала-Уоллиса).

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.g005

Чтобы определить, требуется ли экспрессия CEACAM для отрицательной регуляции эпителиального отщепления с помощью Opa CEA , мы сравнили уровни выделения HEC-1-B. клетки, временно трансфицированные или не трансфицированные CEACAM1L или 1S, путем измерения процента клеток, которые переместились над неполяризованными эпителиальными монослоями после инокуляции GC (фиг. 5H, стрелки).Экспрессия ни CEACAM1L, ни 1S существенно не изменила уровни выделения HEC-1-B, индуцированного Pil+ΔOpa GC, а также базовый уровень выделения (фиг. 5H и 5I). Однако экспрессия CEACAM1L, но не 1S, значительно снижала выделение клеток HEC-1-B, инфицированных Pil+Opa CEA GC, до исходного уровня (фиг. 5H и 5I). Мы определили, был ли задействован SHP, обработав клетки HEC-1-B и эксплантаты шейки матки ингибитором SHP NSC-87877 до и во время инокуляции GC.Обработка ингибитором SHP усиливала выделение Opa CEA GC-инфицированных клеток HEC-1-B, которые экспрессировали CEACAM1L (фиг. 5H и 5I). Кроме того, ингибирование SHP увеличивало эпителиальное отщепление экто/эндоцервикальных тканей, инфицированных Opa CEA GC, до уровня в тканях, инфицированных ΔOpa GC, но не влияло на эпителиальное отщепление в TZ (рис. 5J-5M). Эти данные свидетельствуют о том, что экспрессия CEACAM1L ингибирует GC-индуцированное отшелушивание эпителия шейки матки человека, вероятно, посредством взаимодействия с Opa CEA и активации нижестоящего SHP.В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что ГК может усиливать колонизацию шейки матки или ее проникновение, ингибируя или усиливая отслоение эпителия, соответственно.

GC вызывают разборку межклеточных соединений на основе E-кадгерина исключительно в TZ и эндоцервиксе

Ранее мы показали, что ГК разрушают апикальное соединение эндоцервикальных эпителиальных клеток, вызывая отслоение эпителия и проникновение бактерий [30]. Чтобы определить, обусловлена ​​ли различная инфекционность GC дифференциальной регуляцией эпителиальных межклеточных соединений в трех цервикальных областях, мы проанализировали целостность межклеточных соединений на основе E-кадгерина (Ecad), поскольку они являются общими для эпителия шейки матки. три шейных отдела.Мы использовали транслокацию E-cad из межклеточного соединения в цитоплазму как показатель разборки соединительного комплекса и количественно оценили разборку по соотношению интенсивности флуоресценции (FIR) окрашивания E-cad в межклеточном соединении по сравнению с цитоплазма (фиг.6А и 6В). В неинфицированных эксплантатах ткани шейки матки окрашивание E-cad концентрировалось в эпителиальных межклеточных соединениях всех областей, за исключением люминального слоя эктоцервикальных эпителиальных клеток, не демонстрирующих окрашивания (рис. 6А и рис. S5).Инокуляция Pil+Opa+, Opa CEA , Opa HSPG или ΔOpa GC снижала FIR соединения с цитоплазмой в эпителиальных клетках TZ с ~4 до ≤2, в то время как FIR E-cad эндоцервикальных эпителиальных клеток значительно снижалась. снижается с помощью Pil+Opa HSPG и Pil+ΔOpa, но не Pil+Opa+ и Opa CEA GC, по сравнению с контролем без GC (рис. 6A–6C и S5). Напротив, FIR эктоцервикальных эпителиальных клеток, где не было обнаружено проникновения GC, не подвергался влиянию инокуляции GC или экспрессируемого варианта Opa, несмотря на отщепление эпителия (рис. 6C).Эти результаты показывают, что ГК вызывают разборку основанных на E-cad соединений в TZ и эндоцервиксе, но не в эктоцервиксе. Экспрессия Opa CEA или Opas с переменной фазой ингибирует только GC-индуцированную разборку межклеточных соединений E-cad в эндоцервиксе с высокими уровнями экспрессии CEACAM, но не в TZ с очень низкими уровнями экспрессии CEACAM.

Рис. 6. GC индуцируют разборку основанных на E-кадгерине межклеточных соединений исключительно в TZ и эндоцервиксе.

(A-C) Тканевые эксплантаты инокулировали Pil+ Opa CEA , Opa HSPG или ΔOpa GC в течение 24 ч (MOI ~ 10), промывали через 6 и 12 ч после инокуляции и криоконсервировали.Срезы тканей собирали, обрабатывали, окрашивали на GC и E-кадгерин (E-cad) и анализировали с использованием CFM. Показаны репрезентативные изображения CFM (A). Нарушение межклеточных соединений определяли по соотношению FI (FIR) (±SEM) E-cad (C) на межклеточной границе (красные точки на B) по отношению к цитоплазме (желтые точки на B) с использованием FI линейные профили, пересекающие межклеточное соединение (B). (D-E) Клетки HEC-1-B, трансфицированные CEACAM1L или 1S или без них, инокулированные Pil+Opa CEA или Pil+ΔOpa GC в течение 6 часов и окрашенные на GC, CEACAMs и β-катенин.Показаны репрезентативные изображения CFM (D). Пунктирные линии — клетки, экспрессирующие CEACAM1L или 1S. Нарушение межклеточных соединений определяли по FIR (±SEM) β-катенина на межклеточной границе с цитоплазмой (E). (F-G) Эксплантаты ткани шейки матки человека инокулировали Pil+Opa CEA GC с ингибитором SHP или без него (20 мкМ) в течение 24 часов. Срезы тканей окрашивали на E-cad и GC. Показаны репрезентативные изображения CFM (F). Нарушение межклеточных соединений определяли по FIR (±SEM) E-cad на межклеточной границе с цитоплазмой (G).Показано среднее значение 50~200 отдельных клеток в 20 случайно полученных изображениях из каждой области шейки матки 3 шейки матки (C и G) или 3 независимых экспериментов (E). Масштабная линейка, 20 мкм. ** р < 0,01; *** p <0,001, по данным критерия Стьюдента и однофакторного непараметрического дисперсионного анализа (критерий Крускала-Уоллиса).

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.g006

Чтобы определить, ингибирует ли взаимодействие Opa CEA -CEACAM действие GC на эпителиальные межклеточные соединения, мы сравнили способность GC вызывать разборку клеточных соединений. в клетках HEC-1-B с экспрессией CEACAM1L или 1S или без нее.Мы проанализировали разборку соединений в клетках HEC-1-B путем измерения FIR соединения и цитоплазмы β-катенина, белка, связывающего E-cad с клеточной передачей сигналов, цитоскелетом и CEACAMs [39, 40]. Инокуляция Pil + ΔOpa GC значительно снижала FIR соединения с цитоплазмой β-катенина в клетках HEC-1-B, независимо от того, экспрессировались ли CEACAM1L или 1S или нет (рис. 6D и 6E). Однако инокуляция Pil+Opa CEA снижала FIR β-катенина только в клетках, экспрессирующих CEACAM1S, но не CEACAM1L (фиг. 6D и 6E).Далее мы исследовали участие SHP в регуляции GC-индуцированной разборки межклеточного соединения на основе E-cad в шейке матки. Обработка ингибитором SHP уменьшала FIR соединения с цитоплазмой E-cad в эндоцервикальных эпителиальных клетках, инокулированных Pil+Opa CEA GC, но не влияла на FIR E-cad в инфицированных эпителиальных клетках эктоцервикала и TZ (рис. 6F). и 6G). В совокупности наши данные показывают, что GC исключительно разрушает основанное на E-cad клеточно-клеточное соединение эндоцервикса и TZ, а взаимодействие Opa CEA -CEACAM в эндоцервиксе ингибирует это нарушение, вероятно, посредством нижестоящих молекул, таких как SHP.

GC по-разному регулируют фосфорилирование β-катенина и активацию интегрина-β1 в различных эпителиальных клетках шейки матки

Интактные межклеточные соединения E-cad в инокулированных GC эктоцервикальных эпителиальных клетках, несмотря на сильное выделение, позволяют предположить, что GC индуцирует шеддинг эктоцервикальных эпителиальных клеток посредством механизма, отличного от GC-индуцированного шеддинга TZ и эндоцервикальных эпителиальных клеток. Чтобы изучить это, мы оценили уровни общего белка β-катенина и фосфорилированного β-катенина в Y333 (pY333) в различных эпителиальных клетках шейки матки, которые были инокулированы Pil+Opa CEA GC и обработаны ингибитором SHP или без него. а также уровень β-катенина pY333 в эпителиальных ядрах.Фосфорилирование β-катенина индуцирует диссоциацию β-катенина от межклеточных соединений E-cad, что приводит к разборке соединения, а его дефосфорилирование тирозинфосфатазами, такими как SHP1/2, может стабилизировать соединение [41]. Фосфорилированный β-катенин может перемещаться в ядра, чтобы регулировать транскрипцию [42]. Pil+Opa CEA GC увеличивал FI β-катенина pY333 более чем в 4 раза в отдельных эпителиальных клетках TZ (рис. 7A и 7B) и их ядрах (рис. 7C), но не в экто/эндоцервикальных эпителиальных клетках, по сравнению с контролем без GC.Обработка ингибитором, специфичным к тирозинфосфатазам SHP1/2 NSC87877, повышающим проникновение ГК в эндоцервикальный, но не в ПЗ и эктоцервикальный эпителий, повышала β-катенин pY333 FI в инфицированных эндоцервикальных эпителиальных клетках и их ядрах, но не в эктоцервикальных и ПЗ клетках. (рис. 7А–7С). Однако ни инокуляция GC, ни обработка ингибитором SHP не изменили уровни окрашивания общего белка β-катенина в эпителиальных клетках трех цервикальных областей (рис. 7D).Эти данные указывают на то, что GC индуцирует β-катенин pY333 и его ядерную транслокацию в TZ и эндоцервикальных, но не эктоцервикальных эпителиальных клетках. Экспрессия Opa CEA ингибирует, а ингибитор SHP усиливает β-катенин pY333 в эндоцервиксе, экспрессирующем CEACAM, но не в TZ с низким уровнем экспрессии CEACAM.

Рис. 7. GC по-разному регулируют фосфорилирование β-катенина и активацию интегрина β1 в различных эпителиальных клетках шейки матки.

