Уреазный тест на хеликобактер пилори: 13С-уреазный дыхательный тест на определение Helicobacter pylori

Содержание

Анализ на хеликобактер – цены в Сети клиник МЕГИ

Что такое Helicobacter pylori?

Это бактерия, поражающая пилорический отдел (привратник) желудка и двенадцатиперстную кишку.


В 2005 году ученые Робин Уоррен и Барри Маршал получили Нобелевскую премию за открытие механизмов развития этих недугов, хотя ранее предполагалось, что они вызываются другими причинами (стресс, неправильное питание и пр.).

В настоящее время выявлена прямая связь хеликобактер пилори с возникновением гастрита и язвы желудка.

Симптомы поражения хеликобактерной инфекцией

В большинстве случаев появляются боли в желудке или чувство переполнения после приема даже незначительного количества пищи, изжога, отрыжка, тошнота.

Хеликобактерная инфекция может быть причиной ряда проблем, в том числе и крайне серьезных:


  1. Гастрит
  2. Дуоденит
  3. Язвенная болезнь желудка
  4. Язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки
  5. Железодефицит
  6. Рак желудка

Какими методами выявляется хеликобактер?

Есть несколько лабораторных тестов, которые позволяют выявить инфицированы Вы хеликобактером или нет:


В Сети клиник МЕГИ Вы можете сделать все вышеперечисленные тесты.

Нужно ли Вам провести тесты для выявления хеликобактерной инфекции?

Если у Вас нет жалоб, то нет никакой необходимости в обследовании. Тесты показаны следующим категориям пациентов:


  1. Пациенты, имеющие вышеописанные симптомы
  2. Пациенты, у которых выявили язвенную болезнь желудка или двенадцатиперстной кишки
  3. Пациенты, у которых ранее выявляли язвенную болезнь желудка или двенадцатиперстной кишки

Как хеликобактер пилори выживает в кислой среде желудка?

Хеликобактер пилори, в результате своей жизнедеятельности формирует вокруг себя облако щелочной среды, что позволяет микроорганизму выживать в агрессивной среде желудочно-кишечного тракта.


Распространенность хеликобактерной инфекции.

По самым консервативным оценкам хеликобактерная инфекция встречается у 50% населения земли. В развитых странах инфицировано преимущественно взрослое население.

В странах с низким социально-экономическим уровнем жизни хеликобактером поражено до 80% взрослого населения, инфицированность выявляется даже у детей в возрасте до 10 лет.


Каким образом происходит заражение хеликобактерной инфекцией?

На сегодняшний день, считается, что основным путем заражения является фекально-оральный путь, т.е. через загрязненную воду, продукты питания, при несоблюдении правил гигиены, употреблении в пищу немытых овощей, фруктов. Путь заражения через поцелуи остается спорным, хотя доказано присутствие хеликобактер в полости рта и на зубном налете.


Врач может рекомендовать исследование на носительство хеликобактер и в других случаях:
  1. Семейная история рака желудка
  2. Атрофический гастрит
  3. Дефицит железа

Нужно ли проводить гастроскопию (эзофагогастродуаденоскпию, ФГДС, эндоскопическое исследование желудка и двенадцатиперстной кишки) при подозрении или в контроле лечения хеликобактерной инфекции?

Подозрение на наличие хеликобактерной инфекции не является показанием к эндоскопическому исследованию. Но данное исследование может быть назначено, если врач заподозрит, например, кровоточащую язву. Обычно, в ходе исследования, проводится биопсия тканей желудка, которая позволит выявить хеликобактер пилори в биоптате (кусочке ткани желудка) методом ПЦР.


На сколько эффективно лечение? Нужно ли контролировать результат?

Современные схемы лечения весьма эффективны. Но до 20% людей не излечиваются после первого курса лечения. Обычно это требует либо продления лечения еще на две недели, либо смены как минимум одного антибиотика.


Анализ на Хеликобактер пилори в Москве, цена уреазного теста на Helicobacter pilory

Удивительный микроб

Хеликобактер пилори имеет длину 3,5 мкм. Если выложить друг за другом 300 таких бактерий, то их общая длина будет чуть меньше одного миллиметра. Тело у микроба спиралевидное, гибкое. На одном конце 2-6 жгутиков. С их помощью хеликобактер быстро передвигается внутри желудка, подыскивает себе удобное место и внедряется, пробуривая отверстие, в слизистой и мышечной ткани.

От разрушительного действия соляной кислоты микроб защищается, выделяя уреазу и другие вещества.

При неблагоприятных условиях (вне организма) бактерия принимает форму шарика (кокка). Её жизнедеятельность замедляется. В таком виде микроб может «спать» длительно — годами. Но как только оказывается в желудке — «просыпается», удлиняется, отращивает жгутики и начинает проявлять патогенную активность.

Как можно заразиться?

По данным статистики, Helicobacter pilory обнаруживается у каждого второго европейца или американца, у семи из десяти азиатов и у девяти из десяти африканцев. Микроб передаётся от человека человеку с немытыми руками, плохо обработанной посудой и столовыми приборами, при поцелуях, пользовании общей зубной щёткой.

Опасность Helicobacter pilory

При активном развитии колоний хеликобактер пилори у человека развиваются признаки гастрита: боли и рези в желудке, тошнота, снижение аппетита. Микробы продолжают свою патогенную деятельность, внедряясь в мышечный слой желудка, что приводит к образованию язв. Клинические симптомы обостряются. Присоединяется неприятный запах изо рта, боли в эпигастрии, связанные с приемом пищи, вздутие живота. Человек теряет вес, становится раздражительным.

Но самое опасное: хеликобактер считается ранним маркером возможности развития рака.

Диагностика Хеликобактер пилори

Обнаружить микроб помогает экспресс тест, который проводится во время эндоскопического обследования желудка. Выявив характерные изменения слизистой оболочки пилорической части желудка, доктор берет кусочек тканей (биопсия). Хеликобактер пилори обладает способностью выделять уреазу. Этот фермент разлагает мочевину на аммиак и углекислоту.

Хелпил-тест (быстрый уреазный тест) проводится просто. Биоптат помещают на стандартный одноразовый диск, пропитанный мочевиной и кислотным индикатором. Если в кусочке тканей имеется хеликобактер — мочевина диска под действием ферментов бактерий разлагается и диск окрашивается в синий цвет.

Анализ на Хеликобактер пилори в Москве

Клиника MAJOR CLINIC оснащена всем необходимым для проведения хелпил-теста во время эндоскопического исследования. Результат известен сразу по окончании гастроскопии (эзофагогастродуоденоскопии). Записаться на уреазный тест на хеликобактер пилори и узнать цены можно по телефону регистратуры и на сайте. Задайте интересующие вопросы доктору на приеме. При обнаружении бактерий, вы получите четкий план лечения с гарантией полного выздоровления. Не терпите боль в эпигастрии — обследуйтесь и избавьтесь от неё!

Сделать дыхательный тест на Helicobacter pylori в Одинцово и Звенигороде: лечение Хеликобактер Пилори

Helicobacter pylori – бактерия, способная вызывать язву желудка, язву или эрозии двенадцатиперстной кишки, эрозивный гастрит, гастродуоденит, бульбит.

Дыхательный тест — это неинвазивная дыхательная диагностика инфекции хеликобактер пилори (Helicobacter pylori). Применим в практике врачей-гастроэнтерологов, терапевтов, педиатров и семейных врачей, он безопасен для маленьких детей и беременных женщин. Его можно использовать для первичной диагностики хеликобактер пилори, а также для контроля хода антихеликобактерной терапии и проверки эффективности уже проведенной терапии.

Принцип действия дыхательного теста основан на биохимическом методе определения инфицированности бактерией хеликобактер пилори по ее уреазной активности, т.е. по способности гидролизовать карбамид. Пациент принимает раствор карбамида, и образующийся в ходе гидролиза газ поступает в воздух ротовой полости. Нагрузочный метод основан на сравнении уровня содержания газа, образующегося в ходе гидролиза карбамида (нагрузки), с базальным, исходным уровнем содержания этого газа. Из всех возможных уреазопродуцентов только хеликобактер пилори проявляет столь высокую уреазную активность, вследствие которой быстро гидролизуется карбамид. Для каждого пациента сравнивается его базальный уровень с его же нагрузочным уровнем, за счет чего такой метод исследования и обеспечивает высокую точность диагностики Helicobacter pylori.

Подготовка к исследованию

Дыхательный уреазный тест проводится натощак, последний прием пищи минимум за 6 часов до обследования. Лучше всего делать тест утром, с последним приемом легкого ужина не позднее 22:00 часов.

Не рекомендуем перед тестом принимать:

  • антисекреторные препараты и антибиотики в течение 2 недель;
  • анальгетики, противовоспалительные, антацидные препараты в течение 5 дней;
  • крепкие спиртные напитки в течение 3 дней;
  • бобовые (фасоль, горох, соя и т.д.) накануне теста.

В день обследования почистить зубы и тщательно прополоскать ротовую полость.

За 3 часа до дыхательного теста на хеликобактер не курить, отказаться от жевательной резинки.

Сделать дыхательный тест на хеликобактер в Одинцово и Звенигороде

Сдать анализ на хеликобактер пилори (дыхательный тест или кровь из вены на антитела IgA, IgM, IgG), получить расшифровку врача и при необходимости пройти лечение — всё это можно сделать в одном месте, сэкономив время и деньги. Конкурентные цены на все виды медицинских услуг, лучшие врачи, современные лаборатории, приятный сервис, запись на прием в удобное для вас время: 8(495)150-03-03.

Анализы и тесты на Хеликобактер пилори

Стоимость

ЭГДС диагностическая (эзофагогастродуоденоскопия без наркоза)

Биопсия желудка с помощью эндоскопии

Уреазный экспресс-тест на Helicopter Pylori

Анестезия

Анестезия аппликационная

Хеликбактериоз по современным данным, провоцирует развитие серьезных поражений слизистых оболочек, вызывая множество заболеваний желудочно-кишечного тракта, включая развитие рака желудка. Именно поэтому при наличии жалоб в этой области, неправильно проводить лечение самостоятельно с помощью безрецептурных препаратов. Необходимо проконсультироваться с гастроэнтерологом и пройти тест на хеликобактериоз. Он может быть инвазивным (биопсия при гастроскопии) и неинвазивным (определение продуктов жизнедеятельности бактерии в выдыхаемом воздухе, моче, кале, слюне). Только врач может определить, какой тест или их комбинация в вашем случае даст ему необходимую информацию для проведения эффективного лечения заболевания.

Уреазный дыхательный тест

Хеликобактер пилори разлагает мочевину на аммиак и углекислый газ. Основываясь на этом факте, обследование на концентрацию аммиака в выдыхаемом воздухе, позволяет определить наличие бактерий в вашем организме. Проконсультируйтесь заранее с персоналом клиники о подготовке к тесту, который проводит на приеме гастроэнтеролог. Уреазный дыхательный тест абсолютно безвреден  и достаточно достоверен – 80-85% и используется для первичной диагностики, а также для контроля хода антихеликобактерной терапии и проверки эффективности уже проведенной терапии.

Гистологический тест на Helicobacter pylori.

Cамым надёжным и информативным методом диагностики хеликобактерной инфекции остаётся биопсия, производимая во время гастроскопии желудка и двенадцатиперстной кишки. Взятую при биопсии ткань слизистой подвергают быстрому тестированию на наличие уреазы и антигенов H. pylori, гистологическому исследованию, а также исследованию с помощью культивации бактерии в специальной среде для ее выделения. Это исследование дает 100%-достоверную информацию, позволяя также количественно оценить бактерии, и провести анализ чувствительности бактерии к различным антибиотикам для выбора самого эффективного.

Иммунологическое исследование на Helicobacter pylori

Деятельность хеликобактер пилори вызывает имунную реакцию организма, проявляющуюся в выработке антител на бактерию. К иммунологическим исследованиям относится определение бактериальных антител в слюне, моче, крови, кале. Самым простым, недорогим, доступным является тест определения антител в крови. Точность диагноза составляет порядка 80%. К сожалению, он пригоден лишь для постановки диагноза, но не подходит для оценки эффективности лечения.

