🧬 Что нужно знать про тесты на туберкулез
Всероссийское общество фтизиатров утвердило несколько возможных вариантов тестирования, включая не только пробу Манту, но и тестирование с использованием Диаскин-теста и Т-теста. Результаты каждого из этих тестов будут признаваться достаточными для приема ребенка в детский сад, — сообщается на официальном сайте Минздрава.
Медицинский директор, педиатр GMS Clinic Олег Тогоев дал свой комментарий информационному порталу «Здоровые дети».
Манту — не единственный официальный скрининг. Родители могут самостоятельно принимать решения о способе тестирования ребенка.
Что это за тесты и чем они отличаются?
Реакция Манту (туберкулиновая проба) является на сегодняшний день в России основным методом профилактического обследования детей на инфицирование туберкулезом.
- Реакция Манту — это ответ организма на введение туберкулина (несмотря на название, саму туберкулезную палочку препарат не содержит). После введения в кожу препарата возникает небольшое специфическое воспаление — «пуговка». Измеряя линейкой ее диаметр, можно оценить напряженность иммунитета к туберкулезной палочке. Измерение проводят через 72 часа после введения препарата.
- Тест делается один раз в год, начиная с года и до 16 лет.
- Мочить место пробы можно.
Диаскин-тест — это способ диагностики туберкулеза путем введения препарата под кожу ребенка. Он позволяет определить наличие или отсутствие микобактерий туберкулеза в организме ребенка. Диаскин-тест является более чувствительным тестом, поскольку в его состав входят белки, вызывающие иммунную реакцию в организме только на микобактерии, вызывающие туберкулез.
- Тест по сравнению с реакцией Манту позволяет определить не только наличие возбудителя, но и активность микобактерий, вызывающих само заболевание.
- Сегодня этот тест делается в случаях, если проба Манту — положительная.
- Мочить место введения препарата можно.
Т-спот — тест на туберкулез, который проводится путём забора крови ребёнка и ее последующего исследования.
- «T» обозначает T-лимфоциты (клетки крови, на основе ответа которых производится исследование).
- «SPOT» (от англ. — «пятно»). В результате лабораторного опыта образуются пятна, каждое из которых маркирует Т-лимфоцит. Этот способ определения носительства туберкулеза позволяет исключить ложноположительные реакции на носительство микобактерии туберкулеза.
Олег Тогоев, педиатр, медицинский директор GMS Clinic прокомментировал: «Скажу в первую очередь, что дети обязательно должны проходить один из утвержденных скринингов на туберкулез, потому что это заболевание, к несчастью, существует, и оно контагиозно (то есть, заразно — прим. ред.). Моя рекомендация — диаскин-тест, как наиболее оптимальный скрининг на туберкулез. Его основное преимущество в том, что он редко (в 10 случаев из 100) бывает ложноположительным. То есть, если уж диаскин-тест положителен, то на это можно смело опираться, искать и подтверждать туберкулезную инфекцию другими методами — есть большая вероятность что-то найти. Что касается пробы Манту, то количество ложноположительных реакций (то есть, специфичность теста) составляет 35 случаев на 100 проб. Таким образом, 35 человек из 100 с положительной пробой Манту отправятся к фтизиатру зазря. Единственный минус — это сегодняшняя дороговизна диаскина, он стоит в несколько раз дороже туберкулина для пробы Манту. Видимо, из-за этого он не может применяться массово. Т-тест — ещё „сырой“ вариант. Я, например, почти ничего и не слышал о нем. Его специфичность, чувствительность мне неизвестны. Он может быть хорош для контроля лечения туберкулезной инфекции, для диагностики видов туберкулезных бактерий, для различных узких задач, но он может быть плох для скрининга. Так же, как ПЦР: за ее открытие получена Нобелевская премия, благодаря этому методу были и еще будут сделаны невероятные открытия, это современно, это отлично, но этот метод вообще не годится для массового скрининга на туберкулез — вот такой парадокс. Поэтому старая добрая проба Манту, которой уже почти 100 лет, до сих пор своей актуальности не потеряла, просто нужно правильно и грамотно интерпретировать ее результаты».
Источник: healthy-kids.ru
показания, побочные эффекты, отличия от Манту
Рассказывает педиатр, к.м.н. Юлия Климова
В дополнение к реакции Манту, которую используют для ежегодной массовой скрининговой диагностики туберкулеза, с 2008 года начали использовать Диаскинтест. Этот препарат является разработкой Российских специалистов НИИ молекулярной медицины Московской Медицинской Академии им. И.М. Сеченова. Диаскинтест, в отличие от реакции Манту, обладает почти 100% чувствительностью и специфичностью, что позволяет уменьшить вероятность развития ложноположительных реакций, имеющих место в 40-60% случаев проведения реакции Манту.Проба подобна любым другим аллергопробам с аллергенами животного или растительного происхождения, с помощью которых диагностируют поллинозы, бронхиальную астму и другие аллергические заболевания.
О туберкулезе
В повседневной жизни нас окружает множество болезнетворных микроорганизмов. С одними мы способны легко и быстро справляться самостоятельно, против других разработана вакцинация, а третьи представляют реальную угрозу.
Несмотря на многочисленные профилактические меры, туберкулез все еще представляет угрозу здоровью людей и на территории Российской Федерации, и за ее пределами. А для людей, не вакцинированных от туберкулеза, и пациентов с первичным или приобретенным иммунодефицитом может представлять смертельную опасность.
Эта болезнь неразрывно связана с различными социальными проблемами: вооруженными конфликтами, бедностью, недоступностью медицинской помощи, с наркоманией, алкоголизмом, а также болезнью, вызываемой ВИЧ. Активная миграция населения способствует повышению риска распространения инфекции даже на благополучные по этому заболеванию районы.
Несмотря на снижение заболеваемости туберкулезом в России за последние годы, ситуацию все еще сложно назвать благополучной. Для начального периода болезни характерно отсутствие ярких клинических проявлений, либо они очень слабы. Это могут быть слабость, повышенная утомляемость, нарушение аппетита, раздражительность. Словом, такие состояния, которые легко недооценить и отнести к причинам, не связанным с такой грозной болезнью. Врачи называют эти проявления неспецифическими, а в случае туберкулеза — симптомами интоксикации. В этот момент особенно важно вовремя начать лечение, не допустить, чтобы болезнетворная бактерия одержала верх.
Мнение эксперта
Колпакова Людмила, врач-фтизиатр:«Действительно, давно замечено, что бактерия туберкулеза при попадании в организм может активно размножаться и длительно не вызывать никаких симптомов. Инфекционный период протекает скрыто и незаметно. Доктору очень важно иметь результат исследования, подтверждающий факт попадания бактерий туберкулеза в организм пациента. Положительная кожная проба с препаратом Диаскинтест внешне напоминает укус комара или ожог крапивы. Для пациента такая реакция иногда бывает неожиданной, и тогда он пытается объяснить себе и доктору, что это всего лишь аллергия. Да, это аллергическая реакция на специфический аллерген туберкулеза, а еще подтверждение повышенного риска развития туберкулеза. Заражение бактерией туберкулеза — это еще не болезнь. Здоровая иммунная система, рекомендации доктора, в некоторых случаях — медикаментозная профилактика защитят от заболевания».
Процесс проведения теста
Пробу с препаратом Диаскинтест проводят аналогично тесту Манту следующим образом: внутрикожно вводят 0,1 мл препарата, в результате в месте введения образуется папула или, как ее называют иначе, «пуговка». Через 72 часа пробу оценивает педиатр или специально обученная медицинская сестра. До этого момента не следует допускать раздражения папулы нанесением различных химическх веществ, таких как гель для душа, шампунь, крем и т.п. Нельзя заклеивать или забинтовывать место пробы. На результат теста может повлиять реакция на избыточное потоотделение, к примеру, во время тренировки, или трение одежды.
В Детской клинике ЕМС диагностика туберкулеза с использованием Диаскинтеста проводится ежедневно, не требует специальной подготовки. Она не займет много времени, но позволит удостовериться в отсутствии опасной болезни.
Можно ли мочить манту?
Место введения как пробы манту, так и диаскинтеста, можно мочить, но нельзя тереть, чесать и применять моющие средства, такие как мыло, гель для душа и пр.
Различия реакции манту и диаскинтеста
Реакция Манту, как и Диаскинтест, является внутрикожной диагностической пробой для выявления туберкулеза. Различия состоят в составе препарата. При проведении реакции Манту используют туберкулин, который содержит частицы микобактерий человечьего и бычьего видов. В состав Диаскинтеста входит рекомбинантный белок с двумя связанными между собой антигенами — ESAT6 и CFP10, которые характерны лишь для патогенных штаммов микобактерий туберкулеза и которые отсутствуют в вакцинальных штаммах.
За счет чего достигается такая точность?
Диаскинтест содержит белок, включающий два антигена, характерные именно для тех видов микобактерий туберкулеза, которые могут вызывать заражение и болезнь. Важно, что этих антигенов нет в вакцинном штамме БЦЖ, который используют для вакцинации. Таким образом, результат реакции будет положительным только в том случае, если в организме имеет место размножение возбудителей туберкулеза, и будет отсутствовать ложноположительная реакция, связанная с вакцинальном штаммом микобактерий.
Показания к тесту
Согласно Приказу Минздрава России №124н от 21 марта 2017 года, Диаскинтест нужно выполнять ежегодно всем детям от 8 до 17 лет включительно. Дети из групп высокого риска, в том числе не вакцинированные против туберкулеза, нуждаются в таком обследовании дважды в год. Врач может порекомендовать проведение пробы, если ребенок, например, долго кашляет без видимых причин или жалуется на боли в ногах, чувствует слабость, много потеет, имеются нарушения сна, аппетита, внимания, снижение успеваемости в школе. Диаскинтест требуется в случае длительного повышения температуры тела без видимых причин, особенно сопровождающегося снижением веса. Эту современную диагностическую пробу проводят не только детям, но и взрослым для того, чтобы быстро и вовремя выявить причину длительного недомогания. Кроме того, Диаскинтест используют в качестве дополнительной диагностики при необходимости уточнения результатов пробы Манту, причем его можно проводить одновременно (на разных руках) или последовательно с туберкулиновой пробой.
Противопоказания к тесту
Проведение Диаскинтеста противопоказано в период обострения любых заболеваний, в течение месяца после любой вакцинации, при эпилепсии, выраженных кожных заболеваниях, во время карантина, а также при повышенной чувствительности к любым компонентам препарата.
Результаты теста и их оценка
Для оценки, того, положительный или отрицательный получился тест, пробу проверяют через 72 часа после постановки путем измерения папулы прозрачной линейкой. При отрицательной реакции на коже не будет уплотнения (инфильтрата) или покраснения (гиперемии) в месте инъекции. «Уколочная» реакция до 2 мм также учитывается как отрицательная. Людям с сомнительной или положительной реакцией необходимо провести более углубленное обследование для исключения заболевания, вызванного микобактериями.
Побочные действия
Редко после введения препарата наблюдаются кратковременные реакции: повышение температуры, слабость, головная боль.
Диаскинтест – цена в Москве
Стоимость проведения диаскинтеста в Детской клинике ЕМС указана в прайс-листе ниже. Перед проведением диаскинтеста обязательна консультация педиатра.
Консультация педиатра оплачивается отдельно.
Наши специалисты
Манипуляцию проводят опытные педиатры, имеющие все необходимые сертификаты, в том числе на проведение вакцинопрофилактики. Так же в ЕМС взрослых и детей принимает врач-фтизиатр, который проводит дифференциальную диагностику легочных заболеваний: туберкулеза, в том числе «малых» форм и латентной туберкулезной инфекции, пневмонии, хронических неспецифических заболеваний легких, в том числе «редких» патологий: саркоидоза, альвеолитов, гистиоцитоза Х, поражений органов дыхания при иммунодефицитных состояниях.
Список литературы
1. Приказ МЗ РФ №951 «Об утверждении методических рекомендаций по совершенствованию диагностики и лечения туберкулеза органов дыхания» от 29 декабря 2014 года
2. Приказ Минздрава РФ от 21.03.2017 N 124н
«Об утверждении порядка и сроков проведения профилактических медицинских осмотров граждан в целях выявления туберкулеза»
3. Слогоцкая Л.В., Сенчихина О.Ю., Никитина Г.В., Богородская Е.М. Эффективность кожного теста с аллергеном туберкулезным рекомбинантным при выявлении туберкулеза у детей и подростков Москвы в 2013 г. // Педиатрическая фармакология, 2015. – N 1. – С.99-103
4. Bai X., Liang Y., Yang Y., Zhang J., Wu X. A new method of screening for latent tuberculosis infection: Results from army recruits in Beijing in 2014. Immunol. Lett. 2017 Jun;186:28-32. doi: 10.1016/j.imlet.2017.03.014. Epub 2017 Mar 27.