Эксплантаты ткани шейки матки, обработанные ингибитором SHP или без него, инокулированные Pil+Opa или без него CEA GC в течение 24 часов.(AD) Срезы тканей окрашивали на β-катенин pY333 и общие белки β-катенина. (A) Показаны репрезентативные изображения CFM. (B) Уровни β-катенина pY333 были количественно определены с использованием изображений CFM как кратность увеличения его FI (± SEM) на эпителиальную клетку по сравнению с неинфицированным контролем. Показаны средние значения из 9 изображений, полученных для каждой шейной области 3 шейки матки человека. ( C ) Уровни β-катенина pY333 в ядре были количественно определены с использованием изображений CFM как кратность увеличения его MFI (± SEM) на эпителиальное ядро ​​​​по сравнению с неинфицированным контролем.Показаны средние значения для ~400 клеток в 9 изображениях на шейный отдел 3 человек. (D) Уровни белка β-катенина были количественно определены с использованием изображений CFM как кратность увеличения его FI (± SEM) на эпителиальную клетку по сравнению с неинфицированным контролем. (E-F) Срезы тканей окрашивали на активный интегрин β1. (E) Репрезентативные изображения CFM. (F) Уровни активного интегрина β1 были количественно определены с использованием изображений CFM как кратность увеличения его MFI (± SEM) в эпителиальных клетках шейки матки (за исключением базального слоя в эктоцервиксе) по сравнению с неинфицированным контролем.Показаны средние значения из 9 изображений, полученных для каждой шейной области 3 шейки матки человека. Масштабная линейка, 20 мкм. *** p <0,001, по данным критерия Стьюдента и однофакторного непараметрического дисперсионного анализа (критерий Крускала-Уоллиса).

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.g007

Предыдущие исследования с использованием мышиной модели, экспрессирующей CEACAMs человека, и линии клеток человека предполагают участие интегрина-β1 в эпителиальном отщеплении и колонизации GC [28]. Мы исследовали, был ли интегрин-β1 по-разному вовлечен в инфекцию GC в различных областях шейки матки, с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания интегрина-β1 в его активной конформации.Без инокуляции GC активный интегрин-β1 был обнаружен в базальном слое эктоцервикальных эпителиальных клеток, всех эпителиальных клетках TZ и базальной мембране эндоцервикальных эпителиальных клеток (рис. 7E). Инокуляция Pil+Opa CEA GC повышала MFI активного интегрина-β1 примерно в 4 раза в верхних слоях эктоцервикальных эпителиальных клеток и эндоцервикальных эпителиальных клеток, но не в эпителиальных клетках TZ (рис. 7E и 7F), по сравнению с контролем без GC. . Лечение ингибитором SHP, которое увеличивало отслоение экто/эндоцервикального эпителия, снижало MFI активного интегрина-β1 в эктоцервиксе до базального уровня, но не изменяло MFI активного интегрина-β1 в эндоцервиксе и TZ (рис. 7E и 7F).Наши результаты показывают, что Opa CEA GC активирует интегрин-β1 в эпителиальных клетках экто/эндоцервикса, но не TZ, а GC-индуцированная активация интегрина-β1 в эктоцервиксе, но не в эндоцервиксе чувствительна к ингибитору SHP. В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что GC в первую очередь нацелены на интегрин-β1 в эктоцервиксе, но на β-катенин в TZ и эндоцервиксе для регуляции инфекционности.

Обсуждение

В этом исследовании мы приводим доказательства того, что эксплантаты тканей шейки матки человека можно использовать в качестве эффективной модели для имитации GC-инфекции in vivo .Мы показываем, что когда ворсинчатые GC сталкиваются с гетерогенными поверхностями слизистой оболочки, они предпочтительно колонизируют эктоцервикс и область TZ. В отличие от этого паттерна колонизации, ГК избирательно проникают в субэпителий ПЗ и эндоцервикса с более высоким уровнем проникновения в ПЗ по сравнению с эндоцервиксом. Эти результаты согласуются с клиническими наблюдениями с использованием биопсий пациентов с гонореей, которые выявили GC в субэпителии TZ и эндоцервиксе, но не в эктоцервиксе [7].Поскольку РЖ заражает исключительно людей и инициирует заражение FRT из шейки матки, эксплантаты тканей шейки матки представляют собой превосходную модель инфекции ex vivo для понимания патогенеза РЖ, а также других возбудителей ИППП, а также для тестирования новых средств для профилактики и профилактики гонореи и ИППП. лечение.

Наши исследования с использованием тканевых эксплантатов позволяют предположить, что колонизация поверхности просвета и проникновение в субэпителиальную ткань являются основными путями, которыми GC инфицирует шейку матки человека.Технически сложно различить внеклеточный и внутриклеточный РЖ в инфицированных тканях шейки матки. Однако мы обнаружили очень мало GC между люминальной и базальной поверхностями эпителиальных клеток в эксплантатах шейки матки, что свидетельствует против инвазии GC и репликации внутри отдельных эпителиальных клеток как важного пути диссеминации. Несмотря на то, что взаимодействия GC-эпителия могут вызывать нейтрофильную инфильтрацию, проникновение GC с большей вероятностью подвергает бактерии воздействию иммунных клеток в субэпителии, чем колонизация.Следовательно, проникновение ГК, вероятно, вызовет воспаление, приводящее к симптоматической инфекции; и колонизация поверхности слизистой оболочки может вызвать только местную бессимптомную инфекцию.

Основным выводом этого исследования является то, что различия в свойствах эпителиальных клеток шейки матки являются критическими факторами, контролирующими потенциальные исходы инфекции, включая межклеточные соединения, удерживающие эпителиальные клетки вместе в качестве физического барьера, и экспрессию рецепторов клетки-хозяина для GC. Наше исследование показывает, что эпителиальные клетки в трех областях шейки матки не только экспрессируют разные уровни, но также демонстрируют отчетливое клеточное распределение CEACAM, выходящее за рамки недавнего сообщения о дифференциальной экспрессии изоформ CEACAM в различных частях FRT [22].Высокий уровень экспрессии CEACAM на просветной поверхности эктоцервикса вызывает сильную колонизацию Opa CEA GC. Низкий уровень экспрессии и внутриклеточное расположение CEACAM в эпителиальных клетках TZ устраняют эффекты Opa CEA , обеспечивая проникновение GC независимо от экспрессии варианта GC Opa, что объясняет, почему субэпителиальные GC были обнаружены в TZ пациентов. Эти данные свидетельствуют о том, что инфекционность РЖ может варьировать не только на поверхности слизистой оболочки шейки матки, но и в зависимости от менструального цикла, беременности и возраста, поскольку эти факторы могут изменять уровни экспрессии рецепторов хозяина к РЖ и размер ТЗ [43]. ].И наоборот, экспрессия рецепторов хозяина может управлять отбором GC с определенными вариантами поверхностных молекул, которые могут специфически связываться с этими рецепторами хозяина. Это подтверждается недавними исследованиями с использованием биоинформационного или функционального анализа изолятов человека, которые выявили положительное давление отбора, управляющее вариациями во внеклеточных областях поверхностных белков GC [44, 45].

Комплексы межклеточных соединений, которые запечатывают парацеллюлярное пространство, необходимы для барьерной функции эпителия, которая предотвращает проникновение патогенов в ткани.ГК проникают в ткани эндоцервикса, нарушая апикальное соединение [30]. В то время как гетерогенные эпителиальные клетки шейки матки имеют общие основанные на E-cad соединения, такие как слипчивое соединение и часть апикального соединения, это исследование показывает, что GC по-разному регулируют этот соединительный комплекс вдоль шейки матки. ГК избирательно разрушают соединения E-cad в ПЗ и эндоцервиксе, куда ГК может проникнуть, но не в эктоцервиксе, куда ГК проникнуть не могут. Кроме того, GC активирует только фосфорилирование β-catenin (Y333), что приводит к разборке соединения E-cad в TZ и эндоцервикальных, но не в эктоцервикальных эпителиальных клетках.Эти данные свидетельствуют о нарушении эпителиальных межклеточных соединений как о механизме проникновения GC. Мы наблюдали, что экспрессия E-cad однозначно отсутствует в просветных слоях эктоцервикальных эпителиальных клеток, даже после GC-индуцированного отщепления эпителия. Следовательно, у GC мало шансов взаимодействовать с эктоцервикальными эпителиальными клетками, непосредственно экспрессирующими E-cad, что объясняет, почему GC не могут разрушить соединения клеток E-cad в эктоцервиксе.

Эпителиальное отщепление негативно регулирует колонизацию GC.Предыдущие исследования показали, что ГК может модулировать отторжение вагинальных и эктоцервикальных эпителиальных клеток мышей и неполяризованных эпителиальных клеток человека путем нацеливания на интегрин β1 [46], который принадлежит к семейству белков, опосредующих клеточную адгезию к внеклеточному матриксу [47]. Мы расширили этот вывод, показав, что GC избирательно регулируют активность интегрина β1 в эктоцервикальных эпителиальных клетках, чтобы контролировать отщепление эпителия. В отличие от эктоцервикса, GC индуцируют отторжение TZ и эпителиальных клеток эндоцервикса, нарушая соединения E-cad.Эти результаты вместе проливают критический свет на механизм, с помощью которого различные свойства эпителиальных клеток шейки матки модулируют инфекционность РЖ.

В то время как роль пилей и Opa, двух основных поверхностных молекул на GC, в инфекции GC была тщательно изучена [13, 16, 21, 48-51], это исследование определило роль pili и Opa в инфекции GC на шейка матки человека in vivo . Наши результаты показывают, что пили необходимы для колонизации слизистой оболочки всех трех областей шейки матки GC, что указывает на важную роль пилей в инициировании инфекции GC в FRT.Напротив, Opa не является существенным ни для колонизации GC, ни для проникновения, поскольку штамм Pil+ GC со всеми делетированными 11 изоформами Opa все еще может колонизировать шейку матки и проникать в TZ и эндоцервикальный эпителий. Тем не менее, фазовая вариация Opa может изменить GC-инфекцию от благоприятной колонизации до проникновения в ткани. Экспрессия Opa CEA значительно увеличивает колонизацию GC экто/эндоцервикального эпителия, но резко ингибирует проникновение GC в субэпителий эндоцервикса (бактерии не проникают в эктоцервикс независимо от экспрессии Opa).Эти данные предполагают, что включение экспрессии Opa CEA может ограничивать GC-инфекцию в шейке матки человека до колонизации, что, вероятно, приводит к бессимптомной инфекции. Поскольку большинство из 11 изоформ Opa связываются с CEACAM, а большинство изолятов от пациентов [45, 52] и мышиные модели инфекции представляют собой Opa+ [48, 53], наши результаты могут объяснить, почему процент бессимптомных инфекций GC высок у женщин.