Поделиться в соц. сетях:

ВРАЧИ ОТДЕЛЕНИЯ Анализы на Хеликобактер пилори

УраковаЯна Чингизовна

Врач — эндоскопист. Кандидат медицинских наук. Высшей квалификационной категории.

Дыхательный уреазный тест

АНМО «Ставропольский краевой клинический консультативно-диагностический центр»:

355017, г. Ставрополь, ул. Ленина 304

(8652) 951-951, (8652) 35-61-49 (факс)

(8652) 951-951, (8652) 31-51-51 (справочная служба)

Посмотреть подробнее

Обособленное подразделение «Диагностический центр на Западном обходе»:

355029 г. Ставрополь, ул. Западный обход, 64

(8652) 951-951, (8652) 31-51-51 (контактный телефон)

(8652) 31-68-89 (факс)

Посмотреть подробнее

Клиника семейного врача:

355017 г. Ставрополь, пр. К. Маркса, 110 (за ЦУМом)

(8652) 951-951, (8652) 31-51-51 (контактный телефон)

(8652) 31-50-60 (регистратура)

Посмотреть подробнее

Невинномысский филиал:

357107, г. Невинномысск, ул. Низяева 1

(86554) 95-777, 8-962-400-57-10 (регистратура)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение в г. Черкесске :

369000, г. Черкесск, ул. Умара Алиева 31

8(8782) 26-48-02, +7-988-700-81-06 (контактные телефоны)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение в г. Элисте :

358000, г. Элиста, ул. Республиканская, 47

8(989) 735-42-07 (контактные телефоны)

Посмотреть подробнее

ЗАО «Краевой клинический диагностический центр»:

355017 г. Ставрополь, ул. Ленина 304

(8652) 951-951, (8652) 35-61-49 (факс)

(8652) 951-951, (8652) 31-51-51 (справочная служба)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение на ул. Савченко, 38 корп. 9:

355021, г. Ставрополь, ул. Савченко, 38, корп. 9

8 (8652) 316-847 (контактный телефон)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение на ул. Чехова, 77 :

355000, г. Ставрополь, ул. Чехова, 77

8(8652) 951-943 (контактный телефон)

Посмотреть подробнее

Обособленное структурное подразделение в г. Михайловске:

358000, г. Михайловск, ул. Ленина, 201 (в новом жилом районе «Акварель»).

8(988) 099-15-55 (контактный телефон)

Посмотреть подробнее

Дыхательный тест на Хеликобактер в Одинцово

Если у вас бывают боли и тяжесть в желудке, изжога, дискомфорт, тошнота – наши врачи-гастроэнтерологи рекомендуют пройти по доступной цене дыхательный тест на Хеликобактер Пилори в Медицинском центре «Альтамед+» в Одинцово.

В прежние времена считалось, что гастрит, язва и другие нарушения в работе желудочно-кишечного тракта связаны с неправильным питанием и стрессом, однако в начале 2000-х ученые установили возможность бактериального происхождения этих заболеваний, возникающих из-за присутствия в организме бактерии Helicobacter Pylori. Этот вид бактерий способен существовать и размножаться в кислой среде желудка благодаря своей аммиачной оболочке.

Для того, чтобы подтвердить, является ли Хеликобактер причиной заболеваний ЖКТ, в Альтамед+ можно провести специальную диагностику — уреазный дыхательный тест на хеликобактер. Это исследование зарекомендовало себя как неинвазивная, быстрая, простая и обладающая высокой точностью процедура, которую часто проводят терапевты и гастроэнтерологи на аппарате Хелик (Helic).
Суть исследования

Во время проведения дыхательного теста врач выявляет наличие уреазы – продукт жизнедеятельности бактерии — в выдыхаемом пациентом воздухе. Пациент принимает специальный реактив, и так как уреаза способна гидролизовать карбамид, через 30 минут в выдыхаемом воздухе специальным прибором будут зафиксированы пары аммиака и углекислого газа. Это и подтвердит наличие хеликобактера в организме. В случае, если прибор не зафиксирует эти пары – бактерия в организме отсутствует.

Подготовка к дыхательному тесту

К проведению дыхательного теста на аппарате Хелик пациенту нужно тщательно подготовиться, потому что от правильной подготовки к процедуре напрямую зависит ее результат. Необходимо соблюсти следующие меры:

  • Уреазный дыхательный тест проводится натощак, утром нельзя завтракать, а ужин накануне должен быть максимально легким;
  • За 3 дня до исследования исключить употребление алкоголя;
  • Перед проведением теста не чистить зубы;
  • За несколько часов до теста нельзя курить;
  • за 2 недели следует исключить прием препаратов, влияющих на состояние желудочно-кишечного тракта.
Процесс проведения исследования

Уреазный дыхательный тест на хеликобактер пилори проводится в нашем медицинском центре «Альтамед+» в Одинцово при помощи аппарата Хелик-тест. Длительность исследования составляет около 30 минут, после чего будут доступны данные исследования.

Диагностика на аппарате Хелик-тест удобна и безопасна в применении, ее можно проводить взрослым, детям и даже беременным женщинам.

Данное исследование проводится в рамках приема врача-гастроэнтеролога, который интерпретирует результаты теста и даст рекомендации по дальнейшему лечению.

Расшифровка результатов

При расшифровке результатов могут быть выявлены 3 фазы — неактивная, средняя и тяжелая инфекция. При неактивной фазе лечение оказывается самым эффективным, при средней потребует большего времени, пря тяжелой лечение может быть длительным и непростым. Поэтому после проведения дыхательного теста наши врач-гастроэнтеролог в Альтамед+ назначит своевременную терапию, уничтожающую бактерию.

По окончании курса лечения специалисты «Альтамед+» всегда рекомендуют пройти повторное исследование на аппарате Хелик, чтобы проверить результаты проведенной терапии.

Методы диагностики Helicobacter pylori

Сегодня для диагностики инфекции Helicobacter pylori применяется достаточно широкий спектр различных тестов. Но у каждого из них есть свои особенности, которые могут влиять на точность исследования.

Рассмотрим некоторые из них.

Гистологический метод (при заборе биопсии)

  • Несмотря на высокую чувствительность гистологического метода, на его точность может оказать влияние количество биоптатов и место их забора, учитывая тот факт, что бактерии Н. pylori могут быть неравномерно распределены по слизистой оболочке желудка.

Быстрый уреазный тест. Маленький кусочек слизистой желудка при биопсии помещают в специальный раствор. Если Н. pylori обнаруживается, то за счет продуцируемой уреазы раствор будет менять цвет на малиновый.  Результат доступен через 15-30 минут.

  • Ложноположительные результаты редки, однако в желудке есть много бактерий, которые могут продуцировать уреазу и окрашивать тестовый раствор.
  • Ложноотрицательный результат может быть при малой степени обсемененности слизистой оболочки желудка Н. pylori.

Серологический метод (наличие антител к Н. pylori в крови)

  • Данный метод малоинформативен у пациентов со слабым иммунным ответом, ранней стадией инфицирования, т.к. антитела IgG появляются не ранее, чем через месяц после инфицирования.
  • Несмотря на то, что уровень антител в процессе успешной эрадикации падает, серологическая реакция остается положительной в течение ряда лет, поэтому данный метод нельзя использовать для контроля эффективности антихеликобактерной терапии.

Анализ кала на антиген H. pylori

  • Достаточно точный метод, но при запорах, затруднительных актах дефекации может разрушаться оболочка Н. pylori.

13С-уреазный дыхательный тест

  • Ложноотрицательные результаты редки, но могут наблюдаться после выполнения гастроскопии с биопсией непосредственно перед тестом и у пациентов, перенесших резекцию желудка, а также при значительном снижении секреции желудка.
  • При этом ложноположительные тесты могут быть из-за расщепления мочевины бактериями во рту или бактериями, содержащими уреазу в желудке.

Для повышения точности диагностики этой инфекции рекомендуется проводить комплексное тестирование.

#Гастроэнтерология

Диагностика Helicobacter pylori с помощью экспресс-теста на уреазу

Ann Transl Med. 2015 Янв; 3 (1): 9.

Департамент медицины, Медицинский центр Майкла Э. Дебейки, штат Вирджиния, и Медицинский колледж Бейлора, Хьюстон, Техас 77030, США

Автор, отвечающий за переписку. Для корреспонденции: Дэвид Ю. Грэм, доктор медицины. Медицинский центр Майкла Э. Дебейки, штат Вирджиния, 2002 Holcombe Blvd- Rm 3a-320 (111d), Хьюстон, Техас 77030, США. Электронная почта: [email protected]

Поступило 26 июля 2014 г .; Принята в печать 14 октября 2014 г.

Copyright 2015 Анналы трансляционной медицины. Все права защищены.Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

Abstract

Helicobacter pylori ( H. pylori ) является основным патогеном человека, вызывающим прогрессирующее гастродуоденальное повреждение. Руководства рекомендуют, если нет веских причин для отсрочки, лечение показано всем пациентам, у которых диагностирована инфекция. Быстрый тест на уреазу (RUT) — популярный диагностический тест, поскольку это быстрый, дешевый и простой тест, который определяет присутствие уреазы в или на слизистой оболочке желудка. Чувствительность и специфичность обычно высоки, и многие версии были одобрены для использования на людях. Наилучшие результаты достигаются, если биопсия берется как из антрального отдела, так и из тела. Образец ткани, залитый в гель RUT, также можно использовать для других тестов, таких как молекулярные тесты микробной чувствительности или факторов хозяина. Ложноположительные результаты редки, если RUT содержит антибактериальный агент, предотвращающий рост загрязняющих веществ, содержащих уреазу, а тесты отбрасываются через 24 часа.Использование противомикробных препаратов и ингибиторов протонной помпы, а также наличие кишечной метаплазии может привести к ложноотрицательным результатам. Отрицательный результат теста не следует использовать в качестве критерия излечения или в случаях, когда точность важна для ведения пациента, например, при кровотечении из верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Интерпретация теста должна учитывать вероятность предварительного тестирования и распространенность H. pylori в популяции. Тест также может использоваться для неформальной оценки точности результата гистопатологии, а расхождения должны побудить к пересмотру гистопатологии и обсуждениям с патологом.

Ключевые слова: Диагностика, Helicobacter pylori ( H. pylori ), уреаза, экспресс-тест на уреазу (RUT), обзор, тест на организм, подобный кампилобактерам

Введение

Helicobacter pylori ( pylori ). ) является важным патогеном человека, участвующим в патогенезе атрофического гастрита, язвы желудка, рака желудка, лимфомы MALT, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры, железодефицитной анемии и дефицита витамина B12 (1).Несмотря на общее снижение распространенности инфекций H. pylori в западных странах, 30-40% населения США остаются инфицированными (2,3). H. pylori не является комменсальным организмом, поскольку инфекция всегда вызывает воспаление и повреждение слизистой оболочки желудка. Основное поражение — прогрессирующее воспаление слизистой оболочки, которое может привести к предопухолевым атрофическим изменениям (1). Хотя H. pylori различаются по вирулентности (например, присутствует ли островок патогенности cag), существует риск значительного клинического исхода, так как разница в риске между наименее и наиболее вирулентными только примерно двукратная (1).Поскольку скорость прогрессирования повреждения слизистой оболочки непредсказуема, а инфекция всегда передается, рекомендуется вылечить инфекцию H. pylori , если нет веских причин, которые могли бы смягчить этот выбор (например, , очень пожилые люди с обширными сопутствующими заболеваниями) (4). В феврале 2013 года правительство Японии одобрило универсальную стратегию тестирования и лечения как часть цели Японии по ликвидации рака желудка (5).