5. Aagaard C., Govaerts M., Meikle V., Vallecillo A.J., Gutierrez-Pabello J.A., Suarez-Güemes F., McNair J., Cataldi A., Espitia C., Andersen P., Pollock J.M. Optimizing antigen cocktails for detection of Mycobacterium bovis in herds with different prevalences of bovine tuberculosis: ESAT6-CFP10 mixture shows optimal sensitivity and specificity. J. Clin Microbiol. 2006 Dec;44(12):4326-35. Epub 2006 Sep 27.
6. Slogotskaya L., Bogorodskaya E., Ivanova D., Sevostyanova T. Comparative sensitivity of the test with tuberculosis recombinant allergen, containing ESAT6-CFP10 protein, and Mantoux test with 2 TU PPD-L in newly diagnosed tuberculosis children and adolescents in Moscow. PLoS One. 2018 Dec 21;13(12):e0208705. doi: .1371/journal.pone.0208705. eCollection 2018
Диагностика туберкулеза: проба Манту или диаскинтест
В СССР диагностика туберкулёза начала проводиться туберкулином с 1965 года. Но, несмотря на такой большой опыт в туберкулинодиагностике, до сих пор продолжаются споры — какой метод лучше выбрать. Рассмотрим 2 основных метода диагностики туберкулёза у детей: проба Манту и диаскинтест.
Проба Манту
Проба Манту – это внутрикожное введение туберкулина с целью выявления туберкулёза. Несмотря на распространенное мнение – это не прививка, а тест на наличие специфических антител к микобактериям туберкулеза. Это важный метод, потому что позволяет определить туберкулёз на ранних этапах. Проведение его стандартное: 0,1 мл туберкулина вводится в среднюю треть области внутренней поверхности предплечья. Оценка результата осуществляется через 72 часа.
Механизм теста следующий: он вызывает местную аллергическую реакцию замедленного типа. Сопровождается отёком, покраснением, иногда зудом. Если такая реакция возникает, значит, иммунитет к туберкулёзу сформировался, и организм уже умеет распознавать эти бактерии. Если реакции нет, то и иммунитета к микобактериям туберкулёза нет.
Существуют противопоказания для постановки пробы Манту: эпилепсия, ревматизм, опухоли, подтвержденная аллергическая реакция на туберкулин, а так же обострение аллергии, хронических инфекций, карантин в школе и детском саду. Из-за возможных аллергических реакций некоторые родители опасаются делать пробу Манту.
Диаскинтест
Существуют аналогичные методы для диагностики туберкулёза, один из них – диаскинтест.
Это синтетический препарат, что не может не радовать мам, опасающихся введения туберкулина. Так же, как и при постановке пробы Манту, возникает местная аллергическая реакция, но только в случае заболевания туберкулёзом или заражения им, которое может и не перейти в болезнь. Проведение диаскинтеста схоже с проведением пробы Манту, проверка также происходит через 72 часа.
Проводить его можно с 1 года, и одним из плюсов этого метода является отсутствие риска заразиться туберкулёзом. Этот препарат специфичен и не реагирует на другие бактерии, а также исключена реакция по поставленную ранее вакцину БЦЖ. К тому же, диаскинтестом проводят оценку эффективности лечения туберкулёза.
Детям до 8 лет, в анамнезе имеющим аллергические реакции и аллергические дерматиты, рекомендуют проводить диаскинтест. Желательно предварительно проконсультироваться у фтизиатра. В настоящее время детям с 8 лет в целях туберкулинодиагностики уже проводится диаскинтест. Но и для этого теста существуют противопоказания: обострение аллергических дерматитов, эпилепсия, обострение хронических заболеваний и острые инфекционные заболевания, за исключением подозрения на туберкулёз.
В любом случае, в связи со стёртой клинической картиной в начале заболевания туберкулёзом, разнообразием его форм, а также снижением социальной ответственности населения, туберкулинодиагностику необходимо проводить обязательно! А выбор метода нужно доверить грамотному специалисту, учитывая возрастные особенности, аллергоанамнез и состояние пациента на момент осмотра.
Опытные педиатры клиники «Семейный доктор» разъяснят вам различия между методами, подберут оптимальный вариант и проведут быструю и качественную диагностику в комфортных условиях. Чтобы записаться к специалисту клиники «Семейный доктор» на удобное для Вас время, позвоните по телефону единого контакт-центра в Москве +7 (495) 775 75 66, воспользуйтесь сервисом online-записи к врачу или обратитесь в регистратуру клиники.
Информацию для Вас подготовила:
Петрова Оксана Ивановна — врач-педиатр, ведущий специалист клиники, медицинский директор Детского корпуса на Усачева.
Часто задаваемые вопросы | Противотуберкулезный диспансер
Что нужно знать про тесты на туберкулез?
Всероссийское общество фтизиатров утвердило несколько возможных вариантов тестирования, включая не только пробу манту с 2ТЕ, но и тестирование с использованием Диаскинтеста и T-spot. Результаты каждого из этих тестов будут признаваться достаточными для приема ребенка в детский сад.
Что это за тесты и чем они отличаются?
1. Реакция манту с 2ТЕ/(туберкулиновая проба).
Реакция манту является на сегодняшний день в России основным методом профилактического обследования детей (с 1 года до 8 лет) на инфицирование (заражение) туберкулезом. Реакция манту с 2ТЕ – это ответ организма на введение туберкулина (не смотря на название, саму туберкулезную палочку препарат не содержит). Оценивается напряженность иммунитета ребенка к туберкулезной палочке. До настоящего времени туберкулиновая проба не теряет своей актуальности, просто надо правильно и грамотно интерпретировать ее результаты.
2. Диаскинтест (ДСТ) – способ, который позволяет определить наличие или отсутствие микобактерий туберкулеза в организме ребенка. ДСТ является более чувствительным тестом, поскольку в его состав входят белки, вызывающие иммунную реакцию в организме только на микобактерии, вызывающие туберкулез. ДСТ по сравнению с реакцией манту 2ТЕ позволяет определить не только наличие возбудителя, но и активность микобактерии, вызывающих само заболевание.
3. Т-spot – тест на туберкулез, который проводится путем забора крови ребенка и ее последующее исследование (коммерческий метод).
Дети должны обязательно проходить один из утвержденных скринингов на туберкулез, потому что в настоящее время отмечается рост заболевания туберкулезом в нашем городе и эти тесты предназначены для раннего выявления туберкулеза у детей.
Наиболее оптимальный вариант – ДСТ. Его основное преимущество в том, что он крайне редко бывает ложноположительным. То есть, если ДСТ положительный, то можно смело говорить об активности туберкулезной инфекции у ребенка. Устанавливается факт инфицирования (заражения) микобактериями туберкулеза, что требует дальнейших диагностических мероприятий (включая компьютерную томографию органов грудной клетки) для исключения локального туберкулеза.
Проверка на туберкулёз: какой метод выбрать?
Туберкулёз в России распространён настолько, что к сорока годам 70-90% жителей нашей страны инфицированы им. Это не значит, что они больны: после инфицирования иммунитет большинства людей справляется с бактерией. Вероятность заболеть составляет в среднем 8% в первые два года после инфицирования, затем постепенно снижается, и формируется приобретенный клеточный иммунитет. Среди взрослых чаще болеют люди ослабленные, живущие в плохих условиях, при недостатке света и свежего воздуха. Тем не менее, заразиться может абсолютно каждый из нас. Поэтому так важно проходить регулярные проверки на туберкулёз и проверять своих детей.
ВАЖНО! Информация из статьи не может быть использована для самодиагностики и самолечения! Назначить необходимые обследования, установить диагноз и составить план лечения может только врач на консультации!
Зачем нужна прививка БЦЖ?
ВОЗ рекомендует массовую вакцинацию новорожденных против туберкулёза во всех странах, где эта болезнь распространена. Поэтому на 3-5 день после рождения, еще в роддоме, всем новорожденным бесплатно делают прививку БЦЖ. Но эта вакцина не защищает от инфицирования туберкулёзом. Её задача несколько иная. Если не привитый ребенок младше 2 лет будет инфицирован туберкулёзом, у него крайне высока вероятность развития туберкулезного менингита и генерализованных форм туберкулеза, которые очень быстро приводят к смерти. БЦЖ достаточно надёжно защищает ребенка именно от этих форм. Она также защищает детей от легочной формы туберкулеза, но уже менее эффективно.
Какие ещё прививки нужны детям до 2-х лет?
Проба Манту
Проба Манту ежегодно проводится всем детям до 7 лет. Это не прививка (!), а иммунологический тест, показывающий, есть ли в организме возбудитель туберкулеза. При этом внутрикожно вводится туберкулин — специфический белок, содержащий антигены человеческого и бычьего туберкулеза. Через 72 часа измеряется размер папулы. На результат реакции Манту может повлиять посещение сауны, долгое принятие ванны, бассейн и расчёсывание места введения пробы. Временный контакт с водой никак не влияет на результаты пробы Манту, поэтому мнение о том, что Манту нельзя мочить — миф.
Диаскинтест тест
Он проводится детям с 8 лет. Также является кожной пробой. Но если в Манту используются антигены как человеческого, так и бычьего туберкулеза, то в диаскинтесте — только антигены туберкулеза человека. Диаскинтест гораздо более специфичен: реакция на него возникает, только если в организме есть активные бактерии туберкулеза. Проще говоря — если проба Манту положительная, это ещё ничего не значит: эта проба часто дает и ложноположительные реакции. А вот после диаскинтеста появилась реакция — это более серьёзный показатель.
Точность Манту составляет 50-70%, диаскинтеста — 90%.
Квантифероновый тест
Квантифероновый тест — один из новых методов диагностики туберкулёза по анализу крови. Он основан на определении в крови гамма-интерферона, который вырабатывают клетки в ответ на внедрение туберкулезной палочки. В отличие от Манту и диаскинтеста, квантифероновый тест не требует введения в организм никаких антигенов и бактерий. Кровь для исследования берут из вены. Результат готов через несколько дней, и его точность намного выше, чем у кожных проб. Тест будет положительным, только если человек действительно болен.
T.SPOT.TB («ти-спот»)
Этот метод диагностики туберкулеза по крови аналогичен квантифероновому тесту. Отличие в том, что квантифероновый тест определяет в крови гамма-интерферон, вырабатываемый в ответ на внедрение туберкулезной палочки, а Т-СПОТ определяет сами Т-клетки, которые вырабатывают гамма-интерферон на присутствие микобактерии туберкулеза. Оба теста одинаково чувствительны и информативны (до 97%), они чувствительнее диаскинтеста и намного чувствительнее реакции Манту. «Ти-спот» практически исключает ложноположительные и ложноотрицательные реакции, в то время как квантифероновый тест все-таки может давать ложноположительную реакцию, если во время сдачи крови человек был, например, болен ОРВИ.
Сравнительная характеристика четырех тестов на туберкулёз
| Манту | Диаскинтест | Квантифероновый тест | T.SPOT.TB | |
| Точность | 50,00% | 90,00% | 97,00% | 97,00% |
| Оценка данных | Субъективная | Субъективная | Объективная | Объективная |
| Ложноположительные результаты | Часто | Редко | Крайне редко | Нет |
| При скрытой форме туберкулеза | Не достоверен | Не достоверен | Достоверен | Достоверен |
| Противопоказания | Много | Есть | Нет | Нет |
| Побочные реакции | Есть | Редко | Нет | Нет |
| При ВИЧ и других иммунодефицитах | Не информативен | Не информативен | Информативен | Информативен |
| Способ исследования | Кожный тест | Кожный тест | Анализ крови | Анализ крови |
ПЦР
Чтобы отличить активную форму туберкулеза от латентной, используется специфический тест — ПЦР (исследования мокроты на ДНК). Таким образом, диаскинтест, ти-спот и другие тесты позволяют определить, болен ли человек туберкулезом вообще (легочным или внелегочным), а ПЦР — болен ли он им в активной форме.