Предыдущие исследования показали роль белков Opa, особенно Opa CEA , в инвазии GC в эпителиальные клетки [18, 23].К сожалению, мы не можем исследовать инвазию GC в эпителиальные клетки в тканевых эксплантатах из-за технических трудностей в точном различении внутриклеточных и внеклеточных бактерий с помощью CFM. Однако, как обсуждалось выше, между люминальной и базальной поверхностями эпителия шейки матки человека было обнаружено лишь ограниченное окрашивание GC. Это означает, что инвазия GC и трансцитоз через эпителиальные клетки в эпителии не являются доминирующими событиями для инфекции GC в шейке матки человека. Интересно, что наши предварительные исследования обнаружили GC внутри отшелушивающихся эпителиальных клеток.Наши наблюдения об отсутствии ГК внутри клеток эпителия и наличии ГК внутри отслоившихся эпителиальных клеток согласуются с ранними клиническими наблюдениями [7, 54]. Тем не менее, вопрос о том, играют ли Opas роль в этом событии инвазии, как сообщалось ранее, и связь этого события инвазии с отслоением эпителия, представляет интерес для нашего будущего исследования.

Это исследование предоставляет прямые доказательства как на тканевых эксплантатах, так и на клетках HEC-1-B, которые экспрессируют и не экспрессируют CEACAM, что Opa CEA модулирует инфекцию GC в эксплантатах шейки матки через CEACAM, подтверждая результаты, полученные на трансгенных мышах CEACAM [22].Мы также показываем здесь, что активация SHP является потенциальным механизмом, с помощью которого Opa CEA /CEACAM регулирует инфекционность GC, поскольку ингибитор, специфичный для ферментативной активности SHP1/2, устраняет все эффекты экспрессии Opa CEA или CEACAM1L, которые мы измерили. . Однако наше исследование не исключает возможности дополнительных механизмов ниже по течению CEACAM.

Наши выводы о том, что инфекционность GC варьируется в зависимости от характеристик эпителиальных клеток, с которыми взаимодействуют GC, и вариантов поверхностных молекул GC согласовывают противоречивые результаты, опубликованные в этой области, объясняя, почему разные результаты были получены в разных экспериментальных системах.Объединяя результаты этого исследования и многочисленных опубликованных исследований, мы предлагаем следующую рабочую модель патогенеза РЖ при FRT (рис. 8). GC, введенные во влагалище, обеспечивают эффективную и постоянную колонизацию эктоцервикса и, возможно, также TZ и эндоцервикса посредством пилей и обусловленной эволюцией экспрессии Opa CEA , что приводит к бессимптомным локальным инфекциям. GC может использовать низкую экспрессию CEACAM в TZ для проникновения в эпителий, что приводит к цервициту (рис. 8A).Это проникновение также может быть механизмом преодоления цервикальной слизистой пробки и отторжения эпителия. Низкая экспрессия Opa CEA позволяет GC эффективно проникать в эндоцервикальный эпителий, индуцируя разборку эпителиальных межклеточных соединений, потенциально вызывая симптоматическую инфекцию (рис. 8B). Взаимодействие Opa-CEACAM переводит инфекционность GC в режим колонизации, в то же время ингибируя режим проникновения, блокируя разборку эпителиальных межклеточных соединений и активируя опосредованную интегрином адгезию эпителия, что снижает выделение эпителиальных клеток, связанных с GC (рис. 8B).Поскольку GC с низким уровнем экспрессии Opa CEA встречаются редко, поскольку большинство 11 белков Opa представляют собой Opa CEA , эта модель обеспечивает механистическое объяснение того, почему большинство инфекций FRT протекают бессимптомно и почему инвазивное заболевание встречается редко.

Рис. 8. Как гетерогенные свойства эпителиальных клеток шейки матки, так и поверхностные молекулы GC регулируют инфекционность GC.

Результаты этого исследования и многочисленные опубликованные исследования позволяют нам предложить рабочую модель патогенеза РЖ при ЗРТ.(A) GC, введенные во влагалище, обеспечивают эффективную и постоянную колонизацию в эктоцервиксе и, вероятно, также в TZ и эндоцервиксе посредством пилей и обусловленной эволюцией экспрессии Opa CEA , что приводит к бессимптомным локальным инфекциям. GC может использовать низкую экспрессию CEACAM в TZ для проникновения в эпителий, что приводит к цервициту. Низкая экспрессия Opa CEA позволяет GC эффективно проникать в эндоцервикальный эпителий, потенциально вызывая симптоматическую инфекцию.(B) GC проникают в эпителий эндоцервикса и TZ, индуцируя фосфорилирование β-катенина, что приводит к разборке эпителиальных межклеточных соединений на основе E-cad и отшелушиванию эпителия. Взаимодействие Opa-CEACAM переводит инфекционность GC в режим колонизации, в то же время ингибируя режим проникновения, блокируя фосфорилирование β-катенина и разборку эпителиальных межклеточных соединений и активируя интегрин-опосредованную адгезию эпителия, что снижает выделение GC-ассоциированных эпителиальных клеток.Поскольку GC с низким уровнем экспрессии Opa CEA встречаются редко, поскольку большинство 11 белков Opa представляют собой Opa CEA , большинство бактерий колонизируют, а не проникают в эпителий шейки матки, что объясняет, почему большинство инфекций FRT протекают бессимптомно, а инвазивные заболевание редкое.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.g008

Материалы и методы

Штаммы нейссерии

Н . gonorrhoeae Штамм MS11, экспрессирующий как пили, так и Opa (MS11Pil+Opa+), был получен от Dr.Герман Шнайдер, Армейский исследовательский институт Уолтера Рида. Ранее были описаны изогенные производные этого штамма, MS11ΔOpa (все 11 генов opa удалены), MS11OpaH (CEACAM-связывание, Opa CEA ) и MS11OpaC (HSPG-связывание, Opa HSPG ) [33, 34]. . Изогенные штаммы, полученные из MS11Opa+, включая штаммы OpaH, OpaC и ΔOpa, экспрессируют LOS-структуры, сходные с родительским штаммом [34]. MS11 Pil+Opa+ и Pil-Opa+ GC идентифицировали по морфологии их колоний с помощью препаровального светового микроскопа.Наш предыдущий анализ секвенирования показал, что они экспрессируют разные варианты pilE [34]. GC выращивали на чашках со средой GC (Difco, BD Bioscience) и 1% добавкой Kellogg’s [55] за 16–18 ч до инокуляции. Концентрацию GC в суспензии определяли с помощью спектрофотометра и инокулировали при множественности поражения около 1:10, одна клетка просветного цервикального эпителия на 10 бактерий.

Эксплантаты ткани шейки матки человека

Тканевые эксплантаты культивировали, как описано ранее [31].Ткани шейки матки были получены от пациенток, перенесших добровольную гистерэктомию, и получены в течение 24 часов после операции. Образцы разрезали на кусочки ~ 2,5 см (Д) X 0,6 см (Ш) X 0,3 см (В), инкубировали в среде CMRL-1066 (GIBCO) с антибиотиками в течение 24 ч, а затем в среде без антибиотиков в течение еще 24 ч, прежде чем инокуляция GC, как описано ранее [56]. Количество люминальных эпителиальных клеток шейки матки в каждом тканевом эксплантате оценивали путем деления люминальной площади поверхности тканевого эксплантата на среднюю люминальную площадь поверхности отдельных эпителиальных клеток (25 мкм 2 ).Площадь поверхности просвета каждого тканевого эксплантата измеряли с использованием микроскопических изображений и NIH ImageJ.

Иммунофлуоресцентный анализ эксплантатов ткани шейки матки человека

Отдельные кусочки ткани шейки матки инокулировали GC при MOI ~10 и инкубировали в течение 24 часов. При необходимости кусочки ткани инокулировали GC в присутствии или в отсутствие ингибитора SHP NSC87877 (20 мкМ, EMD Millipore). Неассоциированные GC удаляли путем обширных промывок через 6 и 12 часов после инокуляции.Затем ткань фиксировали, заливали желатином, криоконсервировали, делали срезы, пересекающие люминальную и базальную поверхности эпителия, окрашивали на F-актин (Cytoskeleton), E-кадгерин (BD Bioscience), CEACAMs (моноклональное антитело YTH71.3, кросс- реагируют с CEACAM1, 3 и 6, Santa Cruz Biotechnology), β-катенин (EMD Millipore), фосфорилированный β-катенин (Y333) (Thermo Fisher Scientific), интегрин β1 в активной конформации (моноклональное антитело 9EG7, BD Bioscience), и GC [57] специфическими антителами и ядрами Hoechst (Life Technologies) и визуализированы с использованием объектива 40X на конфокальном флуоресцентном микроскопе (Zeiss LSM 710, Carl Zeiss Microscopy LLC), как описано ранее [56].Изображения были получены случайным образом от эктоцервикса до эндоцервикса в виде одиночных изображений или Z-серии 0,57 мкм/изображение, а также трехмерных композитов, полученных с использованием программного обеспечения Zeiss Zen.

Уровни колонизации GC определяли количественно двумя методами с использованием конфокальных изображений: (1) процент GC-ассоциированных клеток просветного эпителия по сравнению с общим количеством клеток просветного эпителия путем визуального учета и (2) среднюю интенсивность флуоресценции (FI) ГХ-окрашивание на мкм 2 поверхности просвета с использованием программного обеспечения NIH ImageJ.Данные были получены с использованием изображений CFM из трех независимых анализов каждой из трех шейок матки человека. Уровни проникновения GC также определяли двумя методами: (1) процент эпителиальных клеток с окрашиванием GC на уровне базальной мембраны и ниже от общего числа эпителиальных клеток, ассоциированных с GC, посредством визуального подсчета, и (2) процент FI окрашивания GC в субэпителиальной ткани по сравнению с общим FI окрашивания GC как на субэпителиальной, так и на просветной поверхности в каждом случайно полученном изображении.Данные были получены с использованием 12~18 CFM-изображений на область шейки матки из двух-трех независимых анализов каждой из трех шейок матки человека.