H.pylori , как и другие серьезные хронические инфекционные заболевания (например, сифилис и туберкулез), связаны с длительным латентным периодом до клинического проявления. Таким образом, в этот латентный период будет обнаружено множество инфекций. Было разработано несколько методов борьбы с инфекцией H. pylori , которые обычно сгруппированы как «инвазивные», что означает, что они требуют ткани желудка или слизи, или «неинвазивные», требующие только крови, дыхания или стула или анализа. Здесь мы обсуждаем экспресс-тест на уреазу (RUT) или RUT, который является инвазивным тестом, поскольку он требует отбора проб слизистой оболочки желудка.Тест обеспечивает косвенное свидетельство инфекции, идентифицируя присутствие фермента, не являющегося млекопитающим, уреазы, в слизистой оболочке желудка или на ней.

История

H. pylori был впервые посажен в 1983 году. В первоначальном отчете он был описан как отрицательный по уреазе. Однако другие лаборатории, пытающиеся воспроизвести первоначальный результат, правильно определили, что этот организм был положительным по уреазе (6). McNulty et al. адаптировал стандартный лабораторный тест на уреазную активность, в котором петлю культуры помещают в субстрат, содержащий мочевину с индикатором pH, такой как 2% бульон с мочевиной Кристенсена; Уреаза гидролизует мочевину с образованием аммиака и диоксида углерода (7). Аммиак увеличивает pH, что приводит к изменению цвета (с коричневого на розовый). McNulty et al. показал, что с помощью этого теста уреазу можно идентифицировать непосредственно из биопсии желудка, что устраняет необходимость в культуре или гистологии. За первоначальным наблюдением последовало большое клиническое испытание, опубликованное в 1989 г., в котором 1445 пациентов прошли тестирование на H. pylori с использованием модифицированного бульона мочевины Кристенсена (8). Они сообщили о почти 100% специфичности и 96% чувствительности по сравнению с гистологией и культурой.Барри Маршал добавил антибактериальный агент к агаровому гелю, содержащему мочевину и индикатор pH, и запатентовал первый тест RUT, называемый тестом на организм, подобный кампилобактерам (CLO), который быстро стал стандартом для клинического использования и клинических испытаний.

Желудочная уреаза

Желудочная уреаза имела долгую историю до открытия H. pylori (9). На протяжении десятилетий считалось, что уреаза является ферментом млекопитающих, и предполагалось, что уреаза вырабатывается желудком для защиты желудка от переваривания желудочной кислотой (9). Уреаза даже была основой терапии язвенной болезни. Например, ирландский врач Оливер Фицджеральд лечил пептические язвы мочевиной как перорально, так и внутривенно для нейтрализации кислотности желудочного сока и лечения пептических язв (10). Первый эквивалент дыхательного теста с мочевиной с использованием 13 C-мочевины был фактически зарегистрирован в 1951 году и использовался для измерения активности уреазы в желудке лягушки (11). Когда стало очевидно, что уреаза имеет микробное происхождение, интерес к уреазе ослаб, поскольку было ясно, что она не может нести ответственность за защиту слизистой оболочки желудка от повреждения кислотой, а также потому, что большинство соответствующих экспериментов уже было проведено.Открытие того, что H. pylori продуцирует большое количество уреазы, позволило этим многочисленным экспериментам обрести новое значение (6).

RUT — это косвенный тест на присутствие H. pylori , основанный на наличии уреазы в или на слизистой оболочке желудка. Он имеет преимущество перед серологией в том, что он обнаруживает только наличие активной инфекции. Для теста требуется образец слизистой оболочки желудка или слизи, который добавляется в пробирку, гель или другое устройство, которое приводит этот образец в контакт с мочевиной, а также метод обнаружения продуктов гидролиза мочевины, аммиака или диоксида углерода.Для оценки активности желудочной уреазы были разработаны различные тесты, основанные, вероятно, на всех возможных компонентах реакции, включая те, которые оценивают изменения меченого CO 2 в сыворотке или выдыхаемом воздухе, уровень аммиака в выдыхаемом воздухе и изменение pH, вызванное воздействием аммиак либо для изменения цвета, либо непосредственно с помощью pH-метра. В первоначальном тесте использовался феноловый красный, цвет индикатора которого менялся с желтого на розовый или красный по мере увеличения pH. В других тестах использовались разные индикаторы, каждый из которых имел потенциальное преимущество, например, возможность начать реакцию при более низком pH, таком как 5. 4 и, таким образом, снизить активность контаминирующих бактерий ротовой полости, многие из которых также содержат много уреазы (например, HP fast ® ) (). Простейшие тесты выполняются самостоятельно и содержат небольшое количество субстрата в пробирке с индикатором pH и могут быть произведены по одному или двум центам каждый (12).

Примеры трех популярных коммерческих быстрых тестов на уреазу (RUT), доступных в Соединенных Штатах, включая тест CLO и два теста второго поколения, один с использованием геля с контролируемым pH, а другой — с мембраной, насыщенной мочевиной.Один из каждой пары является контрольным, а другой — после смены цвета. CLO, организм, похожий на кампилобактер.

Как и для любой ферментативной реакции, необходимо учитывать параметры, которые влияют на реакцию, такие как концентрация субстрата, концентрация и активность фермента, время и температура, и были проведены исследования для тестирования многих различных параметров, чтобы обеспечить надежные результаты. Важные переменные включают сбор образца, размер образца, время до того, как результат теста будет признан отрицательным, а также то, полезно ли потепление.Положительный результат RUT требует приблизительно 10 5 H. pylori в образце биопсии, чтобы изменить цвет с помощью теста на основе агара, такого как тест CLO (13). Обычно это не проблема, поскольку концентрация H. pylori обычно превышает этот минимум. Чувствительность различных тестов RUT в качестве первичных диагностических тестов высока и, по имеющимся данным, варьируется от 80% до 100%, а специфичность — от 97% до 99% (14-17).

Первое требование — образец биопсии должен быть взят из места, где присутствуют микроорганизмы.У пациентов с язвой двенадцатиперстной кишки обычно неатрофическая слизистая оболочка, и H. pylori особенно распространены по всему антральному отделу. Для этих пациентов один образец из антрального отдела или желудочного угла будет иметь высокий выход, обычно более 85% и часто в диапазоне от 95% до 100%. Однако, если у пациента атрофический гастрит и обширные области кишечной метаплазии, которые содержат несколько организмов H. pylori , результаты часто будут неутешительными. Опубликованы многочисленные исследования места биопсии.Например, в одном исследовании было взято два образца биопсии из антрального отдела, и сообщалось о чувствительности и специфичности 95% и 100% (18). В другом исследовании сравнивали результаты биопсии, взятой под углом желудка, препилорическим участком и участком тела, с результатами 100%, 87% и 84,4% соответственно и без ложноположительных результатов (т.е. специфичность 100%) (19) . В целом, для достижения наилучших результатов достаточно двух образцов: одного из антрального отдела, избегающего участков изъязвления и явной кишечной метаплазии, и одного из нормального тела, которые обеспечивают самый высокий результат.Два образца могут быть помещены в один и тот же гель или среду или в отдельные контейнеры в зависимости от предпочтений врача и от того, планируется ли другое использование образцов.

Размер биопсии

Чувствительность и специфичность больших чашечных щипцов (диаметр 3,3 мм) и маленьких чашечных щипцов (диаметр 1,8 мм) сравнивали с использованием биопсии антрального отдела у одних и тех же пациентов (20). Чувствительность и специфичность больших щипцов составила 92,1% и 95,5% по сравнению с 88,5% и 98,8% для маленьких щипцов, соответственно.Таким образом, для практических целей размер чашки для биопсии не имеет большого значения. Поскольку большие щипцы также предоставляют больше информации для гистологического исследования, мы рекомендуем использовать самые большие щипцы, которые пройдут через канал введения эндоскопии. Если используется действительно крошечная эндоскопия, такая как ультратонкий эндоскоп, образцы для RUT могут быть взяты либо с помощью прилагаемых крошечных щипцов, либо путем чистки слизистой оболочки и помещения кисти в среду RUT.

Скорость реакции RUT частично зависит от температуры реакции.Было проведено сравнение, в котором биопсии антрального отдела были помещены при 38 ° C в более теплый воздух или хранились при комнатной температуре (~ 21 ° C). Возможность поставить диагноз в течение 30 минут была на 20% выше при использовании грелки (21), но в целом результаты были такими же. Многие эндоскописты кладут устройство RUT в карман, чтобы согреться. В целом, использование грелки не имеет большого значения, за исключением того, что это может позволить чаще подтверждать диагноз до того, как пациент покинет эндоскопическую область.

Имеющиеся в продаже наборы RUT предполагают принятие решения (положительный результат vs. отрицательный) в течение 24 часов. Время положительного результата теста зависит от концентрации бактерий и температуры. Большинство из них станет положительным в течение 120–180 минут, но лучше всего подержать отрицательные в течение 24 часов (22,23). Через 24 часа тест может стать положительным из-за присутствия организмов, не содержащих уреазу H. pylori (24). Положительные результаты через 24 часа чаще всего являются ложноположительными и не должны использоваться для принятия решения о лечении. Обычно мы выбрасываем образцы через 24 часа.Существует ряд различных коммерчески доступных наборов RUT, которые в основном различаются в зависимости от платформы (например, гель, жидкость, мембрана и т. Д.). Выбор зависит от доступности и местных предпочтений, поскольку ни один из них не оказался лучшим.

Ложноотрицательные и ложноположительные результаты

Как отмечалось выше, RUT — это тест на присутствие фермента уреазы. Однако фактические результаты будут зависеть от заболевания желудка и вероятности атрофических изменений или экзогенных факторов, которые снижают бактериальную нагрузку и, таким образом, дают ложноотрицательные результаты.Ложноположительные результаты могут быть получены, если другие организмы, содержащие уреазу, присутствуют в достаточном количестве или если один позволяет контактировать между образцом и средой в течение длительного периода, обычно более 24 часов. Как отмечалось ранее, для получения положительного результата в образце биопсии должно присутствовать приблизительно 10 5 бактерий (13), и все, что снижает плотность бактерий, например, использование антибиотиков, висмутсодержащих соединений или ингибиторов протонной помпы, может привести к ложноотрицательные результаты (25-27). Двумя наиболее частыми причинами ложноотрицательных результатов являются недавнее использование ингибиторов протонной помпы и наличие кишечной метаплазии. Антагонисты рецепторов H 2 не снижают бактериальную плотность и могут использоваться до дня проведения теста (28). Неясно, сколько времени нужно ждать после прекращения приема ингибиторов протонной помпы, прежде чем возможность ложноотрицательного результата станет маловероятной. Обычно рекомендуют две недели, исходя из соображений безопасности; однако организмы обычно быстро восстанавливаются после ингибирования ингибитором протонной помпы (26,29).Тем не менее, все тесты на активную инфекцию, включая RUT, гистологию, дыхательный тест на мочевину и посев, могут стать ложноотрицательными во время использования ингибитора протонной помпы или после использования висмута или антибиотика (28). Маловероятно, что ложноотрицательный RUT также будет сопровождаться гистологически невоспаленной и нормальной слизистой оболочкой желудка. Если есть сомнения и результат важен, лучше всего пройти неинвазивный тест (дыхательный тест на мочевину или антиген в стуле) после прекращения приема ИПП.

Ложноположительные результаты редки и, если они есть, могут быть связаны с присутствием других организмов, содержащих уреазу, таких как Proteus mirabilis , Citrobactor freundii , Klebsiella pneumonia , Enterobactor cloacae и Staphylococcus (Staphylococcus aure). .Однако, если у пациента нет ахлоргидрии или гипохлоргидрии, микроорганизмы H. pylori , отличные от , вряд ли будут присутствовать в достаточной концентрации для получения положительного результата, если только в субстрате RUT не будет ингибитора роста бактерий, в котором они могут разрастаться в течение 24 дней. часов периода наблюдения.

