Спайки брюшной полости: история изучения, классификация, патогенез (обзор литературы)

Операция без последствий — Сибирь |

Interfax-Russia.ru — Сибирские химики создали новый материал для профилактики спаечной болезни. По своей эффективности он превосходит зарубежные аналоги и стоит в 10 раз дешевле.

Группа ученых из Томского государственного университета (ТГУ), Института проблем химико-энергетических технологий СО РАН и Сибирского государственного медицинского университета (СибГМУ) разработала новый высокоэффективный материал для профилактики спаечной болезни — осложнения, которое возникает у человека после длительных воспалительных процессов и операций на внутренних органах.

«Новый противоспаечный материал создан на основе отечественных реагентов из возобновляемого природного сырья — производных целлюлозы. Биоразлагаемые пленки модифицированы азотсодержащими гетероциклическими соединениями (гетероциклами — ИФ), которые используются при производстве лекарственных препаратов и обладают противовоспалительным действием», — сообщили Interfax-Russia.

ru в пресс-службе ТГУ.

Эффективность нового противоспаечного материала ученые проверили в ходе экспериментов на крысах в Центральной научно-исследовательской лаборатории (ЦНИЛ) СибГМУ.

«Хирургическое вмешательство проводилось 2 группам лабораторных животных, в первой использовались противоспаечные материалы, а во второй (контрольной) — нет. Во второй группе у 80% грызунов развилась спаечная болезнь, в первой группе такое осложнение было полностью исключено», — уточнили в университете.

Также в ходе исследования специалисты выяснили, что период биораспада пленок составляет 5 дней.

«Новый материал нетоксичен и обладает противовоспалительным действием, что значительно снижает риск развития гнойных процессов и ряда других осложнений в послеоперационном периоде», — добавили в пресс-службе ТГУ.

При этом стоимость нового противоспаечного материала составит менее $10 за пленку, в то время как иностранные аналоги, произведенные в США и Европе, сегодня можно купить минимум за $115 за штуку (размером 13х15 сантиметров).

Отметим, что в марте 2021 года томские ученые получили патент на свой материал. По информации вуза, коммерциализацией продукта будет заниматься Инжиниринговый химико-технологический центр ТГУ.

«Сейчас химики продолжают исследования нового материала. В частности, они намерены варьировать время биораспада противоспаченых пленок. Это даст хирургам возможность выбора материала с учетом особенностей проводимых операций и времени, необходимого на реабилитацию пациента», — добавили в Томском госуниверситете.

Спайками называют тонкие «тяжи» или «перемычки» из рубцовой ткани, образующиеся между соседними органами и тканями. В норме последние имеют скользкую и влажную поверхность, что позволяет им легко смещаться друг относительно друга во время движения тела и при перистальтике. Спайки же могут смещать органы и ткани относительно их нормальной локализации и перемещать их в новое, неестественное положение. Причиной образования таких «стяжек», как правило, является хроническое воспаление или травма, к которой относится и хирургическое вмешательство.

С помощью спаек организм как бы пытается ограничить распространение инфекции или локализовать воспаление в результате хирургической травмы, блокируя рубцами его очаг. По сути, это естественный процесс заживления, который, однако, также может привести к тяжелым последствиям, как, например, бесплодие (у женщин) или кишечная непроходимость (при спаечном процессе в брюшной полости). Также пациенты со спаечной болезнью могут страдать от различных болей в животе, метеоризма, запоров. Если спаечный процесс доставляет значительный дискомфорт, человеку проводят хирургическое лечение.

«Спаечная болезнь — действительно одна из серьезнейших проблем в современной хирургии. Поскольку количество операций на брюшной полости увеличивается, мы становимся все более оснащенными для лечения тяжелых, в том числе онкологических, пациентов, выполняем обширные длительные операции, то и количество пациентов со спаечной болезнью неуклонно растет», — сообщил Interfax-Russia.ru заведующий клиникой общей хирургии СибГМУ, врач-хирург, кандидат медицинских наук Игорь Клиновицкий.

К развитию спаечной болезни, по его словам, может привести любая операция на внутренних органах, которая сопровождается вскрытием брюшной полости.

«Это касается и так называемых традиционных лапаротомных доступов, и современных лапароскопических операций, которые, тем не менее, в силу своей меньшей травматичности, безусловно, вызывают менее выраженный спаечный процесс», — уточнил Клиновицкий.

Также, по словам хирурга, развитие спаечного процесса во многом зависит и от индивидуальных свойств организма. Есть люди, которым свойственно образование спаек, а есть пациенты, у кого даже после большого количества операций на брюшной полости практически нет никаких «стяжек». К слову, не допустить образования «стяжек» между внутренними органами позволяет и скорое возобновление двигательной активности после операции. Поэтому во многих стационарах пациентам рекомендуется чаще вставать с постели и ходить по коридорам больницы. Как правило, это касается тех больных, кто перенес щадящую лапароскопическую операцию и удовлетворительно себя чувствует.

«На сегодняшний момент существует достаточно узкая линейка препаратов, которая применяется для профилактики спаечной болезни при операциях на брюшной полости. Это различные виды пленок, материалов, которые в жидком виде распыляются в брюшной полости», — рассказал собеседник Interfax-Russia.ru.

В то же время, как отметил врач, эффективность таких препаратов и материалов не доказана.

«Мы не очень хорошо понимаем патогенез спайкообразования, те звенья, те мишени, на которые мы могли бы действовать, чтобы угнетать спаечный процесс. Мы надеемся, что наши коллеги — биологи, физиологи патофизиологи, химики и биохимики — смогут помочь нам и в первую очередь помочь больным, которые страдают от этой тяжелой патологии. Если бы нам удалось выработать алгоритм профилактики или помощи пациентам с уже состоявшейся спаечной болезнью, которых приходится оперировать повторно, это был бы серьезный прорыв в современной хирургии», — сказал он.

Висцеральная терапия в борьбе со спайками кишечника.

Спайки кишечника («спаечная болезнь»)

 

Здоровье — дороже золота.   Шекспир У.

Висцеральная терапия в борьбе со спайками кишечника. 

Спайки кишечника («спаечная болезнь») — очень частое послеоперационное осложнение. Оно может протекать бессимптомно, и проявиться лишь спустя время, но о решении проблемы нужно задумываться сразу, так как спайки в кишечнике приводят к грозным последствиям, начиная от резекции части кишки, до летального исхода в запущенных ситуациях.

По статистике 25% оперативных вмешательств с проникновением в брюшную полость заканчиваются образованием спаек. Учитывая, что операционное вмешательство — не единственная причина образования спаек, фиброзные тяжи при лапароскопии можно обнаружить у каждого третьего человека. Хитрость спаечного процесса в том, что он может проявить себя спустя год после травмы, операции или перенесенного инфекционного процесса.

Спаечный процесс или «склеивание кишок» в брюшной полости – это процесс формирования соединительнотканных тяжей(нитей) между листками серозной оболочки. В брюшной полости серозная оболочка представлена брюшиной. Последняя делится на париетальную (покрывает стенки брюшной полости) и висцеральную (покрывает орган). Спайки образуются как между органами (висцеро-висцеро), так и между органом и стенкой (парието-висцеро).

 Основные причины спаек в кишечнике:

 • Перитонит (особенно гемоперитонит – вовремя не санированная брюшная полость), приводит к тому, что на кровяной сгусток начинают воздействовать другие защитные системы организма (в том числе лизис лейкоцитами), в последующем замещая его соединительной тканью, также кровь — прекрасная питательная среда для микроорганизмов и, следовательно, начальный этап для развития инфекционного процесса).

• Получение любых травм живота (не обязательно проникающих, достаточно тупой травмы живота, приводящей к повреждению стенки кишечника).

• Воспаление в брюшине, вследствие перфорации язвы желудка и попадания его содержимого на брюшину.

• Воспаление половых органов (особенно у женщин, инфекция по восходящему пути, в частности сальпингоофорит).

• Наследственность.(Связанно с усиленной выработкой ферментов, отвечающих за образование соединительной ткани).

• Воспаление в кишечнике, например, в аппендиксе (аппендицит).

• Оперативные вмешательства в брюшную полость (особенно, кесарево сечение).

 Возможные осложнения.

 • Кишечная непроходимость, как острая, так и вялотекущая (хроническая) форма (приводит к сильной интоксикации организма).

• Некроз петли кишечника (вследствие нарушения кровоснабжения стенки петли кишечника).

 Жалобы (Клинические проявления).

Спаечный процесс может протекать бессимптомно, или характеризоваться следующими признаками:

• Болевые ощущения при резких движениях, особенно в области послеоперационного рубца.

• Диспепсический синдром (тяжесть, переполнение желудка, склонность к запорам)

• Нарушение перистальтики кишечника (отсутствие актов дефекации более двух суток) – признак острой непроходимости кишечника.

 Диагностика.

• Клинический анализ крови (акцент на СОЭ, лейкоциты).

• УЗИ органов брюшной полости (дает возможность визуализировать спайки)

• Контрастная рентгенография (позволяет увидеть патологические разрастания соединительной ткани и  дефекты наполнения кишечника).

• Лапароскопия (позволяет более детально рассмотреть петли кишечника – опять же, это операционное вмешательство, но малоинвазивное).

 Лечение

Оперативное лечение – начиная срединной лапаротомией, заканчивая лапароскопией с лазерным иссечением спаек. Также параллельно назначается медикаментозное лечение (растворы, восстанавливающие водно-электролитный баланс, ферменты, гипертонические клизмы, антихолинэстеразные препараты).

Висцеральная терапия — подразумевает использование мануальных, остеопатических техник, с исключением оперативного вмешательства в брюшную полость и минимальным применением лекарственных средств (только в далеко зашедших случаях). Методик много, главный их принцип — направить силы организма на усиление перистальтики кишечника – так как она приводит петли кишечника в движение, происходит разрыв тяжей (главное – дозированное воздействие, «не переборщить», так как излишняя перистальтика с фиксированными петлями кишечника может привести к его завороту, далее защемлению, нарушению кровоснабжения, некрозу). Следующий основной принцип – привести петли кишечника в движение механически, мануально, сдвигами их в разных плоскостях, опять же разрывая спайки. И далее реабилитационное лечение, направленное на восстановление пациента, то есть массаж живота, направленный на улучшение кровообращения, нормированная диета, лечебная физкультура.

Диета, направленная на снижение нагрузки на органы пищеварения (исключение острых, жареных, маринованных блюд), обязательно дробное питание, в одно и тоже время, порции по 200-300 гр. («Нельзя угодничать никому, даже собственному чреву» Г. Ратнер).

Лечебная физкультура. Состоит в том, чтобы, используя биомеханику организма, приводить петли кишечника к смещению и, следовательно, отрыву спаек от стенок брюшной полости или рядом расположенной петли кишечника. Упражнения разнообразные, в исполнении простые, и, кроме оказываемого эффекта на спайки, носят общеукрепляющий характер.

При далеко зашедших процессах, параллельно висцеральной терапии назначается ферментотерапия (лидаза (гиалуронидаза), трипсин, хемотрипсин).

Спайки лечатся довольно быстро и эффективно, и страшных последствий, вызванных ими, можно легко избежать, главное вовремя обратиться к специалисту, не допуская развития осложнений. («О мудрости своего организма и о собственной глупости люди начинают вспоминать только во время болезни» — Г. Ратнер).

Стожаров С.С., ведущий специалист центра Атлант, член Ассоциации массажистов РБ, педиатр, ортопед, остеопат

Спаечная болезнь — это… Что такое Спаечная болезнь?

заболевание, возникающее при образовании спаек и сращений в брюшной полости в результате оперативных вмешательств, травм, а также воздействия инородных тел и некоторых лекарственных веществ. Развитию С. б. часто предшествуют аппендицит, воспалительные заболевания органов малого таза, кишечная непроходимость, перитонит. Возникновению С. б. способствуют механические повреждения брюшины и серозных оболочек органов брюшной полости, воздействие на них йода, спирта, антибиотиков и антисептиков талька. Спайки формируются также после кровоизлияний в брюшную полость при инфицировании излившейся крови, вокруг инородных тел, тампонов, дренажей. При длительном парезе кишечника после травмы живота спайки образуются в результате соприкосновения поврежденных серозных поверхностей органов брюшной полости и париетальной брюшины. Особенно выраженным спаечный процесс бывает после перенесенного перитонита. Спайки в брюшной полости вызывают деформацию кишечника и нарушение эвакуации кишечного содержимого. Течение С. б. может быть острым или хроническим. При острой форме С. б., являющейся по сути спаечной непроходимостью кишечника (Непроходимость кишечника), внезапно или постепенно появляются боли в животе, сопровождающиеся усилением перистальтики, рвотой, нарушением отхождения кишечного содержимого, повышением температуры тела и лейкоцитозом. Боли в животе могут постоянно нарастать. При этих явлениях больного необходимо госпитализировать в хирургическое отделение. При хронической форме С. б. болевые приступы и ее клинические проявления возникают периодически. Больной жалуется на боли в животе, чувство тяжести и распирания, запоры. Диагностика С. б. основывается на данных анамнеза — оперативные вмешательства на органах брюшной полости, травма живота, а также на клинических проявлениях кишечной непроходимости — острой или хронической, осложняющей спаечный процесс в брюшной полости. При осмотре передней брюшной стенки, как правило, выявляются послеоперационные рубцы. Из объективных методов клинического обследования наряду с лабораторными показателями ведущее место занимает рентгенологическое исследование. При обзорной рентгенографии брюшной полости обнаруживают пневматизацию кишечных петель и уровни жидкости в них. При исследовании с использованием рентгеноконтрастных веществ определяется замедленное прохождение вещества по желудочно-кишечному тракту, деформации петель кишок, изменения их положения и контуров, участки фиксации в местах сращения с передней брюшной стенкой и органами брюшной полости. Для выявления характера спаечного процесса, суживающего тонкую кишку, взвесь сульфата бария вводят через зонд. Для исследования толстой кишки используют ирригоскопию (Ирригоскопия). Консервативное лечение включает промывание желудка, применение очистительных и сифонных клизм, назначение противовоспалительных и спазмолитических средств. При неразрешающейся кишечной непроходимости показана экстренная операция.