Уровни экспрессии CEACAM в эпителиальных клетках измеряли с помощью FI окрашивания CEACAM на клетку. Данные были получены с использованием 21 CFM-изображения на область шейки матки, полученных в результате 2–4 независимых анализов трех шейок матки человека.

Привлечение CEACAM к GC оценивали по проценту микроколоний GC со скоплением окрашивания CEACAM под или рядом с общим количеством микроколоний GC через профили FI окрашивания GC и CEACAM на люминальной поверхности эпителия шейки матки.Данные были получены с использованием изображений двух независимых анализов каждой из трех шейок матки человека.

Уровни эксфолиации эпителия в эктоцервиксе и зоне трансформации (TZ) определяли двумя методами: (1) процент оставшейся толщины (мкм) эпителия в инфицированных и неинфицированных эксплантатах эктоцервикальной и TZ ткани, и (2) процент оставшихся слоев эпителиальных клеток в инфицированных и неинфицированных эксплантатах эктоцервикальной и TZ ткани. Уровни отслоения эпителия в эндоцервиксе определяли по проценту эпителиальных клеток, локализованных на вершине эпителиального монослоя, по сравнению с общим количеством эпителиальных клеток при визуальном осмотре.Данные были получены с использованием 12–30 изображений CFM, полученных на область шейки матки в результате 2–3 независимых анализов каждой из трех шейок матки человека.

Перераспределение E-кадгерина из межклеточного соединения в цитоплазму оценивали по соотношению интенсивности флуоресценции (FIR) окрашивания E-кадгерина в межклеточном соединении по сравнению с окрашиванием в цитоплазме в отдельных эпителиальных клетках с использованием изображений CFM и программное обеспечение NIH ImageJ. Данные были получены с использованием 50-200 отдельных эпителиальных клеток на область шейки матки из 20 случайно полученных CFM-изображений трех шейок матки человека.

Уровни фосфорилированного β-катенина в Y333 и общего β-катенина были количественно определены как кратность увеличения FI иммунофлуоресцентного окрашивания на эпителиальную клетку в инокулированных эксплантатах шейки матки по сравнению с контролем без GC. Уровни активного интегрина β1 количественно определяли как кратность увеличения MFI иммунофлуоресцентного окрашивания эпителия. Для эктоцервикса базальный слой эпителиальных клеток, который демонстрировал сильное окрашивание на активный интегрин β1 как в тканевых эксплантатах, инокулированных GC, так и без контроля GC, был исключен из количественной оценки.Данные были получены с использованием девяти CFM-изображений на область шейки матки, полученных с трех шейок матки человека. Уровни фосфорилированного β-катенина в эпителиальных ядрах оценивали по кратности увеличения MFI окрашивания в отдельных ядрах, показанного окрашиванием Hoechst, по сравнению с контролем без GC. Данные были получены на основе примерно 400 клеток на область шейки матки в девяти изображениях CFM, полученных с трех шейок матки человека.

Эпителиальные клетки и трансфекция CEACAM1

HEC-1-B, клеточную линию аденокарциномы эндометрия человека (ATCC), поддерживали в альфа-среде Eagles MEM с добавлением 10% термоинактивированной FBS.Клетки высевали по 3,5×10 5 на чашку (диаметр 60 мм, Thermo Fisher Scientific) и культивировали в течение двух дней перед трансфекцией. Клетки трансфицировали, используя 5 мкг плазмиды, содержащей кДНК CEACAM1L или CEACAM1S, и реагенты липофектамин 3000 (Thermo Fisher Scientific). Трансфицированные клетки высевали по 6×10 4 на лунку (диаметр 6,5 мм и размер пор 3 мкм, Corning) и культивировали в течение двух дней перед инокуляцией GC.

T84, клеточную линию колоректальной карциномы человека (ATCC), поддерживали в среде DMEM:Ham F12 (1:1) с добавлением 7% термоинактивированной фетальной телячьей сыворотки (FBS).Клетки высевали по 6×10 4 на лунку (диаметр 6,5 мм и размер пор 3 мкм, Corning) и культивировали в течение ~10 дней, пока трансэпителиальное электрическое сопротивление (TEER) не достигало >2000 Ом перед инокуляцией GC. TEER измеряли с помощью вольтомметра Millicell ERS (EMD Millipore).

Иммунофлуоресцентный анализ эпителиальных клеток

клеток HEC-1-B через два дня после трансфекции инокулировали GC при MOI 10 в течение 6 часов. Клетки промывали и фиксировали 4% параформальдегидом, пермеабилизировали 0.1% Triton X100 и окрашен анти-E-кадгерином (BD Bioscience), анти-β-катенином (EMD Millipore), анти-CEACAM (Santa Cruz Biotechnology), анти-GC антителами и Hoechst для ядер. Серии z-изображений были получены случайным образом с использованием CFM для создания максимальных проекций. Уровни прилипания GC к CEACAM-экспрессирующим и неэкспрессирующим клеткам сравнивали по соотношению средней интенсивности флуоресценции (MFI) окрашивания GC в CEACAM-положительных клетках по сравнению с CEACAM-отрицательными клетками при одинаковом размере областей интереса на одном и том же изображении.Эпителиальное отслоение количественно определяли с использованием изображений xz по проценту клеток HEC-1-B, перемещающихся над монослоем. Перераспределение β-катенина из межклеточного соединения в цитоплазму количественно определяли с использованием FIR окрашивания β-катенина в межклеточном соединении по сравнению с цитоплазмой, как описано для Е-кадгерина в тканевых эксплантатах. Результаты были получены из трех независимых экспериментов и пяти случайно полученных изображений для каждого условия в каждом эксперименте.

Анализ трансмиграции ГХ

Анализы проводились, как описано ранее [57].Вкратце, поляризованные эпителиальные клетки T84, предварительно обработанные ингибитором SHP NSC87877 или без него (20 мкМ, EMD Millipore) в течение 1 часа, инкубировали апикально с GC (MOI = 10) при 37°C в течение 6 часов. Базолатеральную среду собирали и культивировали, а полученные колонии считали трансмигрировавшими бактериями.

Статистический анализ

Статистическую значимость оценивали с использованием t-критерия Стьюдента и однофакторного непараметрического дисперсионного анализа (критерий Крускала-Уоллиса) с помощью программного обеспечения Prism (GraphPad Software).

Заявление об этике

Ткань шейки матки человека была получена от Национального центра исследований заболеваний (NDRI, Филадельфия, Пенсильвания). Используемые ткани шейки матки человека были обезличены. Использование человеческих тканей для этого исследования было одобрено Наблюдательным советом Университета Мэриленда.

Вспомогательная информация

S1 Рис. Эксплантаты ткани шейки матки человека сохраняют характеристики

in vivo в культуре.

Эксплантаты ткани шейки матки человека культивировали в течение трех дней и криоконсервировали.Срезы ткани собирали по просветной и базальной поверхности эпителия, окрашивали на ДНК, E-кадгерин, цитокератин и/или F-актин и анализировали с использованием CFM. (A) Репрезентативные изображения эпителиальных областей слизистой оболочки эксплантатов тканей шейки матки, объединяющие> 30 изображений, полученных с использованием объектива 10X. Пунктирные линии указывают на границу между эндоцервиксом и ПЗ и между ПЗ и эктоцервиксом. Масштабная линейка, 100 мкм. (B) Репрезентативные изображения трех областей эксплантатов тканей шейки матки.Масштабная линейка, 20 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.s001

(TIF)

S2 Рис. Конфокальные флуоресцентные микроскопические изображения эксплантатов ткани шейки матки, инокулированных GC или без него.

Эксплантаты ткани шейки матки человека инкубировали с MS11 Pil+Opa+ GC (Opa+) в течение 24 часов, промывали через 6 и 12 часов для удаления неассоциированного GC и криоконсервировали. Срезы ткани собирали с люминальной и базальной поверхности эпителия и окрашивали на GC, ДНК и F-актин.Изображения были получены с использованием объектива 40X с помощью конфокального флуоресцентного микроскопа (CFM, Zeiss LSM710). Показаны репрезентативные необрезанные изображения трех областей шейки матки эксплантатов тканей человека, которые были инокулированы с GC (-GC) или без него. Масштабная линейка, 20 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.s002

(TIF)

S3 Рис. Обработка ингибитором SHP NSC-87877 не оказывает существенного влияния на рост GC.

MS11 Pil+Opa CEA культивировали в среде GC (с 1% добавки Келлога и 1% NaHCO 3 ) в отсутствие или в присутствии NSC-87877 (20 мкМ).Бактериальные КОЕ подсчитывали через 6, 12 и 24 часа. Показаны средние КОЕ (±SEM) трех независимых экспериментов.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.s003

(TIF)

S4 Рис. Обработка ингибитором SHP увеличивает трансмиграцию Pil+Opa

CEA , но не трансмиграцию Pil+∆Opa GC через поляризованные эпителиальные клетки толстой кишки.

Трансмиграция Pil+Opa CEA и Pil+∆Opa GC через поляризованные эпителиальные клетки T84, обработанные ингибитором SHP (20 мкМ) или без него, показана как кратность увеличения GC CFU в исходной среде по сравнению с КОЕ трансмигрированного Pil+Opa CEA GC без обработки ингибитором SHP.Показаны средние КОЕ (±SEM) трех независимых экспериментов.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.s004

(TIF)

S5 Рис. Инокуляция GC нарушает межклеточное соединение на основе E-кадгерина.

Репрезентативные 3D-изображения TZ и эндоцервикального эпителия в эксплантатах ткани шейки матки человека, которые были инокулированы Pil+Opa CEA или Pil+ΔOpa GC или без них и окрашены на GC и E-кадгерин. Масштабная линейка, 20 мкм.

https://doi.org/10.1371/журнал.ppat.1008136.s005

(TIF)

S1 Видео. Трехмерные изображения срезов тканей шейки матки человека.

Эксплантаты ткани шейки матки человека культивировали в течение трех дней и криоконсервировали. Срезы ткани собирали на просветной и базальной поверхности эпителия, окрашивали на ДНК, E-кадгерин и F-актин и анализировали с использованием программного обеспечения CFM и Zen. Показаны репрезентативные 3D-изображения эпителия эктоцервикальной, TZ и эндоцервикальной областей.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.s006

(MP4)

S2 Видео. Проникновение Pil+Opa

CEA GC в субэпителий ТЗ.