Клиническая интерпретация результатов RUT

Интерпретация RUT, как и любой другой диагностический тест, частично зависит от предварительной вероятности инфекции (30). Таким образом, у пациента с язвой двенадцатиперстной кишки один положительный результат RUT будет считаться подтверждением диагноза, тогда как отрицательный тест должен подтверждаться результатами другого теста, такого как гистология (например, отсутствие признаков воспаления желудка). Напротив, у пожилого пациента, подвергающегося эндоскопии по поводу гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, можно было бы нерешительно начинать терапию, основываясь только на положительном RUT. Таким образом, интерпретация зависит от вероятности предварительного тестирования и важности результата для последующего ведения пациента.Чтобы сэкономить деньги пациента, некоторые врачи предложили брать биопсию для RUT, а также для гистологии из нормальной слизистой оболочки, а затем, если RUT положительный, отбрасывать гистологические образцы за ненадобностью (23,31,32). Хотя это может иметь смысл при наличии высокой вероятности предварительного тестирования (например, активной язвы двенадцатиперстной кишки), это было бы нецелесообразно для пациента с неязвенной диспепсией, когда сами гистологические данные могут быть важны (например, наличие атрофических изменений, дисплазия и др. ). Также было рекомендовано, чтобы RUT не использовался в качестве единственного арбитра результатов эрадикационной терапии H. pylori , потому что чувствительность RUT не составляет 100%, и, таким образом, отрицательный тест не полностью исключает присутствие активного инфекция (4,28). Это особенно важно, когда целью обследования является испытание на излечение. В действительности эндоскопия нечасто проводится для проверки излечения, за исключением пациентов с поражениями, где требуется дальнейшая эндоскопическая и / или гистологическая оценка, например, при язве желудка или после резекции аденоматозных полипов, и вопрос о роли посттерапии RUT возникает редко.Для таких пациентов, вероятно, наиболее экономически выгодно полагаться на гистологическое исследование биопсий антрального отдела и тела.

Вообще говоря, верхняя эндоскопия — это дорогостоящий тест, связанный с небольшим, но определенным риском, и, если нет особых противопоказаний, обычно показана биопсия для исследования гистологии слизистой оболочки. Также можно провести тестирование RUT, которое особенно полезно в сложных диагностических ситуациях, когда врач хотел бы в ближайшее время начать лечение. Таким образом, биопсии для RUT часто берутся у пациентов с недавним кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта.В этой ситуации может быть повышенное количество ложноотрицательных результатов. Было высказано предположение, что кровь приводит к снижению чувствительности RUT, возможно, связанной с присутствием альбумина (33), факторов уничтожения H. pylori в плазме человека (34) или крови в просвете желудка (35, 36). Однако другие исследования сообщают, что кровь не влияет на результаты теста (37,38). Ложноотрицательные тесты также распространены после частичной гастрэктомии, вероятно, из-за снижения бактериальной нагрузки, часто связанной с наличием желчи (39,40).Ни в одной из этих ситуаций критически важно немедленно диагностировать или начать лечение инфекции H. pylori . Такие ложноотрицательные результаты не имеют большого клинического значения, если они не принимаются как доказательство отсутствия инфекции H. pylori . Всегда нужно возвращаться к рассмотрению того, что вы планируете делать с информацией (т.е. положительным тестам обычно следует верить, но отрицательные тесты требуют гистологического или другого подтверждения при наличии H.pylori , вероятно, является причиной эндоскопии, например, при кровоточащей язвенной болезни). Поскольку большинство инфекций H. pylori были приобретены в детстве, немедленное лечение не требуется, и всегда можно подождать, пока не исчезнут острые состояния.

Использование образца RUT для дополнительных целей

Образец ткани, содержащийся в агаре теста RUT, можно использовать для других целей. Например, образец может быть извлечен из агарового геля положительных тестов и использован для молекулярного тестирования на H.pylori и / или наличие устойчивости к кларитромицину (41). Поскольку образец содержит ткань хозяина, его также можно использовать для других тестов, таких как генотип CYP2C19 хозяина (42).

Резюме

RUT — это быстрый, дешевый и простой тест, который часто используется в клинической практике. RUT лучше всего рассматривать как скрининговый тест, а не как золотой стандарт для инфекции H. pylori . Для клинических испытаний диагноз инфекции H. pylori требует, чтобы два разных типа теста были положительными или положительными культурами. H. pylori отрицательный, как правило, определяется как отрицательный результат всех тестов. Ключом к правильному использованию является рассмотрение любого теста с точки зрения предтестовой вероятности, а также важности информации с точки зрения ведения пациентов. Ложноотрицательные тесты встречаются чаще, чем ложноположительные, поэтому отрицательный результат не следует использовать для исключения H. pylori , если неправильный диагноз может нанести ущерб ведению пациента (например, у пациента с недавним кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта или после ). ЧАС.pylori ). Положительный посев считается единственным истинным золотым стандартом для диагностики H. pylori , поэтому при подозрении на ложноотрицательный результат требуется дополнительное тестирование. Наконец, тест также может использоваться в качестве неформальной оценки точности лаборатории патологии, и расхождения между RUT и гистологией, особенно положительная RUT и отрицательная гистология, должны побудить к пересмотру гистопатологии и обсуждениям с патологом.

Выражение признательности

Доктор Грэм получает частичную поддержку со стороны Управления исследований и разработок Службы медицинских исследований Департамента по делам ветеранов, гранты Службы общественного здравоохранения R01 DK062813 и DK56338, которые финансируют Центр болезней органов пищеварения Техасского медицинского центра. Авторы полностью несут ответственность за содержание и не обязательно отражают официальную точку зрения VA или NIH.

Вклад авторов: Каждый из авторов принимал участие в равной степени, прочитал и утвердил окончательный вариант рукописи.Каждый соответствует критериям авторства, установленным Международным комитетом редакторов медицинских журналов, и проверяет достоверность представленных результатов.

Раскрытие информации: Доктор Грэм является неоплачиваемым консультантом компании Novartis по вопросам разработки вакцины для лечения или профилактики инфекции H. pylori . Доктор Грэм является оплачиваемым консультантом RedHill Biopharma по новым методам лечения H. pylori и получил исследовательскую поддержку для культивирования H.pylori . Он является консультантом компании Otsuka Pharmaceuticals по вопросам диагностики дыхания. Доктор Грэм получил лицензионные отчисления от патентов Медицинского колледжа Бейлора, покрывающих материалы, относящиеся к дыхательному тесту 13 на содержание C-мочевины. Доктору Уотани нечего заявлять.

Ссылки

1. Шиотани А., Сен П., Грэм Д. Ликвидация рака желудка теперь возможна и практична. Semin Cancer Biol 2013; 23: 492-501. [PubMed] [Google Scholar] 2. Петерсон В.Л., Фендрик А.М., Кейв Д.Р. и др.Заболевание, связанное с Helicobacter pylori: рекомендации по тестированию и лечению. Arch Intern Med 2000; 160: 1285-91. [PubMed] [Google Scholar] 3. Град Ю.Х., Липсич М., Айелло А.Е. Секулярные тенденции в серопревалентности Helicobacter pylori у взрослых в Соединенных Штатах: доказательства устойчивых расовых / этнических различий. Am J Epidemiol 2012; 175: 54-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 4. Malfertheiner P, Megraud F, O’Morain CA и др. Управление инфекцией Helicobacter pylori — Маастрихтский отчет IV / Флорентийский консенсусный доклад.Кишечник 2012; 61: 646-64. [PubMed] [Google Scholar] 5. Асака М., Като М., Сакамото Н. Дорожная карта для ликвидации рака желудка с помощью эрадикации Helicobacter pylori и последовательного эпиднадзора в Японии. Журнал Гастроэнтерол 2014; 49: 1-8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 6. Campylobacter-подобные организмы в желудке пациентов и здоровых людей. Ланцет 1984; 1: 1348-9. [PubMed] [Google Scholar] 7. McNulty CA, Wise R. Быстрая диагностика гастрита, связанного с кампилобактерами. Ланцет 1985; 1: 1443-4. [PubMed] [Google Scholar] 8.McNulty CA, Dent JC, Uff JS и др. Обнаружение Campylobacter pylori с помощью биопсийного уреазного теста: оценка у 1445 пациентов. Кишечник 1989; 30: 1058-62. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 9. Graham DY, Go MF, Evans DJ, Jr. Обзорная статья: уреаза, желудочный аммоний / аммиак и Helicobacter pylori — прошлое, настоящее и рекомендации для будущих исследований. Aliment Pharmacol Ther 1992; 6: 659-69. [PubMed] [Google Scholar] 10. Фитцджеральд О., Мерфи П. Исследования физиологической химии и клинического значения уреазы с особым упором на желудок.Ирландский журнал J Med Sci 1950; 292: 97-159. [Google Scholar] 11. Фон Корфф Р.В., Глик Д. Роль уреазы в слизистой оболочке желудка. II. Исследования in vitro с изотопной мочевиной на слизистой оболочке лягушки. Am J Physiol 1951; 165: 688-94. [PubMed] [Google Scholar] 12. Hazell SL, Borody TJ, Gal A и др. Campylobacter pyloridis gastritis I: Обнаружение уреазы как маркера бактериальной колонизации и гастрита. Am J Gastroenterol 1987; 82: 292-6. [PubMed] [Google Scholar] 13. Mégraud F, Bessède E, Lehours P. Современные методы диагностики инфекции Helicobacter pylori.В: Buzás GM. ред. Helicobacter pylori — мировая перспектива, 2014. Дуб-парк: Bentham Science, 2014: 234-58. [Google Scholar] 14. Кальвет X, Санчес-Дельгадо Дж., Монтсеррат А. и др. Точность диагностических тестов на Helicobacter pylori: переоценка. Clin Infect Dis 2009; 48: 1385-91. [PubMed] [Google Scholar] 15. Аль-Хумаед С.М., Ахмед М.Э., Белло С.С. и др. Сравнение 4 лабораторных методов обнаружения Helicobacter pylori. Саудовская медицина, 2008; 29: 530-2. [PubMed] [Google Scholar] 16. Redéen S, Petersson F, Törnkrantz E, et al.Надежность диагностических тестов на инфекцию Helicobacter pylori. Гастроэнтерол Рес Прак 2011; 2011: 940650. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] 17. Вайра Д., Перна Ф. Насколько полезен экспресс-тест на уреазу для оценки успеха эрадикационной терапии Helicobacter pylori? Нат Клин Практ Гастроэнтерол Гепатол 2007; 4: 600-1. [PubMed] [Google Scholar] 18. эль-Зимаити Х.М., аль-Асси М.Т., Гента Р.М. и др. Подтверждение успешного лечения инфекции Helicobacter pylori: количество и место биопсии или экспресс-тест на уреазу.Am J Gastroenterol 1995; 90: 1962-4. [PubMed] [Google Scholar] 19. Woo JS, el-Zimaity HM, Genta RM и др. Лучшее место в желудке для получения положительного результата экспресс-теста на мочевину. Helicobacter 1996; 1: 256-9. [PubMed] [Google Scholar] 20. Юсфи М.М., Эль-Зимайты Н.М., Коул Р.А. и др. Обнаружение Helicobacter pylori с помощью экспресс-тестов на уреазу: является ли размер биопсии критической переменной? Gastrointest Endosc 1996; 43: 222-4. [PubMed] [Google Scholar] 21. Юсфи М.М., Эль-Зимайты Н.М., Коул Р.А. и др. Влияет ли использование грелки на результаты экспресс-теста на уреазу на Helicobacter pylori? Gastrointest Endosc 1996; 43: 260-1.[PubMed] [Google Scholar] 22. Осаки Т., Мабе К., Ханава Т. и др. Положительные по уреазе бактерии в желудке вызывают ложноположительную реакцию в дыхательном тесте на мочевину для диагностики инфекции Helicobacter pylori. J Med Microbiol 2008; 57: 814-9. [PubMed] [Google Scholar] 23. Перна Ф., Риччи С., Гатта Л. и др. Диагностическая точность нового экспресс-теста на уреазу (Pronto Dry) до и после лечения инфекции Helicobacter pylori. Минерва Гастроэнтерол Диетол 2005; 51: 247-54. [PubMed] [Google Scholar] 25. Грэм Д. Я., Лью Г. М., Малати Н. М. и др.Факторы, влияющие на эрадикацию Helicobacter pylori при тройной терапии. Гастроэнтерология 1992; 102: 493-6. [PubMed] [Google Scholar] 26. Грэм Д.Ю., Опекун А.Р., Хаммуд Ф. и др. Исследования механизма ложноотрицательных результатов дыхательных тестов на мочевину с ингибиторами протонной помпы. Am J Gastroenterol 2003; 98: 1005-9. [PubMed] [Google Scholar] 27. Форне М., Вивер Дж. М., Эспинос Дж. К. и др. Влияние коллоидного субнитрата висмута на скорость эрадикации язвы двенадцатиперстной кишки, связанной с инфекцией Helicobacter pylori, с использованием короткой схемы лечения омепразолом и кларитромицином: рандомизированное исследование.Am J Gastroenterol 1995; 90: 718-21. [PubMed] [Google Scholar] 28. Аттуми Т.А., Грэм Д.Ю. Контрольное обследование после лечения инфекций Helicobacter pylori: предостережения, предостережения и рекомендации. Clin Gastroenterol Hepatol 2011; 9: 373-5. [PubMed] [Google Scholar] 29. Лайне Л., Эстрада Р., Трухильо М. и др. Влияние терапии ингибиторами протонной помпы на диагностику Helicobacter pylori. Энн Интерн Мед 1998; 129: 547-50. [PubMed] [Google Scholar] 30. Vecchio TJ. Прогностическая ценность одного диагностического теста в неотобранных популяциях.N Engl J Med 1966; 274: 1171-3. [PubMed] [Google Scholar] 31. Мидоло П., Маршалл Б.Дж. Точный диагноз Helicobacter pylori. Тесты на уреазу. Гастроэнтерол Clin North Am 2000; 29: 871-8. [PubMed] [Google Scholar] 32. Лейн Л., Левин Д., Наритоку В. и др. Проспективное сравнение имеющихся в продаже экспресс-тестов на уреазу для диагностики Helicobacter pylori. Gastrointest Endosc 1996; 44: 523-6. [PubMed] [Google Scholar] 33. Леунг В.К., Сунг Дж.Дж., Сиу К.Л. и др. Ложноотрицательный результат биопсии на уреазу при кровоточащих язвах, вызванных буферным действием крови. Am J Gastroenterol 1998; 93: 1914-8. [PubMed] [Google Scholar] 34. Хоутон Дж., Рамамурти Р., Пандья Х. и др. Человеческая плазма обладает прямым бактерицидным действием против Helicobacter pylori in vitro, что потенциально объясняет снижение выявления Helicobacter pylori во время острого кровотечения из верхних отделов ЖКТ. Gastrointest Endosc 2002; 55: 11-6. [PubMed] [Google Scholar] 35. Tu TC, Lee CL, Wu CH, et al. Сравнение инвазивных и неинвазивных тестов для выявления инфекции Helicobacter pylori при кровоточащих пептических язвах. Gastrointest Endosc 1999; 49: 302-6.[PubMed] [Google Scholar] 36. Вильднер-Кристенсен М., Туборг Лассен А., Линдебьерг Дж. И др. Диагностика Helicobacter pylori у пациентов с кровоточащей язвенной болезнью, оценка тестов на мочевину. Пищеварение 2002; 66: 9-13. [PubMed] [Google Scholar] 37. Тан Дж. Х., Лю Н. Дж., Ченг Х. Т. и др. Эндоскопическая диагностика инфекции Helicobacter pylori с помощью экспресс-теста на уреазу при кровоточащих пептических язвах: проспективное исследование случай-контроль. J Clin Gastroenterol 2009; 43: 133-9. [PubMed] [Google Scholar] 38. Archimandritis A, Tzivras M, Sougioultzis S, et al.Экспресс-тест на уреазу менее чувствителен, чем гистология, при диагностике инфекции Helicobacter pylori у пациентов с кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта без варикозного расширения вен. J Gastroenterol Hepatol 2000; 15: 369-73. [PubMed] [Google Scholar] 39. Тянь XY, Чжу Х., Чжао Дж. И др. Диагностическая эффективность дыхательного теста на мочевину, экспресс-теста на мочевину и гистологии инфекции Helicobacter pylori у пациентов с частичной гастрэктомией: метаанализ. Дж. Клин Гастроэнтерол 2012; 46: 285-92. [PubMed] [Google Scholar] 40. Adamopoulos AB, Stergiou GS, Sakizlis GN, et al.Диагностическая ценность экспресс-теста на уреазу и дыхательного теста с мочевиной для выявления Helicobacter pylori у пациентов с гастрэктомией по Бильроту II: проспективное контролируемое исследование. Dig Liver Dis 2009; 41: 4-8. [PubMed] [Google Scholar] 41. Ли Й, Римбара Э, Тирумурти С. и др. Обнаружение устойчивости к кларитромицину у Helicobacter pylori после некриогенного хранения экспресс-тестов на уреазу в течение 30 дней. Журнал Dig Dis 2012; 13: 54-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 42. Фурута Т., Сугимото М., Кодайра С. и др.Схемы экстренной помощи третьей линии на основе ситафлоксацина при инфекции Helicobacter pylori в Японии. J Gastroenterol Hepatol 2014; 29: 487-93. [PubMed] [Google Scholar]