Прогноз при С. б. всегда серьезный. При единичных спайках он более благоприятный.

Профилактика С. б. заключается в проведении плановых оперативных вмешательств на органах брюшной полости при их патологии в так называемом холодном периоде. При травме и острых заболеваниях органов брюшной полости оперативное вмешательство должно осуществляться в наиболее ранние сроки. В связи с тем, что тампоны и грубые дренажи способствуют возникновению спаек в брюшной полости, применять их рекомендуется только по строгим показаниям. При лечении перитонита развитие спаечного процесса предупреждает применение перитонеального диализа, своевременное удаление дренажей. Препятствует спаечному процессу в брюшной полости раннее вставание больного и активное ведение его в послеоперационном периоде. Библиогр.: Оперативная хирургия, под ред. И. Литтмана, пер. с венгер., с. 309, Будапешт, 1985, Симонян К.С. Спаечная болезнь, М., 1966, библиогр.; Чухриенко Д.П., Белый И.С. и Бондаренко В.А. Спаечная болезнь, Киев, 1972.

Диагностика и лечение спаек брюшной полости

При диагностике спаек брюшной полости важно собрать тщательный клинический анамнез, чтобы подтвердить подозрения. Это очень важно, потому что достоверный диагноз не будет получен никакими другими способами, кроме интраоперационного.

Изображение предоставлено: flywish / Shutterstock.com

Спайки могут возникать в любом месте тела, но чаще всего встречаются в желудочно-кишечном тракте, сердце и тазу.Повреждение ткани в результате хирургического вмешательства, травмы, инфекции или облучения запускает процесс заживления клеток в организме, таких как макрофаги и фибробласты.

Этот процесс приводит к образованию полос рубцовой ткани или спаек, которые создают поверхность раздела между тканями, которые обычно не соединяются вместе. Хотя сами по себе эти спайки безболезненны, они вызывают осложнения, связанные с спаечным процессом, которые могут вызывать боль и непроходимость, что в некоторых случаях может быть потенциально опасным для жизни.

Диагностика спаек брюшной полости обычно проводится с помощью лапароскопии. Эта процедура включает использование камеры для визуализации органов в брюшной полости. Обычные тесты, такие как рентген, компьютерная томография и анализ крови, бесполезны при диагностике самого спайки. Тем не менее, они являются отличным выбором для выявления осложнений, связанных с адгезией, таких как непроходимость кишечника, которая ограничивает движение пищи, жидкости, стула и кишечных газов.

Лечение спаек живота

Лечение спаек в брюшной полости во многом зависит от проблем, связанных с адгезией, местоположения спаек и степени их образования.Для лечения спаек брюшной полости используются два основных хирургических метода: лапаротомия и лапароскопия. При лапароскопии делается небольшой разрез, с помощью камеры разрезаются и освобождаются спайки.

Этот метод известен как адгезиолиз и проводится под общим наркозом. Он показан пациентам с непроходимостью тонкой кишки и отсутствием признаков воспаления брюшины, гемодинамической нестабильности, ишемии или перфорации кишечника.

При лапаротомии делается больший разрез, чтобы увидеть спаечные ткани и обработать их.Этот метод также известен как открытый адгезиолиз и связан с потенциальными осложнениями, такими как острая почечная недостаточность, сепсис, инфаркт миокарда, дыхательная недостаточность и раневые инфекции. Более того, парадоксальная взаимосвязь между хирургическим лечением спаек и хирургическим вмешательством как наиболее частой причиной спаек делает лечение спаек особенно трудным.

Профилактика спаек живота

Профилактика спаек в брюшной полости — непростая задача.Однако хирургические методы могут эффективно минимизировать возникновение спаек брюшной полости. Для этого подходит лапароскопическая операция, потому что разрезы меньше, чем при лапаротомии.

Если по каким-либо причинам лапароскопическая операция не может быть проведена и требуется открытый адгезиолиз, между органами и зоной разреза помещается восковая пленка, чтобы предотвратить образование новых спаек. Пленка впитывается организмом в течение недели и при этом увлажняет органы.Это предотвращает обезвоживание, которое, как подозревают, является причиной образования спаек.

Не было опубликовано никаких исследований, подтверждающих, что питание или диета являются защитными или причинными факторами развития спаек в брюшной полости. Однако другие шаги, которые могут быть предприняты во время операции для снижения заболеваемости, — это минимизация времени операции и периодическое увлажнение области послеоперационного разреза физиологическим раствором, тампонами и салфетками.

Кроме того, перчатки без латекса и крахмала, а также бережное обращение с органами и тканями показали многообещающие результаты с точки зрения снижения шансов развития послеоперационных спаек брюшной полости.

Дополнительная литература

Выяснение фундаментальных фиброзных процессов, приводящих к образованию адгезии в брюшной полости

Животные

Следующие линии мышей были приобретены у Jackson Laboratories: Black / 6 (C57BL / 6 J), ROSA26 ^mTmG (B6.129 (Cg) -Gt (ROSA) 26Sortm4 (ACTB-tdTomato, -EGFP) Luo / J) ³⁴ , PDGFRα ^GFP (B6.129S4-Pdgfrαtm11EGFPSor / J), PDGFRα ^CreERT2 (B6N. / ERT) 467 Dbe / J), eGFP (C57BL / 6J-Tg (CAG-EGFP) 10 sb / J), EN1 ^Cre (En1-tm2 (cre) Wrst / J), Wt1 ^CreERT2 (Wt1- tm2 (cre / ERT2) Wtp / J) и мышей ACTIN ^CreERT2 (Tg (CAG-cre / Esr1) 5Amc / J).Мыши Rainbow (ROSA26 ^{VT2 / GK3} ) были подарены лабораторией Вайсмана Медицинской школы Стэнфордского университета. JUN Мыши (flp-in tetO-c-JUN) были предоставлены лабораторией Вернига Медицинской школы Стэнфордского университета. Мышей содержали в Павильоне сравнительной медицины Стэнфордского университета (CMP) и в Центре исследований животных (RAF). Помещения предоставили всем животным помещения с регулируемым освещением и температурой. Мышам давали корм для грызунов и воду ad libitum.Для всех экспериментов использовали минимальный размер выборки из трех животных (точные числа для экспериментов указаны в подписях к рисункам). Десятинедельных мышей с соответствующими генотипами для данного эксперимента случайным образом распределяли по различным экспериментальным условиям. Здоровых однопометников использовали в качестве контроля. Все эксперименты проводились в соответствии со стандартами ухода за животными Стэнфордского университета. Это исследование соответствует всем применимым этическим нормам для исследований с подопытными животными.Все эксперименты на мышах проводились под руководством и с одобрения IACUC / APLAC Стэнфордского университета.

Мышиная модель спаек

Похожая модель образования спаек в брюшной полости была опубликована в нашей лаборатории ⁸ . Вкратце, мышей анестезировали ингаляционным изофлураном (Henry Schein Animal Health) в концентрации 1-2% в кислороде со скоростью 3 л / мин. Офтальмологическая мазь (Puralube petrolatum, Dechra Veterinary Products) наносилась на роговицу для предотвращения высыхания.Бупренорфин (Buprenex, Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc.) вводили подкожно перед операцией в дозе 0,1 мг / кг. Мышей помещали лежа на спине на чистую рабочую поверхность. Под операционным полем использовалась грелка, чтобы животные оставались в тепле на протяжении всей процедуры. Брюшной полости брили, а кожу живота стерилизовали с помощью трех аппликаций бетадина, а затем 70% этанола. Во время процедуры контролировали частоту дыхания животных и соответственно титровали изофлуран.С помощью острых ножниц делали вертикальный разрез кожи по средней линии живота. Затем вертикально открыли нижележащую брюшную стенку. Слепая кишка была локализована и выведена наружу. Стенку слепой кишки осторожно отшлифовали наждачной бумагой с зернистостью 150. Париетальную брюшину вдоль брюшной стенки аналогичным образом отшлифовали наждачной бумагой и на правую боковую стенку живота наложили три одиночных узловых шва 4–0, которые служили очагом образования спаек. Затем слепую кишку поместили анатомически рядом с правой брюшной стенкой.Брюшную полость на короткое время промыли подогретым стерильным физиологическим раствором. Ирригант удаляли промоканием марлевой губкой. Разрез брюшной стенки закрывали непрерывным швом Monocryl 6–0, а разрез кожи закрывали горизонтальными матрасными швами из нейлона 6–0. За животными наблюдали во время выхода из наркоза. Дополнительное количество бупренорфина вводили каждые 6–12 ч по мере необходимости при боли. В случае ложной хирургии животных лечили аналогичным образом; однако разрезы закрыли без манипуляций с органами брюшной полости.

Индукция липосомального тамоксифена

Активированные липосомы 4-гидрокситамоксифена (LiTMX) получали в соответствии с протоколом, разработанным Ransom et al., 2018 ²¹ . Вкратце, смесь 90:10 моль: моль DMPC (1,2-димиристоил- sn -глицеро-3-фосфохолин) и холестерина (Avanti Polar Lipids) сушили в атмосфере азота с последующей сушкой в ​​вакууме, обрабатывали ультразвуком в 1 × PBS, восстановленный экструзией. Размер липосом характеризовали с помощью прибора NanoBrook Omni для динамического светорассеяния (DLS) (Brookhaven).Затем липосомные везикулы инкубировали с 4-гидрокситамоксифеном (Sigma-Aldrich) в атмосфере азота. LiTMX наносили местно на висцеральную и париетальную брюшину в интересующем месте для индукции Cre-рекомбиназы во время операции по адгезии. Процедуру склеивания проводили, как описано выше.

Трансплантат брюшной стенки

Срез брюшной стенки размером 1 × 1 см (мышечный слой на всю толщину и париетальная брюшина) получали от мышей PDGFRA ^GFP :: ROSA26 ^mTmG в хирургических условиях.У мышей PDGFRA ^GFP иссекали срез брюшной стенки того же размера. Трансплантаты PDGFRA ^GFP :: ROSA26 ^mTmG были быстро трансплантированы и зашиты мышам PDGFRA ^GFP с использованием узловых нитей 4–0 шелковых узлов. Спайки создавали, как описано ранее, и собирали их на послеоперационный день (POD) 14.

In vivo

JUN индукция и подавление

Доксициклин (2 мг / мл) или T-5224 (Cayman Chem, 10 мкМ), ресуспендированные в DMSO, наносили местно на участки спаек во время операции по адгезии для индукции JUN ( у мышей JUN ) или подавление (у мышей JUN и WT) соответственно.Для управления использовался только автомобиль.

Parabiosis model

Парабиотические пары мышей были созданы в соответствии с ранее опубликованным протоколом ³⁵ . Вкратце, мышей дикого типа, соответствующих возрасту и полу (WT, C57BL / 6), и мышей с меткой eGFP (C57BL / 6-Tg (CAG ^EGFP ) 10 sb / J) содержали вместе в течение двух недель до парабиоза. операция. Мышей анестезировали; бока мышей брили и очищали бетадином и 70% этанолом, как описано ранее. У мышей WT делали разрез от основания правой передней лапы до основания правой задней лапы, и идентичный разрез делали на левой ноге мышей eGFP.Кожа зашита. Химеризм периферической крови определяли через две недели с помощью проточной цитометрии. Затем на мышах WT были выполнены операции по адгезии.

Обработка тканей и гистология

Адгезионные и контрольные ткани мыши и человека фиксировали в 4% параформальдегиде (электронная микроскопия) в течение 20 часов при 4 ° C и заливали парафином в соответствии со стандартными протоколами. Для криоконсервации образцы помещали в 30% сахарозу (Sigma) до насыщения при 4 ° C после фиксации, затем проводили ОКТ до насыщения при 4 ° C, а затем помещали в ОКТ.Репрезентативные образцы тканей окрашивали гематоксилином и эозином (H&E, Sigma – Aldrich), красителем Picrosirius Red Stain (Abcam) или трихромом Массона (Sigma – Aldrich) в соответствии с протоколами производителя.