Флюорография
Всем взрослым с 15 лет в России рекомендуется раз в год проходить флюорографию. Детям с 15 до 17 лет разрешено выполнять Флюрографию, но это не отменяет постановку Диаскинтеста. Справку со свежим снимком требуют везде — даже при посещении ребенка в больнице. Флюорография — это скорее «коллективный барьер» на пути туберкулеза, чем метод выбора для индивидуальной проверки. Флюрография выявляет только легочные формы туберкулеза.
Если у вас остались вопросы по методам диагностики туберкулеза — позвоните нам: +7 812 331 00 00, мы ответим на них!
Читайте также:
сделать платную пробу в клинике
Препарат Диаскинтест произведен российскими учеными в лаборатории ЗАО «ЛЕККО». По принципу действия напоминает пробу Манту, однако сходство имеет исключительно внешний характер. Главное отличие заключается в том, что этот тест диагностирует только активные микобактерии туберкулеза. Регистрация клеточного иммунного ответа происходит вслед за выявлением специфических антигенов в организме человека. Лица с инфекцией туберкулеза дают реакцию в месте проведения пробы на вещество. По сути Диаскинтест не является прививкой. Этот скрининг дает точный ответ – болен человек или нет.
Кому рекомендуется сделать Диаскинтест?
Взрослые для исключения инфицирования туберкулезом ежегодно проходят флюорографию. По отношению к детям применяется реакция Манту. Оба метода обладают своими недостатками. Первый опасен излучением, поэтому повторять его на протяжении года нельзя. Второй часто выдает ложноположительные результаты.
Клиника «Гармония» предлагает пройти диагностику на выявление туберкулеза с помощью современного препарата. Чтобы сделать Диаскинтест, достаточно записаться на прием по указанному на сайте телефону. Активное вещество этого средства получено через генную модификацию бактерии Escherichia coli BL21(DE3)/pCFP-ESAT. Жидкость не опасна для человека и не может создать риск заражения опасной инфекцией.
Показания для проведения
- Профилактическое тестирование на выявление факта инфицирования.
- Отслеживание динамики изменений при прохождении лечения от туберкулеза. Если сделать Диаскинтест ребенку в Ростове-на-Дону после курса терапии, при излечении проба не покажет реакции. А вот Манту в этом случае среагирует.
- Дифференциальная диагностика больных с болезнями нетуберкулезного типа.
Противопоказания к проведению Диаскинтеста
Проведение пробы Диаскинтест разрешено не во всех случаях. Противопоказаниями являются следующие состояния: острые простудные инфекции, обострение хронических заболеваний, бронхиальная астма и аллергические реакции, эпилептические припадки, поражения кожных покровов. Нельзя делать тестирование после вакцинаций. Должно пройти не менее месяца со дня последней прививки.
Оценка результата
До оценки реакции организма на введенный препарат должно пройти 72 часа. По аналогии с реакцией Манту исследованию подвергается папула. Врач осматривает место проведения пробы, оценивает степень выраженности инфильтрата, покраснение кожи. Оценивается Диаскинтест в Ростове-на-Дону в соответствии с общепринятой технологией:
- Отрицательно (болезни нет) – папула отсутствует или составляет менее 2 мм, нет красноты и отечности.
- Сомнительный результат – присутствует краснота, инфильтрат не превышает размером 4 мм.
- Положительная – папула свыше 5 мм.
- Гиперреакция – инфильтрат более 14 мм, есть заметные изменения структуры кожи, язвы, пузыри.
В медицинском центре «Гармония» вы можете пройти Диаскинтест платно по выгодной цене. Отзывы наших пациентов подтверждают, что тест дает четко видимые результаты, чего во многих случаях не делает Манту. После проведения теста мы выдаем нашим пациентам справку о выполненном скрининге. Записаться на услугу вы можете по телефону: +7 863 226‑18-23. Мы расположены по адресу: г. Ростов-на-Дону, ул. Красноармейская, 170 (2 этаж) .
ЗНАЧЕНИЕ СОВРЕМЕННЫХ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ТЕСТОВ В ДИАГНОСТИКЕ ТУБЕРКУЛЕЗА У ДЕТЕЙ | Яблонский
1. Гегеева Ф.Э. Клинико-рентгенологическая диагностика «малых» форм туберкулеза внутригрудных лимфатических узлов у детей: Автореф. дис. … канд. мед. наук. – М., 2006. – 20 с.
2. Даулетова Я.А.. Оптимизация диагностики туберкулеза внутригрудных лимфатических узлов у детей: Автореф. дис. … канд. мед. наук. – Новосибирск, 2009. – 22 с.
3. Довгалюк И.Ф., Корнева Н.В. Клинико-эпидемические особенности туберкулеза у детей Северо-Запада Российской Федерации // Туберкулез и болезни легких. – 2011. – №3. – С. 12-16.
4. Клинико-лабораторные (иммунобиохимические) методы в диагностике, определении активности и выборе тактики лечения различных проявлений туберкулезной инфекции от инфицирования до локальной формы с осложненным течением: Пособие для врачей / Сост. И.Ф. Довгалюк, Ю.Э. Овчинникова, М.Н. Кондакова, М.Е. Дьякова, Е.И. Потапенко. – СПб., 1999. – 21 с.
5. Кожная проба с препаратом Диаскин-тест® (аллерген туберкулезный рекомбинантный 0,2 мкг в 0,1 мл раствор для внутрикожного введения) для идентификации туберкулезной инфекции: Пособие для врачей / Сост. Б.Л. Медников, Л.В. Слогоцкая. – М., 2009. – 32 с.
6. Корнева Н.В. Возможности оптимизации диагностики туберкулеза органов дыхания у детей (на примере Северо-Западного региона Российской Федерации): Автореф. дис. … канд. мед. наук. – СПб., 2011. – 23 с.
7. Лазарева Я.В. Значение компьютерной томографии в диагностике и классификации туберкулеза // Пробл. туберкулёза и болезней лёгких. – 2005. – № 12 . – С. 14-19.
8. Овсянкина Е.С., Слогоцкая Л.В., Губкина М.Ф. Рекомендации по применению кожной пробы с препаратом аллерген туберкулезный рекомбинантный 0,2 мкг в 0,1 мл раствор для внутрикожного введения (ДИАСКИНТЕСТ®) для идентификации туберкулезной инфекции у детей и диспансерного наблюдения в противотуберкулезных учреждениях: Методические рекомендации. – М.: МНПЦБТ, 2010. – 29 с.
9. Определение состояния иммунитета и уровня цитокинов для оценки течения туберкулеза легких: Пособие для врачей / Сост. Б.Э. Кноринг, Н.М. Чужова, И.Я.Сахарова, Е.М. Леонченко, Т.Б. Ряснянская. – СПб., 1998. – 21 с.
10. Слогоцкая Л.В., Кочетков Я.А., Филинов А.В. Диаскинтест-новый метод выявления туберкулеза // Туберкулез и болезни легких. — 2011. – № 6. – С. 17-22.
11. Шилова М.В. Организация противотуберкулезной помощи в России и пути модернизации организационно-методического управления диспансерным наблюдением больных туберкулезом в современных эпидемических и социально-экономических условиях // Туберкулез и болезни легких. – 2011. – № 5. – С. 236.
12. Adams L.V., Waddell R.D, Reyn C.F T-SPOT.TB Test(R) results in adults with Mycobacterium avium complex pulmonary disease // J. Infect. Dis. – 2008. – Vol. 40. – P. 196-203.
13. Detjen A.K. Interferon-gamma release assays improve the diagnosis of tuberculosis and nontuberculous mycobacterial disease in children in a country with a low incidence of tuberculosis // Clin. Infect. Dis. – 2007. – Vol. 45. – P. 322-328.
14. Streeton J.A., Desem N., Jones S.L. Sensitivity and specificity of a gamma interferon blood test for tuberculosis infection // Int. J. Tuberc. Lung Dis. – 1998. – Vol. 2. – P. 443-450.
Прямое определение лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis пропорциональным методом: многоцентровое исследование
Вступление: Обычные непрямые тесты на лекарственную чувствительность (ТЛЧ) Mycobacterium tuberculosis с твердой средой недороги и надежны, но требуют много времени. Это исследование было направлено на оценку прямого ТЛЧ для тестирования образцов мокроты без посева, чтобы значительно сократить время, необходимое для выявления туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ-ТБ).
Методы: Прямое и непрямое ТЛЧ к изониазиду (INH), рифампицину (RIF) и этамбутолу (EMB) было проведено на 334 образцах с положительным мазком мокроты.
Полученные результаты: Было полное согласие между результатами, полученными при прямом тестировании и после выделения бактерий путем культивирования.Таким образом, по сравнению с непрямым ТЛЧ, чувствительность и специфичность для всех трех тестируемых препаратов составили 100%. По сравнению с непрямым ТЛЧ, ни один из образцов с прямым методом не занял> 25 дней, чтобы сообщить о ТЛЧ (15-25 дней при среднем времени обнаружения 20 дней).
Выводы: Было показано, что прямое ТЛЧ на твердой среде дает надежные результаты на гораздо более ранней стадии, чем традиционное фенотипическое ТЛЧ.Прямой метод оказался более быстрым, точным и простым. Кроме того, это уменьшило количество случаев обращения с патогенными бактериями и, таким образом, снизило биологическую опасность, связанную с традиционным ТЛЧ.
Ключевые слова: Иран; Множественная лекарственная устойчивость; Mycobacterium tuberculosis.
Цветовой тест на МЛУ / ШЛУ-ТБ для определения лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis, Северо-Запад Эфиопии
https: // doi.org / 10.1016 / j.ijid.2019.10.041Получить права и контентОсновные моменты
- •
Цветовой тест на МЛУ / ШЛУ-ТБ был быстрым и простым и использовался для тестирования лекарственной чувствительности.
- •
Цветовой тест имел высокую чувствительность и специфичность для определения устойчивости к рифампицину, туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью и устойчивости к ципрофлоксацину.
- •
Цветовой тест имел низкую чувствительность и высокую специфичность для определения устойчивости к изониазиду.
Реферат
Предпосылки
Для проведения Mycobacterium tuberculosis тестирования лекарственной чувствительности (ТЛЧ) в условиях ограниченных ресурсов необходимы соответствующие технологические тесты. Это исследование было проведено для оценки цветового теста МЛУ / ШЛУ-ТБ (тест с цветным пластинчатым агаром; TB-CX) для ТЛЧ M. tuberculosis путем непосредственного тестирования мокроты в больнице Университета Гондэра.
Методы
Образцы мокроты были разделены на две аликвоты.Одну аликвоту смешивали с дезинфицирующим средством и наносили непосредственно на чашку Петри квадранта TB-CX, содержащую культуральную среду с изониазидом, рифампицином или ципрофлоксацином и без них. Одновременно другую аликвоту обеззараживали гидроксидом натрия, центрифугировали и культивировали на среде Левенштейна-Йенсена; Затем сохраненные изолятов M. tuberculosis субкультивировали в пробирке для определения роста микобактерий BACTEC (MGIT) 960 для эталонного ТЛЧ.
Результаты
Тест TB-CX дал результаты ТЛЧ для 94% (123/131) положительных образцов.Для парных результатов ТЛЧ среднее количество дней от обработки мокроты до ТЛЧ составило 12 для TB-CX по сравнению с 35 для LJ-MGIT ( p <0,001). По сравнению с LJ-MGIT для лечения изониазида, рифампицина и туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью TB-CX имел чувствительность 59%, 96% и 95%; 96%, 94% и 98% специфичность; и 85%, 94% и 98% согласны, соответственно. Все результаты ТЛЧ к ципрофлоксацину оказались чувствительными при использовании обоих методов.
Заключение
Тест TB-CX был простым и быстрым для M.tuberculosis ДСТ. Несоответствующие результаты ТЛЧ могли быть результатом неоптимального хранения и различных концентраций изониазида, использованных в TB-CX по сравнению с эталонным стандартным тестом.
Ключевые слова
Цветовой тест на МЛУ / ШЛУ-ТБ
Тест на лекарственную чувствительность
Лекарственная устойчивость
Тонкослойный агар
Туберкулез
Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)
© 2019 Авторы. Опубликовано Elsevier Ltd от имени Международного общества инфекционных болезней.