Диагностика Helicobacter pylori с помощью экспресс-теста на уреазу

Ann Transl Med. 2015 Янв; 3 (1): 9.

Департамент медицины, Медицинский центр Майкла Э. Дебейки, штат Вирджиния, и Медицинский колледж Бейлора, Хьюстон, Техас 77030, США

Автор, отвечающий за переписку. Для корреспонденции: Дэвид Ю. Грэм, доктор медицины. Майкл Э.DeBakey VA Medical Center, 2002 Holcombe Blvd- Rm 3a-320 (111d), Хьюстон, Техас 77030, США. Электронная почта: [email protected]

Поступило 26 июля 2014 г .; Принято 14 октября 2014 г.

Copyright 2015 Annals of Translational Medicine. Все права защищены.Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

Abstract

Helicobacter pylori ( H. pylori ) является основным патогеном человека, вызывающим прогрессирующее гастродуоденальное повреждение. Руководства рекомендуют, если нет веских причин для отсрочки, лечение показано всем пациентам, у которых диагностирована инфекция.Быстрый тест на уреазу (RUT) — популярный диагностический тест, поскольку это быстрый, дешевый и простой тест, который определяет присутствие уреазы в или на слизистой оболочке желудка. Чувствительность и специфичность обычно высоки, и многие версии были одобрены для использования на людях. Наилучшие результаты достигаются, если биопсия берется как из антрального отдела, так и из тела. Образец ткани, залитый в гель RUT, также можно использовать для других тестов, таких как молекулярные тесты микробной чувствительности или факторов хозяина.Ложноположительные результаты редки, если RUT содержит антибактериальный агент, предотвращающий рост загрязняющих веществ, содержащих уреазу, а тесты отбрасываются через 24 часа. Использование противомикробных препаратов и ингибиторов протонной помпы, а также наличие кишечной метаплазии может привести к ложноотрицательным результатам. Отрицательный результат теста не следует использовать в качестве критерия излечения или в случаях, когда точность важна для ведения пациента, например, при кровотечении из верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Интерпретация теста должна учитывать предварительную вероятность и распространенность H.pylori в популяции. Тест также может использоваться для неформальной оценки точности результата гистопатологии, а расхождения должны побудить к пересмотру гистопатологии и обсуждениям с патологом.

Ключевые слова: Диагностика, Helicobacter pylori ( H. pylori ), уреаза, экспресс-тест на уреазу (RUT), обзор, тест на кампилобактероподобные организмы

Введение

Helicobacter pylori ( H.pylori ) является важным патогеном человека, участвующим в патогенезе атрофического гастрита, гастродуоденальной язвы, рака желудка, лимфомы MALT, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры, железодефицитной анемии и дефицита витамина B12 (1). Несмотря на общее снижение распространенности инфекций H. pylori в западных странах, 30-40% населения США остаются инфицированными (2,3). H. pylori не является комменсальным организмом, поскольку инфекция всегда вызывает воспаление и повреждение слизистой оболочки желудка.Основное поражение — прогрессирующее воспаление слизистой оболочки, которое может привести к предопухолевым атрофическим изменениям (1). Хотя H. pylori различаются по вирулентности (например, присутствует ли островок патогенности cag), существует риск значительного клинического исхода, так как разница в риске между наименее и наиболее вирулентными только примерно двукратная (1). Поскольку скорость прогрессирования повреждения слизистой оболочки непредсказуема, а инфекция всегда передается, рекомендуется всякий раз, когда заражение H.pylori , его следует вылечить, если нет веских причин, которые могли бы смягчить этот выбор (например, очень пожилые люди с обширными сопутствующими заболеваниями) (4). В феврале 2013 года правительство Японии одобрило универсальную стратегию тестирования и лечения как часть цели Японии по ликвидации рака желудка (5).

Инфекции H. pylori , как и другие серьезные хронические инфекционные заболевания (например, сифилис и туберкулез), связаны с длительным латентным периодом до клинического проявления.Таким образом, в этот латентный период будет обнаружено множество инфекций. Было разработано несколько методов борьбы с инфекцией H. pylori , которые обычно сгруппированы как «инвазивные», что означает, что они требуют ткани желудка или слизи, или «неинвазивные», требующие только крови, дыхания или стула или анализа. Здесь мы обсуждаем экспресс-тест на уреазу (RUT) или RUT, который является инвазивным тестом, поскольку он требует отбора проб слизистой оболочки желудка. Тест обеспечивает косвенное свидетельство инфекции, идентифицируя присутствие фермента, не являющегося млекопитающим, уреазы, в слизистой оболочке желудка или на ней.

История

H. pylori был впервые посажен в 1983 году. В первоначальном отчете он был описан как отрицательный по уреазе. Однако другие лаборатории, пытающиеся воспроизвести первоначальный результат, правильно определили, что этот организм был положительным по уреазе (6). McNulty et al. адаптировал стандартный лабораторный тест на уреазную активность, в котором петлю культуры помещают в субстрат, содержащий мочевину с индикатором pH, такой как 2% бульон с мочевиной Кристенсена; Уреаза гидролизует мочевину с образованием аммиака и диоксида углерода (7).Аммиак увеличивает pH, что приводит к изменению цвета (с коричневого на розовый). McNulty et al. показал, что с помощью этого теста уреазу можно идентифицировать непосредственно из биопсии желудка, что устраняет необходимость в культуре или гистологии. За первоначальным наблюдением последовало большое клиническое испытание, опубликованное в 1989 г., в котором 1445 пациентов прошли тестирование на H. pylori с использованием модифицированного бульона мочевины Кристенсена (8). Они сообщили о почти 100% специфичности и 96% чувствительности по сравнению с гистологией и культурой.Барри Маршал добавил антибактериальный агент к агаровому гелю, содержащему мочевину и индикатор pH, и запатентовал первый тест RUT, называемый тестом на организм, подобный кампилобактерам (CLO), который быстро стал стандартом для клинического использования и клинических испытаний.

Желудочная уреаза

Желудочная уреаза имела долгую историю до открытия H. pylori (9). На протяжении десятилетий считалось, что уреаза является ферментом млекопитающих, и предполагалось, что уреаза вырабатывается желудком для защиты желудка от переваривания желудочной кислотой (9).Уреаза даже была основой терапии язвенной болезни. Например, ирландский врач Оливер Фицджеральд лечил пептические язвы мочевиной как перорально, так и внутривенно для нейтрализации кислотности желудочного сока и лечения пептических язв (10). Первый эквивалент дыхательного теста с мочевиной с использованием 13 C-мочевины был фактически зарегистрирован в 1951 году и использовался для измерения активности уреазы в желудке лягушки (11). Когда стало очевидно, что уреаза имеет микробное происхождение, интерес к уреазе ослаб, поскольку было ясно, что она не может нести ответственность за защиту слизистой оболочки желудка от повреждения кислотой, а также потому, что большинство соответствующих экспериментов уже было проведено.Открытие того, что H. pylori продуцирует большое количество уреазы, позволило этим многочисленным экспериментам обрести новое значение (6).

