Хеликобактер пилори, определение ДНК в кале с помощью ПЦР (Helicobacter pylori, DNA, feces)
Метод определения Полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ).
Исследуемый материал Кал
Определение ДНК хеликобактер пилори в кале методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ).
Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori, H. pylori) – спиралевидная бактерия, которая обитает на слизистой оболочке желудка, прикрепляясь к ворсинкам эпителия. По оценкам эпидемиологов, присутствие этой бактерии в желудке можно обнаружить примерно у половины населения планеты, а в некоторых регионах у 80-100%. Нередко у инфицированных симптомы заболевания отсутствуют. При этом выявлена корреляция между наличием H. pylori в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ) и подтвержденными патологиями желудка и двенадцатиперстной кишки, такими как диспепсия, хронический и атрофический гастрит, язвенная болезнь.
Заражение H. pylori возможно уже в возрасте 3-8 лет, с момента начала посещения ребенком детских учреждений. Для этого микроорганизма характерен фекально-оральный, орально-оральный и бытовой пути передачи.
Методы диагностики инфекции H. pylori разделяют на инвазивные, требующие проведения фиброгастродуоденоскопии (ФГДС), и неинвазивные, не требующие проведения ФГДС.
Из неинвазивных методов диагностики инфекции H. pylori в последнее время интенсивно применяется метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). По данным многих исследователей, он является высокоспецифичным (это обеспечивается подбором праймеров, комплементарных уникальной нуклеотидной последовательности исследуемого микроорганизма), высокочувствительным (позволяет диагностировать не только острую, но и латентную форму инфекции, дает возможность выявлять малое количество бактерий).
Helicobacter pylori, ДНК [реал-тайм ПЦР]
Выявление Helicobacter pylori (H. pylori), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в образце биоматериала.
Синонимы русские
Хеликобактер [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени].
Синонимы английские
H. pylori, Helicobacter pyloridis, DNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Биоптат, кал.
Общая информация об исследовании
H. pylori – это грамотрицательная подвижная бактерия, устойчивая к воздействию соляной кислоты и способная колонизировать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки.
H. pylori может быть выявлена с помощью нескольких методов. В настоящее время доступны неинвазивные методы диагностики, обладающие преимуществом простоты и безопасности взятия образца для исследования (исследование кала), что имеет особое значение при обследовании пожилых людей, детей, а также в условиях амбулатории.
Helicobacter очень чувствительна к воздействию желчных кислот и пониженного содержания кислорода, поэтому при пассаже химуса через двенадцатиперстную и толстую кишку количество бактерий значительно снижается. Кроме того, активные спиралевидные формы бактерии претерпевают морфологические изменения, обеспечивающие большую устойчивость в неблагоприятных условиях.
Результатом этого становится низкая концентрация микроорганизмов и преобладание кокковых форм в кале, что следует учитывать при выборе лабораторного метода исследования этого биоматериала. Среди многих неинвазивных методов особое место занимает исследование с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.
Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в кале) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. РТ-ПЦР характеризуется очень высокой чувствительностью (93-95 %), что является преимуществом при анализе кала. В отличие от бактериологического посева, это исследование позволяет выявлять как спиралевидные, так и кокковые (некультивируемые) формы H. pylori. Из-за того что в реакции выявляется ДНК микроорганизма, исследование не применяется для дифференциальной диагностики текущей инфекции или инфекции в анамнезе – результат анализа будет положительным еще некоторое время после полной эрадикации H.
На слизистой оболочке желудка могут также присутствовать другие представители рода Helicobacter (H. suis, H. baculiformis). Несмотря на то что их значение в развитии заболеваний ЖКТ еще до конца не установлено, они играют определенную роль при идентификации H. pylori. Так, например, лабораторные исследования, основанные на выявлении общего для всех видов Helicobacter антигена, будут характеризоваться большим числом ложноположительных результатов исследования на H. pylori за счет выявления других видов (как в случае с ELISA). Это практически исключено в исследовании с помощью РТ-ПЦР, так как реакция основана на выявлении специфического для H. pylori фрагмента ДНК.
Диагностика хеликобактериоза у детей представляет определенные трудности. Это связано с невыполнением ребенком дыхательного маневра при использовании уреазного дыхательного теста, а также необходимостью наркоза при использовании инвазивных методов.
Исследование кала с помощью РТ-ПЦР является хорошей альтернативой этим методам и поэтому может быть с успехом применено в педиатрической практике.
Высокое содержание неорганических солей (фосфатов, кальция), ферментов ЖКТ, полисахаридов, желчных кислот и солей, растительных волокон, слизи и других компонентов кала может ингибировать РТ-ПЦР, поэтому подготовка к тесту требует должного внимания со стороны пациента и врача. Интерпретация результата анализа проводится с учетом дополнительных лабораторных и инструментальных данных.
Для чего используется исследование?
Для диагностики заболеваний, вызванных H. pylori:
- атрофического или антрального гастрита;
- язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.
Когда назначается исследование?
- При подозрении на гастрит или язвенную болезнь у детей и пожилых людей.
- При невозможности использования инвазивных методов идентификации H. pylori у пациентов любого возраста.
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
Положительный результат:
- текущая H. pylori-инфекция;
- H. pylori-инфекция в анамнезе.
Отрицательный результат:
- отсутствие H. pylori-инфекции.
- Присутствие в образце кала крови, желчи, избытка неорганических солей и других компонентов может приводить к получению ложноотрицательного результата.
- Лечение препаратами тетрациклина, пенициллина (аминопенициллины), макролидами (кларитромицин, азитромицин) и метронидазолом может приводить к получению ложноотрицательного результата.
Диагностика методом ПЦР, кал — Комплексы медицинских анализов и их цен в KDL
Алергология. ImmunoCAP. Индивидуальные аллергены, IgE
Аллергокомпоненты ImmunoCAP
Аллергокомпоненты деревьев
Аллергокомпоненты животных и птиц
Аллергокомпоненты плесени
Аллергокомпоненты трав
Пищевые аллергокомпоненты
Аллергология.
ImmunoCAP. Комплексные исследования IgE (результат по каждому аллергену)
Аллергология. ImmunoCAP. Панели аллергенов IgE, скрининг (результат СУММАРНЫЙ)
Аллергология. ImmunoCAP. Фадиатоп
Аллергология. Immulite. Индивидуальные аллергены
Аллергены гельминтов, IgE
Аллергены грибов (кандида и плесневых), IgE
Аллергены деревьев, IgE
Аллергены животных и птиц, IgE
Аллергены клещей домашней пыли, IgE
Аллергены лекарств и химических веществ, IgE
Аллергены насекомых, IgE
Аллергены пыли, IgE
Аллергены ткани, IgE
Аллергены трав, IgE
Бактериальные аллегены (стафилококк), IgE
Пищевые аллергены, IgE
Пищевые аллергены, IgG
Аллергология. Immulite. Комплексы аллергенов, IgE (результат по каждому аллргену)
Аллергология. Immulite. Панели аллергенов, скрининг (результат СУММАРНЫЙ)
Аллергены деревьев, IgE (панель)
Аллергены животных и птиц, IgE (панель)
Аллергены трав, IgE (панель)
Ингаляционные аллергены, IgE (панель)
Пищевые аллергены, IgE (панель)
Аллергология.
Immulite. Панели пищевых аллергенов IgG (результат СУММАРНЫЙ)
Аллергология. ImmunoCAP. Индивидуальные аллергены, IgE
Аллергены бактерий
Аллергены гельминтов, IgE
Аллергены грибов и плесени
Аллергены деревьев, IgE
Аллергены животных и птиц, IgE
Аллергены лекарств и химических веществ, IgE
Аллергены насекомых, IgE
Аллергены пыли, IgE
Аллергены трав, IgE
Пищевые аллергены, IgE
Аллергология. ImmunoCap. Индивидуальные аллергены, IgE
Аллергология. RIDA. Комплексы аллергенов, IgE
Аллергология. RIDA. Комплексы аллергенов, IgE (результат по каждому аллргену)
Аллергология. Местные анестетики, IgE
Биохимические исследования крови
Диагностика анемий
Липидный обмен
Обмен белков
Обмен пигментов
Обмен углеводов
Специфические белки
Ферменты
Электролиты и микроэлементы
Биохимические исследования мочи
Разовая порция мочи
Суточная порция мочи
Витамины, аминокислоты, жирные кислоты
Гематология
Гемостаз (коагулограмма)
Генетические исследования
HLA-типирование
Исследование генетических полиморфизмов методом пиросеквенирования
Исследование генетических полиморфизмов методом ПЦР
Молекулярно-генетический анализ мужского бесплодия
Гистологические исследования
Гистологические исследования лаборатории UNIM
Гормоны биологических жидкостей
Гормоны гипофиза и гипофизарно-адреналовой системы
Гормоны крови
Гормоны гипофиза и гипофизарно-адреналовой системы
Маркеры остеопороза
Пренатальная диагностика
Ренин-альдостероновая система
Тесты репродукции
Функция органов пищеварения
Функция щитовидной железы
Гормоны мочи
Диагностика методом ПЦР
COVID-19
Андрофлор, иследование биоценоза (муж)
Вирус герпеса VI типа
Вирус Варицелла-Зостер (ветряной оспы)
Вирус герпеса VI типа
Вирус простого герпеса I, II типа
Вирус Эпштейна-Барр
Вирусы группы герпеса
Возбудитель туберкулеза
ВПЧ (вирус папилломы человека)
Грибы рода кандида
Листерии
Парвовирус
Респираторные инфекции
Стрептококки (вкл.
S.agalactie)
Токсоплазма
Урогенитальные инфекции, ИППП
Урогенитальные инфекции, комплексные исследования
Урогенитальные инфекции, условные патогены
Фемофлор, исследование биоценоза (жен)
Флороценоз, иследование биоценоза (жен)
Цитомегаловирус
Диагностика методом ПЦР, кал
Кишечные инфекции
Диагностика методом ПЦР, клещ
Клещевые инфекции
Диагностика методом ПЦР, кровь.
Вирус Варицелла-Зостер (ветряной оспы)
Вирус герпеса VI типа
Вирус краснухи
Вирус простого герпеса I, II типа
Вирус Эпштейна-Барр
Вирусы группы герпеса
ВИЧ
Возбудитель туберкулеза
Гепатит D
Гепатит G
Гепатит А
Гепатит В
Гепатит С
Листерии
Парвовирус
Токсоплазма
Цитомегаловирус
Жидкостная цитология
Изосерология
Иммуногистохимические исследования
Иммунологические исследования
Иммунограмма (клеточный иммунитет)
Интерфероновый статус, базовое исследование
Интерфероновый статус, чувствительность к препаратам
Оценка гуморального иммунитета
Специальные иммунологические исследования
Исследование абортуса
Исследование мочевого камня
Исследование парапротеинов.
Скрининг и иммунофиксация
Исследования мочи
Легионеллез
Исследования слюны
Исследования слюны
Комплексные исследования
Лекарственный мониторинг
Маркеры аутоиммунных заболеваний
Антифосфолипидный синдром (АФС)
Аутоиммунные заболевания легких и сердца
Аутоиммунные неврологические заболевания
Аутоиммунные поражения ЖКТ и целиакия
Аутоиммунные поражения печени
Аутоиммунные поражения почек и васкулиты
Аутоиммунные эндокринопатии и бесплодие
Диагностика артритов
Пузырные дерматозы
Системные ревматические заболевания
Эли-тесты
Микробиологические исследования (посевы)
Посев крови на стерильность
Посев на гемофильную палочку
Посев на грибы (Candida)
Посев на грибы (возбудители микозов кожи и ногтей)
Посев на дифтерию
Посев на микоплазмы и уреаплазмы
Посев на пиогенный стрептококк
Посев на стафилококк
Посевы кала
Посевы мочи
Посевы на микрофлору (конъюнктива)
Посевы на микрофлору (отделяемое)
Посевы на микрофлору (урогенитальный тракт женщины)
Посевы на микрофлору (урогенитальный тракт мужчины)
Посевы на микрофлору ЛОР-органы)
Ускоренные посевы с расширенной антибиотикограммой
Неинвазивная диагностика болезней печени
Программы неинвазивной диагностики болезней печени
Неинвазивный пренатальный ДНК-тест (НИПТ)
Неинвазивный пренатальный тест (пол/резус плода)
Общеклинические исследования
Исследование назального секрета
Исследование секрета простаты
Исследования кала
Исследования мочи
Исследования эякулята
Микроскопическое исследование биологических жидкостей
Микроскопия на наличие патогенных грибов и паразитов
Микроскопия отделяемого урогенитального тракта
Онкогематология
Иммунофенотипирование при лимфопролиферативных заболеваниях
Миелограмма
Молекулярная диагностика миелопролиферативных заболеваний
Цитохимические исследования клеток крови и костного мозга
Онкогенетика
Онкомаркеры
Пищевая непереносимость, IgG4
Полногеномные исследования и панели наследственных заболеваний
Пренатальный скрининг
Серологические маркеры инфекций
Аденовирус
Бруцеллез
Вирус HTLV
Вирус Варицелла-Зостер (ветряной оспы)
Вирус герпеса VI типа
Вирус Коксаки
Вирус кори
Вирус краснухи
Вирус эпидемического паротита
Вирус Эпштейна-Барр
Вирусы простого герпеса I и II типа
ВИЧ
Гепатит D
Гепатит А
Гепатит В
Гепатит Е
Гепатит С
Грибковые инфекции
Дифтерия
Кишечные инфекции
Клещевые инфекции
Коклюш и паракоклюш
Коронавирус
Менингококк
Паразитарные инвазии
Парвовирус
Респираторные инфекции
Сифилис
Столбняк
Токсоплазма
Туберкулез
Урогенитальные инфекции
Хеликобактер
Цитомегаловирус
Специализированные лабораторные исследования.
Дыхательный тест
Микробиоценоз по Осипову
Тяжелые металлы и микроэлементы
Тяжелые металлы и микроэлементы в волосах
Тяжелые металлы и микроэлементы в крови
Тяжелые металлы и микроэлементы в моче
Услуги
Выезд на дом
ЭКГ
Установление родства
Химико-токсикологические исследования
Хромосомный микроматричный анализ
Цитогенетические исследования
Цитологические исследования
Чекап
Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) антигенный тест (ПЦР), (в кале)
ОписаниеПодготовкаПоказанияИнтерпретация результатов
Исследование заключается в обнаружении антигенов (генетического материала — ДНК) спиралевидной бактерии Helicobacter pylori в кале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Анализ кала на хеликобактер пилори методом ПЦР обладает высокой чувствительностью и специфичностью, прост в исполнении.
Анализ ПЦР на хеликобактер пилори является качественным, то есть, направлен на выявление бактериальной инфекции и не дает количественных характеристик.
При наличии в желудочно – кишечном тракте (слизистая оболочка желудка и проксимальных отделов двенадцатиперстной кишки) бактерий вида Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) они выделяются из организма вместе с каловыми массами, и могут быть обнаружены при помощи методов лабораторной диагностики. Подтверждение наличия хеликобактер пилори в организме позволяет поставить диагноз и выбрать тактику медикаментозного лечения. Сегодня доказана строгая корреляция между наличием в желудочно – кишечном трате бактерии и развитием таких заболеваний, как гастрит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки. Материалом для исследования служат образцы кала (любой консистенции). Кал может быть исследован в период обострения болезни или при её манифестации для установки этиологического фактора.
Анализ кала на хеликобактер пилори ПЦР методом позволяет установить природу гастрита, если он имеет бактериальную этиологию. В 80 – 90 % случаев развитие гастрита и язвенной болезни двенадцатиперстной кишки связано именно с бактериальной инфекцией хеликобактер пилори.
ПЦР метод быстр и прост в исполнении, может быть назначен как взрослым пациентам (в том числе тяжело больным), так и детям.
Кал на хеликобактер пилори ПЦР методом необходимо сдавать до начала антимикробной (антихеликобактерной) терапии. Нельзя сдавать кал на хеликобактер пилори на фоне приема любых антибактериальных препаратов. Если пациент ранее принимал антибиотики для лечения респираторных и других инфекций, необходимо прекратить прием антибиотиков как минимум за месяц до исследования.За трое суток до забора материала необходимо отказаться от употребления в пищу продуктов, содержащих естественные красители (свекла, черная смородина, виноград, черника, красное вино). Материал обирают в стерильный контейнер, который необходимо заполнить минимум на 1/3 объема. Нельзя собирать кал из унитаза, так как в образец могут попасть дезинфекционные средства.
Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori), качественное определение антигенов (иммунохроматографический экспресс-метод)
Метод исследования
- иммунохроматографический метод
Helicobacter pylori – бактерия в форме спирали, которая поражает стенку желудка и двенадцатиперстной кишки, вызывая атрофический гастрит, язвенную болезнь и злокачественные образования.
Язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки практически в 100% случаев ассоциирована с H.pylori.
Все многообразие методов обнаружения хеликобактерной инфекции основано на определении собственно H. pylori (прямые методы) либо продуктов активной жизнедеятельности бактерии (уреазный дыхательный тест), а также подразделяются на инвазивные (гастроскопия) и неинвазивные. На V Маастрихтской согласительной конференции во Флоренции (2015 г.) одним из основных неинвазивных методов, который рекомендуется для стратегии «test-and-treat» («выявляй и лечи»), признан тест по определению антигенов H.pylori в кале.
Образцы кала лучше исследовать в период обострения болезни, т.к. через неделю после проявления симптомов активной инфекции количество бактерий в фекалиях сокращается. Определение антигенов H. pylori в кале в международной практике служит не только методом диагностики инфекции H.pylori, а также широко используется для диагностики успешности эрадикационной терапии (не ранее чем через 4 недели после окончания курса антихеликобактерной терапии, либо после окончания лечения любыми антибиотиками или антисекреторными средствами сопутствующих заболеваний). Отсутствие антигенов возбудителя в кале через 4 недели после окончания лечения свидетельствует об успешности эрадикационной терапии.