Рекомендуемые статьи
Ссылки на статьи
Руководство по исследованиям, оценивающим точность экспресс-тестов на лекарственную чувствительность от туберкулеза | Журнал инфекционных болезней
Абстрактные
Разработка и внедрение экспресс-молекулярной диагностики для определения лекарственной чувствительности туберкулеза (ТБ) имеет решающее значение для информирования пациентов о лечении и предотвращения появления и распространения резистентности. Оптимальное планирование испытаний существующих и разрабатываемых тестов будет иметь решающее значение для быстрого сбора доказательств, необходимых для информирования Всемирной организации здравоохранения и поддержки потенциальных рекомендаций по политике.Необходимые доказательства включают оценку эффективности обнаружения туберкулеза и устойчивости, а также оценку рабочих характеристик этих платформ. Оценка эффективности должна включать аналитические исследования для подтверждения предела обнаружения и возможности анализа для выявления мутаций, придающих устойчивость у глобально репрезентативных штаммов. Аналитическая оценка обычно сопровождается клиническими оценочными исследованиями на нескольких участках для подтверждения диагностической эффективности в местах и группах предполагаемого использования.В этой статье кратко изложены соображения по поводу дизайна этих аналитических и клинических исследований.
Быстрая и точная диагностика туберкулеза (ТБ) и определение лекарственной чувствительности имеют решающее значение для лечения пациентов и предотвращения появления и распространения устойчивых штаммов. Во всем мире в 2017 году менее одной трети новых пациентов с ТБ прошли тестирование на лекарственную чувствительность (ТЛЧ) к рифампицину (RIF), одному из наиболее важных препаратов первого ряда [1]. Это приводит к недостаточному лечению лекарственно-устойчивого ТБ (ЛУ-ТБ), дальнейшему усилению и передаче устойчивости и связанной с этим смертности [2].Смоделированные данные предсказывают рост заболеваемости ТБ с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) с увеличением на 9–33% только на Филиппинах, в Индии и в России [3, 4]. В 2017 г. только 50% из тех, у кого в 2017 г. был диагностирован туберкулез с устойчивостью к РИФ, прошли ТЛЧ второго ряда, даже при подозрении на МЛУ-ТБ [1]. Отсутствие информации о чувствительности к препаратам второго ряда, особенно к приоритетным соединениям профиля целевого продукта (TPP), таким как фторхинолоны (FQ) [5], может привести к катастрофическим последствиям для пациентов, увеличению нагрузки на системы здравоохранения. и передача устойчивого туберкулеза.Без решения этих ключевых вопросов цель в области устойчивого развития на период до 2030 года по прекращению эпидемии туберкулеза не будет достигнута.
Ввиду ограниченности традиционных фенотипических методов, разработка быстрой молекулярной диагностики ТЛЧ к туберкулезу стала приоритетом исследований и разработок [6]. Хотя развертывание и внедрение новых средств диагностики ЛУ-ТБ, таких как анализ Xpert MTB / RIF (Cepheid, Саннивейл, Калифорния), увеличило количество выявленных и зарегистрированных случаев ТБ и ЛУ-ТБ [1, 7], важная диагностика и лечение остаются пробелы.В частности, существует острая потребность в быстрых молекулярных ТЛЧ, которые выявляют устойчивость к более широкому набору лекарственных соединений, в том числе к тем, которые приоритетны в TPP [5]. Несколько новых анализов были разработаны в соответствии с существующим TPP [5], и некоторые из них уже продемонстрировали многообещающие характеристики для комплекса Mycobacterium tuberculosis (MTBC) и выявления лекарственной устойчивости в ранних исследованиях [8–13]. Однако исследования этих технологий редко дают адекватную информацию для обзора Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) и поддерживают потенциальные политические рекомендации.Например, эти исследования (1) часто не включают в себя хорошо охарактеризованные сравнительные анализы, (2) не проверяют адекватный выбор мутаций устойчивости у штаммов с широким географическим разнообразием, (3) не включают адекватный размер выборки для достижения точности диагностической точности. целевых показателей или (4) использовать поток выборки, который не позволяет проводить надежные сравнения между индексным тестом, эталонным тестом и компараторами.
В этой статье мы определяем стандарты сбора доказательств для решений ТЛЧ к туберкулезу, чтобы гарантировать, что аналитические и клинические оценки дают ответы на ключевые вопросы и позволяют провести всесторонний обзор технологий.Мы суммируем наши рекомендации в Таблице 1.
Таблица 1.Обзор рекомендаций по дизайну исследования
| Тема . | Рекомендация . |
|---|---|
| Индекс-тест | • Определите, является ли тест рефлекторным тестом на ТБ-положительный результат или же тест выявляет MTBC в дополнение к сопротивлению при разработке исследований |
| • Учитывайте особенности индексного теста исследуются (например, пропускная способность, поливалентность, взаимосвязь) в дизайне исследования | |
| Общие соображения по дизайну исследования | • Первоначальные лабораторные аналитические исследования должны подтвердить точность анализа для определения MTBC и устойчивости (можно охватить более широкий диапазон мутаций, чем в клиническое исследование) |
| • Производители должны предоставлять данные об инклюзивности и исключительности анализа, желательны данные об обнаружении резистентности в гетерорезистентных образцах | |
| • Исследования по клинической оценке должны оценивать диагностическую эффективность ТБ тесты на лекарственную чувствительность в образцах пациентов в условиях предполагаемого использования | |
| Население и окружение | • В идеале следует выбрать не менее 3 участков из 3 различных регионов ВОЗ, которые отражают эпидемию ТБ и ЛУ-ТБ в странах с высоким бременем |
| • Проведите тестирование в предполагаемых условиях использования (например, в справочных лабораториях центрального уровня для высокопроизводительных тестов и в центрах первичной медико-санитарной помощи для тестов с низкой пропускной способностью или одноразовых тестов) | |
| • Должны быть установлены целевые показатели размера выборки с учетом определенных TPP целевых оценок эффективности для каждого лекарственного средства, к которому, по утверждениям анализа, выявляется устойчивость.В идеале ширина доверительных интервалов должна составлять ≤5% для оценок специфичности и ≤10% для оценок чувствительности. | |
| Эталонный стандарт и компараторы | • Учитывая потребность в полной картине лекарственной устойчивости и устранении несоответствий, рекомендуется использовать составной эталонный стандарт, который объединяет информацию о генотипическом секвенировании и результаты тестирования фенотипической чувствительности |
| • Включить тесты, одобренные ВОЗ (например, одобренные ВОЗ линейные зонды и тесты Xpert MTB / RIF или Ultra) в качестве компараторов как в аналитических, так и в клинических исследованиях | |
| Проблемы с потоком и образцом | • В идеале индексные, эталонные и сравнительные тесты должны выполняться на одном и том же образце, чтобы обеспечить сопоставимость результатов |
| • В качестве альтернативы, для тестов на основе мокроты индексный тест может быть выполнен дважды: один раз для прямого образца мокроты и один раз на культивированном изоляте вместе с контрольными тестами и тестами сравнения | |
| Ключ иски, превышающие точность | • Различные технические и операционные параметры анализа, которые необходимо оценивать, включают время получения результата, недействительные и неопределенные показатели и другие факторы (Таблица 2) |
| Тема . | Рекомендация . |
|---|---|
| Индекс-тест | • Определите, является ли тест рефлекторным тестом на ТБ-положительный результат или же тест выявляет MTBC в дополнение к сопротивлению при разработке исследований |
| • Учитывайте особенности индексного теста исследуются (например, пропускная способность, поливалентность, взаимосвязь) в дизайне исследования | |
| Общие соображения по дизайну исследования | • Первоначальные лабораторные аналитические исследования должны подтвердить точность анализа для определения MTBC и устойчивости (можно охватить более широкий диапазон мутаций, чем в клиническое исследование) |
| • Производители должны предоставлять данные об инклюзивности и исключительности анализа, желательны данные об обнаружении резистентности в гетерорезистентных образцах | |
| • Исследования по клинической оценке должны оценивать диагностическую эффективность ТБ тесты на лекарственную чувствительность в образцах пациентов в условиях предполагаемого использования | |
| Население и окружение | • В идеале следует выбрать не менее 3 участков из 3 различных регионов ВОЗ, которые отражают эпидемию ТБ и ЛУ-ТБ в странах с высоким бременем |
| • Проведите тестирование в предполагаемых условиях использования (например, в справочных лабораториях центрального уровня для высокопроизводительных тестов и в центрах первичной медико-санитарной помощи для тестов с низкой пропускной способностью или одноразовых тестов) | |
| • Должны быть установлены целевые показатели размера выборки с учетом определенных TPP целевых оценок эффективности для каждого лекарственного средства, к которому, по утверждениям анализа, выявляется устойчивость.В идеале ширина доверительных интервалов должна составлять ≤5% для оценок специфичности и ≤10% для оценок чувствительности. | |
| Эталонный стандарт и компараторы | • Учитывая потребность в полной картине лекарственной устойчивости и устранении несоответствий, рекомендуется использовать составной эталонный стандарт, который объединяет информацию о генотипическом секвенировании и результаты тестирования фенотипической чувствительности |
| • Включить тесты, одобренные ВОЗ (например, одобренные ВОЗ линейные зонды и тесты Xpert MTB / RIF или Ultra) в качестве компараторов как в аналитических, так и в клинических исследованиях | |
| Проблемы с потоком и образцом | • В идеале индексные, эталонные и сравнительные тесты должны выполняться на одном и том же образце, чтобы обеспечить сопоставимость результатов |
| • В качестве альтернативы, для тестов на основе мокроты индексный тест может быть выполнен дважды: один раз для прямого образца мокроты и один раз на культивированном изоляте вместе с контрольными тестами и тестами сравнения | |
| Ключ иски, превышающие точность | • Различные технические и операционные параметры анализа, которые следует оценивать, включают время получения результата, недействительные и неопределенные показатели и другие факторы (Таблица 2) |
Обзор рекомендаций по дизайну исследования
| Тема . | Рекомендация . |
|---|---|
| Индекс-тест | • Определите, является ли тест рефлекторным тестом на ТБ-положительный результат или же тест выявляет MTBC в дополнение к сопротивлению при разработке исследований |
| • Учитывайте особенности индексного теста исследуются (например, пропускная способность, поливалентность, взаимосвязь) в дизайне исследования | |
| Общие соображения по дизайну исследования | • Первоначальные лабораторные аналитические исследования должны подтвердить точность анализа для определения MTBC и устойчивости (можно охватить более широкий диапазон мутаций, чем в клиническое исследование) |
| • Производители должны предоставлять данные об инклюзивности и исключительности анализа, желательны данные об обнаружении резистентности в гетерорезистентных образцах | |
| • Исследования по клинической оценке должны оценивать диагностическую эффективность ТБ тесты на лекарственную чувствительность в образцах пациентов в условиях предполагаемого использования | |
| Население и окружение | • В идеале следует выбрать не менее 3 участков из 3 различных регионов ВОЗ, которые отражают эпидемию ТБ и ЛУ-ТБ в странах с высоким бременем |
| • Проведите тестирование в предполагаемых условиях использования (например, в справочных лабораториях центрального уровня для высокопроизводительных тестов и в центрах первичной медико-санитарной помощи для тестов с низкой пропускной способностью или одноразовых тестов) | |
| • Должны быть установлены целевые показатели размера выборки с учетом определенных TPP целевых оценок эффективности для каждого лекарственного средства, к которому, по утверждениям анализа, выявляется устойчивость.В идеале ширина доверительных интервалов должна составлять ≤5% для оценок специфичности и ≤10% для оценок чувствительности. | |
| Эталонный стандарт и компараторы | • Учитывая потребность в полной картине лекарственной устойчивости и устранении несоответствий, рекомендуется использовать составной эталонный стандарт, который объединяет информацию о генотипическом секвенировании и результаты тестирования фенотипической чувствительности |
| • Включить тесты, одобренные ВОЗ (например, одобренные ВОЗ линейные зонды и тесты Xpert MTB / RIF или Ultra) в качестве компараторов как в аналитических, так и в клинических исследованиях | |