RUT — это косвенный тест на присутствие H. pylori , основанный на наличии уреазы в или на слизистой оболочке желудка. Он имеет преимущество перед серологией в том, что он обнаруживает только наличие активной инфекции. Для теста требуется образец слизистой оболочки желудка или слизи, который добавляется в пробирку, гель или другое устройство, которое приводит этот образец в контакт с мочевиной, а также метод обнаружения продуктов гидролиза мочевины, аммиака или диоксида углерода.Для оценки активности желудочной уреазы были разработаны различные тесты, основанные, вероятно, на всех возможных компонентах реакции, включая те, которые оценивают изменения меченого CO 2 в сыворотке или выдыхаемом воздухе, уровень аммиака в выдыхаемом воздухе и изменение pH, вызванное воздействием аммиак либо для изменения цвета, либо непосредственно с помощью pH-метра. В первоначальном тесте использовался феноловый красный, цвет индикатора которого менялся с желтого на розовый или красный по мере увеличения pH. В других тестах использовались разные индикаторы, каждый из которых имел потенциальное преимущество, например, возможность начать реакцию при более низком pH, таком как 5.4 и, таким образом, снизить активность контаминирующих бактерий ротовой полости, многие из которых также содержат много уреазы (например, HP fast ® ) (). Простейшие тесты выполняются самостоятельно и содержат небольшое количество субстрата в пробирке с индикатором pH и могут быть произведены по одному или двум центам каждый (12).

Примеры трех популярных коммерческих быстрых тестов на уреазу (RUT), доступных в Соединенных Штатах, включая тест CLO и два теста второго поколения, один с использованием геля с контролируемым pH, а другой — с мембраной, насыщенной мочевиной.Один из каждой пары является контрольным, а другой — после смены цвета. CLO, организм, похожий на кампилобактер.

Как и для любой ферментативной реакции, необходимо учитывать параметры, которые влияют на реакцию, такие как концентрация субстрата, концентрация и активность фермента, время и температура, и были проведены исследования для тестирования многих различных параметров, чтобы обеспечить надежные результаты. Важные переменные включают сбор образца, размер образца, время до того, как результат теста будет признан отрицательным, а также то, полезно ли потепление.Положительный результат RUT требует приблизительно 10 5 H. pylori в образце биопсии, чтобы изменить цвет с помощью теста на основе агара, такого как тест CLO (13). Обычно это не проблема, поскольку концентрация H. pylori обычно превышает этот минимум. Чувствительность различных тестов RUT в качестве первичных диагностических тестов высока и, по имеющимся данным, варьируется от 80% до 100%, а специфичность — от 97% до 99% (14-17).

Первое требование — образец биопсии должен быть взят из места, где присутствуют микроорганизмы.У пациентов с язвой двенадцатиперстной кишки обычно неатрофическая слизистая оболочка, и H. pylori особенно распространены по всему антральному отделу. Для этих пациентов один образец из антрального отдела или желудочного угла будет иметь высокий выход, обычно более 85% и часто в диапазоне от 95% до 100%. Однако, если у пациента атрофический гастрит и обширные области кишечной метаплазии, которые содержат несколько организмов H. pylori , результаты часто будут неутешительными. Опубликованы многочисленные исследования места биопсии.Например, в одном исследовании было взято два образца биопсии из антрального отдела, и сообщалось о чувствительности и специфичности 95% и 100% (18). В другом исследовании сравнивали результаты биопсии, взятой под углом желудка, препилорическим участком и участком тела, с результатами 100%, 87% и 84,4% соответственно и без ложноположительных результатов (т.е. специфичность 100%) (19) . В целом, для достижения наилучших результатов достаточно двух образцов: одного из антрального отдела, избегающего участков изъязвления и явной кишечной метаплазии, и одного из нормального тела, которые обеспечивают самый высокий результат.Два образца могут быть помещены в один и тот же гель или среду или в отдельные контейнеры в зависимости от предпочтений врача и от того, планируется ли другое использование образцов.

Размер биопсии

Чувствительность и специфичность больших чашечных щипцов (диаметр 3,3 мм) и маленьких чашечных щипцов (диаметр 1,8 мм) сравнивали с использованием биопсии антрального отдела у одних и тех же пациентов (20). Чувствительность и специфичность больших щипцов составила 92,1% и 95,5% по сравнению с 88,5% и 98,8% для маленьких щипцов, соответственно.Таким образом, для практических целей размер чашки для биопсии не имеет большого значения. Поскольку большие щипцы также предоставляют больше информации для гистологического исследования, мы рекомендуем использовать самые большие щипцы, которые пройдут через канал введения эндоскопии. Если используется действительно крошечная эндоскопия, такая как ультратонкий эндоскоп, образцы для RUT могут быть взяты либо с помощью прилагаемых крошечных щипцов, либо путем чистки слизистой оболочки и помещения кисти в среду RUT.

Скорость реакции RUT частично зависит от температуры реакции.Было проведено сравнение, в котором биопсии антрального отдела были помещены при 38 ° C в более теплый воздух или хранились при комнатной температуре (~ 21 ° C). Возможность поставить диагноз в течение 30 минут была на 20% выше при использовании грелки (21), но в целом результаты были такими же. Многие эндоскописты кладут устройство RUT в карман, чтобы согреться. В целом, использование грелки не имеет большого значения, за исключением того, что это может позволить чаще подтверждать диагноз до того, как пациент покинет эндоскопическую область.

Имеющиеся в продаже наборы RUT предполагают принятие решения (положительный результат vs. отрицательный) в течение 24 часов. Время положительного результата теста зависит от концентрации бактерий и температуры. Большинство из них станет положительным в течение 120–180 минут, но лучше всего подержать отрицательные в течение 24 часов (22,23). Через 24 часа тест может стать положительным из-за присутствия организмов, не содержащих уреазу H. pylori (24). Положительные результаты через 24 часа чаще всего являются ложноположительными и не должны использоваться для принятия решения о лечении. Обычно мы выбрасываем образцы через 24 часа.Существует ряд различных коммерчески доступных наборов RUT, которые в основном различаются в зависимости от платформы (например, гель, жидкость, мембрана и т. Д.). Выбор зависит от доступности и местных предпочтений, поскольку ни один из них не оказался лучшим.

Ложноотрицательные и ложноположительные результаты

Как отмечалось выше, RUT — это тест на присутствие фермента уреазы. Однако фактические результаты будут зависеть от заболевания желудка и вероятности атрофических изменений или экзогенных факторов, которые снижают бактериальную нагрузку и, таким образом, дают ложноотрицательные результаты.Ложноположительные результаты могут быть получены, если другие организмы, содержащие уреазу, присутствуют в достаточном количестве или если один позволяет контактировать между образцом и средой в течение длительного периода, обычно более 24 часов. Как отмечалось ранее, для получения положительного результата в образце биопсии должно присутствовать приблизительно 10 5 бактерий (13), и все, что снижает плотность бактерий, например, использование антибиотиков, висмутсодержащих соединений или ингибиторов протонной помпы, может привести к ложноотрицательные результаты (25-27).Двумя наиболее частыми причинами ложноотрицательных результатов являются недавнее использование ингибиторов протонной помпы и наличие кишечной метаплазии. Антагонисты рецепторов H 2 не снижают бактериальную плотность и могут использоваться до дня проведения теста (28). Неясно, сколько времени нужно ждать после прекращения приема ингибиторов протонной помпы, прежде чем возможность ложноотрицательного результата станет маловероятной. Обычно рекомендуют две недели, исходя из соображений безопасности; однако организмы обычно быстро восстанавливаются после ингибирования ингибитором протонной помпы (26,29).Тем не менее, все тесты на активную инфекцию, включая RUT, гистологию, дыхательный тест на мочевину и посев, могут стать ложноотрицательными во время использования ингибитора протонной помпы или после использования висмута или антибиотика (28). Маловероятно, что ложноотрицательный RUT также будет сопровождаться гистологически невоспаленной и нормальной слизистой оболочкой желудка. Если есть сомнения и результат важен, лучше всего пройти неинвазивный тест (дыхательный тест на мочевину или антиген в стуле) после прекращения приема ИПП.

Ложноположительные результаты редки и, если они есть, могут быть связаны с присутствием других организмов, содержащих уреазу, таких как Proteus mirabilis , Citrobactor freundii , Klebsiella pneumonia , Enterobactor cloacae и Staphylococcus (Staphylococcus aure). .Однако, если у пациента нет ахлоргидрии или гипохлоргидрии, микроорганизмы H. pylori , отличные от , вряд ли будут присутствовать в достаточной концентрации для получения положительного результата, если только в субстрате RUT не будет ингибитора роста бактерий, в котором они могут разрастаться в течение 24 дней. часов периода наблюдения.

Клиническая интерпретация результатов RUT

Интерпретация RUT, как и любой другой диагностический тест, частично зависит от предварительной вероятности инфекции (30).Таким образом, у пациента с язвой двенадцатиперстной кишки один положительный результат RUT будет считаться подтверждением диагноза, тогда как отрицательный тест должен подтверждаться результатами другого теста, такого как гистология (например, отсутствие признаков воспаления желудка). Напротив, у пожилого пациента, подвергающегося эндоскопии по поводу гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, можно было бы нерешительно начинать терапию, основываясь только на положительном RUT. Таким образом, интерпретация зависит от вероятности предварительного тестирования и важности результата для последующего ведения пациента.Чтобы сэкономить деньги пациента, некоторые врачи предложили брать биопсию для RUT, а также для гистологии из нормальной слизистой оболочки, а затем, если RUT положительный, отбрасывать гистологические образцы за ненадобностью (23,31,32). Хотя это может иметь смысл при наличии высокой вероятности предварительного тестирования (например, активной язвы двенадцатиперстной кишки), это было бы нецелесообразно для пациента с неязвенной диспепсией, когда сами гистологические данные могут быть важны (например, наличие атрофических изменений, дисплазия и др.). Также было рекомендовано, чтобы RUT не использовался в качестве единственного арбитра результатов эрадикационной терапии H. pylori , потому что чувствительность RUT не составляет 100%, и, таким образом, отрицательный тест не полностью исключает присутствие активного инфекция (4,28). Это особенно важно, когда целью обследования является испытание на излечение. В действительности эндоскопия нечасто проводится для проверки излечения, за исключением пациентов с поражениями, где требуется дальнейшая эндоскопическая и / или гистологическая оценка, например, при язве желудка или после резекции аденоматозных полипов, и вопрос о роли посттерапии RUT возникает редко.Для таких пациентов, вероятно, наиболее экономически выгодно полагаться на гистологическое исследование биопсий антрального отдела и тела.

Вообще говоря, верхняя эндоскопия — это дорогостоящий тест, связанный с небольшим, но определенным риском, и, если нет особых противопоказаний, обычно показана биопсия для исследования гистологии слизистой оболочки. Также можно провести тестирование RUT, которое особенно полезно в сложных диагностических ситуациях, когда врач хотел бы в ближайшее время начать лечение. Таким образом, биопсии для RUT часто берутся у пациентов с недавним кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта.В этой ситуации может быть повышенное количество ложноотрицательных результатов. Было высказано предположение, что кровь приводит к снижению чувствительности RUT, возможно, связанной с присутствием альбумина (33), факторов уничтожения H. pylori в плазме человека (34) или крови в просвете желудка (35, 36). Однако другие исследования сообщают, что кровь не влияет на результаты теста (37,38). Ложноотрицательные тесты также распространены после частичной гастрэктомии, вероятно, из-за снижения бактериальной нагрузки, часто связанной с наличием желчи (39,40).Ни в одной из этих ситуаций критически важно немедленно диагностировать или начать лечение инфекции H. pylori . Такие ложноотрицательные результаты не имеют большого клинического значения, если они не принимаются как доказательство отсутствия инфекции H. pylori . Всегда нужно возвращаться к рассмотрению того, что вы планируете делать с информацией (т.е. положительным тестам обычно следует верить, но отрицательные тесты требуют гистологического или другого подтверждения при наличии H.pylori , вероятно, является причиной эндоскопии, например, при кровоточащей язвенной болезни). Поскольку большинство инфекций H. pylori были приобретены в детстве, немедленное лечение не требуется, и всегда можно подождать, пока не исчезнут острые состояния.