Показания к исследованию:
- первичная диагностика хеликобактерной инфекции;
- оценка эффективности эрадикационной терапии.
Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) в кале (антигенный тест)
Открытие в 1981 году Helicobacter pylori, изучение его патогенных свойств привело к переосмыслению взглядов на патогенез не только хронического гастрита и язвенной болезни, но и некардиального рака желудка, MALT-лимфомы. По оценке D. Forman до 75% случаев рака желудка в развитых странах связано с H. pylori-инфекцией. В 1994 г. Международное агентство по изучению рака (IARС) отнесло хеликобактерную инфекцию к канцерогенам первого класса. Кроме того, имеются данные о связи между H. pylori инфекцией и рядом негастродуоденальных заболеваний, в частности железодефицитной анемией, идиопатической тромбоцитопенической пурпурой, а также дефицитом витамина В12.
На сегодняшний день H. pylori-инфекция является одной из наиболее распространенных бактериальных инфекций человека. По данным ряда авторов, около 50% населения земного шара инфицировано этим микроорганизмом. Так в Российской Федерации уровень инфицирования H. pylori взрослого населения составляет более 80%. С момента открытия H. pylori прошло более 30 лет. За это время разработано большое количество различных лабораторных методов, позволяющих диагностировать хеликобактерную инфекцию. Однако ни один из них не является универсальным. Чувствительность каждого из методов зависит от множества факторов, особенностей течения заболевания, предшествующей терапии.
Все существующие на сегодняшний день методы лабораторной диагностики H. pylori делятся
на инвазивные (ФГДС, исследование биоптатов слизистой) и неинвазивные. Неинвазивные методы, являясь специфичными и чувствительными, являются первичными и скрининговыми и позволяют диагностировать не только острую, но и латентную форму инфекции.
К неинвазвным скрининговым методам относят:
- дыхательный тест с мочевиной, меченой 13С – считается эталонным и рекомендован как для первичной диагностики, так и для контроля успешности эрадикации;
- определение антигена H. pylori в кале;
- выявление H. pylori в кале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Определение антигена H. pylori в кале иммунохроматографическим методом позволяет быстро получить результаты. Ценность метода определяется его высокой чувствительностью и специфичностью, обеспечивая индикацию антигена даже при наличии малого количества H. pylori. Методика позволяет проводить мониторинг течения инфекции и оценивать эффективность лечения. Определение антигена H. Pylori возможно и при бессимптомном инфицировании H. pylori.
Показания к назначению:
- диагностика инфекции, вызванной Helicobacter pylori, обследование пациентов с гастритом, язвенной болезнью;
- мониторинг эффективности лечения пациентов;
- диагностика рецидивов заболевания;
- невозможность выполнения инвазивной диагностики в связи с возрастом (дети) или состоянием пациента
Референсные значения: Отрицательный.
Взятие пробы необходимо проводить на ранних этапах, до приема противовирусных препаратов, пока патогенные микроорганизмы находятся в материале в больших количествах. В соответствии с Инструкцией по сбору.«Отрицательный»: в анализируемом образце биологического материала (кала) не выявлен антиген H. pylori, или концентрация его в образце ниже границы чувствительности метода.
«Положительный»: инфицирование H. Pylori — в анализируемом образце биологического материала выявлен антиген H. pylori.
Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) антиген в кале
Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) антиген в кале
Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) антиген в кале – анализ, который помогает выявить в кале молекулы, присутствующие в бактериях Helicobacter pylori.
Хеликобактер очень распространенная бактериальная инфекция – ею заражено более 50% человечества. У половины инфицированных людей не наблюдается никаких симптомов присутствия хеликобактера, а гастрит или язва развиваются примерно у 15-20% зараженных. Также установлено, что хеликобактер повышает риск развития рака желудка. Инкубационный период составляет примерно 7 дней. Особенно подвержены болезни люди с дефицитом иммунитета.
Определение антигена хеликобактера в кале пациента – высокочувствительный и безопасный метод исследования, позволяющий выявить инфекцию у 90% зараженных пациентов. Метод высокочувствительный и специфичный (около 90 %), малоинвазивен, прост в применении.
Преимущества метода:
- Неинвазивный метод (диагностика без использования фиброгастроскопии).
- Детекция как активных, так и кокковых форм бактерии.
- Высокая точность, чувствительность и специфичность (до 95-98%).
- Используется у взрослых и детей.
- Не требуется предварительной подготовки.
Показания к назначению
Показаниями к анализу являются такие факторы:
- диагностика хеликобактерной инфекции
- контроль эффективности лечения хеликобактера
- когда необходимо подтверждение полной ликвидации инфекции
- наличие близких родственников пациента с раком желудка
- боли и дискомфорт в области желудка
- пациенты с болезнями сердечно-сосудистой системы (атеросклероз, инсульт, инфаркт)
Референсные значения (нормы лаборатории)
Результат анализа должен быть отрицательным — антиген бактерии не выявлен и инфицирования Helicobacter pylori нет.
Повышение показателя
Повышение показателя (в данном случаем положительный результат) означает, что пациент заражен хеликобактером и есть высокий риск развития рака желудка, язвенной болезни, гастрита.
Понижение показателя
Понижение показателя невозможно. Если не удается интерпретировать результат, то анализ необходимо повторить или прибегнуть к другим методам выявления Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori) антиген в кале.
Оценка с помощью ПЦР в реальном времени для обнаружения ДНК Helicobacter pylori в кале с коинфекцией кишечных паразитов: сравнительное исследование методов выделения ДНК | BMC Microbiology
Петерс Б.М., Джабра-Ризк М.А., О’Мэй Г.А., Уильям Костертон Дж., Шертлифф М.Э. Полимикробные взаимодействия: влияние на патогенез и болезни человека. Clin Microbiol Rev.2012; 25 (1): 193–213.
Артикул Google ученый
Gravina AG, Zagari RM, De Musis C, Romano L, Loguercio C, Romano M.Helicobacter pylori и внегастральные заболевания: обзор. Мир Дж. Гастроэнтерол. 2018; 24 (29): 3204–21.
CAS Статья Google ученый
Salih B. Инфекция Helicobacter pylori в развивающихся странах: как долго это бремя? Саудовская J Gastroenterology. 2009. 15 (3): 201–7.
Артикул Google ученый
Liao CW, Fu CJ, Kao CY, Lee YL, Chen PC, Chuang TW, et al.Распространенность кишечных паразитарных инфекций среди школьников в столицах Демократической Республики Сан-Томе и Принсипи, Западная Африка. Afr Health Sci. 2016; 16 (3): 690–7.
Артикул Google ученый
Морейра Э.Д., Нассри В.Б., Сантос Р.С., Матос Дж.Ф., де Карвалью В.А., Сильвани С.С. и др. Ассоциация инфекции Helicobacter pylori и лямблиоза: результаты исследования суррогатных маркеров фекального воздействия у детей.Мир Дж. Гастроэнтерол. 2005. 11 (18): 2759–63.
Артикул Google ученый
Анкарклев Дж., Хествик Э., Леббад М., Линд Дж., Кадду-Мулиндва Д.Х., Андерссон Дж. О. и др. Распространенные коинфекции Giardia Кишечник и Helicobacter pylori у несимптомных детей Уганды. PLoS Negl Trop Dis. 2012; 6 (8): e1780.
Артикул Google ученый
Якуб Дж., Аббас З., Хан Р., Тарик К., Аван С., Бег М.А.Ассоциация Helicobacter pylori и простейших паразитов у пациентов с хронической диареей. Br J Biomed Sci. 2018; 75 (3): 105–9.
CAS Статья Google ученый
Kaisar MMM, Brienen EAT, Djuardi Y, Sartono E, Yazdanbakhsh M, Verweij JJ, et al. Улучшенная диагностика Trichuris trichiura за счет использования процедуры взбивания бусинок на образцах стула, консервированных этанолом, до выделения ДНК и проведения мультиплексной ПЦР в реальном времени для кишечных паразитов.Паразитология. 2017; 144: 965–74.
CAS Статья Google ученый
Ayana M, Cools P, Mekonnen Z, Biruksew A, Dana D, Rashwan N, et al. Сравнение четырех протоколов экстракции ДНК и трех протоколов сохранения для молекулярного обнаружения и количественного определения гельминтов, передающихся через почву, в кале. PLoS Negl Trop Dis. 2019; 13 (10): e0007778.
Артикул Google ученый
Andersen LOB, Röser D, Nejsum P, Nielsen HV, Stensvold CR. Требуется дополнительное взбивание шариков для экстракции ДНК из яиц нематод с использованием протокола nuclisens easymag. J Clin Microbiol. 2013. 51 (4): 1345–7.
CAS Статья Google ученый
Лю Дж., Грац Дж., Амур К., Ншама Р., Валонго Т., Маро А. и др. Оптимизация количественных методов ПЦР для обнаружения энтеропатогенов. PLoS One. 2016; 11 (6): e0158199.
Артикул Google ученый
Platts-Mills JA, Gratz J, Mduma E, Svensen E, Amour C, Liu J, et al. Связь между количеством энтеропатогенов в стуле и заболеванием у детей Танзании с использованием карт TaqMan Array: вложенное исследование случай-контроль. Am J Trop Med Hyg. 2014; 90 (1): 133–8.
Артикул Google ученый
Beckman E, Saracino I, Fiorini G, Clark C, Slepnev V, Patel D, et al.Новый ПЦР-тест кала на Helicobacter pylori может с высокой скоростью прогнозировать устойчивость к кларитромицину и искоренение инфекции. J Clin Microbiol. 2017; 55 (8): 2400–5.
CAS Статья Google ученый
Бир-Дэвидсон Г., Хиндие М., Мухсен К. Обнаружение Helicobacter pylori в образцах стула детей раннего возраста с использованием полимеразной цепной реакции в реальном времени. Helicobacter. 2018; 23: 1.
Артикул Google ученый
Scaletsky ICA, Aranda KRS, Garcia GT, Gonçalves MEP, Cardoso SR, Iriya K и др. Применение анализа кала методом ПЦР в реальном времени для обнаружения хеликобактер пилори и определения чувствительности к кларитромицину у детей Бразилии. Helicobacter. 2011; 16 (4): 311–5.
CAS Статья Google ученый
Расмуссен Л.Т., де Лабио Р.В., Нето А.С., Силва Л.С., Кейрос В.Ф., Смит МАК и др. Обнаружение Helicobacter pylori в биоптатах желудка, слюне и зубных бляшках пациентов с диспепсией из Марилии, Сан-Паулу, Бразилия: наличие генов vacA и cagA.J Venom Anim Toxins Incl Trop Dis. 2012. 18 (2): 180–7.
Артикул Google ученый
Осаки Т., Заман С., Йонезава Х, Лин И, Окуда М., Нодзаки Е. и др. Влияние аборигенной кишечной микробиоты на внутрисемейную инфекцию Helicobacter pylori в Японии. Фронт Иммунол. 2018; 9: 287.
Артикул Google ученый
Puz S, Innerhofer A, Ramharter M, Haefner M, Hirschl AM, Kovách Z, et al.Новый неинвазивный метод генотипирования Helicobacter pylori с использованием образцов стула. Гастроэнтерология. 2008. 135 (5): 1543–51.
CAS Статья Google ученый
Ногучи Н., Римбара Э, Като А., Танака А., Токунага К., Кавай Т. и др. Обнаружение смешанных резистентных к кларитромицину и чувствительных к хеликобактериям бактерий Helicobacter pylori с использованием вложенной ПЦР и прямого секвенирования ДНК, выделенной из фекалий. J Med Microbiol. 2007; 56 (Pt 9): 1174–80.
CAS Статья Google ученый
Rimbara E, Sasatsu M, Graham DY. ПЦР-определение Helicobacter pylori в клинических образцах. Методы Мол биол. 2013; 943: 279–87.
CAS Статья Google ученый
Сеид А., Тамир З., Касанью Б., Сенбетей М. Совместная инфекция кишечных паразитов и хеликобактер пилори среди взрослых пациентов с симптомами верхних отделов желудочно-кишечного тракта, посещающих больницу Меканесалем, Северо-Восточная Эфиопия. BMC Res Notes. 2018; 11 (1): 144.
Артикул Google ученый
Ek C, Whary MT, Ihrig M, Bravo LE, Correa P, Fox JG. Серологические доказательства того, что инфекции, вызванные аскаридами и токсоплазмами, влияют на воспалительные реакции на Helicobacter pylori у колумбийцев. Helicobacter. 2012. 17 (2): 107–15.
CAS Статья Google ученый
Долан Б., Беркитт-Грей Л., Шовелин С., Бурк Б., Драмм Б., Роуленд М. и др. Использование образцов стула выявляет разнообразие штаммов Helicobacter pylori в когорте подростков и членов их семей в развитой стране.Int J Med Microbiol. 2018; 308 (2): 247–55.
Артикул Google ученый
Монтейро Л., Гра Н., Видаль Р., Кабрита Дж., Мегро Ф. Обнаружение ДНК хеликобактер пилори в человеческих фекалиях с помощью ПЦР: стабильность ДНК и удаление ингибиторов. J Microbiol Methods. 2001. 45 (2): 89–94.
CAS Статья Google ученый
тен Хов Р.Дж., Вервей Дж.Дж., Вереекен К., Полман К., Дайе Л., ван Лисхаут Л.Мультиплексная ПЦР в реальном времени для обнаружения и количественной оценки инфекции Schistosoma mansoni и S. haematobium в образцах стула, собранных в северном Сенегале. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2008. 102 (2): 179–85.
Артикул Google ученый
Niesters HGM. Клиническая вирусология в реальном времени. J Clin Virol. 2002; 25 (Приложение 3): S3–12.
CAS Статья Google ученый
Перандин Ф., Помари Э., Боницци С., Мистретта М., Форменти Ф., Бисоффи З. Оценка полимеразной цепной реакции в реальном времени для обнаружения trichostrongylus spp. ДНК из образцов фекалий человека. Am J Trop Med Hyg. 2018; 98 (3): 768–71.
CAS Статья Google ученый
Verweij JJ, Schinkel J, Laeijendecker D, Van Rooyen MAA, Van Lieshout L, Polderman AM. ПЦР в реальном времени для обнаружения Giardia lamblia. Зонды Mol Cell.2003. 17 (5): 223–5.
CAS Статья Google ученый
Verweij JJ, Oostvogel F, Brienen EAT, Nang-Beifubah A, Ziem J, Polderman AM. Краткое сообщение: распространенность Entamoeba histolytica и Entamoeba dispar в северной Гане. Trop Med Int Heal. 2003. 8 (12): 1153–6.
Артикул Google ученый
Verweij JJ, Mulder B, Poell B, van Middelkoop D, Brienen EAT, van Lieshout L.ПЦР в реальном времени для обнаружения Dientamoeba fragilis в образцах фекалий. Зонды Mol Cell. 2007. 21 (5–6): 400–4.
CAS Статья Google ученый
Verweij JJ, Canales M, Polman K, Ziem J, Brienen EAT, Polderman AM, et al. Молекулярная диагностика Strongyloides stercoralis в образцах фекалий с использованием ПЦР в реальном времени. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2009. 103 (4): 342–6.
CAS Статья Google ученый
Джотикумар Н, Да Силва А.Дж., Моура I, Кварнстрем Y, Хилл VR. Обнаружение и дифференциация Cryptosporidium hominis и Cryptosporidium parvum с помощью двойных тестов TaqMan. J Med Microbiol. 2008. 57 (Pt 9): 1099–105.
CAS Статья Google ученый
Обенг Б.Б., Арьитей Я.А., Де Дуд С.Дж., Амоа А.С., Ларби И.А., Дилдер А.М. и др. Применение полоски с циркулирующим катодным антигеном (CCA) и ПЦР в реальном времени по сравнению с микроскопией для обнаружения Schistosoma haematobium в образцах мочи из Ганы.Ann Trop Med Parasitol. 2008. 102 (7): 625–33.
CAS Статья Google ученый
Stensvold CR, Ahmed UN, Andersen LOB, Nielsen HV. Разработка и оценка специфичного для рода, основанного на пробах, контролируемого внутренним процессом ПЦР-анализа в реальном времени для чувствительного и специфического обнаружения Blastocystis spp. J Clin Microbiol. 2012. 50 (6): 1847–51.
CAS Статья Google ученый
Лю Дж., Грац Дж., Амур К., Кибики Дж., Беккер С., Джанаки Л. и др. Разработанная лабораторией матричная карта такмана для одновременного обнаружения 19 энтеропатогенов. J Clin Microbiol. 2013. 51 (2): 472–80.
CAS Статья Google ученый
Llewellyn S, Inpankaew T., Nery SV, Gray DJ, Verweij JJ, Clements ACA, et al. Применение мультиплексной количественной ПЦР для оценки распространенности и интенсивности кишечных паразитарных инфекций в контролируемых клинических испытаниях.PLoS Negl Trop Dis. 2016; 10 (1): e0004380.