Эксплантаты ткани шейки матки человека инокулировали Pil+Opa CEA GC в течение 24 часов. Тонкие срезы инфицированных тканевых эксплантатов окрашивали на ДНК, F-актин и GC и анализировали с использованием программного обеспечения CFM и Zen. Показаны репрезентативные 3D-изображения эпителия эктоцервикальной, TZ и эндоцервикальной областей. Стрелки, ГК проникли в субэпителий.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.s007

(MP4)

Видео S3. Распределение CEACAM в ткани шейки матки человека.

Тонкие срезы эксплантатов ткани шейки матки человека окрашивали на ДНК и CEACAM и анализировали с использованием программного обеспечения CFM и Zen. Показаны репрезентативные 3D-изображения эпителия эктоцервикальной, TZ и эндоцервикальной областей.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.s008

(MP4)

Видео S4.CEACAM рекрутируются в местах прикрепления Pil+Opa

CEA GC на эндоцервикальных, но не эктоцервикальных и TZ эпителиальных клетках.

Эксплантаты ткани шейки матки человека инокулировали Pil+Opa CEA GC в течение 24 часов. Тонкие срезы инфицированных тканевых эксплантатов окрашивали на ДНК, CEACAMs и GC и анализировали с использованием программного обеспечения CFM и Zen. Показаны репрезентативные 3D-изображения эпителия эктоцервикальной, TZ и эндоцервикальной областей. Стрелки, микроколонии GC, рекрутирующие CEACAM.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008136.s009

(MP4)

Благодарности

Мы благодарим UMD CBMG Imaging Core за все микроскопические эксперименты и доктора Норму Эндрюс за критический обзор рукописи.