Общая и гистологическая оценка адгезионной ткани

Для оценки степени образования адгезии у мышей использовались как общая, так и гистологическая система оценки. Оценка адгезии ткани по макроскопическим изображениям была достигнута с использованием системы оценки адгезии, ранее описанной Tsai et al. ¹⁹ . Используемая гистологическая система оценки была адаптирована из Tsai et al. и Linksy et al. ³⁶ и наносится на образцы, окрашенные гематоксилином и эозитом. Вкратце, гистологическим образцам была присвоена оценка гистологической адгезии 0 без видимой адгезии между поверхностями брюшины. 1 балл указывает на спайки в виде струн или ≤10% контакта с прилипшей тканью. Оценка 2 указывает на прерывистые спайки, более толстые, чем нити, с контактом ≤25% с прилипшей тканью. Оценка 3 указывает на прерывистую, но плотную адгезию с контактом ≤50% с прилипшей тканью.Оценка 4 включала образцы с непрерывной адгезией с множественными (≤75%) точками контакта с прилипшей тканью. Оценка 5 характеризовала плотный (100%) постоянный контакт с прилипшей тканью.

Культура клеток

Фибробласты ресуспендировали в среде (DMEM с добавлением 10% FBS) и высевали в планшет (Falcon), покрытый сверхчистой водой EmbryoMax ™ с 0,1% желатином (Millipore). Все клетки поддерживали в стерильных условиях в увлажненном инкубаторе при 5% CO2 при 37 ° C.Для изображения клеток использовали фазово-контрастный микроскоп (Leica).

Иммуноцитохимия (ICC)

Покровные стекла покрывали 1% желатином Эмбриомакс (EMD Millipore). Адгезионные и контрольные фибробласты высевали на покровные стекла. После прилипания клетки фиксировали, повышали проницаемость 0,5% Triton-X-100 (Sigma), а затем инкубировали с 1X Powerblock (Biogenx). Затем клетки окрашивали первичным антителом при 4 ° C в течение ночи. На следующий день клетки промывали 0,1% Tween-20 (PBST; Sigma-Aldrich), затем окрашивали вторичным антителом и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа.Затем предметные стекла были закреплены с использованием крепежа Prolong Gold Antifade Mountant с DAPI (Life Technologies).

Иммунофлуоресценция (IF)

Криоконсервированные образцы делали криосрезы на предметные стекла Superfrost Plus (FisherSci). Срезы пермеабилизировали 0,5% Triton-X-100 (Sigma), а затем инкубировали с 1X Powerblock (Biogenx). Первичные антитела наносили на образцы тканей на 1 ч при комнатной температуре, а затем повторно промывали. Вторичные антитела наносили на один час при комнатной температуре.Стадии инкубации и промывки антител повторяли, если в одном срезе пробы было окрашено несколько белков. Затем слайды были закреплены с использованием крепежа Prolong Gold Antifade Mountant с DAPI (Life Technologies). Антитела, используемые для ICC и IF, включали: Anti-phospho-JUN (Cell Signaling, S63 (54B3), партия: 7, используется в соотношении 1: 100), anti-JUN (Abcam, ab31419, лот: GR306615-18, используется в 1 : 50), анти-ASMA (Abcam, ab32575, лот: GR282976-32, используется при 1: 100), анти-FSP-1 / S100A4 (Abcam, ab41532 лот: GR3176834-1, используется при 1: 200), анти -COL3 (Abcam, ab7778, лот: GR3234897-1, используется в соотношении 1: 100), анти-COL1 (Abcam, ab34710, лот: GR3244041-2, используется в соотношении 1: 100), анти-MSLN (ABBiotec, 250519, лот : 15102712, используется в соотношении 1: 100), анти-CD26 (Abcam, ab222716, лот: GR3220836-1, используется в соотношении 1: 100), антивиментин (Abcam, ab11256, лот: GR236597-5, используется в соотношении 1:20. ), антифосфо-FAK (Thermo Fisher, 799255, лот: RG240925A, используется в концентрации 1: 100), анти-PDPN (Invitrogen, MA5-29742, лот: UB2724771, используется в концентрации 1: 250), анти-CD10 (Abcam , ab227640, лот: GR3227478-1, используется в соотношении 1: 100), анти-CD31 (Abcam, ab28364, лот: GR3247742-7, используется в соотношении 1:50), анти-CD45 (Abcam, ab10558, лот: GR269008-1 , используется в соотношении 1: 150), анти-фосфо-Stat5 (Cell Signaling, 9314 S, используется в соотношении 1: 200), анти-PDGFRa (A bcam, ab203491, лот: GR3226597-1, используется в концентрации 1: 200), IgG Alexa-Fluor 488 (Invitrogen, A32731, лот: Sh351139, используется в концентрации 1: 1000), IgG Alexa-Fluor 555 (Invitrogen, A32732, лот: Sh351140, используется в соотношении 1: 1000), IgG Alexa-Fluor 647 (Invitrogen, A32733, лот: SI231745, используется в концентрации 1: 1000).

Конфокальная визуализация и анализ

Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия была выполнена с использованием конфокального лазерного сканирующего микроскопа Leica WLL TCS SP8 (Leica Microsystems), расположенного в центре обработки изображений клеток (Стэнфордский университет, Стэнфорд, Калифорния). Использовались объективы × 10, × 20 и × 40 (× 10 HC PL APO, воздух, N.A. 0,40; × 20 и × 40 HC PL APO IMM CORR CS2, h3O / Glycerol / oil, N.A. 0,75). Стеки необработанных изображений были импортированы в программное обеспечение Fiji (Image-J, NIH) или Imaris (Bitplane) для анализа.Фиджи использовали для создания двумерных микрофотографий конфокальных данных и для количественной оценки интенсивности экспрессии флуорофора. Для анализа клональности ткани мыши Rainbow были созданы поверхности для каждого цвета конструкции Rainbow, выраженной с помощью инструментов объемной поверхности и пороговых значений в Imaris.

Набор человеческих образцов

Образцы брюшной ткани человека были получены от пациента, перенесшего абдоминальную операцию в Стэнфордской больнице с одобрения IRB Стэнфордского университета.Образцы тканей включали только ткани, которые в противном случае были бы выброшены. Критерии включения пациентов были следующими: для всех пациентов пациенты должны быть старше 18 лет, операция должна быть плановой, и во время операции не должно быть признаков активного воспаления или инфекции. Для образцов спаек — пациенты должны были перенести хотя бы одну операцию на брюшной полости, для контрольных образцов — пациенты не должны иметь в анамнезе предшествующих операций на брюшной полости. В предоперационной зоне к пациентам обратился один из авторов рукописи.Цели исследования обсуждались с пациентом. Участие было полностью добровольным. Письменное информированное согласие было получено от пациента до операции. Образцы тканей были собраны одним из авторов этой рукописи у основного хирурга в операционной, помещены непосредственно в стерильный физиологический раствор и сохранены на льду для транспортировки. Образцы тканей были обработаны немедленно. Это исследование соответствует всем применимым этическим нормам для исследований с участием людей.

Подготовка образцов и выделение с помощью FACS

Образцы брюшной ткани от мышей или людей измельчали ​​на льду.Затем ткань переваривали в течение 60 мин в мешалке с водяной баней при 37 ° C в буфере для переваривания коллагеназы (коллагеназа типа IV, ThermoFisher) с концентрацией 2 мг / мл в среде 199 (HyClone, GE Healthcare), состоящей из 5% фетальной бычьей сыворотки (Gibco FBS , ThermoFisher), ДНКазу I (Worthington), Poloxamer 188 (Cat. P5556-100ML, Sigma), HEPES и CaCl2. Расщепление гасили охлаждающей средой (DMEM (Gibco DMEM, ThermoFisher) с 15% FBS), затем центрифугировали при 300 × g в течение 5 минут при 4 ° C, ресуспендировали в гасящей среде и фильтровали через 100, 70 и Сетчатые фильтры для клеток 40 мкм (фильтр для клеток Falcon, ThermoFisher).Лизис эритроцитов выполняли с использованием Hybri-Max (Sigma) в соответствии с протоколом производителя. Histopaque был выполнен с использованием Histopaque-1119 (Sigma – Aldrich) в соответствии с протоколом производителя.

Клетки подсчитывали и ресуспендировали в буфере FACS. Применяли первичные антитела, и клетки окрашивали в темноте при осторожном встряхивании в течение 30 мин. Затем клетки тщательно промывали буфером FACS. Окрашивание вторичными антителами проводили таким же образом. Пропидий йод (PI, Thermofisher, кат.P3566, партия: 1755970, 3 мкг / мл) или DAPI (Thermofisher, Cat. 3571) использовали в качестве маркера жизнеспособности. Фибробласты выделяли с помощью системы FACS Aria II. Для секвенирования РНК клетки сортировали в охлажденном лизирующем реагенте в условиях отсутствия РНК / ДНКазы (Trizol LS, ThermoFisher). Показанные графики проточной цитометрии представляют по крайней мере три независимых эксперимента.

Антитела против следующих маркеров клеточной поверхности, первично или вторично конъюгированные с одним и тем же флуорофором, были использованы для исключения клеток «линии происхождения» в образцах мышей и людей с целью беспристрастного выделения фибробластов: CD45, CD31, Ter119, Tie2, CD324 и CD326.Этот подход был ранее подтвержден нашей лабораторией при других фиброзных патологиях ^9,37 .

Для фосфо-специфического анализа проточной цитометрии была приготовлена ​​суспензия отдельных клеток с использованием тканевого диспергирования вручную, а не ферментативного расщепления для сохранения фосфорилированного сигнала, а затем приготовлена ​​с использованием набора BD Biosciences Cytofix / Cytoperm ™ в соответствии с инструкциями производителя. Анализ фосфорилированного белка проводили с использованием системы FACS Aria II.

Антитела, используемые для FACS, включали: Anti-phospho-JUN (Cell Signaling, s73d47G9, лот: 5, используется в соотношении 1: 200), анти-фосфо-STAT5-PECy7 (BD Biosciences, 560117, лот: 8266820, предварительно разведенный и использованный). в объеме 20 мкл на тест производителя), анти-FSP-1 (Ray biotech, 188-11191, партия: 1804128, используется в концентрации 10 мкг / мл), IgG Pacific Blue (Thermo Fisher, p31582, лот: 1929717, используется в 1 мкг / мл), анти-PDGFRα (Abcam, ab90967, партия: gr321324-2, используется в концентрации 10 мкг / мл), IgG Alexa-Fluor 647 (Abcam, ab150159, партия: GR241187-2, используется в концентрации 1: 2000) , IgG Alexa-Fluor 488 (Abcam, ab150077, лот: GR3224145-2, используется при 1: 2000), IgG Alexa-Fluor 647 (Abcam, ab: 150075, лот: GR269275-2, используется при 1: 2000), IgG Pacific Blue (Thermo Fisher, P10994, лот: 2045342, используется в концентрации 1 мкл / мл), анти-S100A4-PE (BioLegend, 370003; лот b286200, используется в соотношении 1:20), анти-PDGFRa (Abcam, ab203491, лот: GR3226597-1, используется в 1:50), анти-CD26 PECy7 (Biolegend, 302713, лот: B253866, используется в 1:20), анти-CD45-FITC (Invitrogen, 11-9459-42, лот 4319940, используется в 1:20 ), анти-Ter119-FITC (Invitrogen, 11-5921-85, лот: 4322597, использовалось в 2.5 мкг / мл), анти-CD31-FITC (Thermo Fisher, 11-0311-82, партия: B224877, используется в соотношении 1: 100), anti-Tie2 (Thermo Fisher, 14-5987-82, партия: 2072830, используется 1: 100), анти-CD324 (Biolegend, 147302, партия: B228369, используется в концентрации 10 мкг / мл), анти-CD326 (Biolegend, 118202, партия: B254013, используется в концентрации 0,6 мкг / мл), 488 вторичных (Abcam , ab150157, используется в концентрации 1: 2000), анти-CD45-eFluor 450 (Invitrogen, 48-0451-82, лот: 1936503, используется в дозе 5 мкг / мл), анти-Ter119-Pacific Blue (Invitrogen, 48-5921- 82, партия: 1974934, использовалась в дозе 5 мкг / мл), анти-CD31-eFluor 450 (Invitrogen, 48-0311-82, партия: 1982691, использовалась в 2.5 мкг / мл), анти-Tie2-биотин (Invitrogen, 13-5978-82, партия: 4304957, используется в дозе 5 мкг / мл), анти-CD324-биотин (Invitrogen, 13-3249-82, лот: 1916204, используется в концентрации 2,5 мкг / мл), eFluor 450-Стрептавидин (Invitrogen, 48-4317-82, лот 1988686, используется в концентрации 2,5 мкг / мл), анти-CD326-eFluor 450 (Invitrogen, 48-5791-82, лот: 1984115). , использовали в концентрации 10 мкг / мл), анти-CD45-PECy7 (Thermo Fisher, MHCD4512, использовали в концентрации 1: 100), анти-Ter119-PECy7 (Invitrogen, 25-5921-82, лот: 1994153, использовали в концентрации 5 мкг / мл). мл), анти-CD31-PECy7 (Invitrogen, 25-0311-81, лот 4318668, используется в концентрации 5 мкг / мл), анти-Tie2 (Invitrogen, 14-5987-82, лот: 2072830, используется в концентрации 10 мкг / мл. ), анти-CD326-PECy7 (BioLegend, 324221, лот: B266928, используется в 1:20) и анти-CD324-PECy7 (Biolegend, 147310, лот: B255274, используется в 2.4 мкг / мл).