Артикул Google ученый
Методы обнаружения Helicobacter pylori в образце стула: текущие возможности и разработки
Маршалл Б.Дж., Уоррен Дж.Р. (1984) Неопознанные изогнутые палочки в желудке пациентов с гастритом и язвенной болезнью. Lancet (Лондон, Англия) 1 (8390): 1311–1315. https://doi.org/10.1016/s0140-6736(84)
-6
CAS Статья Google ученый
Wroblewski LE, Peek RM Jr, Wilson KT (2010) Helicobacter pylori и рак желудка: факторы, которые модулируют риск заболевания. Clin Microbiol Rev 23 (4): 713–739. https://doi.org/10.1128/cmr.00011-10
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
Камило В., Сугияма Т., Туати Э. (2017) Патогенез инфекции Helicobacter pylori. Helicobacter 22 (Дополнение): 1. https://doi.org/10.1111/hel.12405
CAS Статья Google ученый
Mitchell H, Katelaris P (2016) Эпидемиология, клинические последствия и текущее клиническое ведение инфекции Helicobacter pylori. Med J Aust 204 (10): 376–380. https://doi.org/10.5694/mja16.00104
Статья PubMed Google ученый
Ke H, Li J, Lu B, Yang C, Wang J, Wang Z, Liu L, Chen Y (2021) Подходящее пороговое значение pH желудочного сока для эрадикации Helicobacter pylori с помощью четверной терапии на основе висмута. Helicobacter 26 (1): e12768.https://doi.org/10.1111/hel.12768
CAS Статья PubMed Google ученый
Халилпур А., Каземзаде-Нарбат М., Тамайол А., Оклу Р., Хадемхоссейни А. (2016) Биомаркеры и диагностические инструменты для обнаружения Helicobacter pylori. Appl Microbiol Biotechnol 100 (11): 4723–4734. https://doi.org/10.1007/s00253-016-7495-7
CAS Статья PubMed Google ученый
Halland M, Haque R, Langhorst J, Boone JH, Petri WA (2021) Клиническая эффективность анализов H. PYLORI QUIK CHEK ™ и H. PYLORI CHEK ™, новых тестов на антигены стула для диагностики Helicobacter pylori. Европейский журнал клинической микробиологии и инфекционных заболеваний: официальное издание Европейского общества клинической микробиологии 40 (5): 1023–1028. https://doi.org/10.1007/s10096-020-04137-7
Fang YJ, Chen MJ, Chen CC, Lee JY, Yang TH, Yu CC, Chiu MC, Kuo CC, Weng YJ, Bair MJ, Wu MS, Luo JC, Liou JM (2020) Точность экспресс-тестов на антиген Helicobacter pylori для надзора за обновленной распространенностью H.pylori на Тайване. J Formosan Med Assoc, Тайвань и чжи, 119 (11): 1626–1633. https://doi.org/10.1016/j.jfma.2019.12.003
Opekun AR, Zierold C, Rode A, Blocki FA, Fiorini G, Saracino IM, Vaira D, Sutton FM (2020) Clinical выполнение автоматизированного теста на антиген стула LIAISON® Meridian H. pylori SA. BioMed Research International 2020: 7189519. https://doi.org/10.1155/2020/7189519
Kakiuchi T, Okuda M, Hashiguchi K, Imamura I, Nakayama A, Matsuo M (2019) Оценка нового набора для экспресс-теста на антиген стула для обнаружения инфекции Helicobacter pylori.Журнал клинической микробиологии 57 (3). https://doi.org/10.1128/jcm.01825-18
Moon HW, Lee SY, Hur M, Yun YM (2018) Характеристики серопозитивных субъектов с Helicobacter pylori в соответствии с результатами теста на антиген стула: проспективное исследование. Korean J Intern Med 33 (5): 893–901. https://doi.org/10.3904/kjim.2016.353
CAS Статья PubMed Google ученый
Yan J, Yamaguchi T, Odaka T, Suzuki T, Ohyama N, Hara T, Sudo K, Nakamura K, Denda T, Takiguchi N, Yokosuka O, Nomura F (2010) Тест на антиген стула является надежным метод обнаружения Helicobacter pylori в остатке желудка после дистальной резекции желудка по поводу рака желудка.J Clin Gastroenterol 44 (1): 73–74. https://doi.org/10.1097/MCG.0b013e3181aae65e
Статья PubMed Google ученый
Zhou X, Su J, Xu G, Zhang G (2014) Точность теста на антиген стула для диагностики инфекции Helicobacter pylori у детей: метаанализ. Clin Res Hepatol Gastroenterol 38 (5): 629–638. https://doi.org/10.1016/j.clinre.2014.02.001
CAS Статья PubMed Google ученый
Korkmaz H, Kesli R, Karabagli P, Terzi Y (2013) Сравнение диагностической точности пяти различных тестов на антигены стула для диагностики инфекции Helicobacter pylori. Helicobacter 18 (5): 384–391. https://doi.org/10.1111/hel.12053
CAS Статья PubMed Google ученый
Като М, Ота Х, Окуда М, Кикучи С., Сато К., Шимояма Т, Сузуки Х, Ханда О, Фурута Т, Мабе К., Мураками К., Сугияма Т, Уэмура Н., Такахаши С. (2019) Руководство по лечению инфекции Helicobacter pylori в Японии: пересмотренное издание 2016 г.Helicobacter 24 (4): e12597. https://doi.org/10.1111/hel.12597
Lee YC, Tseng PH, Liou JM, Chen MJ, Chen CC, Tu CH, Chiang TH, Chiu HM, Lai CF, Ho JC, Wu MS (2014) Проведение одноэтапного теста на основе образца кала для диагностики инфекции Helicobacter pylori в учреждениях первичной медико-санитарной помощи и массовых обследований. Журнал Медицинской ассоциации Formosan = Тайвань yi zhi 113 (12): 899–907. https://doi.org/10.1016/j.jfma.2012.05.014
Lario S, Ramírez-Lázaro MJ, Montserrat A, Quílez ME, Junquera F, Martínez-Bauer E, Sanfeliu I, Brullet E , Campo R, Segura F, Calvet X (2016) Диагностическая точность трех моноклональных тестов стула в большой серии нелеченных пациентов, инфицированных Helicobacter pylori.Clin Biochem 49 (9): 682–687. https://doi.org/10.1016/j.clinbiochem.2016.01.015
CAS Статья PubMed Google ученый
Эль-Шабрави М., Эль-Азиз Н.А., Эль-Адли Т.З., Хассанин Ф., Эскандер А., Абу-Зекри М., Мансур Х., Мешаал С. (2018) Определение антигена в стуле по сравнению с (13) C-мочевина дыхательный тест для неинвазивной диагностики детской инфекции Helicobacter pylori в условиях ограниченных ресурсов. Arch Med Sci: AMS 14 (1): 69–73. https: // doi.org / 10.5114 / aoms.2016.61031
CAS Статья PubMed Google ученый
Calvet X, Lario S, Ramírez-Lázaro MJ, Montserrat A, Quesada M, Reeves L, Masters H, Suárez-Lamas D, Gallach M, Miquel M, Martínez-Bauer E, Sanfeliu I, Segura F (2010) Точность моноклональных тестов стула для определения излечения от инфекции Helicobacter pylori после лечения. Helicobacter 15 (3): 201–205. https://doi.org/10.1111/j.1523-5378.2010.00757.x
Артикул PubMed Google ученый
Пишон М., Пичар Б., Барриоз Т., Плузо С., Крокет В., Фотсинг Дж., Шерон А., Вуйлемен Э, Вангермез М., Эно, Пенсильвания, Вассер П., Тибо Q, Лефевр С., де Сингли А, Кремнитер J, Broutin L, Michaud A, Silvain C, Burucoa C (2020) Диагностическая точность неинвазивного теста для обнаружения Helicobacter pylori и устойчивости к кларитромицину в стуле с помощью анализа Amplidiag H. pylori + ClariR ПЦР в реальном времени.Журнал клинической микробиологии 58 (4). https://doi.org/10.1128/jcm.01787-19
Redondo JJ, Keller PM, Zbinden R, Wagner K (2018) Новая RT-PCR для обнаружения Helicobacter pylori и идентификации кларитромицина устойчивость, опосредованная мутациями в гене 23S рРНК. Диагностика Microbiol Infect Dis 90 (1): 1–6. https://doi.org/10.1016/j.diagmicrobio.2017.09.014
CAS Статья PubMed Google ученый
Marrero Rolon R, Cunningham SA, Mandrekar JN, Polo ET, Patel R (2021) Клиническая оценка анализа ПЦР в реальном времени для одновременного обнаружения Helicobacter pylori и генотипических маркеров устойчивости к кларитромицину непосредственно из стула. Журнал клинической микробиологии 59 (5). https://doi.org/10.1128/jcm.03040-20
Sun L, Talarico S, Yao L, He L, Self S, You Y, Zhang H, Zhang Y, Guo Y, Liu G , Salama NR, Zhang J (2018) Определение устойчивости к кларитромицину у изолятов Helicobacter pylori на основе цифровой ПЦР в каплях выявляет частую гетерорезистентность.Журнал клинической микробиологии 56 (9). https://doi.org/10.1128/jcm.00019-18
Beckman E, Saracino I, Fiorini G, Clark C, Slepnev V, Patel D, Gomez C, Ponaka R, Elagin V, Vaira D (2017) Новый ПЦР-тест кала на Helicobacter pylori может с высокой скоростью прогнозировать устойчивость к кларитромицину и искоренение инфекции. J Clin Microbiol 55 (8): 2400–2405. https://doi.org/10.1128/jcm.00506-17
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
Talarico S, Safaeian M, Gonzalez P, Hildesheim A, Herrero R, Porras C, Cortes B, Larson A, Fang FC, Salama NR (2016) Количественное определение и генотипирование Helicobacter pylori в стуле с помощью цифровой ПЦР по каплям выявляет вариации бактериальной нагрузки, которые коррелируют с носительством гена вирулентности cagA. Helicobacter 21 (4): 325–333. https://doi.org/10.1111/hel.12289
CAS Статья PubMed Google ученый
Beer-Davidson G, Hindiyeh M, Muhsen K (2018) Обнаружение Helicobacter pylori в образцах стула маленьких детей с использованием полимеразной цепной реакции в реальном времени.Хеликобактер 23 (1). https://doi.org/10.1111/hel.12450
Sicinschi LA, Correa P, Bravo LE, Peek RM Jr, Wilson KT, Loh JT, Yepez MC, Gold BD, Thompson DT, Cover TL, Schneider BG (2012) Неинвазивное генотипирование Helicobacter pylori cagA, vacA и hopQ у бессимптомных детей. Helicobacter 17 (2): 96–106. https://doi.org/10.1111/j.1523-5378.2011.00919.x
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
Scaletsky IC, Aranda KR, Garcia GT, Gonçalves ME, Cardoso SR, Iriya K, Silva NP (2011) Применение анализа кала с помощью ПЦР в реальном времени для обнаружения Helicobacter pylori и тестирования чувствительности к кларитромицину у бразильских детей. Helicobacter 16 (4): 311–315. https://doi.org/10.1111/j.1523-5378.2011.00845.x
CAS Статья PubMed Google ученый
Mishra S, Singh V, Rao GR, Dixit VK, Gulati AK, Nath G (2008) Распространенность Helicobacter pylori у бессимптомных субъектов — исследование на основе вложенной ПЦР.Инфекция, генетика и эволюция: журнал молекулярной эпидемиологии и эволюционной генетики инфекционных болезней 8 (6): 815-819. https://doi.org/10.1016/j.meegid.2008.08.001
Леонарди М., Ла Марка Дж., Пайола Б., Перандин Ф., Лигоцци М., Помари Е. (2020) Оценка ПЦР в реальном времени для обнаружения ДНК Helicobacter pylori в кале с сочетанной инфекцией кишечных паразитов: сравнительное исследование методов выделения ДНК. BMC Microbiol 20 (1): 131. https://doi.org/10.1186/s12866-020-01824-5
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
Kadkhodaei S, Siavoshi F, Akbari Noghabi K (2020) Мукоид и коккоид Helicobacter pylori с быстрым ростом и устойчивостью к антибиотикам. Helicobacter 25 (2): e12678. https://doi.org/10.1111/hel.12678
Статья PubMed Google ученый
Леал Ю.А., Седильо-Ривера Р., Симон Дж. А., Веласкес Дж. Р., Флорес Л.Л., Торрес Дж. (2011) Использование тестов на основе образцов стула для диагностики инфекции Helicobacter pylori у детей. J Pediatr Gastroenterol Nutr 52 (6): 718–728.https://doi.org/10.1097/MPG.0b013e3182077d33
CAS Статья PubMed Google ученый
Giorgio F, Ierardi E, Sorrentino C, Principi M, Barone M, Losurdo G, Iannone A, Giangaspero A, Monno R, Di Leo A (2016) Выделение ДНК Helicobacter pylori в стуле: необходимое предварительное — необходимое условие для бактериального неинвазивного молекулярного анализа. Scand J Gastroenterol 51 (12): 1429–1432. https://doi.org/10.1080/00365521.2016.1216592
Статья PubMed Google ученый
Али М.М., Вулф М., Трамвай К., Гу Дж., Филипе CDM, Ли И, Бреннан Дж. Д. (2019) Колориметрический бумажный датчик на основе ДНКзима для Helicobacter pylori. Angew Chem Int Ed Engl 58 (29): 9907–9911. https://doi.org/10.1002/anie.201
CAS Статья PubMed Google ученый
Chen L, Li X, Zou T, Wang T, Cui X, Chen Y, Zhang C, Zhao S (2019) Сверхчувствительное обнаружение H. pylori в кале человека на основе иммуномагнитного захвата шариков и флуоресцентных квантовых точек .Аналитик 144 (13): 4086–4092. https://doi.org/10.1039/c9an00193j
Jain U, Gupta S, Soni S, Khurana MP, Chauhan N (2020) Неинвазивное электроиммунное зондирование на основе тройного наноструктурирования токсина CagA для Helicobacter pylori обнаружение. Helicobacter 25 (4): e12706. https://doi.org/10.1111/hel.12706
CAS Статья PubMed Google ученый
Ding Z, Zhao S, Gong S, Li Z, Mao M, Xu X, Zhou L (2015) Распространенность и факторы риска инфекции Helicobacter pylori у бессимптомных китайских детей: проспективное, поперечное, популяция исследование на основе.Aliment Pharmacol Ther 42 (8): 1019–1026. https://doi.org/10.1111/apt.13364
CAS Статья PubMed Google ученый
Симояма Т., Ояма Т., Мацудзака М., Дандзё К., Накадзи С., Фукуда С. (2009) Сравнение теста на антиген в стуле и серологии для диагностики инфекции Helicobacter pylori в массовом обследовании. Helicobacter 14 (2): 87–90. https://doi.org/10.1111/j.1523-5378.2009.00672.x
CAS Статья PubMed Google ученый
Shimoyama T (2013) Тесты на антиген кала для лечения инфекции Helicobacter pylori. Мировой журнал J Gastroenterol 19 (45): 8188–8191. https://doi.org/10.3748/wjg.v19.i45.8188
Статья PubMed PubMed Central Google ученый
Кодама М., Мураками К., Окимото Т., Фукуда Й., Симояма Т., Окуда М., Като С., Кобаяси И., Фудзиока Т. (2012) Влияние лечения ингибиторами протонной помпы на тест на антиген стула Helicobacter pylori.World J Gastroenterol 18 (1): 44–48. https://doi.org/10.3748/wjg.v18.i1.44
Статья PubMed PubMed Central Google ученый
Šeligová B, Lukáč Ľ, Bábelová M, Vávrová S, Sulo P (2020) Диагностическая надежность вложенной ПЦР зависит от конструкции праймера и порогового количества Helicobacter pylori в биоптатах, образцах стула и слюны. Helicobacter 25 (2): e12680. https://doi.org/10.1111/hel.12680
Статья PubMed Google ученый
Wongphutorn P, Chomvarin C, Sripa B, Namwat W, Faksri K (2018) Обнаружение и генотипирование Helicobacter pylori в слюне по сравнению с образцами стула от бессимптомных людей в Северо-Восточном Таиланде выявляют тканеспецифичные подтипы H. pylori внутри хозяина. BMC Microbiology 18 (1): 10. https://doi.org/10.1186/s12866-018-1150-7
Lottspeich C, Schwarzer A, Panthel K, Koletzko S, Rüssmann H (2007) Оценка нового Helicobacter pylori ClariRes в реальном времени ПЦР для обнаружения и тестирования чувствительности к кларитромицину H.pylori в образцах стула у детей с симптомами. J Clin Microbiol 45 (6): 1718–1722. https://doi.org/10.1128/jcm.00103-07
Текущая роль тестов стула на Helicobacter pylori — FullText — Digestion 2003, Vol. 68, № 2-3
Аннотация
Анализ кала на Helicobacter pylori — это точный и неинвазивный инструмент для оценки статуса H. pylori до и после лечения. Мы убеждены, что нынешние технические недостатки H.pylori , т. е. вариабельность между тестами и снижение специфичности после лечения, могут быть преодолены в ближайшем будущем. Доступность теста стула в офисе будет значительным преимуществом, поскольку его можно будет проводить в любой частной практике без дальнейших задержек. Однако еще предстоит выяснить, повлияет ли нежелание пациентов собирать образцы стула на его общее использование.
© 2003 S. Karger AG, Базель
Введение
Helicobacter pylori является причиной гастрита типа B и ассоциируется с язвенной болезнью, карциномой желудка и лимфоидной тканью, связанной со слизистой оболочкой.В прошлом было разработано большое количество диагностических тестов для выявления инфекции H. pylori . Инфекция H. pylori может быть диагностирована с помощью инвазивных тестов, требующих эндоскопии, таких как экспресс-тест на уреазу, гистология и посевы, а также неинвазивные тесты, такие как дыхательный тест на мочевину (UBT), серологические тесты и тесты стула. В настоящее время не существует единого теста, который можно было бы считать золотым стандартом. Для клинических исследований сочетание экспресс-теста на уреазу, гистологии и посева часто используется в качестве золотого стандарта.
Культура надежна, точна и позволяет тестировать чувствительность антибиотиков, предназначенных для лечения [1]. Однако для посева требуется верхняя эндоскопия, оно дорогое и может иметь высокий уровень ложноотрицательных результатов. Бактерия может быть трудно культивировать после предварительной обработки антибиотиками, антагонистами рецептора H 2 или ингибиторами протонной помпы [2]. Более того, результаты культивирования зависят от количества образцов, а также от качества условий культивирования.