Каталожные номера

  1. 1. CDC. Факты о ЗППП (http://www.cdc.gov/std/gonorrhea/STDFact-gonorrhea-detailed.htm), по состоянию на 5 октября 2017 г. Доступно по адресу: www.cdc.gov/std/gonorrhea/stdfact-gonorrhea.htm .
  2. 2.Унемо М., Дель Рио К., Шафер В.М. Устойчивость к противомикробным препаратам, выраженная Neisseria gonorrhoeae : основная глобальная проблема общественного здравоохранения в 21 веке. Микробиологический спектр. 2016;4(3). пмид: 27337478; Центральный PMCID в PubMed: PMC4920088.
  3. 3. Райс П.А., Шафер В.М., Рам С., Джерси А.Э. Neisseria gonorrhoeae : лекарственная устойчивость, мышиные модели и разработка вакцины. Анну Рев Микробиол. 2017;71:665–86. пмид: 28886683.
  4. 4. Эдвардс Дж.Л., Апичелла М.А.Молекулярные механизмы, используемые Neisseria gonorrhoeae для инициации инфекции, различаются у мужчин и женщин. Clin Microbiol Rev. 2004;17(4):965–81, оглавление. пмид: 15489357.
  5. 5. Эдвардс Дж.Л., Батлер Э.К. Патобиология Neisseria gonorrhoeae Нижняя инфекция женских половых путей. Фронт микробиол. 2011;2:102. пмид: 21747805; Центральный PMCID в PubMed: PMC3129011.
  6. 6. Бхаттачарья М.Н., Джефкотт А.Е., Мортон Р.С. Диагностика гонореи у женщин: сравнение мест забора проб.Br Med J. 1973; 2 (5869): 748–50. пмид: 4736958; Центральный PMCID в PubMed: PMC1589763.
  7. 7. Харкнесс АХ. Патология гонореи. Бр Дж. Венер Дис. 1948;24(4):137–47. пмид:18099876
  8. 8. Кенеманс П., Давина Дж., де Ханн Р.В., Хафез Э.С. Шейка матки. В: Kenemans ESEHaP, редактор. Атлас репродукции человека с помощью сканирующей электронной микроскопии. Хингем, Массачусетс: пресс-служба MTP; 1982. с. 45–54.
  9. 9. Курита Т. Нормальная и аномальная дифференцировка эпителия в женских половых путях.Дифференциация. 2011;82(3):117–26. Эпб 2011/05/27. пмид: 21612855; Центральный PMCID в PubMed: PMC3178098.
  10. 10. Сигал Э., Бильярд Э., Со М., Шторцбах С., Мейер Т.Ф. Роль хромосомной перестройки в фазовых вариациях пилуса Neisseria gonorrhoeae . Клетка. 1985; 40: 293–302. пмид:2857113
  11. 11. Стерн А., Браун М., Никель П., Мейер Т.Ф. Гены непрозрачности Neisseria gonorrhoeae : контроль фазовой и антигенной изменчивости. Клетка. 1986; 47: 61–71.пмид:3093085
  12. 12. Суонсон Дж. Исследования гонококковой инфекции. IV. Пили: их роль в прикреплении гонококков к клеткам тканевой культуры. J Эксперт Мед. 1973;137(3):571–89. пмид:4631989
  13. 13. ван Путтен Дж.П., Пол С.М. Связывание синдеканоподобных рецепторов протеогликанов клеточной поверхности необходимо для проникновения Neisseria gonorrhoeae в клетки слизистой оболочки человека. EMBO J. 1995;14(10):2144–54. пмид:7774572
  14. 14. Вирджи М., Мейкпис К., Фергюсон Д.Дж., Ватт С.М.Раково-эмбриональные антигены (CD66) на эпителиальных клетках и нейтрофилах являются рецепторами для белков Opa патогенных neisseriae . Мол микробиол. 1996;22(5):941–50. Эпублик 1 декабря 1996 г. пмид:8971715.
  15. 15. Грей-Оуэн С.Д., Дехио С., Хауде А., Грюнерт Ф., Мейер Т.Ф. Раково-эмбриональные антигены CD66 опосредуют взаимодействия между Opa-экспрессирующим Neisseria gonorrhoeae и полиморфноядерными фагоцитами человека. EMBO J. 1997;16(12):3435–45. пмид:9218786; Центральный PMCID в PubMed: PMC1169969.
  16. 16. Эдвардс Дж. Л., Браун Э. Дж., Ук-Нхам С., Кэннон Дж. Г., Блейк М. С., Апичелла М. А. Кооперативное взаимодействие между Neisseria gonorrhoeae и рецептором комплемента 3 опосредует инфекцию первичных эпителиальных клеток шейки матки. Клеточная микробиология. 2002;4(9):571–84. пмид:123
  17. .
  18. 17. Эдвардс Дж.Л., Апичелла М.А. Интегрины, содержащие I-домен, служат рецепторами ворсинок для прикрепления Neisseria gonorrhoeae к эпителиальным клеткам человека. Клеточная микробиология.2005;7(8):1197–211. пмид: 16008586.
  19. 18. Хаук Ч.Р., Мейер Т.Ф. «Светская беседа»: белки Opa как медиаторы связи Neisseria-клетка-хозяин. Curr Opin Microbiol. 2003;6(1):43–9. пмид: 12615218.
  20. 19. Биллкер О., Попп А., Грей-Оуэн С.Д., Мейер Т.Ф. Структурные основы нацеливания CEACAM-рецепторов нейссерийными белками Opa. Тенденции микробиол. 2000;8(6):258–60. пмид:10838580.
  21. 20. Chen T, Belland RJ, Wilson J, Swanson J. Адгезия гонококков pilus-Opa+ к эпителиальным клеткам in vitro включает гепарансульфат.J Эксперт Мед. 1995;182(2):511–7. пмид:7629509; Центральный PMCID в PubMed: PMC2192128.
  22. 21. Чен Т., Грюнерт Ф., Медина-Марино А., Готчлих Э.С. Некоторые карциноэмбриональные антигены (CD66) служат рецепторами для гонококковых белков помутнения. J Эксперт Мед. 1997;185(9):1557–64. пмид:93; Центральный PMCID в PubMed: PMC2196295.
  23. 22. Ислам Э.А., Анипинди В.К., Франциск I, Шайк-Дастхагирисахеб Ю., Сюй С., Люн Н. и др. Специфическое связывание с дифференциально экспрессируемыми молекулами адгезии клеток, родственными карциноэмбриональному антигену человека, определяет исход инфекций Neisseria gonorrhoeae вдоль женских половых путей.Заразить иммун. 2018;86(8). Эпб 2018/05/16. пмид: 29760215; Центральный PMCID в PubMed: PMC6056862.
  24. 23. Шмиттер Т., Пилс С., Вайбель С., Агерер Ф., Петерсон Л., Бунтру А. и др. Белки Opa патогенных neisseriae инициируют зависимое от киназы Src или опосредованное липидным рафтом поглощение через различные изоформы молекул клеточной адгезии, связанные с карциноэмбриональным антигеном человека. Заразить иммун. 2007;75(8):4116–26. пмид: 17517873; Центральный PMCID в PubMed: PMC1952016.
  25. 24. Боултон IC, Грей-Оуэн SD.Связывание Neisserial с CEACAM1 останавливает активацию и пролиферацию CD4+ Т-лимфоцитов. Нат Иммунол. 2002;3(3):229–36. пмид: 11850628.
  26. 25. Nagaishi T, Pao L, Lin SH, Iijima H, Kaser A, Qiao SW, et al. Зависимое от фосфатазы SHP1 ингибирование Т-клеток изоформами молекулы адгезии CEACAM1. Иммунитет. 2006;25(5):769–81. Эпублик 2006/11/04. пмид: 17081782.
  27. 26. Ли Х.С., Островски М.А., Грей-Оуэн С.Д. Динамика CEACAM1 при Neisseria gonorrhoeae подавлении активации CD4+ Т-лимфоцитов.Дж Иммунол. 2008;180(10):6827–35. пмид: 18453603.
  28. 27. Мюнцнер П., Роде М., Кнейц С., Хаук С.Р. Взаимодействие CEACAM с человеческими патогенами усиливает клеточную адгезию и противодействует бактериальному отслоению эпителиальных клеток. Джей Селл Биол. 2005; 170:825–36. пмид:16115956
  29. 28. Мюнцнер П., Бахманн В., Циммерманн В., Хентшель Дж., Хаук С.Р. Бактериальные патогены, ограниченные для человека, блокируют отщепление эпителиальных клеток, стимулируя активацию интегрина. Наука. 2010;329(5996):1197–201.пмид: 20813953
  30. 29. Wang J, Gray-Owen SD, Knorre A, Meyer TF, Dehio C. Связывание Opa с клеточными рецепторами CD66 опосредует трансцеллюлярное перемещение Neisseria gonorrhoeae через монослои поляризованных эпителиальных клеток T84. Мол микробиол. 1998;30(3):657–71. пмид:9822830
  31. 30. Wang LC, Yu Q, Edwards V, Lin B, Qiu J, Turner JR, et al. Neisseria gonorrhoeae инфицирует эндоцервикс человека, активируя немышечное отслоение эпителия, опосредованное миозином II.PLoS Патог. 2017;13(4):e1006269. Эпб 2017/04/13. пмид: 28406994; Центральный PMCID в PubMed: PMC53.
  32. 31. Шурч В., Макдауэлл Э.М., Трамп Б.Ф. Длительная органная культура эндоцервикса матки человека. Рак Рез. 1978; 38 (11, часть 1): 3723–33. Эпб 1978/11/01. пмид:698932.
  33. 32. Бос М.П., ​​Куроки М., Кроп-Ваторек А., Хоган Д., Белланд Р.Дж. Специфичность рецептора CD66, проявляемая вариантами Opa нейссерий, контролируется белковыми детерминантами в N-доменах CD66. Proc Natl Acad Sci U S A.1998;95(16):9584–9. Эпб 1998/08/05. пмид:9689124; Центральный PMCID в PubMed: PMC21382.
  34. 33. Леван А., Циммерман Л.И., Мале А.С., Суонсон К.В., ДеШонг П., Парк Дж. и др. Конструирование и характеристика производного Neisseria gonorrhoeae штамма MS11, лишенного всех opa генов. J Бактериол. 2012;194(23):6468–78. Эпб 2012/09/25. JB.00969-12 [pii]. пмид:23002223; Центральный PMCID в PubMed: PMC3497525.
  35. 34. Стейн Д.С., ЛеВан А., Харди Б., Ван Л.С., Циммерман Л., Сонг В.Экспрессия белков непрозрачности препятствует трансмиграции Neisseria gonorrhoeae через поляризованные эпителиальные клетки. ПЛОС Один. 2015;10(8):e0134342. пмид: 26244560; Центральный PMCID в PubMed: PMC4526573.
  36. 35. Villullas S, Hill DJ, Sessions RB, Rea J, Virji M. Мутационный анализ CEACAM1 человека: потенциал полиморфизма рецепторов в повышении восприимчивости хозяина к бактериальной инфекции. Клеточная микробиология. 2007;9(2):329–46. Эпубликовано 31 августа 2006 г. пмид: 16953805; Центральный PMCID в PubMed: PMC1859983.
  37. 36. Бамбергер А.М., Бриз Дж., Гетце Дж., Эрдманн И., Шульте Х.М., Вагенер С. и др. Стимуляция экспрессии CEACAM1 12-O-тетрадеканоилфорбол-13-ацетатом (ТРА) и ионофором кальция A23187 в клетках карциномы эндометрия. Канцерогенез. 2006;27(3):483–90. пмид:16332726
  38. 37. Грей-Оуэн С.Д., Блумберг Р.С. CEACAM1: контактно-зависимый контроль иммунитета. Нат Рев Иммунол. 2006;6(6):433–46. Эпублик 2006/05/26. пмид: 16724098.
  39. 38. Хубер М., Иззи Л., Грондин П., Худе С., Кунат Т., Вейлетт А. и др.Карбоксильно-концевая область гликопротеина желчи контролирует его фосфорилирование тирозина и ассоциацию с протеин-тирозинфосфатазами SHP-1 и SHP-2 в эпителиальных клетках. Дж. Биол. Хим. 1999;274(1):335–44. Эпублик 1998/12/29. пмид:9867848.
  40. 39. Capaldo CT, Farkas AE, Nusrat A. Эпителиальные спаечные соединения. F1000Prime Rep. 2014; 6:1. пмид: 24592313; Центральный PMCID в PubMed: PMC3883420.
  41. 40. Чупа А.К., Шумахер Т., Хаук Ч.Р. Передача сигналов эпителиальными членами семейства CEACAM — места стыковки слизистой оболочки для патогенных бактерий.Сигнал сотовой связи. 2014;12:27. пмид: 24735478; Центральный PMCID в PubMed: PMC4057559.
  42. 41. Simoneau M, Coulombe G, Vandal G, Vézina A, Rivard N. SHP-1 ингибирует функцию β-катенина, вызывая его деградацию и препятствуя его ассоциации с ТАТА-связывающим белком. Сотовый сигнал. 2011;23(1):269–79. Эпб 2010/09/16. пмид: 20840866.
  43. 42. Валента Т., Хаусманн Г., Баслер К. Многогранность и функции β-катенина. EMBO J. 2012;31(12):2714–36. Эпб 2012/05/22.пмид: 22617422; Центральный PMCID в PubMed: PMC3380220.
  44. 43. Хендриксон М.Р., Кемпсон Р.Л. Нормальная гистология матки и фаллопиевых труб. В: Штернберг С.С., изд. Гистология для патологов, 2-е изд. Филадельфия: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс; 1997. с. стр. 879–927.
  45. 44. Вахтер Дж., Хилл С. Давление положительного отбора вызывает изменчивость экспонированных на поверхности вариабельных белков патогенных Neisseria . ПЛОС Один. 2016;11(8).
  46. 45.Синцова А., Вонг Х., Макдональд К.С., Каул Р., Вирджи М., Грей-Оуэн С.Д. Селекция на фенотип связывания, специфичного к рецептору CEACAM, во время инфекции Neisseria gonorrhoeae половых путей человека. Заразить иммун. 2015;83(4):1372–83. пмид: 25605771; Центральный PMCID в PubMed: PMC4363431.
  47. 46. Muenzner P, Bachmann V, Kuespert K, Hauck CR. Трансмембранный домен CEACAM1, но не цитоплазматический домен, направляет интернализацию патогенов человека через мембранные микродомены.Клеточная микробиология. 2008;10(5):1074–92. пмид: 18081725.
  48. 47. Ивамото Д.В., Колдервуд Д.А. Регуляция интегрин-опосредованных спаек. Curr Opin Cell Biol. 2015;36:41–7. пмид: 26189062; Центральный PMCID в PubMed: PMC4639423.
  49. 48. Джерси АЕ. Экспериментальная гонококковая инфекция половых путей и экспрессия белка непрозрачности у мышей, получавших эстрадиол. Инфекция и иммунитет. 1999;67(11):5699–708. ИСИ: 000083343000021. пмид:10531218
  50. 49. Купш Э.М., Кнеппер Б., Куроки Т., Хойер И., Мейер Т.Ф.Белки наружной мембраны с переменной непрозрачностью (Opa) объясняют клеточный тропизм, проявляемый Neisseria gonorrhoeae по отношению к лейкоцитам и эпителиальным клеткам человека. EMBO J. 1993;12(2):641–50. пмид:8440254; Центральный PMCID в PubMed: PMC413248.
  51. 50. Мелли М.А., Грегг Ч.Р., МакГи З.А. Исследования токсичности Neisseria gonorrhoeae для слизистой оболочки фаллопиевых труб человека. J заразить дис. 1981;143(3):423–31. пмид: 6785364.
  52. 51. Вирджи М., Кайхти Х., Фергюсон Д.Дж., Александреску С., Хекелс Дж.Э., Моксон Э.Р.Роль пилей во взаимодействиях патогенных Neisseria с культивируемыми эндотелиальными клетками человека. Мол микробиол. 1991; 5 (8): 1831–41. пмид:1722554
  53. 52. Schmidt KA, Deal CD, Kwan M, Thattassery E, Schneider H. Neisseria gonorrhoeae Экспрессия белка непрозрачности MS11mkC in vitro и во время исследований инфекционности на добровольцах. Секс Трансм Дис. 2000;27(5):278–83. пмид:10821601.
  54. 53. Садарангани М., Поллард А.Дж., Грей-Оуэн С.Д.Белки Opa и CEACAM: пути иммунного взаимодействия с патогенными Neisseria . FEMS Microbiol Rev. 2010; 35: 498–514. Эпб 06.01.2011. пмид: 21204865.
  55. 54. Эванс Б.А. Ультраструктурное исследование цервикальной гонореи. J заразить дис. 1977;136(2):248–55. пмид:408425.
  56. 55. Уайт Л.А., Келлог Д.С. Улучшенная ферментационная среда для Neisseria gonorrhoeae и других Neisseria. Лаборатория здоровья. 1965;2(4):238–41. пмид: 4953822.
  57. 56.Wang LC, Yu Q, Stein DC, Song W. Иммунофлуоресцентный анализ эксплантатов эндоцервикальной ткани человека, инфицированных Neisseria gonorrhoeae . Био проток. 2018;8(3). пмид: 29780854; Центральный PMCID в PubMed: PMC5959038.
  58. 57. Edwards VL, Wang LC, Dawson V, Stein DC, Song W. Neisseria gonorrhoeae нарушает апикальное соединение поляризованных эпителиальных клеток для трансмиграции путем активации EGFR. Клеточная микробиология. 2013;15(6):1042–57. пмид: 23279089

Проблемы с мазком Папаниколау — Аномальный результат мазка Папаниколау — Аномальный результат теста мазка Папаниколау — Д-р Метава — Госфорд Северный Сидней Австралия — Доктор Метава

Мазок Папаниколау — это скрининговый тест, чтобы проверить, не произошли ли аномальные изменения в клетках шейки матки.Шейка матки является самой нижней частью матки и соединяет матку с влагалищем. Мазок Папаниколау также называют цервикальным мазком. Слой клеток, называемых плоскоклеточными клетками, покрывает внешнюю поверхность шейки матки. Слой клеток, называемых железистыми клетками, выстилает эндоцервикальный канал. Эти два типа клеток встречаются в «зоне трансформации», которая обычно находится снаружи шейки матки, но может быть и внутри эндоцервикального канала. При взятии мазка Папаниколау врач аккуратно соскребает клетки с этих участков.Затем клетки готовят на предметном стекле микроскопа для исследования в лаборатории патологии. Исследование определит, являются ли клетки нормальными или аномальными. Лечение для удаления аномальных клеток на шейке матки в большинстве случаев:

  • Приводит к росту здоровых клеток, а
  • Значительно снижает риск рака шейки матки.