Стробирование FACS и анализ данных выполнялись с помощью FlowJo. Схемы стробирования были установлены с контролем флуоресценции минус один. Одиночные клетки сначала были заблокированы с использованием параметров FSC и SSC. Мертвые и положительные по клонам (нефибробластные) клетки затем исключались путем гейтирования против PI или DAPI и окрашивания антител на панели клонирования соответственно. Схемы гейтинга для количественного определения и / или выделения фибробластов и специфических представляющих интерес субпопуляций фибробластов были проверены путем высева части отсортированных клеток для морфологической визуализации, иммуноцитохимии и / или анализа количественной ПЦР.

Объемное секвенирование мРНК

Для образцов мышей и людей экстракцию РНК проводили с использованием набора Qiagen miRNeasy (каталожный 1071023) с обработкой ДНКазой на колонке в соответствии с рекомендациями производителя. Набор Clontech Smarter Ultra Low Input RNA (Takara Bio, Cat. 634848) использовали для получения кДНК из 150 пг общей РНК в соответствии с рекомендациями производителя. Амплифицированную кДНК очищали с использованием SPRI Ampure Beads (Beckman Coulter, Cat. A63880), а качество и количество измеряли с использованием высокочувствительного ДНК-чипа на биоанализаторе Agilent 2100 (Agilent Technologies).кДНК была разрезана до средней длины 300 пар оснований с использованием ультразвукового аппарата Covaris S2 (Covaris), и библиотеки были созданы с помощью набора Clontech Low Input Library Prep kit (Takara Bio, Cat. 634947). Образцы были уникальным образом закодированы, объединены и секвенированы на одной дорожке NextSeq 500 (Illumina). Всего было получено 300 миллионов считываний парных концов, 151 пара оснований, что привело к 50 миллионам считываний на образец.

Анализ данных массового секвенирования мРНК

Всего было профилировано девять человеческих (шесть адгезий и три контроля) и восемь мышей (четыре адгезии и четыре имитации хирургических операций) образцов путем группового секвенирования РНК, как описано выше.Необработанные считывания FASTQ были сопоставлены с эталонными транскриптами GENCODE v29 (GRCh48.p12) для человека и эталонными транскриптами GENCODE vM20 (GRCm38.p6) для мыши с Salmon ³⁸ v0.12.0 с использованием –seqBias, –gcBias, –posBias, –useVBOpt , –RangeFactorizationBins 4 и – validateMappings флаги и другие параметры по умолчанию для одностороннего сопоставления. Результаты по лососю были объединены в единую матрицу подсчета на уровне генов с использованием пакета R: tximport ³⁹ v1.4.0.

Нормализация подсчета и анализ дифференциальной экспрессии генов выполняли с использованием DESeq2 v1.Пакет 22.2 за R ⁴⁰ . Подсчеты были нормализованы по размерному фактору с использованием функции «DESeq» и ​​преобразованы в журнал ₂ . Анализ парной дифференциальной экспрессии генов выполняли с использованием функции lfcShrink и указания «type = apeglm», который применяет адаптивную оценку предварительного усадки t. Как рекомендовано ⁴⁰ , для определения значимости для дифференциально экспрессируемых генов использовался порог P , скорректированный <0,1 (дополнительные наборы данных 1 и 2).

Анализ обогащения набора генов (GSEA) был проведен на предварительно ранжированных списках генов дифференциально экспрессируемых генов ( n = 851 ген для мыши, n = 3003 гена для человека), упорядоченных по логарифмической шкале ₂ -кратного изменения с использованием GSEA программное обеспечение предоставлено Институтом Броуда ⁴¹ .Наборы генов «HALLMARK_EPITHELIAL_MESENCHYMAL_TRANSITION» и «GO_REGULATION_OF_JUN_KINASE_ACTIVITY» были использованы для выделения генов, участвующих в сигнальном пути от эпителия к мезенхиме (EMT) и JUN . Гипергеометрические тесты для анализа обогащения терминов онтологии генов (GO) в генах, дифференциально экспрессируемых в «Адгезии» по сравнению с «Подделкой» (мышь, n = 451 ген) или «Здоровым» (человек, n = 1443 гена) группы выполнялись с использованием пакета clusterProfiler v3.10.0 ⁴² в R.

Одноклеточное штрих-кодирование, подготовка библиотеки и секвенирование

Адгезионные фибробласты были выделены с помощью FACS из образцов мышей и людей с использованием беспристрастной стратегии, основанной на клонах, как описано ранее. Для каждой временной точки (POD 2 и POD 7) использовали объединенные четыре образца мышей, полученных от однопометников. Отдельные образцы человека были помечены олигонуклеотидами хэштега (HTO) в соответствии с протоколом производителя, а затем объединены. Клетки подсчитывали и фильтровали непосредственно перед загрузкой в ​​10-кратную машину.

Отдельные клетки были закодированы штрих-кодом с использованием платформы 10x Chromium Single Cell, и библиотеки кДНК были подготовлены в соответствии с протоколом производителя (Single Cell 3 ’v3, 10x Genomics, США). Вкратце, клеточные суспензии, мастер-микс для обратной транскрипции и разделяющее масло загружали на одноклеточный чип, а затем запускали на контроллере Chromium. Обратную транскрипцию проводили внутри капель при 53 ° C в течение 45 мин. кДНК амплифицировали всего за 12 циклов на термоциклере BioRad C1000 Touch.Выбор размера кДНК проводили с использованием шариков SpriSelect (Beckman Coulter, США) и отношения объема реагента SpriSelect к объему образца, равного 0,6. кДНК анализировали на ДНК-чипе Agilent Bioanalyzer High Sensitivity для качественного контроля. кДНК фрагментировали с использованием запатентованной смеси ферментов фрагментации в течение 5 минут при 32 ° C с последующей репарацией концов и A-хвостом при 65 ° C в течение 30 минут. кДНК были выбраны по размеру с двух сторон с использованием SpriSelect beats. Адаптеры для секвенирования лигировали к кДНК при 20 ° C в течение 15 мин.кДНК амплифицировали с использованием специфичного для образца индексного олигонуклеотида в качестве праймера, после чего следовали еще один раунд двустороннего отбора по размеру с использованием шариков SpriSelect. Конечные библиотеки анализировали на ДНК-чипе Agilent Bioanalyzer High Sensitivity для качественного контроля. Библиотеки кДНК секвенировали на платформе NextSeq 500 Illumina с целью 50 000 считываний на клетку.

Обработка данных, генерация fastq и отображение чтения

Базовые вызовы были преобразованы в чтения с помощью программного обеспечения Cell Ranger (10x Genomics; версия 3.1) Реализация mkfastq . Затем они были сопоставлены с геномами GRCh48 v3.0.0 (для человека) или mm10 v3.0.0 (для мыши) с использованием функции Cell Ranger count (реализация STAR v2.7.0) с химией SC3Pv3 и 5000 ожидаемых клеток на образец. ⁴³ . Клеточные штрих-коды, представляющие качественные клетки, были отделены от штрих-кодов апоптотических клеток или фоновой РНК на основе порога наличия не менее 1000 профилированных транскриптов и менее 5% их транскриптома митохондриального происхождения.Для образцов человека это привело к обнаружению 1542 уникальных генов на клетку, 6489 UMI на клетку и 3,44% митохондриальных генов на клетку. Для образцов мышей мы обнаружили 4183 уникальных гена, обнаруженных на клетку, 23 586 UMI на клетку и 3,17% митохондриальных генов на клетку.

Нормализация данных, демультиплексирование олигонуклеотидов хэштега и идентификация субпопуляции ячеек

UMI из каждого штрих-кода ячейки были сохранены для всего последующего анализа. Необработанные подсчеты UMI были нормализованы с масштабным коэффициентом 10000 UMI на ячейку, а затем натуральный логарифм преобразован с псевдосчетом 1 с использованием пакета R Seurat (версия 3.1.1) ⁴⁴ . Хештеги-олигонуклеотиды (HTO) для образцов человека были демультиплексированы с использованием реализации Seurat HTODemux . Вкратце, кластеризация k-медоидов выполняется по нормализованным значениям HTO, после чего вычисляется «отрицательное» распределение HTO. Для каждого HTO кластер с самым низким средним значением рассматривается как отрицательная группа, и отрицательное биномиальное распределение соответствует этому кластеру. Используя квантиль 0,99 этого распределения в качестве порога, каждая ячейка классифицируется как положительная или отрицательная для каждого HTO.Клетки, положительные для более чем одного HTO, помечаются как дублеты и удаляются. Также удаляются клетки, которые не являются положительными для какого-либо HTO. Затем агрегированные данные были оценены с использованием анализа аппроксимации и проекции однородного коллектора (UMAP) по первым 15 основным компонентам ⁴⁵ . Аннотации клеток приписывались с использованием SingleR (версия 3.11) относительно эталонной базы данных Blueprint + ENCODE для человеческих клеток, а также эталонных наборов RNA-seq для мышиных клеток в рамках проекта Immunological Genome Project (ImmGen) и мышиных последовательностей.

Создание характерных маркеров субпопуляции и анализ обогащения

Списки маркеров клеточного типа были созданы с помощью двух отдельных подходов. В первом подходе мы использовали встроенную функцию Seurat FindMarkers с порогом изменения логарифмической кратности 0,25 с использованием теста ROC для определения предсказательной силы каждого гена. Однако, чтобы лучше учесть взаимную информацию, содержащуюся в сильно коррелированных прогностических генах, мы также использовали анализ характерного направления ⁴⁶ .50 генов с самым высоким рейтингом из этого анализа для каждого кластера были использованы для выполнения анализа обогащения набора генов по базам данных Института BROAD (http://software.broadinstitute.org/gsea/index.jsp) программным способом с использованием EnrichR (версия 2.1) ⁴⁷ . Псевдовременный анализ был выполнен с использованием пакета Monocle2 в R (версия 2.4.0) ²⁹ . Состояния дифференцировки отдельных клеток были предсказаны в R с использованием пакета CytoTRACE, общедоступного по адресу https: // cytotrace.stanford.edu/ ²⁸ . 200 лучших генов или сигнатуры подсчета генов (GCS) из двух независимых наборов данных, развития фибробластов легких мыши и развития мезодермы человека, были извлечены из предварительно вычисленных файлов на веб-сайте CytoTRACE. Среднее геометрическое этих 200 генов было затем рассчитано в наших наборах данных scRNA-seq и визуализировано в низкоразмерном встраивании.

Количественная (RT) в реальном времени (q) ПЦР

РНК

экстрагировали из образцов мышей и людей с использованием набора для экстракции РНК Direct-Zol (Zymo Research) в соответствии с инструкциями производителя.Концентрацию РНК оценивали с помощью Nanodrop (ThermoFisher). Библиотеки кДНК были созданы с использованием набора для обратной транскрипции кДНК высокой емкости (Applied Biosystems) в соответствии с инструкциями производителя. Реакцию обратной транскрипции проводили с использованием термоциклера 2720 (Applied Biosystems). Смесь Power SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems) использовали для амплификации с использованием 20 мкл реакционной смеси в соответствии с рекомендациями производителя. Последовательности используемых праймеров перечислены в дополнительной таблице 4.Каждый эксперимент проводился в трех экземплярах для каждой точки данных, и значение порога цикла (Ct) использовалось для анализа. Средние кратные изменения экспрессии генов были нормализованы относительно GAPDH для образцов мышей и бета-актина для образцов человека.

Анализ адгезионных фибробластов цитокинов человека

Свежевыделенные адгезионные фибробласты человека помещали в среду, не содержащую антибиотиков, и клеточный супернатант собирали через 24 и 48 часов после посева, а также в качестве отрицательного контроля бесклеточной среды.Анализ 62-plex Luminex (разработанный eBioscience) для оценки содержания цитокинов в супернатанте проводился в соответствии с протоколом производителя. В каждый момент времени анализировали три биологические повторы. Для количественной оценки использовали среднюю интенсивность флуоресценции.

CRISPR-опосредованная инженерия генома

Следуя протоколу из опубликованной литературы ^48,49 , последовательности сайт-специфичных направляющих РНК (sgRNAs) были отобраны с помощью онлайн-инструмента CRISPR Design Tool из лаборатории Фэн Чжана (https: // zlab.био / руководство-дизайн-ресурсы). Олигонуклеотиды с этими последовательностями были клонированы в вектор lentiCRISPRv2 (AddGene), который показан в дополнительной таблице 5. Плазмида для переноса (нокаут-плазмида JUN CRISPR) была затем котрансфицирована упаковывающей плазмидой pRRE (гены GAG и Pol). упаковывающую плазмиду pRSV (ген Rev) и плазмиду pMD2.G, охватывающую клетки HEK293T. Клеточные среды собирали, ультрацентрифугировали и замораживали для использования.

Обработка Т-5224 in vitro

Свежевыделенные адгезионные фибробласты мыши выращивали до 90% конфлюэнтности.Культивированные клетки поднимали с использованием TrypLE (ThermoFisher Scientific) и переносили в день обработки в среду без антибиотиков (DMEMF12 и 10% FBS). Клеткам давали возможность прилипнуть, затем культуральную среду удаляли и заменяли средой с 0,1% бычьим сывороточным альбумином (BSA) на один час. Затем все клетки стимулировали инсулином в течение 1 ч (5 мг / мл). Лунки случайным образом распределялись по условиям обработки по сравнению с контрольными условиями; обрабатываемые лунки получали обработку Т-5224 (10 мкМ), контрольные лунки получали только носитель.Клетки поднимали через 24 часа и экспрессию фосфопротеина анализировали с помощью проточной цитометрии, как описано ранее.