Чтобы избежать необходимости в эндоскопии, были разработаны неинвазивные тесты, такие как UBT или серология.Оба теста обладают высокой чувствительностью и специфичностью. UBT в настоящее время является наиболее важным последующим тестом после эрадикационной терапии H. pylori . Его легко выполнять, он неинвазивен и может использоваться в любой частной практике. Многие аргументы в пользу теста стула также могут быть использованы для теста на дыхание. Серология широко используется для скрининга пациентов на инфекцию H. pylori . Серологические тесты проходят быстро и относительно недорого. Однако UBT и серология имеют значительные ограничения.UBT занимает много времени и требует специального оборудования для измерения 13 C или 14 C. Серологические тесты не могут использоваться для последующего наблюдения после эрадикации H. pylori и могут иметь более низкую специфичность, чем UBT из-за перекрестного -реакция с другими бактериями.
H. pylori Тесты стула: посев и ПЦРПолезен новый диагностический подход для диагностики инфекции H. pylori , и одна из новых привлекательных концепций основана на обнаружении H.pylori в кале. С 1992 г. было разработано множество различных тестов стула, таких как посев, полимеразная цепная реакция (ПЦР) и иммуноанализ.
В 1992 г. Thomas et al. [3] культивировали H. pylori из человеческих фекалий инфицированных детей в Гамбии. Впоследствии различные группы показали, что этот метод, вероятно, невоспроизводим и пока не имеет прогностической ценности [4, 5, 6, 7]. Одной из основных проблем при культивировании H. pylori из фекалий человека является задержка между дефекацией и обработкой стула.Кроме того, в образцах стула H. pylori может присутствовать в кокковидной форме, которую невозможно культивировать [8, 9]. Неспособность нескольких групп культивировать H. pylori из стула может быть связана с тем, что, вероятно, в стуле не было жизнеспособных хеликобактер. Выделение Helicobacter из стула возможно только в течение увеличенного времени прохождения, например, у пациентов с диареей. Из-за этих ограничений в настоящее время нельзя рекомендовать посев кала для клинической диагностики H.pylori [6].
ПЦРиспользовалась для обнаружения H. pylori в различных клинических образцах, таких как биопсия желудка, желудочный сок и слюна [10]. Для обнаружения H. pylori в кале человека разработаны различные ПЦР-тесты [11, 12, 13]. Преимущество ПЦР состоит в том, что она не требует живых H. pylori , а также обнаруживает бактерии в небольшом количестве [14]. В исследовании Mapstone et al. [12], ПЦР была успешно использована для обнаружения H.pylori в кале человека. Однако эти многообещающие результаты не удалось подтвердить в последующих исследованиях. Существует ряд потенциальных ограничений метода ПЦР при обнаружении H. pylori в образцах стула: (1) ложноотрицательные результаты могут быть связаны с присутствием ингибиторов ПЦР [10] или генетической изменчивостью [5]. ]; (2) ложноположительные результаты могут быть получены из-за контаминации или неспецифической амплификации геномной ДНК человека [10, 15]; (3) кокковидную форму H. pylori труднее обнаружить с помощью ПЦР, чем палочковидные клетки [13], и (4) ПЦР-определение H.pylori не стандартизирован, не является общедоступным и недостаточно изученным в клинической практике. Однако ПЦР важна для исследований и может дать дополнительную информацию (статус CagA / VacA, устойчивость к антибиотикам).
Тест стула HpSA
Недавно был разработан тест иммуноанализа кала (HpSA), который выявляет антиген H. pylori в кале человека. Впервые тест стула позволяет напрямую измерить H. pylori неинвазивным методом.В тесте используется поликлональное захватывающее антитело против H. pylori , адсорбированное на микролунках. Образцы стула анализируются в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, стул пациента разбавляют и добавляют в микролунки. Добавляют одну каплю анти- H. pylori , конъюгированных с пероксидазой хрена, и инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре. После 5-кратной промывки добавляют 2 капли субстрата на 10 мин при комнатной температуре, а затем 1 каплю стоп-раствора.
Результаты анализируют спектрофотометрическим методом (фотометр SIRIO S от SEAC).Адсорбцию считывают при 450/630 нм в течение 15 минут после добавления стоп-раствора. Результаты считаются положительными, если ОП> 0,12, и отрицательными, если ОП <0,10.
Для анализа стула на HpSA стул необходимо заморозить до отправки в референс-лабораторию. В замороженном виде стул можно хранить до нескольких месяцев до тестирования. После внедрения теста HpSA было разработано несколько тестов на прикроватный стул H. pylori . Наличие офисного теста даст значительное преимущество, поскольку его можно будет провести в любой частной практике без дальнейших задержек.Однако большинство этих тестов еще не стандартизированы и пока не могут быть рекомендованы для общеклинического использования.
Тест HpSA
Эффективность у нелеченных пациентов
В предыдущем исследовании с нелеченными пациентами мы обнаружили высокую чувствительность (96%) и специфичность (93%) теста HpSA по сравнению со стандартными контрольными тестами (экспресс-тест на уреазу, гистология и культура) [16]. Преимущество этого нового анализа состоит в том, что он неинвазивен, прост, быстр и недорог.Тест стула H. pylori также подходит для детей младшего возраста, у которых серологические и дыхательные тесты могут быть ненадежными или трудными для выполнения. Превосходная чувствительность и специфичность подтверждены многими исследованиями, в которых обнаружена чувствительность и специфичность перед лечением 63–100% [17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27]. В недавно опубликованном метаанализе Gisbert и Pajares [27] были обследованы 4769 нелеченных пациентов из 43 исследований. Чувствительность, специфичность, прогностические значения положительного (PPV) и отрицательного (NPV) были (средневзвешенное значение): 92.4, 91,9, 92,1 и 90,5% соответственно. Основываясь на этих данных, анализ кала на хеликобактерии можно однозначно рекомендовать для первоначальной диагностики у нелеченных субъектов. Тест HpSA недавно был одобрен Американским Управлением по контролю за продуктами и лекарствами для первичного и постобработки выявления инфекции H. pylori .
Роль в оценке после лечения
До сих пор UBT считался золотым стандартом для оценки стойкой инфекции H. pylori после эрадикационной терапии. В последнее время было проведено множество исследований, изучающих, подходит ли тест HpSA для диагностики после лечения.В метаанализе, проведенном Gisbert и Pajares [27], 2078 пациентов из 25 исследований были обследованы по крайней мере через 4 недели после эрадикационной терапии. Чувствительность, специфичность, PPV и NPV составили (средневзвешенное значение) 88,3 (диапазон 30–100), 92 (диапазон 68–100), 75 и 94,8%, соответственно, что указывает на то, что тест стула H. pylori является точным методом. наблюдения, если оно проводится не менее чем через 4 недели после эрадикационной терапии. Несмотря на эти данные, некоторые исследователи выражают озабоченность в основном специфичностью анализа стула при тестировании после лечения [18, 28, 29, 30, 31, 32].В этих исследованиях был обнаружен значительный процент ложноположительных и (реже) ложноотрицательных тестов, и их роль в оценке после лечения была поставлена под сомнение. Интересно, что на Маастрихтской конференции по консенсусу 2-2000 предлагается использовать анализ стула только после эрадикационной терапии, когда UBT недоступен [33]. Ложноположительные результаты теста могут быть следствием (1) перекрестной реакции с другими видами Helicobacter, такими как Helicobacter heilmanii, или (2) задержкой выведения из фекалий H.pylori или кокковидные формы после успешной ликвидации. В исследовании Makristathis et al. [34], антигенов H. pylori можно было обнаружить с помощью ПЦР даже через 4 недели после успешного лечения. В валидационном исследовании Bilardi et al. [32], тест HpSA имел значительно более низкую специфичность и PPV, чем UBT после терапии. Методологический недостаток многих исследований по эрадикации заключается в том, что тест HpSA сравнивают с одним эталонным тестом (в основном UBT) вместо истинного золотого стандарта (соответствие как минимум двух независимых тестов).
Споры существуют также о том, когда проводить анализ стула после эрадикационной терапии. После первоначального исследования эрадикации, проведенного Vaira et al. [26], многие исследования подтвердили, что 4 недели после терапии будут подходящим моментом для оценки состояния после лечения. Однако некоторые авторы предполагают, что 4 недели могут быть слишком ранними [29, 35]. В этих исследованиях наблюдалось повышение чувствительности, специфичности и PPV, когда анализ стула проводился через 6 недель и 3 месяца соответственно.Odaka et al. [36] исследовали динамику уровня HpSA во время и после эрадикационной терапии, чтобы оценить подходящий момент времени для тестирования после лечения. Они обнаружили, что в группе с успешной эрадикацией HpSA стал отрицательным сразу после окончания терапии и оставался отрицательным до конца исследования. У пациентов с неэффективной эрадикационной терапией HpSA стал отрицательным после терапии, но показал положительный результат теста в течение 2 недель после терапии у большинства пациентов. Частота ложноотрицательных результатов сразу после терапии составила 100%.У отдельных пациентов потребовалось до 8 недель, пока HpSA снова не стал положительным. Высокий уровень ложноотрицательных результатов теста может быть связан с наблюдением, что плотность желудка H. pylori значительно снижается сразу после неудачной эрадикационной терапии.
Сравнение между HpSA и другими тестами кала (Novitec
® , FemtoLab ® )Это определенно ограничение, что подавляющее большинство всех исследований до сих пор проводилось только с помощью теста HpSA.В нашем собственном исследовании с участием 162 нелеченных пациентов (неопубликованные данные) обнаружение антигенов H. pylori в стуле оценивалось параллельно с помощью двух независимых поликлональных иммуноферментных анализов (HpSA и Novitec ® ). Быстрый тест на уреазу, гистологию и культуру использовали в качестве золотого стандарта. Чувствительность, специфичность, PPV и NPV оценивались для обоих тестов стула. Результаты теста Novitec ® еще не опубликованы и будут кратко описаны здесь.
Образцы стула анализировали, как описано производителем (Ruwag Diagnostics, Швейцария). Тест представляет собой иммуноанализ, в котором используются поликлональные кроличьи H. pylori , улавливающие антитела, адсорбированные на микролунках. Разбавленные образцы стула добавляют в микролунки и инкубируют одновременно с поликлональными антителами, конъюгированными с пероксидазой, в течение 1 ч при комнатной температуре. После промывки для удаления несвязанных образцов и антител, меченных ферментами, добавляют субстрат на 10 мин при комнатной температуре, а затем добавляют 2 капли стоп-раствора.Результаты анализируются спектрофотометрически. Адсорбцию считывают при 450/650 нм в течение 15 минут после добавления стоп-раствора. Результаты считались положительными, если ОП была> 0,12, и отрицательными, если ОП была <0,10.
Оба теста дали одинаковые результаты. Тест HpSA имел чувствительность 87%, специфичность 96%, PPV 94% и NPV 90%. Тест Novitec имел чувствительность 96%, специфичность 97%, PPV 96% и NPV 97%. Разница в производительности в отношении чувствительности была статистически незначимой.Обработка обоих анализов была очень похожей.
Недавно был разработан новый иммуноферментный моноклональный анализ (FemtoLab H. pylori ). Леодольтер и др. [37] сравнили диагностическую точность FemtoLab и HpSA в образцах кала после эрадикационной терапии. Они обнаружили, что специфичность, PPV и NPV обоих тестов были сопоставимы, но чувствительность FemtoLab была выше, чем HpSA, хотя разница не была значительной. Диагностическая эффективность этого моноклонального иммуноанализа кала также оценивалась Makristathis et al.[35] и Agha-Amiri et al. [38]. Эти исследования подтвердили высокую чувствительность и специфичность до и после эрадикационной терапии. Вполне возможно, что использование моноклональных антител может повысить диагностическую ценность тестирования после лечения и уменьшить проблему межтестовой изменчивости.
Стоимость и рентабельность
Сравнение цен между тестом стула и UBT зависит от страны. В большинстве европейских стран UBT стоит недорого. В США UBT значительно дороже HpSA.Исследования Vakil et al. [39] показали, что анализ стула H. pylori очень рентабелен. Хотя тест ELISA имел самые низкие затраты на правильный диагноз, он был связан с более низкой диагностической точностью. Анализ стула был особенно полезен у пациентов с низкой или средней вероятностью до теста [39].
Эффект антисекреторных препаратов
Доступны лишь ограниченные данные о том, влияет ли на тест HpsA предшествующее или сопутствующее лечение. Этот вопрос, безусловно, имеет клиническое значение, поскольку многие пациенты, прошедшие тестирование на H.pylori принимают ингибиторы протонной помпы или антагонисты рецептора H 2 .
В исследовании Bravo et al. [40], можно было продемонстрировать, что ранитидин не влиял на результаты теста HpSA. Напротив, лансопразол (15–25%) и висмут (10–15%) могут давать ложноотрицательные результаты. Негативное влияние лансопразола и висмута исчезает через 2 недели после отмены препаратов.
Омепразол оказывает значительное, зависящее от времени и дозы отрицательное влияние на тест HpSA и UBT [41].Через 2 недели после отмены омепразола и HpSA, и UBT снова стали положительными во всех случаях. Механизм (ы), с помощью которого омепразол снижает чувствительность теста HpSA, неясен, но это может быть связано с наблюдением, что омепразол снижает плотность H. pylori в слизистой оболочке желудка.
В исследовании Parente et al. [42], 10% всех пациентов, получавших омепразол 20 мг, 6% — лансопразол 30 мг, но ни у одного из пациентов, получавших пантопразол, не было ложноотрицательных результатов теста HpSA.Эффекты омепразола и лансопразола исчезли через 1 неделю после отмены препарата. В общем, лечение ингибиторами протонной помпы снижает чувствительность как HpSA, так и UBT аналогичным образом.
Допуск образцов стула
Вполне возможно, что тесты на дыхание могут дать пациенту более высокую комплаентность, чем сбор образцов стула. Опыт скрининга на колоректальный рак показал, что анализ кала на скрытую кровь плохо поддается лечению. В исследовании Hynam et al. [43] были опрошены пациенты, отказывающиеся от анализа кала на скрытую кровь в общей практике.Помимо страха перед дальнейшими обследованиями и хирургическим вмешательством, одной из наиболее частых причин несоблюдения правил процедуры сбора стула были неприятные ощущения.
Список литературы
- Mégraud F: Наиболее важные диагностические методы для Helicobacter pylori, сейчас и в будущем.Eur J Gastroenterol Hepatol 1997; 9 (приложение 1): S13 – S15.
- Катлер А.Ф., Хавстад С., Ма С.К., Блазер М.Дж., Перес-Перес Г.И., Шуберт Т.Т.: Точность инвазивных и неинвазивных тестов для диагностики инфекции Helicobacter pylori . Гастроэнтерология 1995; 109: 136–141.
- Томас Дж. Э., Гибсон Г. Р., Дарбо М. К., Дейл А., Уивер Л. Т.: Выделение Helicobacter pylori из человеческих фекалий.Ланцет 1992; 340: 1194–1195.
- Шимада Т., Огура К., Ота С., Терано А., Такахаши М., Хамада Е. и др.: Идентификация Helicobacter pylori в образцах желудка, желудочном соке, слюне и фекалиях японских пациентов (письмо). Ланцет 1994; 343: 1636–1637.
- Kelly SM, Pitcher MCL, Farmery SM, Gibson GR: Выделение Helicobacter pylori из фекалий пациентов с диспепсией в Соединенном Королевстве.Гастроэнтерология 1994; 107: 1671–1674.
- Sahay P, West AP, Hawkey PM, Axon AT: Выделение Helicobacter pylori из фекалий (письмо). J Infect 1995; 30: 262–263.
- Leverstein-van Hall MA, van der Ende A, van Milligen de Wit M, Tytgat GN, Dankert J: Передача Helicobacter pylori через фекалии (письмо).Ланцет 1993; 342: 1419–1420 (письмо).
- Катренич CE, Макин К.М.: Характеристика морфологического преобразования Helicobacter pylori из бациллярных в коккоидные формы. Сканд Дж. Гастроэнтерол 1991; 181: S58 – S64.
- Лангенберг В., Феллен М., Данкерт Дж .: Фекалии токсичны для Helicobacter pylori .6-й семинар по кишечнику по Campylobacter, Helicobacter и родственным организмам, Сидней, 1991.
- Chong SK, Lou Q, Fitzgerald JF, Lee Ch: Оценка ПЦР гена 16S рРНК с праймерами Hp1 и Hp2 для обнаружения Helicobacter pylori . J Clin Microbiol 1996; 34: 2728–2730.
- Van-Zwet AA, Thijs JC, Kooistra-Smid AMD, Schirm J, Snijder LA: Использование ПЦР с фекалиями для выявления инфекции Helicobacter pylori у пациентов. J Clin Microbiol 1994; 32: 1346–1348.
- Mapstone NP, Lynch DA, Lewis FA, Axon AT, Tompkins DS, Dixon MF: идентификация ПЦР Helicobacter pylori в фекалиях пациентов с гастритом (письмо).Ланцет 1993; 341: 447.
- Enroth H, Engstrand L: Иммуномагнитное разделение и ПЦР для обнаружения Helicobacter pylori в образцах воды и стула. J Clin Microbiol 1995; 33: 2162–2165.
- Westblom TU: Молекулярная диагностика Helicobacter pylori .Иммунол Инвест 1997; 26: 163–174.
- Roosendaal R, Kuipers EJ, van den Brule AJ, Pena AS, Uyterlinde AM, Walboomers JM и др.: Важность процедуры очистки оптоволоконного эндоскопа для обнаружения Helicobacter pylori в образцах биопсии желудка с помощью ПЦР. J Clin Microbiol 1994; 32: 1123–1126.
- Lehmann FS, Drewe J, Terracciano L, Stuber R, Frei R, Beglinger C: Сравнение иммуноанализа кала со стандартными методами обнаружения инфекции Helicobacter pylori . BMJ 1999; 319: 1409.
- Vaira D, Malfertheiner P, Mégraud F, Axon AT, Deltenre M, Hirschl AM и др.: Диагностика инфекции Helicobacter pylori с помощью нового неинвазивного анализа на основе антигенов.Ланцет 1999; 354: 30–33.