| Проблемы с потоком и образцом | • В идеале индексные, эталонные и сравнительные тесты должны выполняться на одном и том же образце, чтобы обеспечить сопоставимость результатов |
| • В качестве альтернативы, для тестов на основе мокроты индексный тест может быть выполнен дважды: один раз для прямого образца мокроты и один раз на культивированном изоляте вместе с контрольными тестами и тестами сравнения | |
| Ключ иски, превышающие точность | • Различные технические и операционные параметры анализа, которые необходимо оценивать, включают время получения результата, недействительные и неопределенные показатели и другие факторы (Таблица 2) |
| Тема . | Рекомендация . | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Индекс-тест | • Определите, является ли тест рефлекторным тестом на ТБ-положительный результат или же тест выявляет MTBC в дополнение к сопротивлению при разработке исследований | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| • Учитывайте особенности индексного теста исследуются (например, пропускная способность, поливалентность, взаимосвязь) в дизайне исследования | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Общие соображения по дизайну исследования | • Первоначальные лабораторные аналитические исследования должны подтвердить точность анализа для определения MTBC и устойчивости (можно охватить более широкий диапазон мутаций, чем в клиническое исследование) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| • Производители должны предоставлять данные об инклюзивности и исключительности анализа, желательны данные об обнаружении резистентности в гетерорезистентных образцах | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| • Исследования по клинической оценке должны оценивать диагностическую эффективность ТБ тесты на лекарственную чувствительность в образцах пациентов в условиях предполагаемого использования | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Население и окружение | • В идеале следует выбрать не менее 3 участков из 3 различных регионов ВОЗ, которые отражают эпидемию ТБ и ЛУ-ТБ в странах с высоким бременем | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| • Проведите тестирование в предполагаемых условиях использования (например, в справочных лабораториях центрального уровня для высокопроизводительных тестов и в центрах первичной медико-санитарной помощи для тестов с низкой пропускной способностью или одноразовых тестов) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| • Должны быть установлены целевые показатели размера выборки с учетом определенных TPP целевых оценок эффективности для каждого лекарственного средства, к которому, по утверждениям анализа, выявляется устойчивость.В идеале ширина доверительных интервалов должна составлять ≤5% для оценок специфичности и ≤10% для оценок чувствительности. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Эталонный стандарт и компараторы | • Учитывая потребность в полной картине лекарственной устойчивости и устранении несоответствий, рекомендуется использовать составной эталонный стандарт, который объединяет информацию о генотипическом секвенировании и результаты тестирования фенотипической чувствительности | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| • Включить тесты, одобренные ВОЗ (например, одобренные ВОЗ линейные зонды и тесты Xpert MTB / RIF или Ultra) в качестве компараторов как в аналитических, так и в клинических исследованиях | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Проблемы с потоком и образцом | • В идеале индексные, эталонные и сравнительные тесты должны выполняться на одном и том же образце, чтобы обеспечить сопоставимость результатов | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| • В качестве альтернативы, для тестов на основе мокроты индексный тест может быть выполнен дважды: один раз для прямого образца мокроты и один раз на культивированном изоляте вместе с контрольными тестами и тестами сравнения | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Ключ иски за пределами точности | • Различные технические и операционные параметры анализа, которые необходимо оценивать, включают время получения результата, недействительные и неопределенные показатели и другие факторы (Таблица 2) ТРУБОПРОВОД ИСПЫТАНИЯ НА УСТОЙЧИВОСТЬ Тесты на ТЛЧ к туберкулезу предназначены для выявления устойчивости к противотуберкулезным препаратам непосредственно из клинических образцов.Эти анализы могут использоваться как предварительный тест и включать обнаружение MTBC или только как рефлексный тест на положительный результат анализов обнаружения MTBC. Анализы ТЛЧ с высокой пропускной способностью обычно используются в центральных референс-лабораториях, включая специализированные лаборатории 3-го уровня или районные больницы 2-го уровня, тогда как тесты на ТЛЧ с меньшей производительностью могут быть реализованы в центрах 1-го уровня. Несколько недавно разработанных анализов, которые в настоящее время находятся на пути к одобрению ВОЗ и нацелены на использование в централизованных лабораториях, включают анализы Abbott RealTi m e MTB и MTB RIF / INH (Abbott, North Chicago, IL), Roche COBAS MTB и Анализ MTB-RIF / INH (Roche Diagnostics, Базель, Швейцария), анализ Hain FluoroType MTBDR (Hain Lifescience GmbH, Нерен, Германия) и анализ BD MAX MDR-TB (Becton Dickinson, Франклин Лейкс, Нью-Джерси) [8– 11].Тест Abbott RealTi m e MTB может диагностировать MTBC в 94 образцах, при этом положительные образцы отражаются на тесте RIF / INH для диагностики МЛУ-ТБ в течение 10,5 часов [8, 14]. Анализ Roche COBAS MTB также использует полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в реальном времени для обнаружения MTBC и может генерировать результаты для 96 тестов за один 3,5-часовой цикл, при этом положительные образцы, отраженные на анализ RIF / INH для диагностики МЛУ-ТБ, дополнительно 3,5 часа спустя [15]. Анализ Hain FluoroType MTBDR основан на ПОЗДНЕЙ ПЦР-амплификации и химии включения / выключения света для определения устойчивости к MTBC и изониазиду (INH) и RIF для 94 образцов в течение 4 часов [16].В настоящее время разрабатывается новый метод определения устойчивости к FQ и инъекционным препаратам второй линии (SLI) с использованием той же технологии [13]. Тест BD Max MDR-TB — это еще один анализ ПЦР в реальном времени, который можно запустить в системе BD MAX System для выявления устойчивости к MTBC, INH и RIF в 22 образцах мокроты за 4 часа [11]. Целевые анализы секвенирования следующего поколения также станут вариантом универсального централизованного ТЛЧ к туберкулезу в ближайшем будущем [17]. Один новый тест, который в настоящее время разрабатывается для расширенного DST в децентрализованных условиях, — это анализ Xpert MTB / XDR (Cepheid), который можно запустить на платформе GeneXpert для определения устойчивости к INH, FQ и SLI [12].Анализ Molbio Truenat (MolBio Diagnostics Pvt Ltd, Гоа, Индия), который позволяет определять устойчивость к MTBC и RIF, был недавно одобрен для использования в Индии и проходит испытания для обзора ВОЗ [18]. Обзор дополнительных анализов ТЛЧ, находящихся в разработке, проходящих валидацию или одобрение регулирующих органов, доступен через диагностический конвейер FIND (Foundation for Innovative New Diagnostics) [19]. Все эти тесты на ТЛЧ к туберкулезу заявляют о высокой чувствительности и специфичности для выявления резистентности в клинических образцах туберкулеза.Многие из них обладают дополнительными характеристиками, которые имеют дополнительную ценность, включая поливалентность, то есть обнаружение и дифференциацию нетуберкулезных микобактерий (НТМ) и вирусов (например, вируса иммунодефицита человека) на одной платформе, и / или возможность подключения к платформе для облегчения отчетности и обмена результатами ( Таблица 2) [5]. Производители должны по возможности предоставлять данные об этих дополнительных характеристиках. Учитывая недавнее обновление руководств ВОЗ по лечению лекарственно-устойчивого туберкулеза [20], вполне вероятно, что вскоре будут разработаны новые анализы, которые также будут проверять устойчивость к новым лекарствам (например, бедаквилину и / или линезолиду), если молекулярная основа устойчивости к ним препараты хорошо определены [21].Аналогичные соображения по дизайну исследования будут применяться к этим тестам. Таблица 2. Рабочие характеристики анализаa
Рабочие характеристики анализаa
ОБЩИЕ СООБРАЖЕНИЯ ПРИ ПРОЕКТИРОВАНИИ ИССЛЕДОВАНИЯДля оценки точности и надежности новых тестов на ТЛЧ для поддержки процессов разработки политики ВОЗ и страны следует рассмотреть два типа исследований: (1) аналитические исследования в лабораторных условиях для подтверждения предела обнаружения теста для MTBC и обнаружения устойчивости; и (2) клинические оценочные исследования для подтверждения диагностической эффективности клинических образцов, собранных из последовательной серии или случайной выборки невыбранных пациентов, требующих оценки на ТБ и ЛУ-ТБ в местах предполагаемого использования (Приложение 1: Глоссарий).Вместе эти исследования могут предоставить репрезентативные данные о характеристиках анализов и приборов для использования в странах с высоким бременем ТБ и их применимости в различных клинических условиях и в разных группах населения (Таблица 3). Оценки простоты использования и другие оценки (см. Таблицу 1 в статье 1 Денкингера и др.) Также являются обязательными, но здесь не рассматриваются. Таблица 3.Использование данных аналитических и клинических оценочных исследований для достижения целей a
Использование данных аналитических и клинических оценочных исследований для достижения целей a
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯНезависимые аналитические исследования дополнят и подтвердят то, что производители производят для проверки своих анализов.Эти исследования должны проводиться в лабораторных условиях в рамках анализа с привязкой к дизайну для оценки пределов обнаружения MTBC и устойчивости, аналитической чувствительности и специфичности, инклюзивности и исключительности, а также обнаружения гетерорезистентности по ряду хорошо охарактеризованных образцов. Предел обнаруженияУчитывая, что проспективные клинические исследования страдают от изменчивости исследуемой популяции пациентов (с течением времени, в разных географических регионах или в разных зонах обслуживания), аналитические исследования предела обнаружения (LoD), выполненные на стандартизированной панели и с использованием хорошо охарактеризованных сравнительных анализов, могут обеспечить LoD, который можно сравнивать в разных анализах.В идеале, тестирование LoD должно проводиться в проверенной матрице мокроты, чтобы собрать достаточно данных, чтобы соответствовать кривой Пробита и оценить LoD с доверительным интервалом 95%. Учитывая обширные данные, доступные по Xpert MTB / RIF и Ultra, рекомендуется включить любой анализ в качестве прямого компаратора для проведения сравнительного анализа. Результаты должны подтвердить, что LoD анализа для MTBC эквивалентен или превосходит, по крайней мере, тот, который указан для Xpert MTB / RIF [17], в соответствии с критериями TPP [5], хотя снижение чувствительности может быть приемлемым, если другие характеристики анализа существенно улучшат доступность. и доступ [22].Проверка предела обнаружения против Ultra может быть особенно полезна для высокочувствительных анализов DST для информирования о размещении в алгоритмах тестирования (например, для использования в качестве предварительного или рефлекторного теста). LoD для целей устойчивости к ТЛЧ также следует подтвердить, потому что эти оценки, вероятно, будут отличаться от оценок для обнаружения MTBC из-за обнаружения различных и множественных генных целей. В этой оценке тестируются наиболее распространенные мутации устойчивости (например, katG 315ACC для устойчивости к INH; rpoB 531TTG для устойчивости к RIF; gyrA 94GGC для устойчивости к FQ; rplC T460C для устойчивости к линезолиду; pncA a-11g для устойчивости к пиразинамиду и rrs A1401G для обнаружения устойчивости к SLI) можно использовать для определения LoD для тестирования устойчивости к некоторым соединениям первого и второго ряда, обнаруживаемым с помощью анализа [23].Анализы с линейным зондом (LPA) могут быть включены в качестве компараторов для соответствующих лекарственных соединений. В идеале результаты этого тестирования должны подтверждать, что анализ LoD для определения устойчивости эквивалентен или превосходит одобренные ВОЗ компараторы. Следует отметить, что для оценки LoD следует использовать только генетически и фенотипически хорошо охарактеризованные и количественно определенные образцы. В отсутствие международного стандарта ВОЗ стандартизированная панель для определения динамического диапазона и LoD доступна в FIND и Zeptometrix [24].