CRISPR Cas9

JUN — нокдаун-обработка

Свежевыделенные адгезионные фибробласты человека выращивали до 90% слияния. Культивированные клетки поднимали с помощью TrypLE и переносили в день обработки в среду без антибиотиков. Клеткам давали прилипнуть, затем культуральную среду удаляли и заменяли средой с 0,1% бычьим сывороточным альбумином (BSA) на 1 час. Затем клетки стимулировали инсулином в течение 1 ч (5 мг / мл).Лунки случайным образом распределяли по условиям обработки, контролю носителя («индуцированный контроль») и условиям выбора контроля носителя; лунки для обработки получали вирус CRISPR Cas9, контрольный образец — только носитель. В лунки CRISPR Cas9 и контрольный носитель для отбора вводили пуромицин (1 мкг / мл), дозируемый каждые 24 ч, до тех пор, пока в лунках для отбора контрольного носителя не наблюдалась полная гибель клеток. Отбор был дополнительно подтвержден с помощью проточной цитометрии. Затем клетки из лунок для обработки и контроля носителя поднимали и обрабатывали для анализа.

Препарат лентивируса для вирусной опосредованной сверхэкспрессии

JUN

Девяносто процентов конфлюэнтных Т-клеток 293 трансфицировали 4 мкг трансферной плазмиды (плазмида сверхэкспрессии JUN tet-on, контролируемая тетрациклином трансактиваторная плазмида, JUN CRMISPR нокаутная плазмида, нокаут CRMISPR репортерная плазмида, энхансерная репортерная плазмида E7TK CD47 и плазмида люцифераза-GFP), 2 мкг плазмиды упаковки pRRE (гены GAG и Pol), 1 мкг плазмиды упаковки pRSV (ген Rev), 1 мкг pMD2.G, охватывающая плазмиду, и 24 мкг PEI. Клеточные среды собирали и центрифугировали, затем супернатант фильтровали через фильтр 0,22 мкм, ультрацентрифугировали и быстро замораживали для использования.

Вирусно-опосредованная терапия сверхэкспрессией JUN

NIH 3T3 и свежевыделенные адгезионные фибробласты выращивали до 90% слияния. Культивируемые клетки поднимали с помощью TrypLE и перед обработкой повторно помещали в среду, не содержащую антибиотиков (DMEMF12 и 10% FBS). Клеткам давали возможность прилипнуть, затем культуральную среду удаляли и заменяли на 0.1% среда с бычьим сывороточным альбумином (BSA) в течение одного часа. Лунки случайным образом распределяли по условиям обработки по сравнению с условиями контроля носителя. Аликвоты вируса сверхэкспрессии JUN (приготовленные, как описано выше) размораживали непосредственно перед использованием и вносили в лунки для обработки полибреном (Sigma-Aldrich, 1: 1000). После 6-часовой инкубации среду меняли и наносили среду без антибиотиков плюс dox (2 мкг / мл). Отбор гигромицина продолжали через 48 часов. Выбор был подтвержден с помощью проточной цитометрии.

Статистика и воспроизводимость

Статистический анализ проводился с использованием программного обеспечения GraphPad Prism v.6 (если не указано иное). Результаты выражаются в виде абсолютных чисел, процентов, фракций или среднего ± стандартное отклонение (стандартное отклонение, если не указано иное). Непарный t -тест, предполагающий двустороннее распределение или односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) и апостериорную поправку Тьюки, использовали для сравнения групп, где это уместно. P <0,05 считали статистически значимым. Все эксперименты были повторены не менее трех раз с аналогичными результатами (если не указано иное).

Краткое изложение отчета

Дополнительная информация о дизайне исследования доступна в Резюме отчета об исследовании природы, связанном с этой статьей.

Спайки брюшной полости — Атлас физиотерапии

Спайки брюшной полости

Рубцовая ткань брюшной полости в результате травм и хирургических операций является частой причиной боли в пояснице и тазу, радикулита, скованности и дисфункции. Специализированные методы мануальной терапии под названием Манипуляция висцеральной функцией могут успешно лечить рубцовую ткань, восстанавливать движения и устранять боль.

Адгезия — это прочная полоса из рубцовой ткани , которая связывает части двух тканей или органов вместе.Обычно поверхности органов, мышц и нервов не слипаются и могут скользить друг по другу, когда вы двигаете своим телом. Спайки выглядят как листы ткани, похожие на полиэтиленовую пленку, или толстые фиброзные ленты. Спайки брюшной полости встречаются более чем у 90% людей, перенесших операцию, а также у некоторого процента людей, которые никогда не подвергались хирургическим вмешательствам.

Они развиваются, когда организм пытается восстановиться после травм, таких как травмы, операции, облучение или воспалительные процессы, вызванные медицинскими состояниями, болезнями или пищевой чувствительностью.

Спайки брюшной полости и таза могут охватывать любой орган или ткань внутри или вокруг брюшной полости или таза и могут включать толстую и тонкую кишку, матку / яичники или простату, мочевой пузырь, а также нервы, проходящие через брюшную полость. Позвоночник и таз, а также мышцы туловища и бедра также могут прилипать к органам брюшной полости.

Спайки могут медленно сжиматься и скручиваться с течением времени. вызывает проблемы с функцией кишечника и мочевого пузыря и даже может влиять на фертильность у женщин.Они также могут нарушать подвижность и функцию нижней части спины, таза и бедер. Плотность и ограничение могут препятствовать нормальному сглаживанию движений в поясничном отделе позвоночника и тазовых суставов и могут изменить положение поясницы (вспомните глубокий поясничный изгиб / отклонение назад) и привести к болезненному увеличению давления в спине и тазобедренных суставах и мышцах.

Нервы нижней части спины, таза, бедер и ног проходят перед поясничным отделом позвоночника в брюшной полости и проходят мимо органов брюшной полости, прежде чем выйти в ноги.Спайки нервов могут серьезно ограничить движения бедра и ног и привести к повторяющемуся раздражению нервов, что приводит к радикулиту и нервным болям в ногах.

Лечение спаек брюшной полости включает в себя операцию по их удалению. Интересно, что вероятность возникновения спаек при хирургическом вмешательстве превышает 90%. Операция по удалению спаек почти наверняка непосредственно приведет к образованию новых.

Физиотерапевтическое лечение спаек включает в себя специализированные мануальные терапевтические методы для растягивания, ослабления и освобождения плотных тканей в брюшной полости.Эти техники выполняет терапевт, используя свои руки, чтобы почувствовать ограничения в животе, и используя мягкие тянущие движения, чтобы освободить их. Часто терапевт будет удерживать структуру или орган неподвижно, в то время как пациенту дают указание многократно двигать спиной или телом в определенных схемах, чтобы освободить прилипшие структуры.

Физиотерапевтическое лечение щадящее, неинвазивное и проводится амбулаторно.

Гидродиссекция для лечения боли в животе, вызванной послеоперационными спайками

В этом отчете о клиническом случае гидродиссекция под ультразвуковым контролем обеспечила облегчение болезненных спаек брюшной полости, появившихся после нескольких операций на груди.

Страницы 53-55

Послеоперационные спаечные процессы часто приводят к хронической изнуряющей боли после обширных операций на брюшной полости. По оценкам, внутрибрюшные спайки возникают как минимум у 55% ​​женщин после операций на органах малого таза или брюшной полости, и риск увеличивается с каждой дополнительной хирургической процедурой. ¹ Спайки — это полосы фиброзной ткани, которые образуются между структурами (т. Е. Тканью и органами) во внутрибрюшной полости в результате хирургического вмешательства, травмы или воспаления. ² Было высказано предположение, что спайки образуются из-за дисбаланса между фибринолитической и фибринобразующей активностями в брюшине. ³ Спайки брюшной полости и таза могут повышать риск бесплодия, непроходимости тонкого кишечника и хронической тазовой боли из-за потери сгибания, деформации или скручивания пораженных внутренних органов, а также натяжения нервных окончаний, которые могут быть захвачены развивающимся спаечным соединением. . ^1,4 Хотя риск спаек и возможные побочные эффекты хорошо известны хирургам, он не всегда включается в состав информированного согласия. ⁵

Лапароскопическое исследование и лизис спаек — это стандартный метод, используемый для удаления болезненных спаек брюшной полости, но, как и другие хирургические процедуры, он не всегда эффективен и может даже привести к большему количеству спаек. ^5,6 Однако процесс гидродиссекции включает введение физиологического раствора и / или лидокаина под давлением в плоскости рассечения. ² Гидродиссекция не только успешно лечит синдром запястного канала, симптоматические невриномы икроножной мышцы и офтальмологические процедуры, но также рассматривается в качестве предоперационной терапии для удаления спаек. ^7,8

Целью данного тематического исследования является ознакомление с эффективным использованием гидродиссекции как метода лечения боли в животе из-за послеоперационных спаек у женщин.Мы представляем пациентку, у которой возникла недееспособная боль после развития спаек в результате частично неудачной двусторонней реконструкции кожно-мышечным лоскутом поперечной прямой мышцы живота (TRAM), которая значительно уменьшилась после шести курсов лечения гидродиссекции.

При реконструкции груди с помощью лоскута TRAM кровеносные сосуды лоскута остаются прикрепленными к исходному кровоснабжению, а жир, кровеносные сосуды и мышцы живота вместе переносятся в грудь и анастомозируют либо с грудной, либо с внутренней грудной артериями. ^8,10

(Источник: 123RF)

Пациент

53-летняя женщина с раком молочной железы в анамнезе, поступившая по поводу неослабевающей боли после двусторонней мастэктомии и реконструкции груди, в дополнение к ревизии реконструкции правой груди с помощью TRAM-лоскута и пяти последующих корректирующих операций по адресу -операционные осложнения. Следует отметить, что в анамнезе у нее также была хирургическая история сращения позвоночника в сегментах L5-S1 около 33 лет назад с последующей связанной с этим легкой эпизодической болью.

По мере того, как соответствующие периоды послеоперационного восстановления истекли, она испытала неуклонно нарастающую боль в животе и ограниченный диапазон движений туловища и верхних конечностей, особенно в правом плече. В течение следующих трех лет она посетила различные больницы и клиники, пробуя многочисленные методы лечения в поисках облегчения боли, включая лекарства и добавки, физиотерапию, сухие иглы, беговую дорожку с отрицательным G, йогу, пилатес, купирование, горячие камни, гидромассажные ванны. и различные мануальные методы лечения, включая висцеральные манипуляции, миофасциальное расслабление, хиропрактические манипуляции, ролфинг, массаж глубоких тканей и снятие триггерных точек.После того, как она безуспешно испробовала множество методов уменьшения боли, ее лечащий врач направил ее в нашу амбулаторную клинику для снятия боли.

Прибыв на первичный прием, она рассказала, что страдает от давящей, «тисковидной» боли в животе и испытывает сильные мышечные спазмы по всей мускулатуре туловища. Пациент потерял значительную подвижность, у него возникла хроническая одышка и развилось сильное недержание мочи. Она была пилотом реактивного самолета в отставке и спортсменкой, но в настоящее время сообщала об ограниченных способностях во всех сферах повседневной жизни (ADL), требующих дополнительного времени для одевания, купания и туалета.

Активный диапазон движений правого плеча был ограничен 70 градусами отведения и 80 градусами сгибания, в то время как внутреннее и внешнее вращение оставалось полным. У нее было несколько участков твердой плотной рубцовой ткани, которые сопротивлялись перемещению во всех плоскостях, особенно вдоль правой линии груди от грудины до средней подмышечной линии, повторяющей контур пятого ребра; по окружности вокруг пупка; и одна поперечная, идущая от одной передней верхней подвздошной ости до другой.

Начало гидродиссекции для облегчения боли в правом верхнем углу грудной клетки

Учитывая, что наиболее сильным ограничением был диапазон движений ее верхней конечности, было принято решение применить гидродиссекцию к разрезу правой груди. Перед началом лечения было объяснено обсуждение процедуры и возможные риски, и было получено согласие.

Пациентка лежала на спине. Спайки были идентифицированы под ультразвуковым контролем вдоль ткани ее правой груди.Десять миллилитров 1% лидокаина вводили в медиальную границу адгезии с помощью иглы 25-го размера, создавая болюс. После этого следовали две минуты ручной мобилизации рубца, прикладывая сильное, глубокое давление на болюс от медиального к латеральному направлению, заставляя жидкость еще больше разделять волокна в месте сращения. Эту процедуру немедленно повторили с еще 10 миллилитрами 1% болюса лидокаина в латеральную границу рубца с последующей мобилизацией рубца с латеральным и медиальным давлением.Места инъекций были перевязаны, и ее выписали домой без происшествий. Эту процедуру повторяли шесть раз, каждые две недели, в общей сложности в течение 12 недель, обрабатывая ткань правой груди, причем каждое лечение фокусировалось на границах определенной области рубцовой ткани в этой области, а именно на глубокой стенке грудной клетки, поверхностных мягких тканях, парастернальная область и подмышечная область.