- Trevisani L, Sartori S, Galvani F, Rossi MR, Ruina M, Chiamenti C, et al: Оценка нового иммуноферментного анализа для обнаружения Helicobacter pylori в фекалиях: проспективное пилотное исследование. Am J Gastroenterol 1999; 94: 1830–1833.
- Fanti L, Mezzi G, Cavallero A, Gesu G, Bonato C, Masci E: новый простой иммуноанализ для обнаружения инфекции Helicobacter pylori : антиген в образцах стула.Пищеварение 1999; 60: 456–460.
- Trevisani L, Sartori S, Ruina M, Caselli M, Rossi MR, Costa F, et al: Helicobacter pylori , тест на антиген стула. Клиническая оценка и анализ стоимости нового иммуноферментного анализа. Dig Dis Sci 1999; 44: 2303–2306.
- Брейден Б., Тойбер Г., Дитрих С., Каспари В. Ф., Лембке Б.: Сравнение нового теста на фекальный антиген с дыхательным тестом на мочевину 13C для выявления инфекции Helicobacter pylori и мониторинга лечения эрадикации: проспективная клиническая оценка.BMJ 2000; 320: 148.
- Метц, округ Колумбия: Анализ стула на инфекцию Helicobacter pylori : еще одна неинвазивная альтернатива. Am J Gastroenterol 2000; 95: 546–548.
- Puspok A, Bakos S, Oberhuber G: Новый неинвазивный метод обнаружения Helicobacter pylori: Действительность в обычных клинических условиях.Eur J Gastroenterol Hepatol 1999; 11: 1139–1142.
- Chang MC, Wu MS, Wang HH, Wang HP, Lin JT: Helicobacter pylori Тест на антиген стула (HpSA) — простой, точный и неинвазивный тест для обнаружения инфекции Helicobacter pylori . Гепатогастроэнтерология 1999; 46: 299–302.
- Vakil N, Affi A, Robinson J, Sundaram M, Phadnis S: проспективное слепое испытание теста на фекальный антиген для обнаружения инфекции Helicobacter pylori . Am J Gastroenterol 2000; 95: 1699–1701.
- Vaira D, Malfertheiner P, Mégraud F, Axon AT, Deltenre M, Gasbarrini G и др.: Неинвазивный анализ на основе антигенов для оценки эрадикации Helicobacter pylori : Европейское многоцентровое исследование.Am J Gastroenterol 2000; 95: 925–929.
- Gisbert JP, Pajares JM: Диагностика инфекции Helicobacter pylori путем определения антигена в стуле: систематический обзор. Am J Gastroenterol 2001; 96: 2829–2838.
- Форне М., Домингес Дж., Фернандес-Банарес Ф., Лайт Дж., Эстев М., Гали Н. и др.: Точность иммуноферментного анализа для обнаружения Helicobacter pylori в образцах стула при диагностике инфекции и контрольном осмотре после лечения.Am J Gastroenterol 2000; 95: 2200–2205.
- Коста Ф, Мумоло М.Г., Беллини М., Романо М.Р., Мангетти М., Пачи А. и др.: Диагностическая точность нового иммуноферментного анализа после лечения для обнаружения Helicobacter pylori в стуле. Алимент Фармакол Тер 2001; 15: 395-401.
- Каллен К.П., Бродерик Б.М., Джаянти Дж .: Оценка нового метода иммуноферментного анализа HpSA для обнаружения антигена Helicobacter pylori в образцах стула.Кишечник 2000; 47: A122.
- Husson MO, Rolland C, Gottrand F, Guimber D, Kalach N, Spyckerelle C, et al: Оценка теста на антиген стула Helicobacter pylori для диагностики и последующего наблюдения за инфекциями у детей. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2000; 19: 787–789.
- Bilardi C, Biagini R, Dulbecco P, Iiritano E, Gambaro C, Mele MR, et al: Анализ стула на антиген (HpSA) менее надежен, чем дыхательный тест на мочевину, для диагностики инфекции Helicobacter pylori после лечения. Aliment Pharmacol Ther 2002; 16: 1733–1738.
- Мальфертхайнер П., Мегроуд Ф., О’Морайн С., Хангин А.П., Джонс Р., Аксон А. и др.: Современные концепции управления инфекцией, вызванной вирусом Helicobacter pylori — Консенсусный доклад Маастрихта 2-2000.Алимент Фармакол Тер 2002; 16: 167–180.
- Макристатис А, Пашинг Э., Шутце К., Виммер М., Роттер М.Л., Хиршль А.М.: Обнаружение Helicobacter pylori в образцах стула с помощью ПЦР и иммуноферментного анализа антигена. J Clin Microbiol 1998; 36: 2772–2774.
- Makristathis A, Barousch W, Pasching E, Apfalter P, Willinger B, Rotter ML, et al: Два иммуноферментных анализа и ПЦР для обнаружения Helicobacter pylori в образцах стула от педиатрических пациентов до и после эрадикационной терапии.J Clin Microbiol 2000; 38: 3710–3714.
- Odaka T, Yamaguchi T., Koyama H, Saisho H, Nomura F: Оценка теста на антиген стула Helicobacter pylori для мониторинга эрадикационной терапии. Am J Gastroenterol 2002; 97: 594–599.
- Леодольтер А., Пейтц У., Эберт М., Ага-Амири К., Мальфертхайнер П.: Сравнение двух иммуноферментных анализов для оценки статуса Helicobacter pylori в образцах стула после эрадикационной терапии.Am J Gastroenterol 2002; 97: 1682–1686.
- Agha-Amiri K, Peitz U, Mainz D, Kalh S, Leodolter A, Malfertheiner P: новый иммуноанализ, основанный на моноклональных антителах, для обнаружения антигенов Helicobacter pylori в стуле человека. Z Gastroenterol 2001; 39: 555–560.
- Vakil N, Rhew D, Soll AH, Ofman JJ: Экономическая эффективность стратегий диагностического тестирования для Helicobacter pylori. Am J Gastroenterol 2000; 95: 1691–1698.
- Bravo LE, Realpe JL, Campo C, Mera R, Correa P: Влияние кислотоподавляющих и висмутовых препаратов на выполнение диагностических тестов на инфекцию Helicobacter pylori .Am J Gastroenterol 1999; 94: 2380–2383.
- Manes G, Balzano A, Iaquinto G, Ricci C, Piccirillo MM, Giardullo N и др.: Точность теста на антиген стула при диагностике инфекции Helicobacter pylori до лечения и у пациентов, получающих терапию омепразолом. Aliment Pharmacol Ther 2001; 15: 73–79.
- Parente F, Sainaghi M, Maconi G: Не все краткосрочные ингибиторы протонной помпы ухудшают точность дыхательного теста с мочевиной 13C и анализа стула H. pylori . Гастроэнтерология 2000; 118: A697.
- Hynam KA, Hart AR, Gay SP, Inglis A, Wicks AC, Mayberry JF: Скрининг колоректального рака: причины отказа от анализа фекальной скрытой крови в общей практике в Англии.J Epidemiol Commun Health 1995; 49: 84–86.
Автор Контакты
Christoph Beglinger, MD
Отделение гастроэнтерологии
Университетская клиника Базеля
CH – 4031 Базель (Швейцария)
Тел. +41 61265 25 25, факс +41 61265 53 52, электронная почта Beglinger @ tmr.ch
Подробности статьи / публикации
Предварительный просмотр первой страницы
Получено: 24 марта 2003 г.
Принято: 15 сентября 2003 г.
Опубликовано в Интернете: 16 января 2004 г.
Дата выпуска: 2003
Количество страниц для печати: 5
Количество рисунков: 0
Количество столов: 0
ISSN: 0012-2823 (печатный)
eISSN: 1421-9867 (онлайн)
Для дополнительной информации: https: // www.karger.com/DIG
Авторские права / Дозировка препарата / Заявление об ограничении ответственности
Авторские права: Все права защищены. Никакая часть данной публикации не может быть переведена на другие языки, воспроизведена или использована в любой форме или любыми средствами, электронными или механическими, включая фотокопирование, запись, микрокопирование, или с помощью какой-либо системы хранения и поиска информации, без письменного разрешения издателя. .
Дозировка лекарств: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор и дозировка лекарств, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Тем не менее, ввиду продолжающихся исследований, изменений в правительственных постановлениях и постоянного потока информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на них, читателю настоятельно рекомендуется проверять листок-вкладыш для каждого препарата на предмет любых изменений показаний и дозировки, а также дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендованным агентом является новое и / или редко применяемое лекарство.
Отказ от ответственности: утверждения, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и соавторам, а не издателям и редакторам.Появление в публикации рекламы и / или ссылок на продукты не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности. Издатель и редактор (-ы) не несут ответственности за любой ущерб, нанесенный людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в контенте или рекламе.
метод оценки генотипа Helicobacter pylori по образцам стула | Возбудители и болезни
Абстрактные
Инфекция Helicobacter pylori считается основным фактором, связанным с развитием желудочных заболеваний.Характеристика инфицированных H. pylori у бессимптомных лиц важна для прогнозирования начала таких заболеваний. Однако из-за сложности получения образцов биопсии желудка H. pylori у здоровых людей не были изучены в достаточной степени. Поэтому мы протестировали неинвазивный метод характеристики H. pylori с использованием образцов стула. Этот метод включал обнаружение антигена H. pylori в образцах стула с помощью иммунохроматографии; подтверждение H.pylori с помощью ПЦР в реальном времени, в ходе которой был обнаружен его ген 16S рРНК в ДНК, выделенной из образцов стула; и вложенная ПЦР с парами праймеров, специфичных для генотипа. С помощью этого метода было проанализировано в общей сложности 80 образцов, полученных от бессимптомных субъектов. Результаты показали, что распространенность H. pylori у бессимптомных японцев составляла 37,5%. Частота обнаружения гена фактора вирулентности cagA составила 18,8%. Кроме того, все обнаруженные cagA принадлежали к высоковирулентному восточноазиатскому типу.Эти данные предполагают, что метод, использованный в этом исследовании, ценен для изучения молекулярной эпидемиологии инфекции H. pylori у бессимптомных людей.
Введение
Helicobacter pylori признан канцерогеном группы I Международным агентством по изучению рака, поскольку инфицирование этим патогеном вызывает стойкий гастрит и напрямую связано с развитием язвенной болезни, рака желудка и лимфомы слизистой оболочки желудка. -ассоциированная лимфоидная ткань (Fox & Wang, 2007; Amieva & El-Omar, 2008).Различные факторы вирулентности H. pylori , такие как VacA, CagA и уреаза, вовлечены в патологию инфекции H. pylori (Maeda & Mentis, 2007). Среди этих факторов cagA , который расположен в области острова патогенности ( cag PAI), был идентифицирован как критический фактор вирулентности в отношении инициации рака. Существует множество генотипов гена cagA , включая восточноазиатские и западные типы. Восточноазиатский тип более вирулентен, чем западный тип, из-за его сильной способности стимулировать пути передачи сигнала в организме хозяина (Higashi et al., 2002; Хатакеяма, 2006 г.). Поэтому широко проводилось генотипирование гена cagA клинических изолятов H. pylori , полученных от пациентов с желудочными заболеваниями. Напротив, генотип факторов вирулентности изолятов H. pylori от бессимптомных лиц редко оценивался качественно и количественно из-за сложности сбора образцов. Существует два возможных типа образцов для выделения и характеристики инфицированных бактерий у бессимптомных лиц: один — это образец эндоскопической биопсии, а другой — образец кала.Хотя использование образца эндоскопической биопсии более надежно для изоляции инфицированных H. pylori , этот метод сбора имеет ряд недостатков, включая ненужную инвазию здоровых людей. Следовательно, такие недостатки затрудняют проведение эпидемиологического исследования, особенно с большими когортами. С другой стороны, исследования с использованием образцов стула неинвазивны, и их легко собрать. Эти преимущества облегчают эпидемиологический анализ, такой как исследование случай – контроль, исследование факторного контроля или проспективное исследование.Однако кал не считается хорошим материалом для выделения H. pylori , поскольку бактерии могут находиться в «жизнеспособном, но не культивируемом» состоянии. Фактически, лишь в нескольких отчетах описывается прямая изоляция бактерий из образцов стула (Kabir, 2001), хотя было предпринято много попыток изолировать бактерии. Кроме того, присутствие ингибиторов и значительная сложность бактерий в образцах стула также могут препятствовать детальному анализу H.pylori с использованием молекулярно-биологических методов, таких как ПЦР-амплификация (Abu Al-Soud & Radstrom, 2000). Молекулярная характеристика H. pylori у бессимптомных лиц считается одним из наиболее ценных факторов для прогнозирования начала заболеваний, связанных с тихой инфекцией H. pylori . Поэтому в этом исследовании, чтобы оценить вирулентность H. pylori , мы использовали метод неинвазивного генотипирования для генотипирования гена cagA из образцов кала бессимптомных лиц.
Материалы и методы
Клинические образцы
Исследование проводилось с июля по август 2007 г. в Осаке, Япония. Информированное согласие было дано всеми участниками. Образцы стула были взяты у 80 бессимптомных добровольцев в возрасте 40 лет и старше. Протоколы исследования были одобрены этическим комитетом Отделения медицинских наук Высшей школы медицины Университета Осаки (Осака, Япония).
Обнаружение
H.pylori в образцах стула и выделение бактериальной ДНККоммерчески доступный набор для экспресс-тестов (Testmate Rapid Pylori Antigen, BD, Токио, Япония) был использован для обнаружения каталазы антигена H. pylori (Suzuki et al. , 2002) в образцах стула. Обнаружение было выполнено в соответствии с инструкциями производителя.
Бактериальную ДНК экстрагировали из всех образцов стула с использованием мини-набора QIAamp DNA Stool Mini (Qiagen, Valencia, CA) в соответствии с инструкциями производителя с небольшими изменениями.Вкратце, бактериальная ДНК была извлечена из c . 1 г образца стула и был получен в объеме 200 мкл с концентрациями ДНК до 150 нг мкл -1 . Извлеченную ДНК хранили при -20 ° C до дальнейшего использования.
ПЦР анализ
Раствор с концентрацией экстрагированной ДНК 50 нг мкл -1 или 10-кратно разбавленный раствор экстрагированной ДНК использовали в качестве матрицы для всех анализов ПЦР. Для выявления гена 16S рРНК H.pylori , ПЦР в реальном времени выполняли с ген-специфическими праймерами, зондом (Таблица 1) и TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems, Foster, CA) в соответствии с инструкциями производителя, согласно которым существует H. pylori ДНК в экстрагированной ДНК может быть подтверждена.
Таблица 1 Олигонуклеотидные праймеры и зонд, используемые для ПЦР-анализа гена Helicobacter pylori 16S рРНК и cagA
| Ген | Праймер | Последовательность праймера | последовательность праймера | ., 2005)Вперед | 5′-TGC GAA GTG GAG CCA ATC TT-3 ‘ |
| Обратный | 5′-GGA ACG TAT TCA CCG CAA CA-3′ | |
| Зонд | 5 ‘- (FAM) CCT CTC AGT TCG GAT TGT AGG CTG CAA C (TAMRA) -3’ | |
| cagA обнаружение (данное исследование) | Прямое (обычное) | 5′-GGA ACC CTA GTC AGT AAT GGG TT-3 ‘ |
| Обратный (JR) | 5′-AAT TCT TGT TCC CTT GAA AGC CC-3′ | |
| Обратный (WR) 5 | GCT TTA GCT TCT GAT ACC GCT TGA -3 ‘ | |
| cagA -Western (Yamazaki et al., 2005) | Вперед | 5′-AGG CAT GAT AAA GTT GAT GAT-3 ‘ |
| Обратный | 5′-AAA GGT CCG CCG AGA TCA T-3′ | |
| cag45 — Восточно-Азиатский (Ямазаки и др. , 2005) | Вперед | 5′-AAA GGA GTG GGC GGT TTC A-3 ‘ |
| Обратный | 5′-CCT GCT TGA TCA TCA-3 ‘ |
| Ген | Праймер | Последовательность праймера |
| Ген 16S рРНК (Yamazaki et al., 2005) | Вперед | 5′-TGC GAA GTG GAG CCA ATC TT-3 ‘ |
| Обратный | 5′-GGA ACG TAT TCA CCG CAA CA-3′ | |
| Зонд | 5 ‘- (FAM) CCT CTC AGT TCG GAT TGT AGG CTG CAA C (TAMRA) -3’ | |
| cagA обнаружение (данное исследование) | Прямое (обычное) | 5′-GGA ACC CTA GTC AGT AAT GGG TT-3 ‘ |
| Обратный (JR) | 5′-AAT TCT TGT TCC CTT GAA AGC CC-3′ | |
| Обратный (WR) 5 | GCT TTA GCT TCT GAT ACC GCT TGA -3 ‘ | |
| cagA -Western (Yamazaki et al., 2005) | Вперед | 5′-AGG CAT GAT AAA GTT GAT GAT-3 ‘ |
| Обратный | 5′-AAA GGT CCG CCG AGA TCA T-3′ | |
| cag45 — Восточно-Азиатский (Ямазаки и др. , 2005) | Вперед | 5′-AAA GGA GTG GGC GGT TTC A-3 ‘ |
| Обратный | 5′-CCT GCT TGA TCA TCA-3 ‘ |
Олигонуклеотидные праймеры и зонд, использованные для ПЦР-анализа Helicobacter pylori гена 16S рРНК и cagA
| Последовательность гена | Праймер | Праймер | Ген 16S рРНК (Yamazaki et al., 2005) | Вперед | 5′-TGC GAA GTG GAG CCA ATC TT-3 ‘ | ||
| Обратный | 5′-GGA ACG TAT TCA CCG CAA CA-3′ | ||||||
| Зонд | 5 ‘- (FAM) CCT CTC AGT TCG GAT TGT AGG CTG CAA C (TAMRA) -3’ | ||||||
| cagA обнаружение (данное исследование) | Прямое (обычное) | 5′-GGA ACC CTA GTC AGT AAT GGG TT-3 ‘ | |||||
| Обратный (JR) | 5′-AAT TCT TGT TCC CTT GAA AGC CC-3′ | ||||||
| Обратный (WR) 5 | GCT TTA GCT TCT GAT ACC GCT TGA -3 ‘ | ||||||
| cagA -Western (Yamazaki et al., 2005) | Вперед | 5′-AGG CAT GAT AAA GTT GAT GAT-3 ‘ | |||||
| Обратный | 5′-AAA GGT CCG CCG AGA TCA T-3′ | ||||||
| cag45 — Восточно-Азиатский (Ямазаки и др. , 2005) | Вперед | 5′-AAA GGA GTG GGC GGT TTC A-3 ‘ | |||||
| Обратный | 5′-CCT GCT TGA TCA TCA-3 ‘ |
| Ген | Праймер | Последовательность праймера |
| Ген 16S рРНК (Yamazaki et al., 2005) | Вперед | 5′-TGC GAA GTG GAG CCA ATC TT-3 ‘ |
| Обратный | 5′-GGA ACG TAT TCA CCG CAA CA-3′ | |
| Зонд | 5 ‘- (FAM) CCT CTC AGT TCG GAT TGT AGG CTG CAA C (TAMRA) -3’ | |
| cagA обнаружение (данное исследование) | Прямое (обычное) | 5′-GGA ACC CTA GTC AGT AAT GGG TT-3 ‘ |
| Обратный (JR) | 5′-AAT TCT TGT TCC CTT GAA AGC CC-3′ | |
| Обратный (WR) 5 | GCT TTA GCT TCT GAT ACC GCT TGA -3 ‘ | |
| cagA -Western (Yamazaki et al., 2005) | Вперед | 5′-AGG CAT GAT AAA GTT GAT GAT-3 ‘ |
| Обратный | 5′-AAA GGT CCG CCG AGA TCA T-3′ | |
| cag45 — Восточно-Азиатский (Yamazaki et al. , 2005) | Вперед | 5′-AAA GGA GTG GGC GGT TTC A-3 ‘ |
| Обратный | 5′-CCT GCT TGA TCA TCA-3 ‘ |
Вложенную ПЦР проводили для генотипирования cagA .Первый раунд ПЦР проводили с общим прямым праймером и любым из двух обратных праймеров (таблица 1). Условия ПЦР были следующими: 95 ° C в течение 2 минут, затем 40 циклов, состоящих из 94 ° C в течение 15 секунд, 55 ° C в течение 30 секунд и 68 ° C в течение 1 минуты. Затем проводили второй цикл ПЦР с 1 мкл продуктов ПЦР первого цикла в качестве матрицы. Во втором раунде ПЦР праймеры, специфичные для этих двух типов, использовали в отдельных реакциях. Условия во втором раунде ПЦР были следующими: 94 ° C в течение 2 минут, затем 50 циклов при 98 ° C в течение 10 секунд и 65 ° C в течение 2 секунд.Продукты ПЦР визуализировали электрофорезом в 2% агарозном геле и окрашиванием бромидом этидия.