Разработчики анализа должны рассмотреть возможность использования по крайней мере 1 лекарственно-чувствительного и 1 лекарственно-устойчивого штамма из такой панели для оценки LoD анализов DST, чтобы повысить уверенность в LoD анализа как для MTBC, так и для обнаружения устойчивости. Обнаружение мутаций, вызывающих резистентностьВ ходе этого аналитического исследования также должна быть оценена способность обнаруживать мутации в устойчивых штаммах. Это необходимо, потому что ни одно клиническое исследование разумного размера не сможет достичь достаточного разнообразия штаммов и мутаций, придающих устойчивость, чтобы адекватно повлиять на эффективность анализа.В идеале анализы должны быть протестированы против панелей мутаций, которые включают мутации устойчивости с высокой степенью достоверности заметной глобальной распространенности, охватывающие примерно 80–90% известных механизмов устойчивости к любому лекарству. Например, мутации katG 315ACC и inhA C-15T представляют 80,8% глобальных механизмов устойчивости к INH, согласно недавним данным оценки мутаций [23]. В идеале 3 независимых штамма из разных регионов ВОЗ должны быть протестированы на каждую мутацию, чтобы гарантировать высокую воспроизводимость результатов анализа ТЛЧ для эпидемиологически разнообразного набора штаммов с соответствующими мутациями устойчивости.Следует отметить, что эта оценка требует тестирования на панелях штаммов, фенотипически охарактеризованных с помощью тестов, одобренных ВОЗ, включая фенотипическое ТЛЧ на твердой или жидкой среде в рекомендуемых критических концентрациях [25] и секвенирование для определения генетической основы устойчивости. К существующим высококачественным банкам штаммов ВОЗ относятся банк штаммов FIND TB с разнообразием генетически и клинически хорошо охарактеризованных устойчивых штаммов и подобранных клинических образцов [26], а также Институт тропической медицины (Антверпен, Бельгия) [27, 28], в котором содержится широкий спектр изолятов MTBC. Инклюзивность и эксклюзивностьАналитические исследования должны также оценивать инклюзивность и эксклюзивность анализа DST, тестировать реактивность анализа против ряда вариантов MTBC (инклюзивность), а также против других организмов (исключительность). Хотя использование эпидемиологически разнообразного набора штаммов во время экспериментов по заражению мутациями может дать данные, касающиеся инклюзивности анализа, следует позаботиться о том, чтобы тест был адекватно проверен против вариантов MTBC.Также следует подтвердить, что анализ идентифицирует всех различных членов MTBC как TB. Для тестирования на исключительность следует проверить ряд NTM, грамположительных и отрицательных бактерий, особенно тех, которые присутствуют в флоре полости рта и мокроте [29]. Рекомендуется, чтобы в ходе этой оценки было протестировано не менее 20 клинически значимых НТМ и не менее 10 других бактерий без наблюдаемых перекрестных реакций. Такая панель доступна через Европейскую сеть референс-лабораторий по туберкулезу, а другая в настоящее время разрабатывается и будет доступна через FIND.Это тестирование может быть дополнено оценкой in silico данных о последовательности, с целью изучения перекрестной реактивности аналитического праймера и зондов со всеми известными клинически значимыми NTM и патогенами. Наконец, следует оценить интерференционные эффекты NTM или дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) человека в смешанных образцах, чтобы подтвердить функциональность анализа в этих случаях [5]. Обнаружение гетерорезистентностиОбнаружение гетерорезистентности также следует оценивать в ранних аналитических исследованиях.Реплицируемые смеси штаммов дикого типа и мутантных штаммов или ДНК следует тестировать с помощью анализа в контексте LoD при установленных соотношениях для наиболее распространенных мутаций устойчивости в каждой области гена, включенной в анализ [23]. Эти соотношения могут быть шире или уже в зависимости от типа тестируемого анализа. Например, технология секвенирования следующего поколения, вероятно, будет иметь более низкий порог для тестирования устойчивости, и поэтому может быть более узкий диапазон смесей (например, 0,5%, 1%, 2%, 5% и 10% мутант: дикий тип). тестировали, сравнивая с анализом в реальном времени (например, 10%, 25%, 50%, 75% и 90% мутант: дикий тип). ИССЛЕДОВАНИЯ КЛИНИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИПосле подтверждения адекватных аналитических характеристик следует провести клинические исследования для оценки диагностической эффективности тестов на ТЛЧ на ТБ образцов от пациентов в условиях предполагаемого использования. Данные, полученные в результате этих исследований по точности анализа, можно сопоставить с ранними данными LoD и аналитическими характеристиками. Клинические исследования в дальнейшем внесут существенный вклад в установление диагностической специфичности, поддержат данные, полученные в ходе тестирования исключительности, и предоставят данные об эксплуатационных характеристиках для руководства политиками использования. Население и условияКлинические оценки должны проводиться в различных условиях, репрезентативных для эпидемии ТБ в странах с высоким бременем, чтобы изучаемая популяция точно соответствовала целевой группе в условиях предполагаемого использования. В идеале для этих исследований следует выбрать по крайней мере 3 участка из разных регионов ВОЗ. Выбор площадок в различных географических регионах также гарантирует, что данные об эксплуатационных характеристиках отражают особые проблемы, которые могут возникнуть в различных условиях.Набор пациентов на основе факторов риска ЛУ-ТБ (например, ранее леченных больных ТБ) также может быть приемлемой стратегией для обогащения пациентов с М / ШЛУ-ТБ исследованиями ТЛЧ (дополнительные сведения о размере выборки приведены ниже). Эталоны и компараторыУчитывая важность оценок точности при принятии клинических решений и разработке диагностических алгоритмов и клинических руководств, крайне важно, чтобы в оценочные исследования были включены надежный эталонный стандарт и информативные компараторы (Таблица 4).В настоящее время методы ТЛЧ, основанные на культуре, являются наилучшим доступным эталоном для выявления MTBC и резистентности, но эти методы не всегда воспроизводимы или точны, особенно для определения резистентности [30, 31]. Хотя генотипические методы, такие как секвенирование, можно считать надежным методом подтверждения наличия мутаций, обнаруживаемых с помощью ТЛЧ к туберкулезу, не все механизмы генетической устойчивости известны для каждого препарата, и некоторые мутации могут не быть связаны с устойчивостью. Таблица 4.Преимущества и недостатки стандартных образцов и компараторов для диагностических оценочных исследований ЛУ-ТБ
Преимущества и недостатки стандартных образцов и компараторов для диагностических оценочных исследований ЛУ-ТБ
Учитывая потребность в полной картине лекарственной устойчивости и устранении несоответствий между индексным тестом и эталонным стандартом в исследованиях диагностической точности, использование составного эталонного стандарта, объединяющего информацию о генотипическом секвенировании и фенотипических результатов ТЛЧ, настоятельно рекомендуется.Преимущество составного эталонного стандарта состоит в том, что он помогает преодолеть ограничения отдельных эталонных тестов: если образец устойчив в соответствии с фенотипическим ТЛЧ или имеет известную мутацию, придающую устойчивость, образец классифицируется как устойчивый к лекарствам, но если оба фенотипа ТЛЧ и секвенирование указывают на чувствительность, образец классифицируется как лекарственно-чувствительный. Поскольку специфичность как фенотипического ТЛЧ, так и секвенирования высока, это создает более надежный эталонный стандарт и позволяет получить более полную картину эффективности диагностического анализа, как показано в недавней оценке Hain MTBDR plus Version 2 (Hain Lifescience GmbH, Nehren, Германия) и Nipro NTM + MDRTB (Nipro Corporation, Осака, Япония) LPA [32]. Включение одобренных ВОЗ тестов в качестве компараторов в оценочные исследования также дает возможность проводить сравнительный анализ и генерировать более убедительные доказательства для обзора ВОЗ [33]. В частности, включение одобренных ВОЗ LPA и анализов Xpert MTB / RIF и / или Ultra может принести пользу как аналитическим, так и клиническим оценочным исследованиям, поскольку эти анализы, вероятно, будут нацелены на те же генные цели, что и индексные тесты для первой линии и в случае анализа второй линии Hain MTBDR sl (Hain Lifescience GmbH, Нерен, Германия) — определение устойчивости к FQ и SLI.В идеале оценочное исследование должно оценивать диагностическую точность индексного теста по сравнению с фенотипическим ТЛЧ, секвенированием и составным эталонным стандартом, а также сравнивать диагностические характеристики теста с включенными компараторами. Размер выборкиРазмер выборки является важным фактором при разработке клинических оценочных исследований. Размер выборки должен быть установлен таким образом, чтобы достичь намеченной точности оценок точности. На рисунке 1 показано, как точность оценок увеличивается с увеличением размера выборки, а также показано, где повышение точности связано с высокими затратами с точки зрения количества набранных пациентов.Для решений TB DST эти оценки могут быть основаны на оценках производительности TPP [5]. В идеале должны быть достигнуты чувствительность> 95% и специфичность ≥98% по сравнению с секвенированием для всех препаратов, включенных в анализ, в соответствии с минимально приемлемыми рабочими характеристиками TPP [5]. Кроме того, чувствительность должна быть> 90% для INH,> 95% для RIF и> 90% для FQ по сравнению с фенотипическим ТЛЧ, а специфичность ≥98% для выявления лекарственной устойчивости для препаратов первого и второго ряда, к которым проводится тест. способен идентифицировать резистентность [5], с выбранным размером выборки, обеспечивающим высокую достоверность полученных оценок диагностической эффективности.В идеале ширина целевых доверительных интервалов должна составлять ≤5% для оценок специфичности и ≤10% для оценок чувствительности (таблица 5). Оценки размера выборки также должны быть завышены, чтобы учесть количество прогонов индексных и эталонных тестов, которые, как ожидается, дадут неопределенные результаты или ошибки (например, <5% в соответствии с TPP). При расчетах следует также учитывать тот факт, что профили резистентности зарегистрированных пациентов, вероятно, будут различаться в зависимости от места проведения. Например, ожидаемые профили лекарственной устойчивости пациентов, поступивших в специализированный центр по лечению лекарственно-устойчивого туберкулеза, будут отличаться от профилей, зарегистрированных в централизованной лаборатории в условиях низкой распространенности ТБ. Таблица 5. Пример расчета размера выборкидля клинической оценки теста на ТЛЧ на ТБ, выявляющего устойчивость к изониазиду и рифампицину
Пример расчета размера выборки для клинической оценки теста на ТЛЧ на ТБ, определяющего устойчивость к изониазиду и рифампицину
Рисунок 1. Точность оценок точности в зависимости от размера выборки. Линии показывают точность оценок точности как функцию размера выборки; Точечные оценки точности выбираются в соответствии с минимальными целями на основе профиля целевого продукта, то есть чувствительностью 98% (синяя линия) для обнаружения целевых однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) для устойчивости к рифампицину (RIF) и 95% (зеленая линия) ) для обнаружения SNP устойчивости к фторхинолонам (FQ), пиразинамиду (PZA), изониазиду (INH) и аминогликозидам (AG) и капреомицину по сравнению с генетическим секвенированием; специфичность 98% (синяя линия) для любого противотуберкулезного (ТБ) агента, для которого тест может определить устойчивость по сравнению с генетическим секвенированием; чувствительность 95% (зеленая линия) для обнаружения устойчивости к RIF и 90% (красная линия) для обнаружения устойчивости к FQ, PZA, INH и AG по сравнению с фенотипической культурой Ось Y показывает общую ширину 95% доверительного интервала для чувствительности и специфичности для заданный размер выборки.По оси абсцисс показано необходимое количество пациентов с лекарственно-устойчивым (ЛУ) -ТБ для достижения заданной точности чувствительности и количество пациентов без ЛУ-ТБ для достижения заданной точности для специфичности. Рис. 1. Точность оценок точности как функция размера выборки. Линии показывают точность оценок точности как функцию размера выборки; Точечные оценки точности выбираются в соответствии с минимальными целями на основе профиля целевого продукта, то есть чувствительностью 98% (синяя линия) для обнаружения целевых однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) для устойчивости к рифампицину (RIF) и 95% (зеленая линия) ) для обнаружения SNP устойчивости к фторхинолонам (FQ), пиразинамиду (PZA), изониазиду (INH) и аминогликозидам (AG) и капреомицину по сравнению с генетическим секвенированием; специфичность 98% (синяя линия) для любого противотуберкулезного (ТБ) агента, для которого тест может определить устойчивость по сравнению с генетическим секвенированием; чувствительность 95% (зеленая линия) для обнаружения устойчивости к RIF и 90% (красная линия) для обнаружения устойчивости к FQ, PZA, INH и AG по сравнению с фенотипической культурой Ось Y показывает общую ширину 95% доверительного интервала для чувствительности и специфичности для заданный размер выборки.