Оценка лечения изменений зарегистрированной боли и подвижности

После первых шести раундов гидродиссекции под ультразвуковым контролем спаек вокруг правого плечевого пояса и грудины активный диапазон движений верхней конечности пациентки увеличился до 170 градусов сгибания и отведения, а ее функциональные ограничения резко улучшились.Тем не менее, она продолжала страдать от сильных болей в животе и чувствовала себя так, как будто она «несла в животе 16-фунтовый шар для боулинга». Процедуру гидродиссекции повторяли в поверхностном и глубоком слоях фасции в брюшной стенке околопупочной области и вдоль поперечного рубца от одной передней верхней подвздошной ости до другой, постепенно воздействуя на разные слои с каждым раундом, с интервалом каждые два. до трех недель в течение 11-месячного периода. Изображения спаек брюшной полости были получены до (см. Рисунок 1) и после (см. Рисунок 2) раунда гидродиссекции и мобилизации, чтобы продемонстрировать процесс.

Рис. 1. Поперечный вид живота с отмеченными гиперэхогенными спайками в глубоком фасциальном слое (красная стрелка).

Рисунок 2. Пост состояния ткани 2 минуты ручной мобилизации рубца. Отметьте распространение болюса за счет предыдущих спаек (красный кружок)

После воздействия на каждую область спаек грудной клетки и брюшных стенок пациент больше не нуждался в трамадоле и был полностью независим от всех ADL без каких-либо сообщений о боли. Наиболее важно то, что после окончания почти годичного лечения пациент смог вернуться к работе после прохождения строгого курса подготовки, чтобы стать пилотом коммерческого грузового транспорта.Остаточные симптомы включали чувство наполнения и стеснения по средней линии прямо под пупком, где расположен корень TRAM-лоскута, и некоторые периодические боли в спине, если она сидит в течение продолжительных периодов времени. Однако с этими проблемами можно было справиться, и они не повлияли на ее повседневную мобильность или способность летать.

Обзор эффективности лечения и удовлетворенности пациентов

С ростом осведомленности пациентов, страдающих от сильной боли из-за хирургических спаек, необходимость обеспечения безопасного и эффективного лечения стала клинической необходимостью.На сегодняшний день единственным признанным потенциальным хирургическим методом лечения спаек брюшной полости было удаление лапароскопии. ³ Принимая во внимание, что этот вариант требует, чтобы пациенты перенесли еще одну хирургическую процедуру, он повышает риск возникновения большего количества спаек.

Таким образом, испытание нехирургического метода с введением лидокаина для облегчения боли у пациентов с послеоперационными спаечными процессами было признано успешным. Применение гидродиссекции под ультразвуковым контролем позволило рассечение спаек минимально инвазивным способом, чтобы избежать риска возникновения дополнительных спаек у этого пациента.Следует отметить, что в этом случае в качестве среды для гидродиссекции использовался 1% лидокаин на основании предшествующей литературы; ² , однако, другие растворы, такие как бупивакаин или физиологический раствор, могут быть столь же или более эффективными, учитывая необходимость ограничения лидокаина до 20 миллилитров на раунд из-за опасения сердечной токсичности.

Конечно, дальнейшее исследование этого метода с большим количеством участников в рандомизированном контрольном исследовании было бы разумным следующим шагом для более полной оценки преимуществ гидродиссекции под ультразвуковым контролем как обезболивающего лечения послеоперационных спаек.Эту терапию легко применять в амбулаторных условиях, и она может значительно улучшить качество жизни пациентов, страдающих от других изнурительных болевых ощущений.

Учитывая ограниченный набор возможностей для лечения неослабевающей боли, вызванной послеоперационными спаечными процессами, использование гидродиссекции представляет собой возможный метод для практикующих обезболивающих, который может предложить пациентам, у которых боль в животе не реагирует на традиционные формы обезболивания.

Последнее обновление: 12 апреля 2019 г.

Анальгетики будущего: потенциал модуляторов глиальных клеток

Профилактика внутрибрюшных абсцессов и спаек с помощью раствора гиалуроновой кислоты на модели перитонита у крыс | Неотложная медицина | JAMA Surgery

Гипотеза Биорезорбируемая мембрана на основе гиалуроновой кислоты (HA) и 0.4% раствор ГК снижает внутрибрюшную адгезию и образование абсцесса на модели перитонита у крыс.

Конструкция Рандомизированный лабораторный эксперимент.

Настройка Университетская больница.

Вмешательства У 72 крыс-самцов линии Wistar бактериальный перитонит был индуцирован с использованием модели лигирования слепой кишки и пункции. Животные были рандомизированы для получения изотонического раствора хлорида натрия (группа 1), биорезорбируемой мембраны НА-карбоксиметилцеллюлоза (группа 2) или 0.4% раствор ГК (3 группа). Половину каждой группы умерщвляли на 7-й день, а половину — на 21-й день, а спайки оценивали слепым методом. Отмечены наличие и размеры внутрибрюшных абсцессов. Культуры брали на бактериальный анализ.

Основные показатели результатов Внутрибрюшные спайки и абсцессы.

Результаты Средняя тяжесть спаек была значительно ниже в группе 3 по сравнению с крысами группы 1 на 7 день (II [диапазон, I-IV] против IV [диапазон, I-IV], соответственно; P =.02) и на 21 день (II [диапазон, I-III] против IV [диапазон, II-IV], соответственно; P = 0,02). Не было значимой разницы между крысами группы 2 и группы 1 ни в один из дней. На 7 день абсцессы размером более 2 см были обнаружены у 6 из 12 крыс группы 1 и у 4 из 12 крыс группы 2, но у 0 из 11 крыс группы 3 ( P = 0,01). На 21 день у 0 из 11 крыс группы 3 был внутрибрюшной абсцесс, в отличие от 4 (33%) из 12 крыс группы 1 и 5 (45%) из 11 крыс группы 2. Во всех посевах абсцессов выявлена ​​полимикробная флора.

Заключение Адгезия и образование абсцесса уменьшаются при использовании 0,4% раствора HA, а не биорезорбируемой мембраны HA-карбоксиметилцеллюлоза в модели генерализованного бактериального перитонита на крысах.

ИНТРАБДОМИНАЛЬНАЯ инфекция сопровождается отложением фибрина в брюшной полости. Это отложение фибрина может привести к образованию спаек и абсцесса. Оба объекта имеют важное клиническое значение. Внутрибрюшные абсцессы являются важной причиной заболеваемости и смертности пациентов с генерализованным перитонитом.Спайки — основная причина кишечной непроходимости в развитых странах. Кроме того, спаечные процессы являются причиной от 15% до 20% случаев бесплодия и связаны с хронической болью в животе и тазу. ^{1 -3}

Многочисленные агенты были исследованы для предотвращения спаек, например, декстран, кортикостероиды, фосфатидилхолин, ингибиторы фосфолипазы, нестероидные противовоспалительные препараты, гепарин и тканевый активатор плазминогена. ⁴ Агенты, особенно мешающие коагуляции и фибринолизу, например гепарин и активатор тканевого плазминогена, также изучались для предотвращения образования внутрибрюшного абсцесса. Однако клинический опыт применения этих агентов ограничен, главным образом из-за опасения кровотечений.

Недавно в экспериментальных и клинических исследованиях было показано, что производные гиалуроновой кислоты (НА) успешно предотвращают послеоперационные спаечные процессы. ^{5 -11} Гиалуроновая кислота — это биосовместимый, нетоксичный высокомолекулярный полианионный полисахарид, состоящий из повторяющихся звеньев чередующихся N -ацетилглюкозамина и D-глюкуроновой кислоты.Он содержится во всех тканях и жидкостях организма позвоночных. ¹² Гиалуроновая кислота оказывает стабилизирующее действие на внеклеточные матриксы. Кроме того, он взаимодействует с поверхностями клеток, изменяя их поведение. ^{12 , 13}

Becker et al. ⁵ продемонстрировали значительное снижение образования внутрибрюшной адгезии после колэктомии с использованием биорезорбируемой мембраны, состоящей из HA и биорезорбируемой мембраны на основе карбоксиметилцеллюлозы (HA-CMC).В другом исследовании использование раствора ГК уменьшало образование спаек de novo после гинекологических процедур. ⁶ Антиадгезивный эффект этих агентов не оценивался в инфекционной среде, а также их влияние на формирование внутрибрюшного абсцесса.

Используя модель генерализованного бактериального перитонита на животных, мы изучили влияние биорезорбируемой мембраны HA-CMC и раствора HA на внутрибрюшную адгезию и образование абсцесса.

Семьдесят двум самцам крыс линии Wistar (Harlan Nederland, Zeist, Нидерланды) массой от 250 до 325 г позволяли привыкнуть к лабораторным условиям в течение 1 недели перед экспериментальным использованием.Животных содержали при 21 ° C с 12-часовым циклом день-ночь. У них был свободный доступ к воде и стандартному корму для грызунов (Hope Farms BV, Верден, Нидерланды). Протокол исследования был одобрен Комитетом по этике животных медицинского факультета Университета Неймегена, Неймеген, Нидерланды.

У всех крыс бактериальный перитонит был вызван путем выполнения процедуры перевязки слепой кишки и пункции (CLP) с использованием методов Wichterman et al. ¹⁴

Животным отказывали в корме в течение 12 часов перед первой операцией.В день 0 крыс взвешивали и анестезировали смесью галотана (Fluothane; Zeneca, Чешир, Англия), закиси азота и кислорода. Перед операцией живот побрили и продезинфицировали 70% спиртом. С помощью лапаротомии по средней линии 3 см слепая кишка была рассечена без повреждения васкуляризации и заполнена фекалиями в обратном направлении. После этого слепую кишку лигировали чуть дистальнее илеоцекального клапана с помощью полиглактинового шва 3,0 (Vicryl; Ethicon Inc, Somerville, NJ), и в антимезентериальном участке слепую кишку прокололи один раз иглой 19 калибра.Брюшную стенку ушили в 2 слоя полиглактиновым швом 3,0. Сразу после операции крысы получали однократную дозу гентамицина сульфата (Centrafarm Services BV, Etten-Leur, Нидерланды), 6 мг / кг, внутримышечно и гидрохлорид бупренорфина (Temgesic, Reckitt and Colman Products Ltd, Амстелвин, Нидерланды), 0,1 мг / кг, подкожно. Всех животных реанимировали подкожно 10 мл изотонического раствора хлорида натрия.

В день 1 животных взвешивали, брюшную полость повторно открывали под анестезией, отбирали образцы перитонеальной жидкости и собирали их в конверт (BBL Port-A-Cul; Becton Dickinson, Cockeysville, MD) для микробиологического исследования.Брюшную полость промыли 10 мл изотонического раствора хлорида натрия и удалили слепую кишку. Перед закрытием брюшной полости животных случайным образом распределили для получения 8 мл изотонического раствора хлорида натрия (группа 1, n = 24), биорезорбируемой мембраны HA-CMC 4 × 4 см (Seprafilm; Genzyme Corporation, Кембридж, Массачусетс), обернутой вокруг место резекции слепой кишки и 2 × 3 см под срединным разрезом (группа 2, n = 24) или 8 мл 0,4% раствора HA (Sepracoat Genzyme Corporation), закапываемого по всей брюшной полости (группа 3, n = 24).

Через 1 и 3 недели, соответственно, половину животных в каждой группе взвешивали и умерщвляли с помощью удушения углекислым газом. Спайки были оценены слепым методом одним из нас (HvG) в соответствии с методом Zuhlke et al, ¹⁵ , при этом степень 0 означает отсутствие спаек, а степень IV означает прочные обширные спайки, которые можно рассечь только острыми инструментами, с повреждением органов. почти неизбежно. Оцениваемые участки спаек включали среднюю линию, верхнюю часть живота (печень), париетальную брюшину, сальник и между петлями кишечника.

При наличии отмечали размер абсцессов. Абсцесс определялся как скопление, отделенное стенками, содержащее гнойный материал. Из абсцессов были взяты образцы для микробиологического исследования.

Образцы перитонеальной жидкости и абсцессов культивировали полуколичественно в аэробных и анаэробных условиях. Агар Columbia III с 5% овечьей крови (Becton & Dickinson, Etten-Leur, Нидерланды), агар левин-эозин-метиленовый синий (Oxoid, Харлем, Нидерланды) и анаэробный агар требовательного качества (Tapley, Bury, England) с или без канамицина, использовали для посева.

Через 24 и 48 часов инкубации при 37 ° C бактерии были идентифицированы с использованием стандартных процедур.

Используемые статистические тесты приведены в тексте. Тесты проводились на персональном компьютере с использованием имеющегося в продаже программного обеспечения (программа Stat Xact; Statcon, Witzenhausen, Германия). Статистическая значимость была достигнута при P <0,05. Все тесты были двусторонними.

После CLP у всех крыс были симптомы внутрибрюшного сепсиса.Они продемонстрировали апатичное поведение, глазной экссудат, пилоэрекцию и диарею. Эти симптомы исчезли в течение 2 дней после релапаротомии и удаления некротизированной, перфорированной слепой кишки и перитонеального лаважа. Похудание наблюдалось в первую неделю. Через 1 неделю вес крыс восстановился. Различия в потере веса или увеличении веса не были статистически значимыми между группами ( P = 0,62, тест Манна-Уитни U ). Трое (4%) из 72 животных погибли. Выживаемость в группе 1 составила 100% (24 из 24) по сравнению с 96% (23 из 24) в группе 2 и 92% (22 из 24) в группе 3 (различия не были значительными; P =.49, точный критерий Фишера). Одна крыса умерла сразу после анестезии, другие 2 крысы через 1 и 4 дня после CLP по неизвестным причинам. Никто из них не умер от кровотечения.