Использование образца RUT для дополнительных целей

Образец ткани, содержащийся в агаре теста RUT, можно использовать для других целей. Например, образец может быть извлечен из агарового геля положительных тестов и использован для молекулярного тестирования на H.pylori и / или наличие устойчивости к кларитромицину (41). Поскольку образец содержит ткань хозяина, его также можно использовать для других тестов, таких как генотип CYP2C19 хозяина (42).

Резюме

RUT — это быстрый, дешевый и простой тест, который часто используется в клинической практике. RUT лучше всего рассматривать как скрининговый тест, а не как золотой стандарт для инфекции H. pylori . Для клинических испытаний диагноз инфекции H. pylori требует, чтобы два разных типа теста были положительными или положительными культурами. H. pylori отрицательный, как правило, определяется как отрицательный результат всех тестов. Ключом к правильному использованию является рассмотрение любого теста с точки зрения предтестовой вероятности, а также важности информации с точки зрения ведения пациентов. Ложноотрицательные тесты встречаются чаще, чем ложноположительные, поэтому отрицательный результат не следует использовать для исключения H. pylori , если неправильный диагноз может нанести ущерб ведению пациента (например, у пациента с недавним кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта или после ). ЧАС.pylori ). Положительный посев считается единственным истинным золотым стандартом для диагностики H. pylori , поэтому при подозрении на ложноотрицательный результат требуется дополнительное тестирование. Наконец, тест также может использоваться в качестве неформальной оценки точности лаборатории патологии, и расхождения между RUT и гистологией, особенно положительная RUT и отрицательная гистология, должны побудить к пересмотру гистопатологии и обсуждениям с патологом.

Выражение признательности

Доктор Грэм получает частичную поддержку со стороны Управления исследований и разработок Службы медицинских исследований Департамента по делам ветеранов, гранты Службы общественного здравоохранения R01 DK062813 и DK56338, которые финансируют Центр болезней органов пищеварения Техасского медицинского центра. Авторы полностью несут ответственность за содержание и не обязательно отражают официальную точку зрения VA или NIH.

Вклад авторов: Каждый из авторов принимал участие в равной степени, прочитал и утвердил окончательный вариант рукописи.Каждый соответствует критериям авторства, установленным Международным комитетом редакторов медицинских журналов, и проверяет достоверность представленных результатов.

Раскрытие информации: Доктор Грэм является неоплачиваемым консультантом компании Novartis по вопросам разработки вакцины для лечения или профилактики инфекции H. pylori . Доктор Грэм является оплачиваемым консультантом RedHill Biopharma по новым методам лечения H. pylori и получил исследовательскую поддержку для культивирования H.pylori . Он является консультантом компании Otsuka Pharmaceuticals по вопросам диагностики дыхания. Доктор Грэм получил лицензионные отчисления от патентов Медицинского колледжа Бейлора, покрывающих материалы, относящиеся к дыхательному тесту 13 на содержание C-мочевины. Доктору Уотани нечего заявлять.

Ссылки

1. Шиотани А., Сен П., Грэм Д. Ликвидация рака желудка теперь возможна и практична. Semin Cancer Biol 2013; 23: 492-501. [PubMed] [Google Scholar] 2. Петерсон В.Л., Фендрик А.М., Кейв Д.Р. и др.Заболевание, связанное с Helicobacter pylori: рекомендации по тестированию и лечению. Arch Intern Med 2000; 160: 1285-91. [PubMed] [Google Scholar] 3. Град Ю.Х., Липсич М., Айелло А.Е. Секулярные тенденции в серопревалентности Helicobacter pylori у взрослых в Соединенных Штатах: доказательства устойчивых расовых / этнических различий. Am J Epidemiol 2012; 175: 54-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 4. Malfertheiner P, Megraud F, O’Morain CA и др. Управление инфекцией Helicobacter pylori — Маастрихтский отчет IV / Флорентийский консенсусный доклад.Кишечник 2012; 61: 646-64. [PubMed] [Google Scholar] 5. Асака М., Като М., Сакамото Н. Дорожная карта для ликвидации рака желудка с помощью эрадикации Helicobacter pylori и последовательного эпиднадзора в Японии. Журнал Гастроэнтерол 2014; 49: 1-8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 6. Campylobacter-подобные организмы в желудке пациентов и здоровых людей. Ланцет 1984; 1: 1348-9. [PubMed] [Google Scholar] 7. McNulty CA, Wise R. Быстрая диагностика гастрита, связанного с кампилобактерами. Ланцет 1985; 1: 1443-4. [PubMed] [Google Scholar] 8.McNulty CA, Dent JC, Uff JS и др. Обнаружение Campylobacter pylori с помощью биопсийного уреазного теста: оценка у 1445 пациентов. Кишечник 1989; 30: 1058-62. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 9. Graham DY, Go MF, Evans DJ, Jr. Обзорная статья: уреаза, желудочный аммоний / аммиак и Helicobacter pylori — прошлое, настоящее и рекомендации для будущих исследований. Aliment Pharmacol Ther 1992; 6: 659-69. [PubMed] [Google Scholar] 10. Фитцджеральд О., Мерфи П. Исследования физиологической химии и клинического значения уреазы с особым упором на желудок.Ирландский журнал J Med Sci 1950; 292: 97-159. [Google Scholar] 11. Фон Корфф Р.В., Глик Д. Роль уреазы в слизистой оболочке желудка. II. Исследования in vitro с изотопной мочевиной на слизистой оболочке лягушки. Am J Physiol 1951; 165: 688-94. [PubMed] [Google Scholar] 12. Hazell SL, Borody TJ, Gal A и др. Campylobacter pyloridis gastritis I: Обнаружение уреазы как маркера бактериальной колонизации и гастрита. Am J Gastroenterol 1987; 82: 292-6. [PubMed] [Google Scholar] 13. Mégraud F, Bessède E, Lehours P. Современные методы диагностики инфекции Helicobacter pylori.В: Buzás GM. ред. Helicobacter pylori — мировая перспектива, 2014. Дуб-парк: Bentham Science, 2014: 234-58. [Google Scholar] 14. Кальвет X, Санчес-Дельгадо Дж., Монтсеррат А. и др. Точность диагностических тестов на Helicobacter pylori: переоценка. Clin Infect Dis 2009; 48: 1385-91. [PubMed] [Google Scholar] 15. Аль-Хумаед С.М., Ахмед М.Э., Белло С.С. и др. Сравнение 4 лабораторных методов обнаружения Helicobacter pylori. Саудовская медицина, 2008; 29: 530-2. [PubMed] [Google Scholar] 16. Redéen S, Petersson F, Törnkrantz E, et al.Надежность диагностических тестов на инфекцию Helicobacter pylori. Гастроэнтерол Рес Прак 2011; 2011: 940650. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] 17. Вайра Д., Перна Ф. Насколько полезен экспресс-тест на уреазу для оценки успеха эрадикационной терапии Helicobacter pylori? Нат Клин Практ Гастроэнтерол Гепатол 2007; 4: 600-1. [PubMed] [Google Scholar] 18. эль-Зимаити Х.М., аль-Асси М.Т., Гента Р.М. и др. Подтверждение успешного лечения инфекции Helicobacter pylori: количество и место биопсии или экспресс-тест на уреазу.Am J Gastroenterol 1995; 90: 1962-4. [PubMed] [Google Scholar] 19. Woo JS, el-Zimaity HM, Genta RM и др. Лучшее место в желудке для получения положительного результата экспресс-теста на мочевину. Helicobacter 1996; 1: 256-9. [PubMed] [Google Scholar] 20. Юсфи М.М., Эль-Зимайты Н.М., Коул Р.А. и др. Обнаружение Helicobacter pylori с помощью экспресс-тестов на уреазу: является ли размер биопсии критической переменной? Gastrointest Endosc 1996; 43: 222-4. [PubMed] [Google Scholar] 21. Юсфи М.М., Эль-Зимайты Н.М., Коул Р.А. и др. Влияет ли использование грелки на результаты экспресс-теста на уреазу на Helicobacter pylori? Gastrointest Endosc 1996; 43: 260-1.[PubMed] [Google Scholar] 22. Осаки Т., Мабе К., Ханава Т. и др. Положительные по уреазе бактерии в желудке вызывают ложноположительную реакцию в дыхательном тесте на мочевину для диагностики инфекции Helicobacter pylori. J Med Microbiol 2008; 57: 814-9. [PubMed] [Google Scholar] 23. Перна Ф., Риччи С., Гатта Л. и др. Диагностическая точность нового экспресс-теста на уреазу (Pronto Dry) до и после лечения инфекции Helicobacter pylori. Минерва Гастроэнтерол Диетол 2005; 51: 247-54. [PubMed] [Google Scholar] 25. Грэм Д. Я., Лью Г. М., Малати Н. М. и др.Факторы, влияющие на эрадикацию Helicobacter pylori при тройной терапии. Гастроэнтерология 1992; 102: 493-6. [PubMed] [Google Scholar] 26. Грэм Д.Ю., Опекун А.Р., Хаммуд Ф. и др. Исследования механизма ложноотрицательных результатов дыхательных тестов на мочевину с ингибиторами протонной помпы. Am J Gastroenterol 2003; 98: 1005-9. [PubMed] [Google Scholar] 27. Форне М., Вивер Дж. М., Эспинос Дж. К. и др. Влияние коллоидного субнитрата висмута на скорость эрадикации язвы двенадцатиперстной кишки, связанной с инфекцией Helicobacter pylori, с использованием короткой схемы лечения омепразолом и кларитромицином: рандомизированное исследование.Am J Gastroenterol 1995; 90: 718-21. [PubMed] [Google Scholar] 28. Аттуми Т.А., Грэм Д.Ю. Контрольное обследование после лечения инфекций Helicobacter pylori: предостережения, предостережения и рекомендации. Clin Gastroenterol Hepatol 2011; 9: 373-5. [PubMed] [Google Scholar] 29. Лайне Л., Эстрада Р., Трухильо М. и др. Влияние терапии ингибиторами протонной помпы на диагностику Helicobacter pylori. Энн Интерн Мед 1998; 129: 547-50. [PubMed] [Google Scholar] 30. Vecchio TJ. Прогностическая ценность одного диагностического теста в неотобранных популяциях.N Engl J Med 1966; 274: 1171-3. [PubMed] [Google Scholar] 31. Мидоло П., Маршалл Б.Дж. Точный диагноз Helicobacter pylori. Тесты на уреазу. Гастроэнтерол Clin North Am 2000; 29: 871-8. [PubMed] [Google Scholar] 32. Лейн Л., Левин Д., Наритоку В. и др. Проспективное сравнение имеющихся в продаже экспресс-тестов на уреазу для диагностики Helicobacter pylori. Gastrointest Endosc 1996; 44: 523-6. [PubMed] [Google Scholar] 33. Леунг В.К., Сунг Дж.Дж., Сиу К.Л. и др. Ложноотрицательный результат биопсии на уреазу при кровоточащих язвах, вызванных буферным действием крови.Am J Gastroenterol 1998; 93: 1914-8. [PubMed] [Google Scholar] 34. Хоутон Дж., Рамамурти Р., Пандья Х. и др. Человеческая плазма обладает прямым бактерицидным действием против Helicobacter pylori in vitro, что потенциально объясняет снижение выявления Helicobacter pylori во время острого кровотечения из верхних отделов ЖКТ. Gastrointest Endosc 2002; 55: 11-6. [PubMed] [Google Scholar] 35. Tu TC, Lee CL, Wu CH, et al. Сравнение инвазивных и неинвазивных тестов для выявления инфекции Helicobacter pylori при кровоточащих пептических язвах. Gastrointest Endosc 1999; 49: 302-6.[PubMed] [Google Scholar] 36. Вильднер-Кристенсен М., Туборг Лассен А., Линдебьерг Дж. И др. Диагностика Helicobacter pylori у пациентов с кровоточащей язвенной болезнью, оценка тестов на мочевину. Пищеварение 2002; 66: 9-13. [PubMed] [Google Scholar] 37. Тан Дж. Х., Лю Н. Дж., Ченг Х. Т. и др. Эндоскопическая диагностика инфекции Helicobacter pylori с помощью экспресс-теста на уреазу при кровоточащих пептических язвах: проспективное исследование случай-контроль. J Clin Gastroenterol 2009; 43: 133-9. [PubMed] [Google Scholar] 38. Archimandritis A, Tzivras M, Sougioultzis S, et al.Экспресс-тест на уреазу менее чувствителен, чем гистология, при диагностике инфекции Helicobacter pylori у пациентов с кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта без варикозного расширения вен. J Gastroenterol Hepatol 2000; 15: 369-73. [PubMed] [Google Scholar] 39. Тянь XY, Чжу Х., Чжао Дж. И др. Диагностическая эффективность дыхательного теста на мочевину, экспресс-теста на мочевину и гистологии инфекции Helicobacter pylori у пациентов с частичной гастрэктомией: метаанализ. Дж. Клин Гастроэнтерол 2012; 46: 285-92. [PubMed] [Google Scholar] 40. Adamopoulos AB, Stergiou GS, Sakizlis GN, et al.Диагностическая ценность экспресс-теста на уреазу и дыхательного теста с мочевиной для выявления Helicobacter pylori у пациентов с гастрэктомией по Бильроту II: проспективное контролируемое исследование. Dig Liver Dis 2009; 41: 4-8. [PubMed] [Google Scholar] 41. Ли Й, Римбара Э, Тирумурти С. и др. Обнаружение устойчивости к кларитромицину у Helicobacter pylori после некриогенного хранения экспресс-тестов на уреазу в течение 30 дней. Журнал Dig Dis 2012; 13: 54-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 42. Фурута Т., Сугимото М., Кодайра С. и др.Схемы экстренной помощи третьей линии на основе ситафлоксацина при инфекции Helicobacter pylori в Японии. J Gastroenterol Hepatol 2014; 29: 487-93. [PubMed] [Google Scholar]