По оси абсцисс показано необходимое количество пациентов с лекарственно-устойчивым (ЛУ) -ТБ для достижения заданной точности чувствительности и количество пациентов без ЛУ-ТБ для достижения заданной точности для специфичности. Поток пробыПри разработке клинической оценки теста на ТЛЧ на ТБ особое внимание следует уделять потоку образцов. Индексный тест следует проводить либо на необработанном, либо на обработанном клиническом образце, либо на обоих, в зависимости от целевого исходного материала для анализа.Контрольный тест и компаратор следует по возможности проводить на тех же образцах, что и индексный тест, чтобы обеспечить сопоставимость результатов. В случае тестов ТЛЧ на ТБ на основе мокроты индексный тест может быть проведен дважды: один раз для прямого образца для оценки эффективности анализа для сырых образцов и один раз для культивированного изолята вместе с контрольными методами и методами сравнения (рис. 2). Это двойное тестирование обеспечивает оценку эффективности анализа для 2 различных типов образцов и позволяет разрешить противоречащие друг другу результаты между тестами, выполненными на необработанном образце и на культивированном изоляте.Поток образцов должен также учитывать минимальные потребности в объеме образца для индексных, эталонных и сравнительных тестов, учитывая потенциальную потребность в повторении неопределенных результатов, обеспечивая при этом, чтобы исследовательская деятельность соответствовала процедурам сбора и обработки образцов в клинических учреждениях и не создавала чрезмерного бремени. на участников исследования, как это может иметь место при получении нескольких образцов (см. более подробное обсуждение вопросов, относящихся к этой теме, в Документе 2). Рисунок 2. Пример рекомендуемого потока проб для клинических оценочных исследований. График отражает поток образцов для оценки раствора для определения лекарственной чувствительности (ТЛЧ) от туберкулеза (ТБ). Все молекулярные анализы следует проводить в соответствии со стандартными рабочими протоколами, предоставленными производителями, тогда как обращение с образцами и их обработка должны выполняться в соответствии с политикой и стандартами Национальной программы по борьбе с туберкулезом. После скрининга пациентов или образцов для включения в исследование следует собрать образцы мокроты и провести мазок на кислотоустойчивые бациллы и индикаторную пробирку роста микобактерий (MGIT) и культивирование Левенштейна-Йенсена (LJ) непосредственно для всех образцов в дополнение к индексный тест.После прямого тестирования следует провести фенотипическое ТЛЧ MGIT для всех образцов с положительным посевом на соответствующие лекарственные соединения. Культивированные образцы также будут подвергаться последующему молекулярному тестированию с помощью сравнительных анализов и целевого секвенирования следующего поколения (NGS) соответствующих областей гена и другого индексного теста. NGS следует выполнять из культурального изолята для получения результатов секвенирования высокого качества. FM, флуоресцентная микроскопия. Рис. 2. Пример рекомендуемого потока проб для клинических оценочных исследований.График отражает поток образцов для оценки раствора для определения лекарственной чувствительности (ТЛЧ) от туберкулеза (ТБ). Все молекулярные анализы следует проводить в соответствии со стандартными рабочими протоколами, предоставленными производителями, тогда как обращение с образцами и их обработка должны выполняться в соответствии с политикой и стандартами Национальной программы по борьбе с туберкулезом. После скрининга пациентов или образцов для включения в исследование следует собрать образцы мокроты и провести мазок на кислотоустойчивые бациллы и индикаторную пробирку роста микобактерий (MGIT) и культивирование Левенштейна-Йенсена (LJ) непосредственно для всех образцов в дополнение к индексный тест.После прямого тестирования следует провести фенотипическое ТЛЧ MGIT для всех образцов с положительным посевом на соответствующие лекарственные соединения. Культивированные образцы также будут подвергаться последующему молекулярному тестированию с помощью сравнительных анализов и целевого секвенирования следующего поколения (NGS) соответствующих областей гена и другого индексного теста. NGS следует выполнять из культурального изолята для получения результатов секвенирования высокого качества. FM, флуоресцентная микроскопия. Ключевые проблемы, выходящие за рамки точностиСуществует дополнительная потребность в мониторинге и оценке других аспектов эффективности анализа, которые необходимо запланировать при планировании клинических исследований.Данные о работе анализа следует собирать с помощью анкет наблюдения за использованием и оценки пользователей во время клинических испытаний, чтобы в конечном итоге определить политику в отношении использования анализа. Различные технические и операционные параметры анализа, которые следует измерять во время клинических исследований, включают время получения результата, неопределенные показатели и другие факторы, которые также могут быть оценены вне клинического исследования, перечислены в таблице 2. Необходимость направления пробы и Следует также отметить сети передачи данных, особенно для централизованных решений DST.Кроме того, операторы должны проявлять особую осторожность при мониторинге и замечании потенциальных проблем перекрестного загрязнения при включении анализов ТЛЧ в лабораторный поток. Наконец, есть важные соображения при интерпретации результатов клинических исследований, полученных при помощи эталонных стандартов и компараторов. Примечательно, что возможность различных технологий для обнаружения гетерорезистентности в клинических образцах может вызывать беспокойство, особенно для лекарств, для которых обычно наблюдаются устойчивые субпопуляции, таких как FQ [34, 35], где частота устойчивого аллеля может быть ниже порог обнаружения различных диагностических тестов.Эти популяции также могут быть устойчивыми или восприимчивыми к фенотипическому ТЛЧ, что может привести к несоответствиям между фенотипическим ТЛЧ и секвенированием, если секвенирование выполняется только на культуральном изоляте. По этой причине исследователи могут рассмотреть возможность сохранения образцов мокроты для последующего целенаправленного глубокого секвенирования для устранения несогласованности. Это гарантирует получение наиболее точных эталонных генотипических данных для клинических образцов, особенно когда индексный тест проводится непосредственно на клиническом образце. Для анализа обнаружения MTBC важно, чтобы результаты анализировались по статусу мазка и истории ТБ пациента, чтобы учесть возможные ложноположительные результаты из-за остаточного ТБ в образцах и гарантировать, что клинические данные отражают точные оценки обнаружения MTBC. Эти соображения жизненно важны для обеспечения точной отчетности о результатах исследования, включая ключевые параметры эффективности анализа (подробное обсуждение вопросов, относящихся к этой теме, приведено в документе 2). ВЫВОДЫПо мере того, как новые тесты разрабатываются в соответствии с существующими TPP, должны быстро последовать соответствующие доказательства их производительности и эксплуатационных характеристик.Это обеспечит возможность выработки политических рекомендаций, что является первым шагом к доступу к этим тестам для пациентов с туберкулезом. Ожидается, что исследования, проводимые в соответствии с изложенным здесь планом, позволят получить высококачественные лабораторные и клинические данные, касающиеся эффективности анализа и рабочих характеристик, а также поддержат обзор ВОЗ и потенциальные рекомендации. Дополнительные данныеДополнительные материалы доступны по адресу The Journal of Infectious Diseases онлайн.Состоящие из данных, предоставленных авторами для удобства читателя, размещенные материалы не копируются и являются исключительной ответственностью авторов, поэтому вопросы или комментарии следует адресовать соответствующему автору. БанкнотыДополнение спонсорства. Это дополнение спонсируется FIND (Фонд инновационных новых диагностических средств) и стало возможным благодаря щедрой поддержке правительств Соединенного Королевства, Нидерландов, Германии и Австралии. Возможный конфликт интересов. Все авторы: о конфликтах интересов не сообщалось. Все авторы подали форму ICMJE для раскрытия информации о потенциальных конфликтах интересов. Список литературы1.Всемирная организация здравоохранения .Глобальный отчет о туберкулезе, 2018 г. .Женева :Всемирная организация здравоохранения ;2018 .2.Shah NS ,Richardson J ,Moodley P и др.Повышение лекарственной устойчивости туберкулеза с широкой лекарственной устойчивостью, Южная Африка .Emerg Infect Dis 2011 ;17 :510 —3 . 3.Kendall EA ,Azman AS ,Cobelens FG ,Dowdy DW .Лечение МЛУ-ТБ как профилактика: прогнозируемое воздействие расширенного лечения туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью на популяционном уровне .PLoS One 2017 ;12 :e0172748 .4.Шарма A ,Hill A ,Курбатова E и др.Оценка будущего бремени туберкулеза с множественной и широкой лекарственной устойчивостью в Индии, Филиппинах, России и Южной Африке: исследование с математическим моделированием .Lancet Infect Dis 2017 ;17 :707 —15 .5.Всемирная организация здравоохранения . Отчет о совещании: Профили высокоприоритетных целевых продуктов для новых средств диагностики туберкулеза: отчет совещания по консенсусу .Женева :Всемирная организация здравоохранения ;2014 .6.Гилпин С ,Коробицын А ,Вейер К .Современные инструменты для диагностики лекарственно-устойчивого туберкулеза .Ther Adv Infect Dis 2016 ;3 :145 —51 .7.Steingart K ,Schiller I ,Horne DJ ,Pai M ,Boehme C ,Dendukuri 9. Анализ Xpert MTB / RIF на туберкулез легких и устойчивость к рифампину у взрослых .Кокрановская база данных Syst Rev 2014 ;CD009593 .8.Скотт L ,Дэвид A ,Благородный L и др.Эффективность тестов Abbott Realtime MTB и MTB RIF / INH в условиях высокой коинфекции туберкулеза и ВИЧ в Южной Африке .J Clin Microbiol 2017 ;55 :2491 —501 .9.Park JE ,Huh HJ ,Koh WJ ,Song DJ ,Ki CS ,Lee NY NY .Оценка эффективности анализа Cobas TaqMan MTB на респираторных образцах в соответствии с клинической заявкой .Int J Infect Dis 2017 ;64 :42 —6 .10.Hillemann D ,Haasis C ,Andres S ,Behn T ,Kranzer K .Валидация анализа FluoroType® MTBDR на определение устойчивости к рифампицину и изониазиду в изолятах комплекса Mycobacterium tuberculosis .J Clin Microbiol 2018 ;56 :pii: e00072-18 .12.Се YL ,Чакраворти S ,Армстронг DT и др.Оценка молекулярного экспресс-теста на лекарственную чувствительность при туберкулезе .N Engl J Med 2017 ;377 :1043 —54 . 14.Hofmann-Thiel S ,Молодцов N ,Антоненка U ,Hoffmann H .Оценка тестов Abbott Realtime MTB и INH / RIF в реальном времени для прямого обнаружения комплекса Mycobacterium tuberculosis и маркеров резистентности в респираторных и внелегочных образцах .J Clin Microbiol 2016 ;54 :3022 —7 . 16.Rice JE ,Reis AH Jr,Rice LM ,Carver-Brown RK ,Wangh LJ .Флуоресцентные сигнатуры для вариабельных последовательностей ДНК .Nucleic Acids Res 2012 ;40 :e164 . 17.Dolinger DL ,Colman RE ,Engelthaler DM ,Rodwell TC .Удобные платформы на основе секвенирования нового поколения для диагностики лекарственно-устойчивого туберкулеза: перспективы на ближайшее будущее .Int J Mycobacteriol 2016 ;5 (Дополнение 1 ):27 —8 .18.Nikam C ,Jagannath M ,Narayanan MM и др.Быстрая диагностика Mycobacterium tuberculosis с помощью Truenat MTB: практический подход .PLoS One 2013 ;8 :e51121 .20.Всемирная организация здравоохранения .Использование технологий секвенирования нового поколения для обнаружения мутаций, связанных с лекарственной устойчивостью, в комплексе Mycobacterium tuberculosis : Техническое руководство .Женева :Всемирная организация здравоохранения ;2018 . 21.Всемирная организация здравоохранения .Рекомендации ВОЗ по лечению туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью и туберкулезом, устойчивым к рифампицину. Обновление 2018 .Женева :Всемирная организация здравоохранения ;2018 . 22.Всемирная организация здравоохранения .ВОЗ рекомендует провести новый тест на туберкулез .Женева :Всемирная организация здравоохранения ;2016 . 23.Miotto P ,Tessema B ,Tagliani E et al.Стандартизированный метод интерпретации связи между мутациями и фенотипической лекарственной устойчивостью у Mycobacterium tuberculosis .Eur Respir J 2017 ;50 :1 —13 . 25.Всемирная организация здравоохранения .