Через неделю после CLP значительно меньшее количество крыс в группе 3 имело спаек III и IV степени (5/11 [45%]), чем в группе 1 крыс (11/12 [92%]) ( P = 0,03; Fisher точный тест). Не было существенной разницы в возникновении спаек III и IV степени между крысами группы 2 (9/12 [75%]) и крыс группы 1.Наиболее частыми участками спаек были сальник, латеральная брюшина между петлями кишечника и разрез по средней линии в указанном порядке. Через три недели после CLP у 8 из 12 контрольных крыс и 6 из 11 крыс в группе 2 были спайки III и IV степени, тогда как в группе 3 только 2 из 11 крыс имели спайки III степени, и ни у одной из них не было спаек IV степени ( P = .04; точный тест Фишера).

Средняя тяжесть спаек через 1 и 3 недели показана на рисунке 1. Средняя тяжесть спаек у крыс 3 группы была значительно ниже через 1 неделю (II [диапазон, I-IV]) и 3 недели (II [диапазон , I-III]) по сравнению с крысами группы 1 (1 неделя, IV [диапазон, II-IV]; 3 недели, IV [диапазон, I-IV]) ( P =.02 для обоих сравнений; Тест Манна-Уитни U ). Не было различий в средней степени тяжести у крыс группы 2 через 1 неделю (IV [диапазон II-IV]) или 3 недели (III [диапазон, I-III]) по сравнению с крысами группы 1.

Участие сальника в формировании спаек анализировали отдельно. На 1-й неделе средняя тяжесть спаек сальника была значительно ниже в группе 3 по сравнению с животными группы 1 ( P = 0,02; тест Манна-Уитни U ). Между группами 1 и 2 не было различий в появлении спаек сальника.Через 3 недели спаек сальника III или IV степени не наблюдалось у крыс группы 3, тогда как у 33% крыс группы 1 и 33% крыс группы 2 не было обнаружено спаек сальника III и / или IV степени. Разница не достигла статистической значимости ( P = 0,06; критерий Манна-Уитни U ).

Абсцессы преимущественно располагались в месте резекции слепой кишки.

На 7 день у 6 из 11 крыс в группе 3 были абсцессы, тогда как это было у 10 из 12 крыс в группах 1 и 2; в группе 3 абсцессов размером более 2 см не наблюдалось ( P =.02; Точный тест Фишера).

На 21 день в группе 3 абсцессов обнаружено не было, тогда как у 4 из 12 контрольных крыс и у 5 из 11 крыс в группе 2 был внутрибрюшной абсцесс. Эта разница не достигла статистической значимости ( P = 0,09; точный критерий Фишера). Кожно-кишечный свищ в сочетании с абсцессом развился у крыс 1 группы 1 и 2 крыс группы 2.

Бактериальные культуры, взятые в день резекции слепой кишки, выявили смешанную аэробную и анаэробную флору видов Proteus , Escherichia coli , колиформные грамотрицательные палочки, анаэробные грамотрицательные палочки и Enterococcus и Staphylococcus видов в концентрации от 10 ⁷ до 10 ⁹ колониеобразующих единиц / мл.Аналогичная флора была обнаружена в культурах абсцессов, имеющихся на 7-е сутки.

Преобладающими бактериями, обнаруженными в абсцессах на 21 день, были видов Proteus и E coli . Концентрации, как правило, были ниже, чем на 7-й день.

Мы продемонстрировали, что 0,4% раствор ГК снижает образование внутрибрюшных абсцессов и спаек на клинически значимой модели генерализованного бактериального перитонита, не влияя отрицательно на заболеваемость и смертность.Сходные результаты через 1 и 3 недели после инсульта указывают на длительный эффект.

Несколько исследований продемонстрировали способность растворов ГК предотвращать образование послеоперационных спаек в неинфекционной среде. ^{8 -10,16 , 17} Растворы гиалуроновой кислоты уменьшают серозные травмы за счет предварительного покрытия поверхностей брюшины, которые повреждаются во время операции. Как следствие, поверхности брюшины не срастаются друг с другом с образованием фибринозных отложений и могут зажить без образования спаек.

Внутрибрюшная инфекция — мощный стимул к повреждению брюшины, неизбежно ведущий к образованию спаек. ¹⁸ Раствор гиалуроновой кислоты использовался через 24 часа после первоначального повреждения брюшины для имитации клинического лечения интраабдоминальной инфекции. В этот момент была обнаружена установленная внутрибрюшная инфекция с фибринозным экссудатом и гноем по всей брюшной полости. Следовательно, предварительное покрытие раствора ГК не объясняет уменьшения спаек и абсцессов, и могут быть задействованы другие механизмы действия.

Ряд данных свидетельствует о том, что ГК уменьшает воспаление, препятствует образованию фибрина и ускоряет заживление брюшной ткани (рис. 2). ^{19 -21} Воспаление считается ключевым в формировании спаек и абсцесса. ^{18 , 22 -24} Сообщалось, что гиалуроновая кислота ингибирует высвобождение протеазы из перитонеальных лейкоцитов и кислородных радикалов из макрофагов и поглощает свободные кислородные радикалы. ^{19 , 25 , 26} Макрофаги несут на своей мембране рецептор гиалуроната-CD44, который, как известно, модулирует цитокиновый ответ. ^{27 , 28}

Внутрибрюшная инфекция заметно ухудшает фибринолиз, что отражается в высоких концентрациях ингибиторов, активирующих плазминоген, в брюшной ткани и жидкости. ^{23 , 24,29} Отмена активности ингибитора, активирующего плазминоген, важна для облегчения деградации фибрина и, следовательно, для уменьшения адгезии и образования абсцесса. ³⁰ В другом эксперименте на крысах через 6 часов после закапывания раствора ГК была обнаружена значительно более низкая активность ингибитора, активирующего плазминоген, в брюшной жидкости по сравнению с изотоническим раствором хлорида натрия. Это открытие подтверждает тезис о благоприятном влиянии ГК на фибринолиз. ²⁰

Гиалуроновая кислота ускоряет заживление различных тканей, включая брюшину, без чрезмерного разрастания соединительной ткани. ^{20 , 21} Стимуляция восстановления мезотелия действительно защищает от образования спаек. ^{31 , 32} Такой механизм действия кажется маловероятным, поскольку раствор ГК исчез из брюшной полости в течение 24 часов после закапывания, до заживления брюшины.

Избыток раствора ГК, использованный в нашем исследовании, мог иметь «плавающий» эффект на внутрибрюшные органы, что, в свою очередь, предотвращало спайки. Хотя такое же количество изотонического раствора хлорида натрия не оказало влияния на адгезию и образование абсцесса, это не обязательно опровергает такой эффект, поскольку между растворами имеется существенная разница в вязкости и способности абсорбироваться.Гиалуроновая кислота, установленная в брюшной полости, вероятно, абсорбируется так же, как и перитонеальная жидкость, диафрагмальными устьицами и разлагается так же, как эндогенная ГК, в основном в лимфе и крови, но также и в печени. ³³ Изотонический раствор натрия хлорида всасывается всей брюшиной. Более подходящими растворами для сравнения с 0,4% HA являются гель метилгидроксипропилцеллюлозы и жидкая фаза биорезорбируемой мембраны HA-CMC. Недавно было показано, что гель метилгидроксипропилцеллюлозы не снижает адгезию и образование абсцесса у крыс с внутрибрюшной инфекцией. ³⁰ Биорезорбируемая мембрана HA-CMC, которая превращается в жидкую фазу через 24 часа, по-видимому, не снижает адгезию и образование абсцесса.

Отсутствие эффекта мембраны HA-CMC по сравнению с раствором HA было неожиданным. Неспособность мембраны HA-CMC уменьшать спайки в инфекционной среде согласуется с выводами Medina и ассоциирует ³⁴ на кроличьей модели неполного анастомоза толстой кишки и с дополнительными данными на модели CLP крыс (J.W. Burns, PhD, и H.v.G., устное сообщение, июнь 1998 г.). Можно критиковать, что биорезорбируемая мембрана HA-CMC размещалась только в местах операции, например, в месте резекции слепой кишки и под срединным разрезом, тогда как повреждение брюшины было генерализованным. ¹⁸ Эта первоначально местная терапия по сравнению с раствором ГК может объяснить образование спаек и абсцесса в других частях брюшной полости. Однако большинство абсцессов было обнаружено в местах расположения мембраны HA-CMC. Мембрана HA-CMC могла действовать как инородный материал, который в присутствии бактерий усиливает воспалительную реакцию.Кожно-кишечный свищ, наблюдаемый у крыс, получавших биорезорбируемую мембрану, является признаком усиленного воспаления, адгезии к париетальной брюшине и образования абсцесса. Сообщалось, что соединение мембраны, CMC, увеличивает образование адгезии к поврежденной париетальной брюшине на кроличьей модели повреждения брюшины. ³⁵ Однако другие исследования показали обратное. ^{16 , 36}

Раннее уменьшение фибринозных спаек при интраабдоминальной инфекции приводит к бактериемии и последующей смертности, как описано ранее. ³⁰ Повышенной смертности, связанной с раствором ГК, не было обнаружено, вероятно, в результате лечения антибиотиками. Однако не исключен антибиотический эффект раствора ГК. Недавно было высказано предположение, что ГК придает устойчивость к фагоцитозу грамположительных организмов. ³⁷

Лечение внутрибрюшной инфекции 0,4% раствором ГК предотвращает образование спаек и абсцессов. Необходимы дальнейшие эксперименты, чтобы выяснить механизм (ы) действия раствора ГК в инфекционной среде.

Работа поддержана грантом Genzyme BV, Наарден, Нидерланды.

Отпечатки: Гарри ван Гур, доктор медицинских наук, отделение хирургии, университетская больница Неймегена, а / я 9101, 6500 HB Неймеген, Нидерланды (электронная почта: [email protected]).