Предел обнаружения
ДНК H. pylori с помощью ПЦР в образцах стулаПредел обнаружения ПЦР был определен с помощью спайк-теста. Для теста на спайк использовали клинические изоляты cagA с определенным генотипом H. pylori . К антиген-отрицательным образцам стула добавляли серию 10-кратных разведений культуры H. pylori в фосфатно-солевом буфере в диапазоне от 0 до 10 5 КОЕ г -1 стула.Бактериальную ДНК экстрагировали из образца стула, и экстрагированную ДНК использовали для ПЦР.
Результаты и обсуждение
Распространенность H. pylori в бессимптомной популяции Японии была изучена с помощью серологического теста (Асака и др. , 1992; Осава и др. , 1996; Фудзисава и др. , 1999; Ямагата и др. , 2000). Однако у серологического теста, используемого в этих исследованиях, есть несколько недостатков, например, он также выявляет перенесенные и излеченные инфекции.В связи с этим недавно был разработан новый метод обнаружения, который может напрямую обнаруживать бактериальный антиген в образцах стула с использованием моноклональных антител против каталазы H. pylori , и его чувствительность и специфичность сопоставимы с таковыми из дыхательного теста (Cardenas ). и др., , 2008). Поэтому мы применили этот метод обнаружения для оценки распространенности H. pylori у бессимптомных японцев.
Известно, что H.pylori увеличивается с возрастом, и более высокая распространенность может быть обнаружена в популяции старше 40 лет (Asaka et al. , 1992). Поэтому в качестве источника образцов стула в этом исследовании были выбраны бессимптомные японцы в возрасте 40 лет и старше. Как видно из таблицы 2, антиген H. pylori был обнаружен в 30 (37,5%) из 80 образцов, собранных у бессимптомных взрослых людей. Этот показатель был ниже, чем в предыдущих отчетах, в которых антигены определяли с использованием вышеупомянутого серологического метода (Asaka et al., 1992; Fujisawa et al. , 1999; Yamagata et al. , 2000). Причины более низкой распространенности H. pylori у здоровых людей, обследованных в этом исследовании, не ясны. Тем не менее, похоже, что разница в нынешних результатах и предыдущих отчетах, вероятно, связана с разными используемыми методами обнаружения; то есть метод обнаружения антигена в настоящем исследовании может выявить активную и текущую инфекцию H. pylori , в то время как серологический метод, использованный в предыдущих исследованиях, также выявил перенесенную и вылечил инфекцию.
Таблица 2Сводка по обнаружению Helicobacter pylori и генотипированию cagA
| Протестировано | Положительно (%) | |
| 909 | H. pylori test 30 (37,5) | |
| ПЦР в реальном времени | ||
| Ген 16S рРНК | 80 | 26 (32,5) |
| Обычная ПЦР | ||
| Обнаружение | 18.8) | |
| Генотипирование cagA | 15 | |
| Восточноазиатский тип | 15 (100.0) | |
| % | |||||
| Тест на антиген H. pylori | 80 | 30 (37,5) | |||
| ПЦР в реальном времени | |||||
| 16S ген рРНК | 80 | 26 (5) | |||
| Обычная ПЦР | |||||
| Обнаружение cagA | 80 | 15 (18,8) | |||
| Генотипирование cagA | Азиатский тип | Азиатский тип | 15 (100,0) | ||
Сводная информация об обнаружении Helicobacter pylori и генотипировании cagA
| Протестировано | Положительно | .pylori тест на антиген | 80 | 30 (37,5) | ||
| ПЦР в реальном времени | ||||||
| Ген 16S рРНК | 80 | 26 (32,5) | ||||
| Обнаружение | 909 909 Обычное ПЦР cagA | 80 | 15 (18,8) | |||
| Генотипирование cagA | 15 | |||||
| Восточноазиатский тип | 15 (100.0) | |||||
| Протестировано | Положительно (%) | |
| H. pylori Тест на антиген | 80 | 30 (37951) | Реальное время44
| Ген 16S рРНК | 80 | 26 (32,5) |
| Обычная ПЦР | ||
| Обнаружение cagA | 80 | 15 (18.8) |
| Генотипирование cagA | 15 | |
| Восточноазиатский тип | 15 (100,0) | |
Для определения генотипа H. бессимптомным лицам был проведен ПЦР-анализ гена фактора вирулентности cagA . ДНК Helicobacter pylori была выделена из всех образцов стула. Существование ДНК H. pylori в экстрагированной ДНК было подтверждено с помощью ПЦР в реальном времени, специфичной для H.pylori ген 16S рРНК (Yamazaki et al. , 2005). cagA генотипирование было достигнуто с помощью вложенной ПЦР, которая была специфичной для восточноазиатского или западного типа. В целом можно ожидать, что содержание ДНК H. pylori может быть невысоким в ДНК, выделенной из образцов стула. Кроме того, ДНК, выделенная из образцов стула, может не быть хорошей матрицей для ПЦР из-за наличия ингибиторов ПЦР и ее более высокого уровня сложности (Cavallini et al., 2000). Таким образом, перед анализом ДНК, выделенной из образцов стула, была оценена чувствительность ПЦР, использованной в этом исследовании, с помощью теста на спайк. Результаты показали, что предел обнаружения ПЦР в реальном времени, специфичной для гена 16S рРНК, и вложенной ПЦР для генотипа cagA составлял 2,1 ± 0,1 × 10 2 и 1,0 × 10 4 КОЕ г -1 соответственно. . Как показано в таблице 2, ген H. pylori 16S рРНК был обнаружен в 26 из 80 образцов ДНК, выделенных из образцов стула.Низкий уровень обнаружения (32,5%) ДНК H. pylori с помощью ПЦР, вероятно, был связан с различными мишенями (антиген против ДНК), используемыми для обнаружения, и присутствием ингибиторов ПЦР в извлеченных образцах ДНК (Kabir, 2004) . Тем не менее, результаты обнаружения ДНК H. pylori соответствовали предыдущему отчету об обнаружении ДНК H. pylori в образцах стула (Monteiro et al. , 2001).
После подтверждения существования ДНК H. pylori был обнаружен и генотипирован ген фактора вирулентности cagA .Ген cagA был обнаружен в 15 (18,8%) из 80 образцов. Уровень обнаружения cagA , полученный в этом исследовании, был относительно ниже, чем в предыдущих исследованиях, которые показали уровень обнаружения в диапазоне от 53,8% до 70,8% (Russo et al. , 1999; MacKay et al. , 2003; Sicinschi и др. , 2003a, 2003b). Причины низкого уровня выявления, наблюдаемого в этом исследовании, могут быть связаны с использованием другой целевой группы, например, здоровых людей.
Анализ cagA показал, что все обнаруженные cagA принадлежали к высоковирулентному восточноазиатскому генотипу. То есть 18,8% обследованных японцев были инфицированы высоковирулентным вирусом H. pylori . В связи с этим наше недавнее исследование генотипа cagA у бессимптомных тайцев показало, что восточноазиатский генотип присутствовал в <2% протестированных образцов (неопубликованные данные). Следовательно, представляется вероятным, что распространенность высоковирулентного восточноазиатского генотипа cagA H.pylori у бессимптомных людей может различаться в зависимости от страны. Такая различная распространенность, если таковая имеется, может быть связана с заболеваемостью желудочными заболеваниями, включая рак желудка. Тем не менее, исходя из результатов, полученных в этом исследовании, можно предположить, что значительное число здоровых японцев может быть инфицировано высоковирулентным вирусом H. pylori .
Таким образом, результаты, полученные в этом исследовании, показывают, что метод, использованный в этом исследовании, полезен для оценки H.pylori у здоровых людей.
Благодарности
Мы благодарим Ai Kimoto и Yasutaka Fukuda за их отличную техническую помощь. Эта работа была частично поддержана Программой финансирования исследовательских центров по возникающим и вновь возникающим инфекционным заболеваниям, MEXT, Япония.
Список литературы
(
2000
)Влияние фасилитаторов амплификации на диагностическую ПЦР в присутствии крови, фекалий и мяса
.J Clin Microbiol
38
:4463
—4470
.(
2008
)Взаимодействие между хозяином и бактериями в инфекции Helicobacter pylori
.Гастроэнтерология
134
:306
—323
.(
1992
)Связь Helicobacter pylori с пепсиногенами сыворотки у бессимптомной популяции Японии
.Гастроэнтерология
102
:760
—766
.(
2008
)Оценка нового теста на антиген нативной каталазы в кале для выявления инфекции Helicobacter pylori у бессимптомных детей в Северной Америке
.J Педиатр Гастроэнтерол Нутр
46
:399
—402
.(
2000
)Использование макропористого полипропиленового фильтра для идентификации бактерий с помощью ПЦР в образцах фекалий человека
.Дж Microbiol Meth
39
:265
—270
.(
2007
)Воспаление, атрофия и рак желудка
.Дж. Клин Инвест
117
:60
—69
.(
1999
)Изменения сероэпидемиологической картины Helicobacter pylori и вируса гепатита А в Японии за последние 20 лет
.Am J Гастроэнтерол
94
:2094
—2099
.(
2006
)Helicobacter pylori CagA — бактериальный нарушитель, вызывающий канцерогенез желудка
.Int J Cancer
119
:1217
—1223
.(
2002
)Тирозинфосфатаза SHP-2 как внутриклеточная мишень для белка Helicobacter pylori CagA
.Наука
295
:683
—686
.(
2001
)Обнаружение Helicobacter pylori в фекалиях с помощью посева, ПЦР и иммуноферментного анализа
.J Med Microbiol
50
:1021
—1029
.(
2004
)Обнаружение ДНК Helicobacter pylori в кале и слюне методом полимеразной цепной реакции: обзор
.Helicobacter
9
:115
—123
.(
2003
)Оценка протокола с использованием захвата генов и ПЦР для обнаружения ДНК Helicobacter pylori в кале
.J Clin Microbiol
41
:4589
—4593
.(
2007
)Патогенез инфекции Helicobacter pylori
.Helicobacter
12
(доп. 1
):10
—14
.(
2001
)Обнаружение ДНК Helicobacter pylori в человеческих фекалиях с помощью ПЦР: стабильность ДНК и удаление ингибиторов
.Дж Microbiol Meth
45
:89
—94
.(
1996
)Обратная зависимость сывороточных титров Helicobacter pylori и степени кишечной метаплазии
.Дж. Клин Патол
49
:112
—115
.(
1999
)Обнаружение гена Helicobacter pylori cagA с помощью полимеразной цепной реакции в образцах фекалий
.евро J Gastroen Hepat
11
:251
—256
.(
2003a
)Обнаружение и типирование генов Helicobacter pylori cagA / vacA с помощью радиоактивной одностадийной полимеразной цепной реакции в образцах стула детей
.Дж Microbiol Meth
52
:197
—207
.(
2003b
)Сравнение генотипирования генов вирулентности Helicobacter pylori cagA и vacA из биопсии желудка и образцов стула
.Helicobacter
8
:601
—607
.и другие. . (
2002
)Производство и применение новых моноклональных антител, специфичных к фекальному антигену Helicobacter pylori
.Clin Diagn Lab Immun
9
:75
—78
.и другие. . (
2000
)Влияние инфекции Helicobacter pylori на заболеваемость раком желудка среди населения Японии в целом: исследование Hisayama
.Arch Intern Med
160
:1962
—1968
.и другие. . (
2005
)Идентификация Helicobacter pylori и cagA генотипа при биопсии желудка с использованием высокочувствительной ПЦР в реальном времени в качестве нового диагностического инструмента
.FEMS Immunol Med Mic
44
:261
—268
.Заметки автора
© 2009 Федерация европейских микробиологических обществ.
% PDF-1.4 % 30 0 объект > эндобдж xref 30 82 0000000016 00000 н. 0000002481 00000 н. 0000002610 00000 н. 0000004504 00000 н. 0000004640 00000 н. 0000005075 00000 н. 0000005530 00000 н. 0000005938 00000 н. 0000006268 00000 н. 0000006379 00000 н. 0000006632 00000 н. 0000007030 00000 н. 0000007428 00000 н. 0000009033 00000 н. 0000010443 00000 п. 0000011904 00000 п. 0000012302 00000 п. 0000012687 00000 п. 0000013084 00000 п. 0000013572 00000 п. 0000013979 00000 п. 0000014438 00000 п. 0000014684 00000 п. 0000014937 00000 п. 0000015328 00000 п. 0000015604 00000 п. 0000017165 00000 п. 0000017800 00000 п. 0000018067 00000 п. 0000018206 00000 п. 0000018231 00000 п. 0000018819 00000 п. 0000019451 00000 п. 0000021352 00000 п. 0000023152 00000 п. 0000023399 00000 н. 0000023512 00000 п. 0000024025 00000 п. 0000024443 00000 п. 0000024695 00000 п. 0000025104 00000 п. 0000026965 00000 п. 0000028381 00000 п. 0000028482 00000 п. 0000028551 00000 п. 0000034983 00000 п. 0000061843 00000 п. 0000080445 00000 п. 0000085761 00000 п. 0000123998 00000 н. 0000124278 00000 н. 0000129210 00000 н. 0000175357 00000 н. 0000182768 00000 н. 0000183231 00000 н. 0000183300 00000 н. 0000183399 00000 н. 0000199915 00000 н. 0000200188 00000 н. 0000200613 00000 н. 0000200638 00000 п. 0000201201 00000 н. 0000202579 00000 н. 0000202909 00000 н. 0000203304 00000 н. 0000206520 00000 н. 0000206767 00000 н. 0000207108 00000 н. 0000207643 00000 н. 0000232791 00000 п. 0000233051 00000 н. 0000233452 00000 п. 0000255288 00000 н. 0000255559 00000 н. 0000255931 00000 н. 0000256321 00000 н. 0000260232 00000 н. 0000260485 00000 н. 0000260845 00000 н. 0000265356 00000 н. 0000265603 00000 н. 0000001936 00000 н. трейлер ] / Назад 339507 >> startxref 0 %% EOF 111 0 объект > поток hb«b`d`g`Pdfb @
Фекальное и оральное выделение Helicobacter pylori от здоровых инфицированных взрослых | Гастроэнтерология | JAMA
Контекст Helicobacter pylori обычно поражает людей; однако способ его передачи остается неизвестным.
Цель Определить, как люди — основной хозяин для H. pylori — распространяют этот организм в окружающую среду.
Дизайн Контролируемое клиническое экспериментальное исследование, проведенное с февраля по Декабрь 1998 г.
Учреждение Отделение клинических исследований в больнице в северной Калифорнии.
Пациенты Шестнадцать бессимптомных H. pylori– инфицированных и 10 неинфицированных взрослых.
Вмешательство Слабительное (фосфат натрия) и рвотное средство (ипекакуана) были даны все инфицированные субъекты и рвотное средство давали 1 неинфицированному субъекту.
Основной результат измерения Подтверждено Изоляты H. pylori , культивированные из стула, воздух или слюна до и после катарсиса и рвоты, а также от рвоты во время рвота. Отпечатки изолятов были сняты с использованием повторяющихся экстрагенных палиндромов. (REP) полимеразная цепная реакция и видовая принадлежность была подтверждена секвенированием. ген рибосомной РНК 16s.