Без лечения существует риск того, что аномальные клетки могут перерасти в рак шейки матки. Регулярные мазки Папаниколау важны, потому что рост предраковых клеток на поверхности шейки матки обычно не вызывает боли или других физических симптомов.Мазок Папаниколау является единственным средством обнаружения предраковых клеток.

Аномальный мазок Папаниколау

При исследовании мазка Папаниколау можно увидеть различные изменения в клетках. Важные изменения называются «дисплазией». Дисплазия – это аномальное изменение размера и формы клеток. Дисплазия не является раком, но тяжелая дисплазия может перерасти в рак в течение длительного, но непредсказуемого периода времени, если ее не лечить. Для развития большинства видов рака шейки матки требуются годы. Дисплазию клеток на поверхности шейки матки классифицируют как легкую, среднюю или тяжелую.

В настоящее время более распространенным термином для описания аномальных клеток шейки матки является «цервикальная интраэпителиальная неоплазия» или ЦИН. Интраэпителиальный означает «внутри ткани», а «неоплазия» означает новый рост (аномальных) клеток. CIN-1 — легкая дисплазия. CIN-2 – умеренная дисплазия. CIN-3 — тяжелая дисплазия. CIN-1 возникает из-за заражения ВПЧ (вирусом папилломы человека). Из каждых 10 случаев заражения ВПЧ восемь исчезают без лечения в течение 12 месяцев. В дополнение к изменениям CIN обычно наблюдаются другие незначительные аномалии.Они часто требуют последующего наблюдения, но не обязательно означают, что развиваются предраковые изменения».

Аномалии плоскоклеточных и железистых клеток

Два типа клеток шейки матки могут развиваться аномальные изменения. Наиболее часто поражаются плоскоклеточные клетки. Аномалии железистых клеток встречаются гораздо реже.

  1. Плоскоклеточные аномалии – Большинство аномалий, обнаруженных в мазке Папаниколау, связаны с инфекцией ВПЧ. На ранних стадиях инфекции ВПЧ на шейке матки не вызывает никаких признаков или симптомов.Инфекция ВПЧ обычно устраняется собственной иммунной системой организма, при этом 80% инфекций излечиваются в течение 12 месяцев. Аномалии классифицируются следующим образом:
    • Возможное LSIL (плоскоклеточное внутриэпителиальное поражение низкой степени): Иногда мазок Папаниколау показывает возможные незначительные изменения, и точная причина неясна. Эти атипичные клетки могут быть вызваны воспалением тканей, изменениями, вызванными ВПЧ, или инфицированием каким-либо другим микроорганизмом (бактериями, вирусами, грибками или дрожжами). Обычно со временем состояние улучшается.Женщине обычно советуют сделать еще один мазок Папаниколау через 12 месяцев. Если изменения сохраняются, врач может порекомендовать кольпоскопию.
    • LSIL (плоскоклеточное внутриэпителиальное поражение низкой степени злокачественности): Этот отчет о мазке Папаниколау предполагает наличие определенных изменений, обычно связанных с инфекцией ВПЧ. Эти изменения могут быть названы только ВПЧ, или могут присутствовать другие клетки, которые называются CIN-1. 80% этих аномалий LSIL исчезают в течение 12 месяцев. Если у вас впервые были обнаружены аномальные клетки на шейке матки, врач порекомендует вам пройти повторный мазок Папаниколау через 12 месяцев.Если изменения все еще присутствуют через 12 месяцев, врач порекомендует вам пройти кольпоскопию. Если вам больше 30 лет и у вас не было нормального мазка Папаниколау в предыдущие два-три года, ваш врач может порекомендовать повторный мазок Папаниколау через 6 месяцев или может направить вас на кольпоскопию. Если диагноз слабовыраженной аномалии подтвердится, вам НЕ потребуется никакого лечения, только наблюдение с регулярными мазками Папаниколау каждый год, пока аномалия не исчезнет.
    • Возможный HSIL (плоскоклеточное внутриэпителиальное поражение высокой степени): Этот отчет о мазке Папаниколау означает, что патологоанатом не уверен в точной аномалии, но подозревает, что может быть HSIL (высокосортная аномалия), такая как CIN-2 или ЦИН-3.Врач направит вас на кольпоскопию.
    • HSIL (Плоскоклеточное внутриэпителиальное поражение высокой степени): Этот мазок означает, что весьма вероятно наличие аномалии высокой степени на шейке матки. Ваш врач направит вас на кольпоскопию.
    • Рак: Этот отчет о мазке означает, что в мазке есть клетки, которые могут быть связаны с наличием рака шейки матки. Ваш врач направит вас на кольпоскопию, которую часто проводит гинеколог-онколог, специализирующийся на уходе за женщинами с раком шейки матки.
  2. Аномалии железистых клеток: Это необычные изменения клеток шейки матки. Женщин с такими клеточными изменениями рекомендуется направлять на кольпоскопию, так как на мазок Папаниколау для последующего наблюдения полагаться труднее. Основываясь на результатах кольпоскопии или биопсии, врач может посоветовать вам чаще сдавать мазки Папаниколау или проводить лечение для удаления аномальных клеток.

Цервикальная интраэпителиальная неоплазия (CIN-1/HPV)

Незначительные изменения размера, формы и количества клеток шейки матки называются CIN-1 или легкой дисплазией.Почти все аномалии низкой степени (CIN-1) исчезнут без лечения, так как они вызваны инфекцией ВПЧ. Лечение этой аномалии больше не рекомендуется, так как вред перевешивает пользу. У небольшого числа женщин аномалия низкой степени сохраняется или редко прогрессирует до изменения высокой степени. После постановки диагноза CIN-1/ВПЧ женщине обычно рекомендуется сдавать мазок Папаниколау у своего врача каждый год, пока мазок Папаниколау не вернется к норме. У небольшого числа женщин незначительные изменения могут сохраняться из-за продолжающейся инфекции ВПЧ.В этой ситуации женщина должна продолжать делать мазок Папаниколау ежегодно, пока он не вернется к норме. Если развивается аномалия высокой степени, ей следует пройти кольпоскопию.

Аномалии высокой степени CIN-2 и CIN-3

Могут присутствовать предраковые клетки, сильно отличающиеся от нормальных клеток. Они описываются как умеренная дисплазия (CIN-2) или тяжелая дисплазия (CIN-3).

Предраковые изменения затрагивают только клетки поверхностного слоя шейки матки. Эти клетки с большей вероятностью станут раковыми и проникнут в более глубокие слои шейки матки, если их не лечить.При выявлении высокодифференцированных аномалий в мазке Папаниколау женщине рекомендуется пройти кольпоскопию и биопсию. Если диагноз ЦИН-2 или ЦИН-3 подтвержден, то рекомендуется лечение для удаления аномальных клеток. Хотя не все CIN-2 и CIn-3 будут прогрессировать в рак, невозможно предсказать, какая аномалия исчезнет. Поэтому рекомендуется лечить все CIN-2 и CIN-3, за исключением определенных обстоятельств. Оставлять CIN-2 и CIN-3 без лечения опасно. Если в течение длительного периода аномальные клетки распространяются глубже в шейку матки или в другие ткани или органы, заболевание называется раком шейки матки и требует более агрессивного лечения.Поражения высокой степени (CIN-3) обычно развиваются в рак в течение многих лет.

Кольпоскопия

Кольпоскопия — это визуальный осмотр шейки матки для выявления предраковых изменений. Процедура обычно проводится в кабинете врача. Женщину просят раздеться ниже пояса и лечь на специально сконструированную кушетку, поддерживающую ее ноги. Как и при мазке по Папаниколау, во влагалище вводится зеркало, чтобы шейка матки оставалась открытой. Врач использует кольпоскоп (увеличительный прибор, похожий на бинокль с подключенным фонариком) для осмотра шейки матки.Кольпоскоп не вводят во влагалище, только зеркало. Шейка матки окрашивается слабой уксусной кислотой (уксусом), отчего патологические клетки белеют; можно использовать как йод, так и уксусную кислоту. Полученная картина может помочь врачу решить, является ли это поражением высокой или низкой степени. Важно сообщить своему врачу, если у вас когда-либо была аллергическая реакция на йод. Ваш врач может взять небольшой образец ткани (биопсия) из любой аномально выглядящей области. На область биопсии можно нанести специальный раствор, чтобы остановить кровотечение.Если была взята биопсия, у вас может быть некоторая боль или дискомфорт, похожий на менструальные спазмы, которые можно снять с помощью болеутоляющего средства. Затем биопсию отправляют в патологоанатомическое отделение для диагностики. Результаты обычно сообщают примерно через неделю. После биопсии у вас есть незначительное кровотечение и незначительные выделения из влагалища в течение недели. Избегайте секса, тампонов или ванн (вместо душа) в течение недели, чтобы шейка матки зажила.

Лечение дисплазии

Если результаты кольпоскопии и биопсии указывают на патологию высокой степени (CIN-2 или CIN3), врач порекомендует лечение для удаления аномальных клеток.Лечение также может быть рекомендовано при стойких слабовыраженных аномалиях. Несколько методов лечения являются эффективными, как описано ниже. Лучшее лечение для вас будет зависеть от типа и серьезности аномальных клеток.

Иссечение проволочной петлей – Иссечение проволочной петлей также известно как LEEP (процедура электрохирургического иссечения петли) или LLETZ (иссечение большой петли зоны трансформации). Полукруглая проволочная петля используется для удаления части шейки матки, содержащей предраковые изменения.Многие врачи предпочитают иссечение проволочной петлей другим методам, поскольку удаленная ткань не разрушается и ее можно отправить в патологоанатомическую лабораторию для исследования. Иссечение проволочной петлей часто предпочтительнее, когда в эндоцервикальном канале присутствуют аномальные клетки. Используя проволочную петлю, можно:

  • Подтвердить, были ли полностью удалены аномальные клетки, и
  • Определить тип присутствующей аномалии.

Во время процедуры вводят зеркало, чтобы открыть влагалище и четко увидеть шейку матки.На поверхность шейки матки наносят слабую уксусную кислоту (уксус) и/или раствор йода, чтобы сделать участки аномальных клеток более заметными. Вводят местный анестетик, чтобы вызвать онемение шейки матки. Затем слои аномальных клеток срезают с шейки матки тонкой проволочной петлей, через которую проходит электрический ток. Диатермия используется для остановки любого значительного кровотечения. Процедура занимает около 15-30 минут и обычно проводится в дневном стационаре. Вскоре после процедуры появляются кровянистые, коричневые или черные выделения.Кровянистые выделения могут наблюдаться в течение 2–4 недель после этого, а иногда и дольше. Спазмы и боль в нижней части живота могут сохраняться в течение дня или двух после процедуры. Большинство женщин могут вернуться к нормальной деятельности в течение 2-3 дней.