2.ДеЧерни АхдиЗерега Г.С. Клиническая проблема формирования внутрибрюшинных послеоперационных спаек после общей хирургии и применения барьеров для предотвращения спаек. Surg Clin North Am. 1997; 3671-688Google ScholarCrossref 3.DiZerega GS Биохимические события в восстановлении ткани брюшины. Eur J Surg. 1997; 577 (доп.) 10-16 Google Scholar4.Kowalczyk CLDiamond М.П. Ведение спаечной болезни. Treutner KHSchumpelick Ведс Спайки брюшины. Нью-Йорк, Нью-Йорк Springer-Verlag NY Inc 1997; 315-324 Google Scholar 5. Беккер JMDayton МОГФацио VW и другие. Профилактика послеоперационных спаек брюшной полости с помощью биорезорбируемой мембраны на основе гиалуроната натрия: проспективное рандомизированное двойное слепое многоцентровое исследование. J Am Coll Surg. 1996; 183297-306 Google Scholar6. Алмаз MP Уменьшение послеоперационных спаек de novo путем интраоперационного предварительного покрытия раствором Sepracoat (HAL-C): проспективное рандомизированное, слепое, плацебо-контролируемое многоцентровое исследование. Fertil Steril. 1998; 691067-1074Google ScholarCrossref 7. Алмаз MP Уменьшение спаек после миомэктомии матки мембраной Seprafilm (HAL-F): слепое рандомизированное многоцентровое клиническое исследование. Fertil Steril. 1996; 66904-910Google Scholar8.Burns JWSkinner KColt J и другие. Профилактика травм тканей и послеоперационных спаек за счет предварительного покрытия тканей растворами гиалуроновой кислоты. J Surg Res. 1995; 59644-652Google ScholarCrossref 9. Урман БГомель VJetha N Влияние гиалуроновой кислоты на формирование послеоперационной внутрибрюшинной адгезии на модели крыс. Fertil Steril. , 1991; 56563–567. YIsrael А.А.Гольдберг Е.П. Профилактика послеоперационных спаек брюшной полости путем предварительного покрытия тканей растворами полимеров. J Surg Res. 1993; 55422-426Google ScholarCrossref 11. Альпонат Алакшминарасаппа СРЯвуз NGoh PMY Предотвращение спаек с помощью рассасывающегося адгезионного барьера Seprafilm: модель послеоперационной грыжи у крыс. Am Surg. 1997; 63818-819Google Scholar12.Fraser JRELaurent TCLaurent UBG Hyaluronan: его природа, распространение и оборот. J Intern Med. 1997; 24223-77Google ScholarCrossref 13. Тул. Б.П.Кнудсон CBKnudson WGoldberg RLChi-Rossi GBiswas C Взаимодействия гиалуронат-клетки в морфогенезе и онкогенезе.Вольф JRed Мезенхимно-эпителиальные взаимодействия в нервном развитии. Нью-Йорк, Нью-Йорк Springer-Verlag NY Inc 1987; 267-278 Google Scholar14.Wichterman КАБауэ AEChaundry IH Сепсис и септический шок: обзор лабораторных моделей и предложение. J Surg Res. 1980; 29189-201Google ScholarCrossref 15. Zuhlke HVLorenz EMStraub EMSavvas V Патофизиология и классификация спаек. Langenbecks Arch Chir Suppl II Verh Dtsch Ges Chir. 1990; 1009-1016 Google Scholar16.Peck LSQuigg JMFossum Г. Т. Гольдберг EP Оценка растворов CMC и HA для адгезиолиза. J Invest Surg. 1995; 8337-348Google ScholarCrossref 17.Seeger JMKaelin LDStaples ЭМ и другие. Профилактика послеоперационных спаек перикарда с помощью тканезащитных растворов. J Surg Res. 1997; 6863-66Google ScholarCrossref 18. van Goor Hde Graaf JSGrond J и другие.Фибринолитическая активность в брюшной полости крыс с перитонеальным перитонитом. Br J Surg. 1994; 811046-1049Google ScholarCrossref 19.Suzuki Ямагути T Влияние гиалуроновой кислоты на фагоцитоз макрофагов и активное высвобождение кислорода. Действия агентов. 1993; 3832-37Google ScholarCrossref 20.Weigel PHFuller GMLeBoeuf RD Модель роли гиалуроновой кислоты и фибрина в ранних событиях во время воспалительной реакции и заживления ран. J. Theor Biol. 1986; 119219-226Google ScholarCrossref 21.Adzick NSLongacker MT Заживление плода без рубца: терапевтическое значение. Ann Surg. 1992; 2153-7Google ScholarCrossref 22.Hau TPayne WDSimmons Р.Л. Фибринолитическая активность брюшины при экспериментальном перитоните. Surg Gynecol Obstet. 1987; 148415-418Google Scholar23.van Goor HBlom VJJvan der Meer JSluiter WJBleichrodt Коагуляция RP и фибринолитические реакции в перитонеальной жидкости и плазме человека на бактериальный перитонит. Br J Surg. 1996; 831133-1135Google ScholarCrossref 24.Whawell С.А.Томпсон EMFlemming К.А.Томпсон JN Экспрессия ингибитора активатора плазминогена-2 в воспаленном отростке. Гистопатология. 1995; 2775-78Google ScholarCrossref 25. Гринвальд RAMay WW Влияние свободных радикалов кислорода на гиалуроновую кислоту. Arthritis Rheum. 1980; 223455-461Google ScholarCrossref 26.Akatzuka MYamamoto YTobetto K и другие.Подавляющее действие гиалуроновой кислоты на высвобождение эластазы из перитонеальных лейкоцитов крыс. J Pharm Pharmacol. 1993; 45110-114Google ScholarCrossref 27.Noble PWLake FRHenson PMRiches DW Гиалуронатная активация CD44 индуцирует экспрессию фактора роста-1 инсулина посредством альфа-зависимого механизма некроза опухоли в макрофагах мышей. J Clin Invest. 1993; 912368-2377Google ScholarCrossref 28.McKee CMPenno MBCowman M и другие.Фрагменты гиалуроновой кислоты индуцируют экспрессию гена хемокина в альвеолярных макрофагах. J Clin Invest. 1996; 982403-2413Google ScholarCrossref 29.Vipond MNWhawell С.А.Томпсон JNDudley HA Фибринолитическая активность брюшины и внутрибрюшные спайки. Ланцет. 1990; 3351120–1122Google ScholarCrossref 30.van Goor Hde Graaf JSKooi K и другие. Влияние рекомбинантного тканевого активатора плазминогена на формирование внутрибрюшного абсцесса у крыс с генерализованным перитонитом. J Am Coll Surg. 1994; 179407-411Google Scholar31.Buckman RFBuckman PDHufnagel HVGervin AS Физиологическая основа для заживления деперитонеализированных поверхностей без спаек. J Surg Res. 1976; 2167-76Google ScholarCrossref 32.Gervin А.С.акетт CLSilver D Серозный гипофибринолиз: причина послеоперационных спаек. Am J Surg. 1973; 12580-88Google ScholarCrossref 33.Fraser JRELaurent TC Обмен и метаболизм гиалуронана.Evered DWhelan Jeds Биология гиалуроновой кислоты. Chichester, Sussex Whiley-Interscience, 1989; 41–53, Google Scholar, 34, Медина. MPaddock HNConnoly Р.Дж.Швайцберг Антиадгезионный барьер SD Novel не препятствует заживлению анастомоза на модели кролика. J Invest Surg. 1995; 8179-186Google ScholarCrossref 35.Holmdahl ЛИЛ-Джабрин MRisberg Б.О. Роль фибринолиза в формировании послеоперационных спаек. Регенерация для восстановления ран. 1994; 2171-176Google ScholarCrossref 36.Diamond MPDeCherney AHLinskey CB и другие. Восстановление адгезии на модели рога матки кролика, I: восстановление карбоксиметилцеллюлозой. Int J Fertil. 1988; 33372-375 Google Scholar 37. Моисей EAWessels MRZalcman K и другие. Относительный вклад капсулы гиалуроновой кислоты и белка М в вирулентность мукоидного штамма Streptococcus группы A . Infect Immun. 1997; 6564-71.

Лизис спаек — Больница и медицинский центр Лахи, Берлингтон и Пибоди

Шеннон DW

(Рассечение спаек; адгезиолиз)

Определение

Спайки — это шрамы, которые образуются на теле. Обычно они образуются в области живота или таза. Они также могут образовываться в суставах или глазах. Спайки развиваются естественным путем после операции как часть процесса заживления. Также они могут развиться после инфекции или любого другого воспалительного процесса, например:

Лизис спаек — это процесс рассечения рубцовой ткани внутри тела.Это делается для восстановления нормальной функции и уменьшения боли.

Лапароскопическая хирургия спаек кишечника

Авторские права © Nucleus Medical Media, Inc.

Причины процедуры

Спайки могут вызывать:

• Боль
• Непроходимость кишечника
• Бесплодие
• Ограничение диапазона движения

Эта операция может устранить непроходимость кишечника и лечить бесплодие, вызванное спаечным процессом.Он также уменьшает хроническую боль в животе у некоторых людей.

Возможные осложнения

Проблемы с процедурой редки, но все процедуры связаны с определенным риском. Ваш врач рассмотрит возможные проблемы, например:

• Травма органов или сустава
• Ухудшение спаек
• Кровотечение
• Инфекция
• Грыжа

Перед процедурой поговорите со своим врачом о способах управления факторами, которые могут увеличить риск осложнений, таких как:

Чего ожидать

До процедуры

Ваш врач проведет медицинский осмотр и может назначить некоторые из следующих анализов:

• Анализы крови и мочи
• Визуализирующие исследования будут использоваться для поиска спаек и их осложнений:

До операции:

• Поговорите со своим врачом о принимаемых вами лекарствах.Вас могут попросить прекратить прием некоторых лекарств за неделю до процедуры.
• Организовать поездку из больницы домой. Кроме того, попросите кого-нибудь помочь вам дома.
• Съешьте легкую пищу накануне операции. Ничего не ешьте и не пейте после полуночи.

Описание процедуры

Эта операция обычно выполняется лапароскопически .

Спайки брюшной полости

• В брюшной полости будут сделаны небольшие отверстия для доступа к пораженным органам.Газ используется для расширения живота, чтобы хирургу было легче видеть. Затем лапароскоп будет вставлен через небольшие отверстия. Трубки со светом и камерой проецируют изображение на экран. После обнаружения спайки вырезаются небольшими хирургическими инструментами, которые вводятся через трубки. Это освободит органы, попавшие в спайки.

В некоторых случаях врачу может потребоваться переключиться на открытую абдоминальную операцию или провести ее. В брюшной полости делается больший разрез.Это позволит получить прямой доступ ко всем органам. Спайки будут вырезаны.

Спайки суставов

• Когда вы спите, лапароскоп вводится через небольшое отверстие в коже. Район будет обследован. Вокруг сустава будет сделано несколько небольших разрезов. Используя небольшие инструменты, которые вставляются в эти отверстия, спайки будут вырезаны. Это освободит спайки, ограничивающие функцию сустава.

Сколько времени это займет?

1-3 часа

Сколько будет больно?

Анестезия предотвратит боль во время операции.С болью и дискомфортом после процедуры можно справиться с помощью лекарств.

Среднее время пребывания в больнице

Эта операция проводится в условиях больницы. Если вам сделают лапароскопическую операцию, вы сможете уехать в этот или следующий день. Если у вас открытая операция, вам нужно будет остаться в больнице на несколько дней. Возможно, вам придется остаться подольше, если у вас возникнут осложнения.

Уход после процедуры

Предотвращение заражения

Во время вашего пребывания персонал больницы примет меры, чтобы снизить вероятность заражения, например:

• Мытье рук
• В перчатках или масках
• Держите разрезы закрытыми

Есть также шаги, которые можно предпринять, чтобы снизить вероятность заражения, например:

• Часто мыть руки и напоминать медицинским работникам о том же
• Напоминание медицинским работникам о необходимости ношения перчаток или масок
• Не позволять другим прикасаться к вашему разрезу

Дома

Некоторые действия будут ограничены до полного заживления разрезов.Обязательно следуйте инструкциям врача по уходу за разрезом, чтобы предотвратить заражение.

Позвоните своему врачу

Позвоните своему врачу, если произойдет что-либо из этого:

• Признаки инфекции, включая лихорадку и озноб
• Покраснение, отек, усиливающаяся боль, сильное кровотечение или выделения из места разреза
• Боль, которую вы не можете контролировать с помощью лекарств, которые вам давали
• Постоянная тошнота или рвота
• Диарея, запор, стул с кровью или черный стул
• Вздутие живота
• Усиливающаяся боль в суставах или отек
• Проблемы с мочеиспусканием
• Кашель, одышка или боль в груди

Если вы считаете, что вам нужна неотложная помощь, немедленно вызовите скорую медицинскую помощь.

Список литературы

Адгезия. Сайт горы Синай. Доступно по адресу: http://www.mountsinai.org/health-library/diseases-conditions/adhesion. Обновлено 5 апреля 2016 г. Проверено 10 января 2018 г.

Дункер М.С., Бемельман В.А., Виджн и др. Отдаленные результаты и качество жизни после лапароскопического адгезиолиза при хронической боли в животе. J Am Assoc Gynecol Laparosc. 2004; 11 (1): 36-41.

Устранение кишечной непроходимости. Сайт «Энциклопедия хирургии». Доступно по адресу: http://www.surgeryencyclopedia.com/Fi-La/Intestinal-Obstruction-Repair.html. По состоянию на 10 января 2018 г.

Ламву Г., Ту Ф, Ас-Сани С., Золноун Д., Стидж Дж. Ф. Роль лапароскопии в диагностике и лечении состояний, связанных с хронической тазовой болью. Obstet Gynecol Clin N Am. 2004; 31 (3): 619-630.

Szomstein S, Lo Menzo E, Simpfendorfer C, Zundel N, Rosenthal RJ. Лапароскопический лизис спаек. Мир J Surg. 2006; 30 (4): 535-540.

Информация о редакции

• Рецензент: Медицинский наблюдательный совет EBSCO Даус Манке, доктор медицины
• Дата пересмотра: 11/2018
• Дата обновления: 20.12.2014

Спайки брюшной полости в гинекологической хирургии после кесарева сечения: продольное популяционное регистровое исследование — Hesselman — 2018 — BJOG: Международный журнал акушерства и гинекологии

Объектив

Целью исследования было оценить связь между спаечным процессом брюшной полости во время гинекологической операции и кесаревым сечением в анамнезе, а также изучить акушерские факторы, способствующие образованию спаек после кесарева сечения (CS).

Типовой проект

Продольное исследование регистров населения.

Настройка

Швеция.

Население

Женщины, перенесшие доброкачественную гистерэктомию и / или операцию на придатках в Швеции, 2000–2014 гг., С предыдущими родами в 1973–2013 гг. ( n = 15 479).

Методы

Информация о спаечных процессах брюшной полости во время гинекологических операций, анамнезе, беременностях и родах была получена из Шведских национальных регистров здоровья и качества.

Основные показатели результатов

Спайки.

Результаты

У женщин с предыдущим КС спайки присутствовали у 37% по сравнению с 10% женщин без предыдущего КС [отношение шансов (ОШ): 5,18, 95% доверительный интервал (ДИ): 4,70–5,71]. Спайки увеличивались с увеличением числа кесарева сечения: 32% после одного КС; 42% после двух CS и 59% после трех и более CS ( P < 0,001). Независимо от количества CS, факторы CS, такие как возраст ≥35 лет (aOR: 1.28, 95% ДИ: 1,05–1,55), индекс массы тела (ИМТ) ≥30 [скорректированное OR (aOR): 1,91, 95% CI: 1,49–2,45] и послеродовая инфекция (aOR: 1,55, 95% CI: 1,05– 2.30) увеличивал риск спаек.

Выводы

Наличие спаек при абдоминальной гинекологической хирургии связано с личным анамнезом женщин, имевших кесарево сечение. Количество кесарева сечения было важным показателем спаек; пожилой возраст, ожирение и послеродовая инфекция еще больше увеличили заболеваемость.

Аннотация в твиттере

Повторное кесарево сечение, возраст, ожирение и инфекция увеличивают риск спаек таза после кесарева сечения.

.