Результаты Все образцы рвотных масс инфицированных субъектов выросли H pylori , часто в больших количествах.Образцы воздуха, взятого во время рвоты, увеличили H. pylori у 6 (37,5%) из 16 субъектов. Слюна до и после того, как рвота выросла в небольших количествах H. pylori у 3 (18,8%) и 9 (56,3%) испытуемых соответственно. Никакого нормального стула и только У 22 (21,8%) из 101 индуцированного стула рост организма, хотя 7 (50,0%) из 14 субъектов имели как минимум 1 положительный посев (2 образца посева стула были заражены грибком и не включены). Отпечатки пальцев изолятов внутри субъекты были идентичны друг другу, но различались между субъектами.Нет образцов от неинфицированных субъектов получено H. pylori .
Выводы Helicobacter pylori можно культивировать равномерно от рвоты и, иногда, от слюны и слабительного стула. Организм потенциально передается во время эпизодов заболеваний желудочно-кишечного тракта, особенно при рвоте.
H elicobacter pylori вызывает пептические язвы и был вовлечен в этиологию дистального рака желудка. 1 Однако неизвестно, как передается H pylori . Эта неопределенность проистекает из 4 нерешенных вопросов: (1) как организм покинуть свой хозяин и войти в среду? (2) где в окружающей среде организм проживает? (3) когда люди заражаются? и (4) все люди восприимчивы к инфекции? Хотя большинство эпидемиологических данных подтверждают прямая передача от человека к человеку, способ, которым это происходит, неизвестен. 2 -4
Считается, что Helicobacter pylori живет нормально только в желудке; таким образом, предполагается, что организм попадает в окружающую среду. в кале, слюне или рвоте. Хеликобактер пилори является относительно привередливым организмом, однако его идентификация проводится в клинические образцы сложно. Опытные лаборатории могут извлечь H pylori только из 50–70% инфицированных биоптатов желудка. 5 , 6 Из стула, слюны и рвоты, которые могут быть в значительной степени колонизированы более устойчивыми организмами — выделение H pylori еще сложнее. 7 -10 Таким образом, многие клинические исследования опирались на полимеразную цепную реакцию (ПЦР). для идентификации H pylori . 11 , 12 К сожалению, с помощью ПЦР нельзя отличить ДНК от жизнеспособных клеток от нежизнеспособных. организмы. Новый метод на основе ПЦР, иммуномагнитное разделение (ИМС) с ПЦР, может решить эту проблему, предпочтительно амплифицируя ДНК в интактных клетках. 13 -15
В этом исследовании, используя как культуру, так и ПЦР IMS, мы оценили, можно ли выделить H pylori из фекалий, рвотных масс и слюны. бессимптомных инфицированных взрослых добровольцев.Поскольку некоторые исследования предполагают, что H pylori выделяется только с диарейным стулом, мы культивировали стул как до, так и после приема слабительного. Кроме того, мы пробовал воздух во время приступов рвоты. Таким образом, мы надеялись выяснить как H pylori попадает в окружающую среду и вторгается в новые хосты.
Мы набирали здоровых добровольцев с помощью рекламы на радиостанциях и в деловых учреждениях, клиниках и церквях.Мы преимущественно набирали среди меньшинств (чернокожих и латиноамериканцев), которые, как известно, имеют высокую распространенность из H pylori в северной Калифорнии. 16 За 3 недели анонсов мы получили 379 запросов и проинтервьюировали 132 потенциальных участника; 103 были допущены к участию. Критерий исключения включен возраст старше 55 лет; беременность; язвенная болезнь желудочно-кишечного тракта в анамнезе кровотечение из тракта или тяжелая диспепсия; рутинное использование слабительных средств; недавнее использование антибиотиков, антагонистов гистамина или ингибиторов протонной помпы; и ранее лечение инфекции H. pylori .
Из 103 допущенных к участию субъектов 62 были выбраны для участия. После предоставив письменное информированное согласие, каждый субъект предоставил образец сыворотки для H pylori IgG. Первые 15 из 27 серопозитивных Субъектам было предложено пройти дыхательный тест 13C на H pylori (Meretek Corp, Нэшвилл, Теннесси), физический осмотр, кровь подсчет клеток, химический состав крови и анализ скрытой крови стула. Два бессимптомных субъекты, идентифицированные как H pylori IgG-положительные в в предыдущем исследовании просили принять участие, а также были приглашены для проверки дыхания и физический осмотр.Подтверждено, что все 17 серопозитивных субъектов инфицирован H pylori при дыхательном тесте, но 1 был исключен от дальнейшего участия из-за анемии. Остальным 16 пациентам (группа, инфицированная H. pylori ) было предложено пройти клинический эксперимент, описанный здесь. Тен H pylori Были выявлены добровольцы с отрицательным серологическим тестом и тестом дыхания. ( H pylori — неинфицированная группа). Субъекты были оплатили свое участие в исследовании.
Helicobacter pylori –инфицированные субъекты поступили в отделение общеклинических исследований, где им назначили 45 мл раствора фосфата натрия в 90 мл воды, затем 720 мл воды. Мы выбрали фосфат натрия в качестве слабительного средства, потому что он быстро в дебюте, действует как на тонкий, так и на толстый кишечник и использовался ранее для облегчения диагностики возбудителей заболеваний желудочно-кишечного тракта. 17 Мы собрали весь стул в течение 8 часов после слабительного приема. и сразу перевезли в лабораторию.
После ночного голодания инфицированным субъектам вводили 5 мл ипекакуана, а затем не менее 480 мл воды. До рвоты мы получили образец слюны (испытуемый сплюнул в чашку) и поместил воздух Мэттсона-Гэвина пробоотборник на расстоянии 0,3 м от объекта. На время периода рвоты мы взяли пробы воздуха на чашки с триптиказо-соевым агаром из овечьей крови с помощью флюоропора. фильтр по центру, покрывающий половину диаметра пластины.Мы заменили пластину каждые 30 минут, чтобы предотвратить высыхание. Для 10 предметов мы разместили второй пробоотборник воздуха на расстоянии 1,2 м для определения радиуса бактериальной аэрозолизации. Образцы были доставлены в лабораторию для обработки в течение 10 минут. рвоты. После того, как рвота утихла, мы взяли второй образец слюны.
У 10 неинфицированных контрольных субъектов были нормальный стул и слюна. образцы для анализа. Один неинфицированный контроль также подвергся рвоте. эксперимента.
Протокол был одобрен Администрацией Стэнфордского университета. Панель по человеческим субъектам в медицинских исследованиях.
Культуры стула, рвоты и слюны
Мы разбавили образцы стула до 20% суспензии в физиологическом растворе с фосфатным буфером. (PBS) и просеивали суспензию через сетчатый фильтр 250 мкм.Мы покрыли порция 200 мкл суспензии на соевом агаре с триптиказой овечьей крови с добавлением полимиксина B (3,3 мкг / мл), амфотерицина B (50 мкг / мл), бацитрацин (200 мкг / мл), налидиксовая кислота (10,7 мкг / мл) и ванкомицин (100 мкг / мл). Мы культивировали вторую порцию (1 мл) суспензии, используя метод, описанный Келли и его коллегами. 8 Используя эти методы, мы успешно извлекли H pylori из инокулированного стула при таких низких концентрациях, как 10 2 организмов / мл (штамм Американской коллекции типовых культур 43579). 14 Однако чувствительность обнаружения H pylori различалась: в зависимости от штамма H pylori, инокулированного (диапазон, 10 2 -10 4 организмов / мл).
Мы нейтрализовали образцы рвотных масс до pH 7,0 и разбавили образец с PBS в соотношении 1: 1; 200 мкл культивировали на чашках с антибиотиками в качестве описано здесь. Используя эти методы, мы смогли обнаружить H pylori , привитые в рвотные массы при концентрациях всего 10 организмов / мл, в зависимости от используемого штамма H. pylori . 14 Ипекак (0,125 мл на миллилитр образца) уменьшился чувствительность обнаружения H. pylori в 10 раз. Слюна образцы разбавляли 1: 1 в PBS и высевали, как описано.
Все планшеты инкубировали микроаэрофильно при 37 ° C. Подозрительный колонии были подтверждены как H pylori . Когда возможно, мы оценили количество колониеобразующих единиц (КОЕ) H. pylori на миллилитр образца.
Мы связали очищенные поликлональные кроличьи анти– H pylori IgG (Dako, Glostrup, Дания) с намагниченными шариками из полистирола с предварительно нанесенным покрытием. с овечьим антителом против кроличьего IgG, как описано производителем (Dynal, Осло, Норвегия).Затем мы смешали суспензии стула, рвоты и слюны с 30 мкл (1,8 × 10 6 шариков) покрытых шариков в течение 1 часа. при 4 ° C. Мы отделили шарики от раствора с помощью магнитной частицы. концентратор, удалили раствор и снова суспендировали шарики в 1 мл PBS с 0,1% бычьим сывороточным альбумином. После 3 таких разделений и промываний, 1 порцию отделенного комплекса гранул с бактериями ресуспендировали в 30 мкл стерильной дистиллированной воды, кипяченой в течение 10 минут для лизирования бактерий, ненадолго охлаждали на льду и замораживали до анализа с помощью ПЦР.Вторая порция комплекс бактерий в виде гранул ресуспендировали в 100 мкл PBS и культивировали как описано здесь. Поскольку мы обнаружили, что IMS не улучшает чувствительность культуры, мы не культивировали комплекс микробов с бактериями после первых 5 испытуемых.
Полимеразная цепная реакция комплекса гранул-бактерий, разделенных IMS выполняли с использованием праймеров, специфичных к H pylori Ген рибосомной РНК (рРНК) 16s, как описано ранее. 18 Полоса 139 пар оснований (п.н.) при электрофорезе в агарозном геле показала наличие в образце H. pylori .Отрицательный контроли включали стерильную дистиллированную воду и иммуномагнитные шарики без добавлены образцы. В экспериментах по инокуляции с помощью ПЦР IMS было обнаружено 33 H pylori организмов / мл в стуле и 3 организма / мл в рвотных массах. 14
Чтобы установить методы отбора проб воздуха, мы распыляли H pylori (10 9 организмов / мл) в кожухе биобезопасности во время отбора проб. воздух с различной скоростью всасывания на пластины и фильтры.Культура могла обнаружить между 10 6 и 10 7 аэрозольных организмов, с наиболее тяжелыми рост происходит при скорости всасывания 1,7 м 3 / ч. Полоски фильтра были помещают в 100 мкл стерильной воды; половина была обработана ультразвуком. Фильтры затем прошли 6 циклов лизиса замораживанием-оттаиванием. Мы протестировали фильтрующие решения для гена 16s рРНК с использованием ПЦР, как описано в данном документе. Фторопоровые фильтры (Millipore, Бедфорд, Массачусетс) неизменно давал H pylori без обработка ультразвуком (чувствительность = 10 3 организмов) и были выбраны для этого учиться.
Снятие отпечатков пальцев с изолятов и подтверждение
Изоляты были подтверждены биохимически как H. pylori . (положительные на оксидазу, уреазу и каталазу) и по морфологии под световым микроскопом. Из каждой положительной культуры мы субкультивировали 1 колонию и амплифицировали ген рРНК H pylori 16s, как описано здесь. 18 Если ген 16s рРНК амплифицировался, мы затем сняли отпечатки пальцев с изолята, используя повторяющиеся экстрагенная палиндромная (REP) ПЦР, как описано ранее. 19 , 20 Повторяющиеся экстрагенные отпечатки пальцев палиндромной ПЦР изолятов рвотных масс, стул, воздух и слюна внутри и среди субъектов сравнивались.
Для подтверждения видовой принадлежности изоляты с уникальными отпечатками REP PCR были отправлены вслепую в Midi Labs (Ньюарк, Дел) для секвенирования первые 500 п.н. гена 16s рРНК. 21 Для ПЦР-положительные образцы, отрицательные по культуре, ампликон 16s рРНК длиной 139 п.н. был секвенирован. в нашей лаборатории.
Средний возраст 16 инфицированных субъектов составлял 38,7 года (диапазон: 22-53 года). лет) и 9 (56,3%) — женщины. Средний возраст 10 неинфицированных субъектов составляло 39,0 лет (диапазон 29-49 лет) и 6 (60%) составляли женщины.
Стул, собранный до введения слабительного у всех 16 инфицированных и 10 неинфицированных субъектов дали отрицательный результат посева на H. pylori .У 5 инфицированных, но не инфицированных, IMS PCR обнаружен ген H pylori 16s рРНК (Таблица 1).
От инфицированных субъектов мы собрали 121 катартический стул (в среднем на предмет, 7,6; диапазон, 4-13), из которых 115 были культивированы; минимум 4 образца были культивированы от каждого субъекта (таблица 2). Культуры от 2 субъектов не были оценены из-за чрезмерного роста грибков; культуры от 7 (50%) из оставшихся 14 субъектов дали H. pylori .Поздний стул при катарсисе был более вероятен, чем ранний стул для роста организма. Количество H pylori выделение стула было количественно определено в 16 из 37 стула с положительной культурой из 5 предметы; количество КОЕ / мл колебалось от 5 до 2125. У 1 субъекта, у которого Последовательные культуры стула были определены количественно, количество H pylori , по-видимому, увеличилось в более поздних отобранных образцах (500 КОЕ / мл в образце 5, 725 КОЕ / мл в образце 6 и 2124 КОЕ / мл в образце 7).
По данным IMS-ПЦР, у 11 из 16 субъектов был хотя бы 1 положительный результат на катартический стул. для H pylori . Стул выделяется как рано, так и поздно во время катарсиса с равной вероятностью был обнаружен фрагмент гена рРНК H pylori 16s. Среди 5 субъектов без ДНК H. pylori , обнаруженной во время катарсиса, у 2 была обнаружена ДНК H. pylori в стуле до катарсиса; Вдобавок субъект с отрицательными результатами ПЦР IMS имел положительный посев кала.Таким образом, стул 14 (88%) из 16 субъектов показал наличие потенциально жизнеспособного H. pylori . 2 субъекта без H pylori , обнаруженного в их стуле, были лицами с зараженными культуральными чашками.
Результаты рвоты и слюны
Мы собрали 85 образцов рвотных масс у инфицированных субъектов (в среднем на одного субъекта, 5.3; диапазон, 3-8). Пять образцов были заражены грибком и не могли быть оцененным; все остальные 80 образцов выросли на H. pylori . Культуры можно было количественно оценить по 38 образцам, представляющим 14 субъектов. Количество КОЕ на образец было высоким, более 1000 КОЕ / мл. рвотные массы в 31 образце и более 10000 КОЕ / мл в 11 образцах (диапазон, 10-30 000 КОЕ / мл). ПЦР с иммуномагнитным разделением выявила ген 16s рРНК H pylori во всех образцах. Незараженный субъект, который был вводили ипекакуальную рвоту 3 раза; все культуры и анализы ПЦР из этого субъекты были отрицательными для H. pylori .
Слюна перед рвотой была положительной на H. pylori посевом у 3 инфицированных субъектов (18,8%) и с помощью ПЦР IMS у 7 инфицированных субъектов (43,8%), в том числе 3 испытуемых с положительной культурой. Через полчаса после прекращение рвоты, культуры слюны были положительными на H. pylori от 9 инфицированных субъектов (56,3%), и результаты ПЦР IMS были положительный результат у 8 инфицированных субъектов (включая 7 субъектов с положительным культур). Количество H pylori в слюне после смерти имели тенденцию быть низкими (4 культуры с количественным определением имели значения в диапазоне от 50 до 500 КОЕ / мл).Все образцы слюны из неинфицированных контролей были отрицательными на H pylori как при культивировании, так и при ПЦР IMS. Слюна 1 неинфицированного субъекта перенесший рвоту снова оказался отрицательным для организма после рвоты.
Образцы воздуха, отобранные до начала рвоты, не дали H pylori при культивировании или ПЦР. После начала рвоты проба воздуха составила 0,3 м от 6 испытуемых выросло H. pylori. В 5 из них В 6 случаях положительный посев совпал с первым эпизодом рвоты; в шестом случае позитивная культура совпала с пятым поединком рвоты.В 2 случаях с положительной культурой воздуха фильтр был также положительный по результатам ПЦР. Фильтры были дополнительно положительными из 2 случаев с отрицательные воздушные культуры. Ни один образец, полученный на расстоянии 1,2 м от субъекта, не дал H. pylori .
Отпечатки пальцев и идентификация штаммов
Для снятие отпечатков пальцев у 14 из 16 субъектов; У 2 субъектов были изоляты из всех 4 типов образцов (стул, рвота, воздух и слюна), 4 из 3 типов, 4 из 2-х типов и 4 только из 1-го типа.Отпечатки пальцев у разных испытуемых различались, в том числе между парой жена-муж (TR26 и TR31), но были идентичны внутри субъектов (рисунок 1).
Подтверждены все 14 уникальных изолятов REP ПЦР, полученных от 14 субъектов. как H pylori путем секвенирования 500 п.н. рРНК 16s ген с отличием от референсного штамма не более чем на 0,82%. Для IMS ПЦР – положительные, отрицательные по культуре образцы, последовательность ампликона 16s рРНК соответствует H pylori в 14 из 20 образцов (Таблица 1).Для остальных 6 положительных результатов ПЦР IMS образцы с отрицательной культурой, мы не смогли повторно амплифицировать ДНК, достаточную для выполнения анализ последовательности.