Конусная биопсия – Конусная биопсия обычно проводится, когда:

  • Результаты мазка Папаниколау указывают на аномальные изменения в железистых клетках
  • Аномальные клетки находятся в эндоцервикальном канале или
  • Подозрение на ранний рак
  • это операция, при которой конусообразный или цилиндрический участок шейки матки, содержащий аномальные клетки, удаляется с помощью лазера или скальпеля (холодная конусная биопсия).Может потребоваться дневное или ночное пребывание в больнице. Конусная биопсия может быть выполнена, поскольку диагностика обычно одновременно лечит проблему. После введения общей анестезии ноги пациента помещают в опоры, а нижнюю половину тела укрывают стерильными простынями. (в некоторых случаях для опорожнения мочевого пузыря может быть введен мочевой катетер). После окрашивания шейки матки йодом для окрашивания любых аномальных клеток врач делает круговой разрез в шейке матки, включая аномальные участки, и удаляет конусообразный цилиндрический клин ткани.Эту ткань отправляют в лабораторию патологии, где ее исследуют. Оперируемая область прижигается или наносится раствор для остановки кровотечения. Швы могут быть наложены, чтобы закрыть рану. В это время может быть проведено эндоскопическое исследование матки (гистероскопия). После конусной биопсии избегайте тяжелой физической работы и отдыхайте в течение нескольких дней. После лечения у вас могут быть боли в животе. Нормально иметь прозрачные или окрашенные кровью выделения из влагалища до 6 недель. Если у вас была конусная биопсия, а позже вы забеременели, вы должны сообщить об этом своему врачу.В редких случаях конусная биопсия может ослабить шейку матки, и ваш врач может принять особые меры предосторожности во время беременности.


    Гистерэктомия

    Гистерэктомия редко используется для лечения дисплазии шейки матки. В некоторых случаях, однако, это может быть рассмотрено, если другие проблемы связаны с сексом, в том числе:

    • Другие гинекологические состояния (такие как выпадение матки, миомы или обильные менструальные кровотечения)
    • Результаты конусной биопсии указывают на CIN-2 или CIN- 3 слишком обширен, чтобы его можно было удалить с помощью других методов, описанных выше
    • Ранний рак диагностируется в ходе лечения дисплазии


    Восстановление и уход после лечения

    В течение 3-4 недель после любого лечения для удаления аномальной ткани шейки матки:

    • Избегайте половых контактов, чтобы снизить риск заражения
    • Используйте гигиенические салфетки, а не тампоны
    • При кровотечениях или кровянистых выделениях избегайте ванн, спа и общественных бассейнов; вместо душа.

    Последующее наблюдение

    Любое оставшееся заболевание обычно выявляют в течение первого или двух лет после лечения. Иногда ваше лечение подтвердит, что у вас на самом деле не было аномалии высокой степени (CIN-2 или CIN-3), а была аномалия низкой степени (только CIN-1 или ВПЧ). В этой ситуации вам следует пройти контрольную кольпоскопию у вашего гинеколога через 4-6 месяцев после лечения, когда будет взят мазок Папаниколау. Если мазок Папаниколау нормальный, вам будет рекомендовано сделать еще один мазок Папаниколау через год, и если это нормально, вы можете возвращаться к мазку Папаниколау каждые 2 года.

    После лечения аномалии высокой степени (CIN-2 или CIN-3) вам следует пройти кольпоскопию и мазок Папаниколау примерно через 4-6 месяцев после лечения. Если мазок нормальный или низкокачественный, вам следует обратиться к врачу общей практики через 6 месяцев (через 12 месяцев после лечения), когда будут выполнены мазок Папаниколау и тест на ВПЧ. Эти тесты следует повторить через год (через 245 мес после лечения). Как только у вас будут нормальные результаты в течение 2 лет подряд, вы можете вернуться к обычному тесту мазка Папаниколау. Если ваш мазок Папаниколау показывает незначительные изменения или тест на ВПЧ положительный, вы должны продолжать иметь ОБА этих яичек у своего терапевта, пока оба не вернутся к норме.Если какой-либо последующий мазок Папаниколау показывает значительные изменения или у вас развивается аномальное вагинальное кровотечение, вам следует обратиться к врачу.

    БРОСЬТЕ КУРИТЬ: Важно бросить курить навсегда.


    Возможные осложнения лечения

    Лазерное лечение, иссечение проволочной петли, диатермия и конусная биопсия являются относительно безопасными процедурами, но сопряжены с риском.
    Иссечение проволочной петлей, лазерное лечение и конусная биопсия:

    • Кровотечение: из каждых 100 женщин, прошедших лечение, примерно у 5 женщин может быть достаточно сильное кровотечение, требующее госпитализации для наблюдения, тампонады влагалища, наложения швов или редко, крови переливание.
    • Инфекция: примерно у 5 из каждых 100 пролеченных женщин может развиться инфекция либо матки, либо шейки матки. Это обычно лечится антибиотиками
    • Цервикальный стеноз (сужение): в редких случаях отверстие эндоцервикального канала может сужаться, что приводит к болезненным менструациям, трудностям при родах или бесплодию может быть ослаблена, увеличивая риск позднего выкидыша или преждевременных родов.
    • В редких случаях возможно повреждение кишечника или мочевого пузыря.
    • LEEP или LLETZ: ожоги могут возникать в верхней части влагалища и вульвы.Они обычно безболезненны и обычно хорошо заживают без осложнений.
    Влияние лечения на течение беременности

    Лечение с целью удаления аномальных клеток шейки матки не влияет на способность большинства женщин забеременеть. Тем не менее, способности некоторых женщин могут быть затронуты. Конусная биопсия может вызвать проблемы при будущих беременностях. В редких случаях шейка матки может ослабнуть, что увеличивает риск выкидыша или раннего начала родов. Если вы позже забеременеете, вашему акушеру, возможно, придется наложить шов на шейку матки, чтобы укрепить ее, гарантируя, что эндоцервикальный канал останется закрытым на время беременности.Конусная биопсия также может оставить шрам на шейке матки, так что она не откроется во время родов. Если у вас была конусная биопсия, сообщите об этом своему врачу, чтобы шейка матки находилась под тщательным наблюдением во время беременности и родов.

    Бедствие

    Для некоторых женщин анализы, лечение и обсуждение предраковых клеток могут быть особенно неприятными. Наличие инфекции ВПЧ также может вызывать беспокойство. Возможно, вам будет полезно поговорить со своим врачом, партнером или друзьями о том, как вы себя чувствуете.

    Атипичные плоскоклеточные клетки неопределенного значения (ASCUS)

    Ни одна женщина не хочет получить положительный результат теста Папаниколау.Положительный результат означает, что может потребоваться дальнейшее тестирование, и есть вероятность, что эти тесты могут привести к диагнозу рака шейки матки. Положительным моментом, однако, является то, что положительный результат, выявляющий аномальные или предраковые клетки, также означает, что можно поставить определенный диагноз и начать лечение.

    При раннем выявлении рак шейки матки излечим. Результаты могут быть намного хуже, если тест выявит атипичные плоскоклеточные клетки неопределенного значения (ASCUS) и результаты будут неправильно истолкованы или врач не продолжит дальнейшее тестирование.Задержка лечения может означать развитие инвазивного рака шейки матки, что может привести не только к бесплодию и необходимости более жестких методов лечения, таких как облучение и химиотерапия, но и к фатальным последствиям.

    Для получения информации о компенсации за ущерб, причиненный в результате неправильного анализа Папаниколау, обратитесь к профессиональному адвокату сегодня.

    ASCUS

    Плоскоклеточные клетки представляют собой плоские и тонкие клетки, которые растут на поверхности здоровой шейки матки. По данным клиники Майо, когда речь идет об атипичных плоскоклеточных клетках неопределенного значения (ASCUS), мазок Папаниколау может выявить «слегка аномальные» плоскоклеточные клетки, но такие изменения не обязательно означают наличие предраковых клеток.

    Из всех аномальных результатов мазка Папаниколау ASCUS является наиболее распространенным: примерно 2 миллиона женщин в год в США получают известие о том, что у них есть такие клетки в шейке матки. Что должен сделать врач, если мазок Папаниколау показывает ASCUS, так это снова посмотреть на образец и проверить, присутствуют ли вирусы, особенно вирус папилломы человека (ВПЧ). ASCUS также может появиться у женщин с низким уровнем гормонов и у женщин с доброкачественными новообразованиями, такими как кисты или полипы.

    Присутствие ВПЧ связано с раком шейки матки.Если клетки ВПЧ не обнаружены, необходимо проводить дополнительное тестирование каждые три года в соответствии с рекомендациями CDC. При обнаружении клеток ВПЧ врач должен провести кольпоскопию и биопсию. Эта процедура включает использование кольпоскопа, представляющего собой увеличительный прибор с подсветкой, для осмотра шейки матки, а также влагалища и вульвы.

    Врач обычно одновременно выполняет биопсию, беря образцы тканей или клеток, чтобы лаборант мог изучить образец под микроскопом.

    ASCUS Прогрессирование рака шейки матки

    Без оперативного лечения или тщательного наблюдения, около 0.У 25 процентов женщин с атипичными плоскоклеточными клетками неопределенного значения (ASCUS) развивается рак шейки матки в течение двух лет. Конечно, это означает, что более чем у 99 процентов женщин рак шейки матки не развивается в течение этого периода времени, но это мало утешает тех, у кого диагностировано это заболевание.

    У женщин, не прошедших лечение из-за ошибок, допущенных лабораторией или врачом при расшифровке результатов мазка Папаниколау, в течение этого периода времени повышается риск развития рака шейки матки.В то время как только у небольшого процента женщин с ASCUS развивается рак шейки матки, примерно половина всех случаев CIN-2 и CIN-3 — аномальных клеток, которые в конечном итоге могут стать раком шейки матки — обнаруживаются у женщин с ASCUS.

    Ложноотрицательные результаты

    К сожалению, мазки Папаниколау имеют высокий процент ложноотрицательных результатов.

  • Leave a Reply

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.