Технический отчет о критических концентрациях для тестирования лекарственной чувствительности противотуберкулезных препаратов, используемых для лечения лекарственно-устойчивого туберкулеза .Женева :Всемирная организация здравоохранения ;2018 .26.Tessema B ,Nabeta P ,Valli E и др.НАЙТИ банк штаммов туберкулеза: ресурс для исследователей и разработчиков, работающих над тестами на обнаружение Mycobacterium tuberculosis и связанной с ним лекарственной устойчивости .J Clin Microbiol 2017 ;55 :1066 —73 . 27.Vincent V ,Rigouts L ,Nduwamahoro E и др.Банк штаммов туберкулеза TDR: ресурс для фундаментальной науки, разработки инструментов и диагностических услуг .Int J Tuberc Lung Dis 2012 ;16 :24 —31 . 28.Натансон CM ,Куэвас LE ,Каннингем J и др.Банк образцов туберкулеза TDR: ресурс для разработчиков диагностических тестов .Int J Tuberc Lung Dis 2010 ;14 :1461 —7 .30.Kim SJ .Тестирование лекарственной чувствительности при туберкулезе: методы и достоверность результатов .Eur Respir J 2005 ;25 :564 —9 . 31.Van Deun A ,Aung KJ ,Bola V и др.Тесты на лекарственную устойчивость к рифампицину при туберкулезе: бросая вызов золотому стандарту .J Clin Microbiol 2013 ;51 :2633 —40 .32.Nathavitharana RR ,Hillemann D ,Schumacher SG , et al.Многоцентровая оценка неэффективности генотипа hain MTBDRplus версии 2 и линейных зондов Nipro NTM + MDRTB для выявления устойчивости к рифампину и изониазиду .J Clin Microbiol 2016 ;54 :1624 —30 . 33.Takwoingi Y ,Leeflang MM ,Deeks JJ .Эмпирические доказательства важности сравнительных исследований точности диагностических тестов .Ann Intern Med 2013 ;158 :544 —54 . 34.Каплан G ,Пост FA ,Морейра AL и др.Mycobacterium tuberculosis Рост на поверхности полости: микросреда с нарушенным иммунитетом .Infect Immun 2003 ;71 :7099 —108 .35.Zhang X ,Zhao B ,Liu L ,Zhu Y ,Zhao Y ,000 QinСубпопуляционный анализ гетерорезистентности к фторхинолону в изолятах Mycobacterium tuberculosis из Пекина, Китай .J Clin Microbiol 2012 ;50 :1471 —4 ,36.Уилсон EB .Вероятный вывод, закон последовательности и статистический вывод .J Am Stat Assoc 1927 ;22L :209 —12 .© Автор (ы) 2019. Опубликовано Oxford University Press для Общества инфекционных болезней Америки. Все права защищены. Для получения разрешений обращайтесь по электронной почте: [email protected]. Тестирование на молекулярную и ростовую лекарственную чувствительность микобактерий туберкулеза Комплекс на устойчивость к этамбутолу в СШАЭтамбутол (EMB) используется как часть схем лечения туберкулеза (ТБ).Чувствительность изолятов комплекса Mycobacterium tuberculosis (MTBC) к EMB можно определить с помощью секвенирования ДНК для выявления мутаций в гене embB , связанных с устойчивостью. Лаборатории общественного здравоохранения США (PHL) в основном используют методы теста на лекарственную чувствительность (ТЛЧ) на основе роста для определения устойчивости к ЭМВ. Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC) предоставляют услуги по молекулярному обнаружению лекарственной устойчивости (MDDR) путем секвенирования ДНК и одновременного ТЛЧ на основе роста с использованием пропорции агара.Результаты тестов PHL и CDC сравнивались для 211 образцов MTBC, представленных в CDC с сентября 2009 года по февраль 2011 года. Соответствие результатов ТЛЧ на основе роста от PHL и CDC составило 88,2%. Основанное на росте сравнение 39 образцов, в которых была обнаружена мутация embB , связанная с устойчивостью к EMB, выявило более высокий процент устойчивости к EMB по CDC (84,6%), чем по PHL (59,0%), что было значимым (значение = 0,002). . Расхождения между результатами всех тестов, основанных на росте, от PHL и CDC также были значительными (значение = 0.003). Большинство несоответствий было связано с ложной восприимчивостью с использованием системы, основанной на росте BACTEC ™ MGIT ™ 960 (MGIT). Наш анализ поддерживает объединение результатов на основе роста и молекулярных результатов для информированной интерпретации потенциальной устойчивости к ЭМВ. 1. ВведениеВ 2014 г. в США было зарегистрировано 9 412 новых случаев туберкулеза (ТБ) [1]. Из этих случаев 96 (1,3%) были классифицированы как множественная лекарственная устойчивость (МЛУ), определяемая как устойчивость как минимум к рифампину (RMP) и изониазиду (INH).Надежный тест на лекарственную чувствительность (ТЛЧ) изолятов комплекса Mycobacterium tuberculosis (MTBC) необходим для выбора эффективных схем лечения, прерывания передачи и предотвращения дальнейшего развития устойчивых форм ТБ. Этамбутол (EMB) в сочетании с INH, RMP и пиразинамидом (PZA) используется как часть схемы лечения туберкулезом первого ряда для пациентов с лекарственно-чувствительным ТБ. EMB часто включается в комбинации с препаратами второго ряда как часть схемы лечения МЛУ-ТБ, когда изолят чувствителен [2–4].EMB представляет собой бактериостатический антимикробный препарат, который препятствует клеточному метаболизму путем ингибирования арабинозилтрансферазы, необходимой для биосинтеза арабиногалактана в клеточной стенке [4, 5]. Мутации в опероне embCAB , который кодирует арабинозилтрансферазу микобактерий, в значительной степени связаны с основанной на росте устойчивостью к EMB [6]. Эти мутации наиболее часто встречаются либо в кодоне embB 306, либо в кодоне embB 406 [7–9]. Несинонимичные мутации были обнаружены в других кодонах за пределами этих мест между кодонами 296 и 497 в EMB-устойчивых изолятах [10].Однако мутации, описанные в этих кодонах, такие как Glu378Ala, могут быть маркерами клонирования, не связанными с устойчивостью [11–14]. Следовательно, нельзя полагаться только на секвенирование ДНК для выявления устойчивости к EMB из-за наличия мутаций, не обеспечивающих устойчивость на основе роста, и потому что могут существовать другие механизмы устойчивости к EMB [13, 14]. Противоречивые результаты среди методов тестирования ТЛЧ на основе роста на устойчивость к EMB были хорошо задокументированы и связаны с трудностями при установлении эквивалентных критических концентраций (CC) [7, 15–19].Кроме того, эксперименты по обмену аллелей продемонстрировали, что некоторые мутации embB 306, такие как Met306Ile, могут приводить только к умеренно повышенной минимальной ингибирующей концентрации (МИК) по сравнению с CC, а изоляты MTBC с этими мутациями могут быть ошибочно признаны чувствительными [8 , 20]. Как чувствительные к EMB, так и устойчивые к EMB изоляты с мутациями Met306Ile были описаны в одном и том же исследовании, где для ТЛЧ на основе роста использовалась пропорция агара [13]. Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC) обеспечивают молекулярное обнаружение лекарственной устойчивости (MDDR) посредством секвенирования ДНК локусов, связанных с лекарственной устойчивостью против ТБ, включая устойчивость к EMB, и одновременное ТЛЧ на основе роста.Молекулярное тестирование может проводиться либо с изолятами MTBC, либо с осадками клинических образцов, положительных на MTBC с помощью тестов амплификации нуклеиновых кислот (NAAT) [13]. Эта услуга доступна по запросу лабораторий общественного здравоохранения (PHL) для образцов, соответствующих определенным критериям подачи [21]. Компания PHL, отправляющая образцы MTBC для тестирования, получает промежуточный отчет с молекулярными результатами и окончательный отчет по завершении ТЛЧ на основе роста. Окончательный отчет содержит пояснительные комментарии, основанные как на молекулярных результатах, так и на результатах роста.Сервис CDC MDDR был описан ранее [22, 23]. Ранее мы исследовали соответствие между молекулярным и основанным на росте ТЛЧ для определения устойчивости к RIF и INH образцов MTBC, представленных в службу MDDR CDC [23]. В этом исследовании мы сравнили результаты по чувствительности к EMB, полученные с помощью службы MDDR, молекулярные и основанные на росте, с результатами, основанными на росте, предоставленными PHL. Кроме того, мы проанализировали результаты тестов и методы на предмет возможных причин несоответствия. 2. Материалы и методы2.1. Образцы MTBC и сбор результатов ТЛЧ на основе роста из PHLРезультаты теста EMB, проанализированные для этого исследования, представляли собой изоляты MTBC и NAAT-положительные осадки от больных туберкулезом, представленные PHL в службу MDDR CDC с сентября 2009 по февраль 2011 года. основанные на результатах ТЛЧ и методы тестирования, использованные для этих образцов в PHL, были доступны из ранее описанного исследования, в котором использовался безопасный инструмент опроса для сбора данных онлайн из PHL [23, 24]. CDC определила, что предыдущее исследование не было исследованием на людях; таким образом, он не требовал рассмотрения Советом по институциональному надзору.Результаты ТЛЧ на основе роста для EMB были успешно собраны для 211 образцов MTBC, представленных PHL в течение периода исследования. Сбор всех данных был одобрен в соответствии с общим пакетом разрешений Управления управления и бюджета (OMB) (Сбор информации для улучшения эффективности системы, потенциала и реализации программ государственных, племенных, местных и территориальных государственных органов; номер OMB 0920-0879) в соответствии с требованиями. в соответствии с Законом о сокращении бумажного документооборота. 2.2. ТЛЧ на основе роста и секвенирование ДНКТЛЧ на основе роста для EMB проводили в CDC с использованием метода непрямого определения пропорции агара с использованием критической концентрации (КК) 5 мк мкг / мл в агаре Миддлбрук 7h20 с добавками [25].PHL провела ТЛЧ на основе роста 211 образцов MTBC, представленных в MDDR CDC, с использованием системы BACTEC MGIT 960 (MGIT) (Becton Dickinson and Company) (136 образцов), BACTEC 460 (Becton Dickinson and Company) (45 образцов), BACTEC 460 и пропорция агара (18 образцов), пропорция агара (2 образца), VersaTrek ™ (Trek Diagnostic Systems) (1 образец) или изоляты, которые были переданы в другую лабораторию (9 образцов), где метод ТЛЧ был неизвестен. Секвенирование ДНК для обнаружения мутаций в локусе embB , связанных с лекарственной устойчивостью EMB, выполняли, как описано ранее [13]. 2.3. Анализ данныхДанные ТЛЧ на основе роста из PHL были проанализированы с помощью PASW Statistics (версия 18; программное обеспечение IBM SPSS). Соответствие между тестированием в CDC (как секвенирование ДНК, так и ТЛЧ на основе роста) и тестированием на основе роста, выполняемым PHL, определяли путем сопоставления результатов и расчета процента совпадения. Пропорции выборки сравнивались с использованием критерия Макнемара без поправки на непрерывность с уровнем значимости = 0,05. 3. Результаты и обсуждение3.1. Сравнение ТЛЧ на основе роста, выполненного с помощью PHL, с секвенированием ДНК и ТЛЧ на основе роста, проводимым CDC. Перекрестное табулирование результатов для определения устойчивости к EMB с помощью ТЛЧ на основе роста с помощью PHL и с помощью секвенирования ДНК и на основе роста. ТЛЧ, проведенное CDC, показано в таблице 1. Из 211 образцов MTBC, представленных PHL с соответствующим результатом ТЛЧ на основе роста для EMB, результат ТЛЧ на основе роста не был доступен для сравнения из 30 образцов, протестированных CDC. Отсутствие результатов ТЛЧ на основе роста было связано либо с загрязнением (14 образцов), либо с невозможностью роста (16 образцов).Секвенирование ДНК не проводилось в CDC для 12 образцов, представленных в 2009 году, прежде чем были добавлены молекулярные тесты на устойчивость к EMB. CDC обнаружил 14 образцов MTBC, которые содержали нейтральный полиморфизм либо Glu378Ala, либо Leu355Leu, чувствительность к EMB подтверждена пропорцией агара CDC. Результаты EMB на основе роста PHL и результаты секвенирования ДНК и роста от CDC были доступны для сравнения для 170 из 211 образцов MTBC, перечисленных в таблице 1. Было достигнуто согласие между результатами ТЛЧ на основе роста от PHL и CDC для 150 образцов. в общем согласии 88.2%.
Перекрестная таблица того, была ли обнаружена мутация embB , связанная с устойчивостью к EMB, с использованием секвенирования ДНК образцов MTBC с помощью CDC с числом устойчивых к DST на основе роста как в PHL, так и в CDC, показано в таблице 2 Секвенирование ДНК показало, что 39 образцов (22,9%) из 170 образцов MTBC с результатами, основанными на росте, доступными как от PHL, так и от CDC, содержали мутацию embB , связанную с устойчивостью. Когда была обнаружена мутация embB , связанная с устойчивостью, более высокий процент (84.6%) этих образцов оказались устойчивыми с использованием ТЛЧ на основе роста в CDC по пропорции агара по сравнению с ТЛЧ на основе роста, выполненным с помощью PHL (59,0%), и эта разница была значимой (значение = 0,002). Не было значительной разницы в результатах ТЛЧ на основе роста между CDC и PHL для образцов MTBC, в которых не было обнаружено мутации (значение = 0,317). Однако для всех 170 исследованных образцов MTBC была значительная разница (значение = 0,003) между основанным на росте определением устойчивости к EMB, выполненным PHL, и определением, проведенным CDC.
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||