В этом исследовании мы обнаружили, что H. pylori может быть культивированы как из рвотных масс, так и из стула здоровых человек, инфицированных H. pylori– человек. Helicobacter pylori был часто присутствует в больших количествах в рвотных массах, до 30000 КОЕ / мл образца. Поскольку чувствительность нашей культуры рвотных масс была между 0.1% и 1%, по нашим оценкам, более 10 6 организмов могут присутствовать в на каждый миллилитр вырвало. Таким образом, рвота может быть мощным механизмом для выделения миллионов H. pylori в окружающую среду. Несмотря на то что закономерности передачи болезни через рвоту систематически не изучено, можно было бы ожидать, что факторы риска передачи рвотными массами будут аналогичными. зарегистрированным для H pylori , например, близкоживущим кварталы, много братьев и сестер, а также плохие санитарно-гигиенические условия в доме. 23 , 24 Немногочисленные задокументированные случаи острой инфекции H. pylori подтверждают передачу через желудочно-кишечный тракт. Митчелл и коллеги 25 сообщили об острой инфекции H. pylori у годовалых близнецов через 3 недели после устойчивой рвота у их H. pylori– инфицированных мать. Вторая острая инфекция была зарегистрирована у исследователя, который обычно обработанный желудочный сок. 26 Возможно желудочно-оральный Также сообщалось о передаче H. pylori после реанимация «рот в рот» инфицированного человека, которого рвало. 27
Рвота также разошлась H pylori в воздухе. Хотя другие патогены желудочно-кишечного тракта, особенно маленькие, круглые, структурированные вирусы, похожие на норволк, могут передаваться аэрозолем Мы сомневаемся, что во время эпизодов рвоты это обычный способ передачи H pylori . 28 , 29 Кратковременность зараженного аэрозоля (в первые минуты первого эпизод рвоты) и ограниченное распространение организмов (менее 1.2 м) делает маловероятным воздействие аэрозоля.
ДНК Helicobacter pylori часто обнаруживалась усилен как из слюны, так и из зубного налета, 10 , 11,30 но очень редко H. pylori культивировали из рот. 9 , 30 , 31 ср. извлечено H. pylori из слюны до рвоты у 19% субъектов и после рвоты у 50% субъектов. На сегодняшний день мало эпидемиологические данные, подтверждающие орально-оральную передачу.Стоматологи имеют аналогичная распространенность H. pylori в среднем по популяции. 32 Большинство супружеских пар демонстрируют слабое согласие инфекции или типа штамма 33 , 34 и пролеченные пациенты не заражаются повторно от их нелеченых инфицированных супругов. 35 Таким образом, еще предстоит выяснить, будут ли организмы в во рту, которые обычно присутствовали в небольших количествах по сравнению с vomitus, представляют собой значительный источник передачи.
Helicobacter pylori культивировали менее надежно от стула, чем от рвоты. Частично это может быть связано с более низкой чувствительностью посева стула. Однако у 50% пациентов H pylori можно было культивировать из фекалий в условиях быстрого желудочно-кишечного тракта. тракт транзитный.
Можно утверждать, что диарея, вызванная слабительным и рвотным средством, рвота не имитирует гастроэнтерит. Вероятно, что H pylori необходимо быстро выводить из проксимальных отделов желудочно-кишечного тракта. тракт жизнеспособен в стуле.Действительно, отсутствие регуляторных генов у H pylori означает, что организм не может выжить долго. периоды вне его нормальной окружающей среды. 36 Тем не менее, только патогены, поражающие тонкий кишечник, вызывают водянистую диарею, наблюдаемую при введение фосфата натрия. В этом случае колитические формы гастроэнтерита и гастроэнтерит с относительно более медленным кишечным транзитом может не передавать H pylori . С другой стороны, рвота загрязнен большим количеством H. pylori , что он трудно представить себе обстоятельства, при которых он не был бы заразным.Это также поднимает вопрос о том, могут ли люди с хронической регургитацией желудка или частая рвота из-за других заболеваний являются передатчиками высокого риска H. pylori .
В этом исследовании мы оценивали только здоровых бессимптомных взрослых и обнаружили: что жизнеспособный H pylori был выделен в окружающую среду всеми зараженными предметами. Учитывая большое количество зараженных хостов во всем мире, примечательно, что многие из них остаются незараженными.Препятствия для заражения — оба присущие хозяину (например, высокая кислотность желудочного сока, хорошее питание) и внешние к хозяину (например, бытовая и общественная санитария и личная гигиена) — может объяснить это явление. Мы постулируем, что снижение заболеваемости гастроэнтеритом происходит по мере того, как страны переходят от развивающихся к развитым может также способствовать наблюдаемому снижению инфицирования H. pylori в промышленно развитых странах. 37 , 38 Эпидемиологические исследования в домах лиц с желудочно-кишечными заболевание тракта может дать важные ключи к пониманию и контролю передачи H. pylori .
1.Parsonnet J. Helicobacter pylori : размер проблемы. Gut. 1998; 43: S6-S9.Google Scholar2.Megraud F. Передача Helicobacter pylori : фекально-оральный по сравнению с орально-оральным. Aliment Pharmacol Ther. 1995; 9 (приложение 2): 85-92. Google Scholar 3. Малати Х.М., Грэм Д.Ю., Кляйн П.Д., Эванс Д.Г., Адам Э., Эванс Д. Передача инфекции Helicobacter pylori : исследования в семьях здоровых людей. Scand J Gastroenterol. 1991; 26: 927-932.Google Scholar4.Axon ATR. Коробка передач H pylori : какая теория подходит факты? евро J Gastroenterol Hepatol. 1996; 8: 1-2. Google Scholar 5. Гроув Д.И., Кутсуридис Г., Cummins AG. Сравнение посева, гистопатологии и анализа уреазы для постановки диагноза из Helicobacter pylori гастрит и восприимчивость к амоксициллину, кларитромицину, метронидазолу и тетрациклину. Патология. 1998; 30: 183-187.Google Scholar 6. Лоффельд Р. Дж., Стобберинг Э., Флендриг Дж. А., Арендс Дж. У. Helicobacter pylori в образцах биопсии желудка: сравнение культуры, модифицированного окрашивания Гимзы и иммуногистохимии: a ретроспективное исследование. J Pathol. 1991; 165: 69-73.Google Scholar7.Thomas JE, Gibson GR, Darboe MK, Dale A, Weaver LT. Выделение Helicobacter pylori от человека кал. Ланцет. , 1992; 340: 1194-1195.Google Scholar8. Kelly SM, Pitcher MC, Farmery SM, Gibson GR. Выделение Helicobacter pylori из кала пациентов с диспепсией в Соединенном Королевстве. Гастроэнтерология. 1994; 107: 1671-1674.Google Scholar9.Madinier IM, Fosse TM, Monteil RA. Оральное носительство Helicobacter pylori : обзор. J Periodontol. 1997; 68: 2-6. Google Scholar 10. Люман В., Алкоут А.М., Блэквелл С.К., Вейр Д.М., Пламер К.Р. Helicobacter pylori во рту: отрицательно изоляция от зубного налета и слюны. евро J Gastroenterol Hepatol. 1996; 8: 11-14. Google Scholar 11. Mapstone NP, Lynch DA, Lewis FA. и другие. Идентификация ДНК Helicobacter pylori во рту и желудке больных гастритом с помощью ПЦР. J Clin Pathol. 1993; 46: 540-543.Google Scholar 12.Li C, Ha T, Ferguson DA. и другие. Недавно разработанный ПЦР-анализ H pylori в Биопсия желудка, слюна и фекалии: данные о высокой распространенности H pylori в слюне подтверждают оральную передачу. Dig Dis Sci. 1996; 41: 2142-2149.Google Scholar 13. Энрот Х., Энгстранд Л. Иммуномагнитное разделение и ПЦР для обнаружения Helicobacter pylori в образцах воды и стула. J Clin Microbiol. 1995; 33: 2162-2165. Google Scholar. 14. Ватанабе Т., Томита С., Кудо М. и другие. Обнаружение гена Helicobacter pylori с помощью иммуномагнитной сепарации на основе полимеразной цепной реакции в кале. Scand J Gastroenterol. 1998; 33: 1140-1143. Google Scholar. 15. Лау Д., Ян С., Шмуели Х., Тернер К., Парсоннет Дж. Обнаружение Helicobacter pylori иммуномагнитным методом. разделение в клинических матрицах [аннотация]. Гастроэнтерология. 1998; 114: G805.Google Scholar16.Replogle ML, Glaser SL, Hiatt RA, Parsonnet J. Биологический пол как фактор риска для Helicobacter pylori у здоровых молодых людей. Am J Epidemiol. 1995; 142: 856-863.Google Scholar 17.Информация о лекарствах в американской больнице. Бетесда, Мэриленд: Совет директоров Американского общества здравоохранения. Системные фармацевты; 1997.
18. Weiss J, Mecca J, Da Silva E, Gassner D. Сравнение ПЦР и других диагностических методов для обнаружения инфекции Helicobacter pylori у пациентов с диспепсией. J Clin Microbiol. 1994; 32: 1663-1668.Google Scholar 19. Go MF, Chan KY, Versalovic J, Koeuth T., Graham DY, Lupski JR. Кластерный анализ генома Helicobacter pylori ДНК-отпечатки пальцев позволяют предположить ассоциации, специфичные для гастродуоденального заболевания. Scand J Gastroenterol. , 1995; 30: 640-646.Google Scholar, 20.Версалович Дж., Коут Т., Лупски Дж. Р. Распределение повторяющихся последовательностей ДНК у эубактерий и применение дактилоскопии бактериальных геномов. Nucleic Acids Res. 1991; 19: 6823-6831.Google Scholar21.Ludwig W, Schleifer KH. Бактериальная филогения на основе анализа последовательности 16S и 23S рРНК. FEMS Microbiol Rev. 1994; 15: 155-173. Google Scholar 22.Fleiss JL. Статистические методы для ставок и пропорций. 2-е изд. Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: John Wiley & Sons Inc; 1981.
23.Уитакер С.Дж., Дубиль А.Дж., Галпин О.П. Социально-географические факторы риска у Helicobacter pylori инфекция. Epidemiol Infect. 1993; 111: 63-70.Google Scholar24.Тейлор Д. Н., Парсоннет Дж. Эпидемиология и естественная история Helicobacter pylori инфекция. В: Blaser MJ, Smith PD, Ravdin JI, Greenberg HB, Guerrant RL, eds. Инфекции желудочно-кишечного тракта . Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Raven Press; 1995: 551-564.
25.Mitchell JD, Mitchell HM, Tobias V. Острая инфекция Helicobacter pylori в младенец, связанный с язвой желудка и серологическими признаками внутрисемейного коробка передач. Am J Gastroenterol. , 1992; 87: 382-386. Google Scholar, 26, Собала Г.М., Крэбтри Дж. Э., Диксон М. Ф. и другие. Острая инфекция, вызванная Helicobacter pylori : клиническая картина особенности, местный и системный иммунный ответ, гистология слизистой оболочки желудка и концентрация аскорбиновой кислоты в желудочном соке. Gut. 1991; 32: 1415-1418.Google Scholar27.Figura N. Реанимация «рот в рот» и инфекция Helicobacter pylori . Ланцет. 1996; 347: 1342. Google Scholar 28. Chadwick PR, McCann R.Передача небольшого круглого структурированного вируса при рвоте во время госпитальная вспышка гастроэнтерита. J Hosp Infect. 1994; 26: 251-259.Google Scholar 29.Caul EO. Вирусы небольшой круглой структуры: воздушно-капельная передача и госпитальный контроль. Ланцет. 1994; 343: 1240-1242.Google Scholar 30. Крайден С., Фукса М., Андерсон Дж. и другие. Исследование биопсии желудка человека, слюны и зубного налета на предмет Campylobacter pylori . J Clin Microbiol. 1989; 27: 1397-1398.Google Scholar31.Фергюсон Д.А., Ли К., Патель Н.Р., Мейберри В.Р., Чи Д.С., Томас Э. Выделение Helicobacter pylori из слюны. J Clin Microbiol. 1993; 31: 2802-2804.Google Scholar 32. Малати Х.М., Эванс Д.И., Абрамович К., Эванс Д.Г., Грэм Д.Ю. Helicobacter pylori Инфекция у стоматологических работников: сероэпидемиологическое исследование. Am J Gastroenterol. 1992; 87: 1728-1731.Google Scholar 33. Perez-Perez GI, Witkin SS, Decker MD, Blaser MJ. Распространенность инфекции Helicobacter pylori в парах. J Clin Microbiol. 1991; 29: 642-644.Google Scholar 34. Georgopoulos SD, Mentis AF, Spiliadis CA. и другие. Инфекция Helicobacter pylori у супругов пациенты с язвой двенадцатиперстной кишки и сравнение генов рибосомной РНК. Gut. 1996; 39: 634-638. Google Scholar. 35. Катлер А.Ф., Шуберт Т.Т. Факторы, влияющие на пациента Helicobacter pylori эрадикация тройной терапией. Am J Gastroenterol. 1993; 88: 505-509.Google Scholar, 36. Tomb JF, White O, Kerlavage AR.и другие. Полная последовательность генома возбудителя желудочного сока Helicobacter pylori . Природа. 1997; 388: 539-547.Google Scholar 37.Черный RE, Lanata CF. Эпидемиология диарейных заболеваний в развивающихся странах. В: Blaser MJ, Smith PD, Ravdin JI, Greenberg HB, Guerrant RL, eds. Инфекции желудочно-кишечного тракта. Нью-Йорк, Нью-Йорк: Raven Press; 1995: 13-36.
38.Токс Р.В., Коэн МЛ. Эпидемиология диарейных заболеваний в развитых странах.В: Blaser MJ, Smith PD, Ravdin JI, Greenberg HB, Guerrant RL, eds. Инфекции желудочно-кишечного тракта . Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Raven Press; 1995: 37-52.
анализов стула быстро предсказывают устойчивость к антибиотикам H. pylori
Использование образцов стула для проверки устойчивости к антибиотикам Helicobacter pylori дает результаты, очень похожие на результаты биопсии желудка, что позволяет предположить, что, по мнению исследователей, анализ стула может быть более безопасным, удобным и более экономичным вариантом.
Прямое тестирование мутаций, связанных с устойчивостью, с использованием секвенирования следующего поколения (NGS) показало 92% соответствия между двумя типами образцов, со 100% техническим успехом среди положительных образцов стула с полимеразной цепной реакцией (ПЦР), ведущий автор Стивен Сообщили Мосс, доктор медицины из Университета Брауна, Провиденс, Род-Айленд, и его коллеги.
«Уровень эрадикации H. pylori снизился в основном из-за роста устойчивости к противомикробным препаратам во всем мире», — сказал Мосс на ежегодном собрании Американского колледжа гастроэнтерологии.«Следовательно, существует потребность в быстром, точном и надежном тестировании на устойчивость к антибиотикам».
По словам Мосса, тестирование биопсии желудка на молекулярную резистентность дает результаты, аналогичные результатам культурального тестирования биопсии желудка, но сбор эндоскопических образцов остается неудобным и относительно дорогостоящим, поэтому «во многих практиках желудочно-кишечного тракта он обычно не проводится.
«Остается неясным, возможны ли надежные испытания на резистентность с помощью NGS по образцам стула», — сказал Мосс.
Чтобы изучить эту возможность, Мосс и его коллеги набрали 262 пациента, которым была назначена верхняя эндоскопия в четырех центрах США. У каждого пациента были взяты две биопсии желудка, и в течение 2 недель после процедуры, до начала терапии анти- H pylori , был взят один образец стула.
Для образцов биопсии желудка положительный результат H. pylori был подтвержден с помощью ПЦР, тогда как положительный результат в образцах стула был подтвержден как тестированием фекального антигена, так и ПЦР.После подтверждения был проведен NGS со скринингом мутаций, связанных с устойчивостью к шести обычно используемым антибиотикам: кларитромицину, левофлоксацину, метронидазолу, тетрациклину, амоксициллину и рифабутину.
Из 262 пациентов 73 дали положительный результат на H. pylori при анализе стула; однако у 2 из этих пациентов была недостаточная желудочная ДНК для анализа, в результате чего в анализируемом наборе данных остался 71 пациент. В этой группе образцы от 50 пациентов (70,4%) имели по крайней мере одну ассоциативную мутацию устойчивости.
Среди всех 71 человека 65 пациентов (91,5%) имели полностью совпадающие результаты между двумя типами выборок. В четырех из шести несогласованных случаев было только одно различие в мутациях, связанных с антибиотиками. Согласованность варьировала от 89% для мутаций метронидазола до 100% для мутаций тетрациклина, амоксициллина и рифабутина.
«Теперь можно быстро получить данные о чувствительности без эндоскопии», — заключил Мосс. «Использование NGS для определения H.pylori с использованием стула позволяет избежать затрат, неудобств и рисков, связанных с составлением профиля устойчивости при эндоскопии ».
Мосс отметил, что стоимость теста на стул через спонсора исследования American Molecular Laboratories составляет около 450 долларов, и что компания «работает с различными страховыми компаниями, чтобы попытаться получить компенсацию [теста]».
Для случаев инфекции H. pylori без результатов тестирования на резистентность Мосс рекомендовал лечение первой линии с четырехкратной терапией на основе висмута; тем не менее, он отметил, что «большинство гастроэнтерологов во всех сферах практики не измеряют уровень успешности своей эрадикации…. так что действительно трудно понять, действительно ли ваше предположение является подходящим лечением. «
Д-р Лукаш Квапис
По словам Лукаша Кваписа, доктора медицины из Медицинского колледжа Бейлора, Хьюстон, Техас, результаты согласования «обнадеживают» и предполагают, что анализ стула «может быть намного проще для пациента и врача», чтобы найти способы искоренить болезнь. Инфекция H. pylori .
Квапис предсказал, что потребуются дополнительные успешные исследования, а также реальные данные, чтобы обратить врачей на новый подход.Он предположил, что переход может быть постепенным, как, например, введение теста на кальпротектин в фекалиях.
«Я не знаю, скажет ли вам одно единственное определяющее исследование:« Хорошо, мы все должны использовать это [тестирование сопротивления стула] », — сказал он. «Это происходит со временем — в течение двух или трех лет, я думаю, с положительными результатами».
Исследование было поддержано Американскими молекулярными лабораториями.