Диагностика Helicobacter pylori с помощью экспресс-теста на уреазу

Ann Transl Med. 2015 Янв; 3 (1): 9.

Департамент медицины, Медицинский центр Майкла Э. Дебейки, штат Вирджиния, и Медицинский колледж Бейлора, Хьюстон, Техас 77030, США

Автор, отвечающий за переписку. Для корреспонденции: Дэвид Ю. Грэм, доктор медицины. Майкл Э.DeBakey VA Medical Center, 2002 Holcombe Blvd- Rm 3a-320 (111d), Хьюстон, Техас 77030, США. Электронная почта: [email protected]

Поступило 26 июля 2014 г .; Принято 14 октября 2014 г.

Copyright 2015 Annals of Translational Medicine. Все права защищены.Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

Abstract

Helicobacter pylori ( H. pylori ) является основным патогеном человека, вызывающим прогрессирующее гастродуоденальное повреждение. Руководства рекомендуют, если нет веских причин для отсрочки, лечение показано всем пациентам, у которых диагностирована инфекция.Быстрый тест на уреазу (RUT) — популярный диагностический тест, поскольку это быстрый, дешевый и простой тест, который определяет присутствие уреазы в или на слизистой оболочке желудка. Чувствительность и специфичность обычно высоки, и многие версии были одобрены для использования на людях. Наилучшие результаты достигаются, если биопсия берется как из антрального отдела, так и из тела. Образец ткани, залитый в гель RUT, также можно использовать для других тестов, таких как молекулярные тесты микробной чувствительности или факторов хозяина.Ложноположительные результаты редки, если RUT содержит антибактериальный агент, предотвращающий рост загрязняющих веществ, содержащих уреазу, а тесты отбрасываются через 24 часа. Использование противомикробных препаратов и ингибиторов протонной помпы, а также наличие кишечной метаплазии может привести к ложноотрицательным результатам. Отрицательный результат теста не следует использовать в качестве критерия излечения или в случаях, когда точность важна для ведения пациента, например, при кровотечении из верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Интерпретация теста должна учитывать предварительную вероятность и распространенность H.pylori в популяции. Тест также может использоваться для неформальной оценки точности результата гистопатологии, а расхождения должны побудить к пересмотру гистопатологии и обсуждениям с патологом.

Ключевые слова: Диагностика, Helicobacter pylori ( H. pylori ), уреаза, экспресс-тест на уреазу (RUT), обзор, тест на кампилобактероподобные организмы

Введение

Helicobacter pylori ( H.pylori ) является важным патогеном человека, участвующим в патогенезе атрофического гастрита, гастродуоденальной язвы, рака желудка, лимфомы MALT, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры, железодефицитной анемии и дефицита витамина B12 (1). Несмотря на общее снижение распространенности инфекций H. pylori в западных странах, 30-40% населения США остаются инфицированными (2,3). H. pylori не является комменсальным организмом, поскольку инфекция всегда вызывает воспаление и повреждение слизистой оболочки желудка.Основное поражение — прогрессирующее воспаление слизистой оболочки, которое может привести к предопухолевым атрофическим изменениям (1). Хотя H. pylori различаются по вирулентности (например, присутствует ли островок патогенности cag), существует риск значительного клинического исхода, так как разница в риске между наименее и наиболее вирулентными только примерно двукратная (1). Поскольку скорость прогрессирования повреждения слизистой оболочки непредсказуема, а инфекция всегда передается, рекомендуется всякий раз, когда заражение H.pylori , его следует вылечить, если нет веских причин, которые могли бы смягчить этот выбор (например, очень пожилые люди с обширными сопутствующими заболеваниями) (4). В феврале 2013 года правительство Японии одобрило универсальную стратегию тестирования и лечения как часть цели Японии по ликвидации рака желудка (5).

Инфекции H. pylori , как и другие серьезные хронические инфекционные заболевания (например, сифилис и туберкулез), связаны с длительным латентным периодом до клинического проявления.Таким образом, в этот латентный период будет обнаружено множество инфекций. Было разработано несколько методов борьбы с инфекцией H. pylori , которые обычно сгруппированы как «инвазивные», что означает, что они требуют ткани желудка или слизи, или «неинвазивные», требующие только крови, дыхания или стула или анализа. Здесь мы обсуждаем экспресс-тест на уреазу (RUT) или RUT, который является инвазивным тестом, поскольку он требует отбора проб слизистой оболочки желудка. Тест обеспечивает косвенное свидетельство инфекции, идентифицируя присутствие фермента, не являющегося млекопитающим, уреазы, в слизистой оболочке желудка или на ней.

История

H. pylori был впервые посажен в 1983 году. В первоначальном отчете он был описан как отрицательный по уреазе. Однако другие лаборатории, пытающиеся воспроизвести первоначальный результат, правильно определили, что этот организм был положительным по уреазе (6). McNulty et al. адаптировал стандартный лабораторный тест на уреазную активность, в котором петлю культуры помещают в субстрат, содержащий мочевину с индикатором pH, такой как 2% бульон с мочевиной Кристенсена; Уреаза гидролизует мочевину с образованием аммиака и диоксида углерода (7).Аммиак увеличивает pH, что приводит к изменению цвета (с коричневого на розовый). McNulty et al. показал, что с помощью этого теста уреазу можно идентифицировать непосредственно из биопсии желудка, что устраняет необходимость в культуре или гистологии. За первоначальным наблюдением последовало большое клиническое испытание, опубликованное в 1989 г., в котором 1445 пациентов прошли тестирование на H. pylori с использованием модифицированного бульона мочевины Кристенсена (8). Они сообщили о почти 100% специфичности и 96% чувствительности по сравнению с гистологией и культурой.Барри Маршал добавил антибактериальный агент к агаровому гелю, содержащему мочевину и индикатор pH, и запатентовал первый тест RUT, называемый тестом на организм, подобный кампилобактерам (CLO), который быстро стал стандартом для клинического использования и клинических испытаний.

Желудочная уреаза

Желудочная уреаза имела долгую историю до открытия H. pylori (9). На протяжении десятилетий считалось, что уреаза является ферментом млекопитающих, и предполагалось, что уреаза вырабатывается желудком для защиты желудка от переваривания желудочной кислотой (9).Уреаза даже была основой терапии язвенной болезни. Например, ирландский врач Оливер Фицджеральд лечил пептические язвы мочевиной как перорально, так и внутривенно для нейтрализации кислотности желудочного сока и лечения пептических язв (10). Первый эквивалент дыхательного теста с мочевиной с использованием 13 C-мочевины был фактически зарегистрирован в 1951 году и использовался для измерения активности уреазы в желудке лягушки (11). Когда стало очевидно, что уреаза имеет микробное происхождение, интерес к уреазе ослаб, поскольку было ясно, что она не может нести ответственность за защиту слизистой оболочки желудка от повреждения кислотой, а также потому, что большинство соответствующих экспериментов уже было проведено.Открытие того, что H. pylori продуцирует большое количество уреазы, позволило этим многочисленным экспериментам обрести новое значение (6).

RUT — это косвенный тест на присутствие H. pylori , основанный на наличии уреазы в или на слизистой оболочке желудка. Он имеет преимущество перед серологией в том, что он обнаруживает только наличие активной инфекции. Для теста требуется образец слизистой оболочки желудка или слизи, который добавляется в пробирку, гель или другое устройство, которое приводит этот образец в контакт с мочевиной, а также метод обнаружения продуктов гидролиза мочевины, аммиака или диоксида углерода.Для оценки активности желудочной уреазы были разработаны различные тесты, основанные, вероятно, на всех возможных компонентах реакции, включая те, которые оценивают изменения меченого CO 2 в сыворотке или выдыхаемом воздухе, уровень аммиака в выдыхаемом воздухе и изменение pH, вызванное воздействием аммиак либо для изменения цвета, либо непосредственно с помощью pH-метра. В первоначальном тесте использовался феноловый красный, цвет индикатора которого менялся с желтого на розовый или красный по мере увеличения pH. В других тестах использовались разные индикаторы, каждый из которых имел потенциальное преимущество, например, возможность начать реакцию при более низком pH, таком как 5.4 и, таким образом, снизить активность контаминирующих бактерий ротовой полости, многие из которых также содержат много уреазы (например, HP fast ® ) (). Простейшие тесты выполняются самостоятельно и содержат небольшое количество субстрата в пробирке с индикатором pH и могут быть произведены по одному или двум центам каждый (12).

Примеры трех популярных коммерческих быстрых тестов на уреазу (RUT), доступных в Соединенных Штатах, включая тест CLO и два теста второго поколения, один с использованием геля с контролируемым pH, а другой — с мембраной, насыщенной мочевиной.Один из каждой пары является контрольным, а другой — после смены цвета. CLO, организм, похожий на кампилобактер.

Как и для любой ферментативной реакции, необходимо учитывать параметры, которые влияют на реакцию, такие как концентрация субстрата, концентрация и активность фермента, время и температура, и были проведены исследования для тестирования многих различных параметров, чтобы обеспечить надежные результаты. Важные переменные включают сбор образца, размер образца, время до того, как результат теста будет признан отрицательным, а также то, полезно ли потепление.Положительный результат RUT требует приблизительно 10 5 H. pylori в образце биопсии, чтобы изменить цвет с помощью теста на основе агара, такого как тест CLO (13). Обычно это не проблема, поскольку концентрация H. pylori обычно превышает этот минимум. Чувствительность различных тестов RUT в качестве первичных диагностических тестов высока и, по имеющимся данным, варьируется от 80% до 100%, а специфичность — от 97% до 99% (14-17).

Первое требование — образец биопсии должен быть взят из места, где присутствуют микроорганизмы.У пациентов с язвой двенадцатиперстной кишки обычно неатрофическая слизистая оболочка, и H. pylori особенно распространены по всему антральному отделу. Для этих пациентов один образец из антрального отдела или желудочного угла будет иметь высокий выход, обычно более 85% и часто в диапазоне от 95% до 100%. Однако, если у пациента атрофический гастрит и обширные области кишечной метаплазии, которые содержат несколько организмов H. pylori , результаты часто будут неутешительными. Опубликованы многочисленные исследования места биопсии.Например, в одном исследовании было взято два образца биопсии из антрального отдела, и сообщалось о чувствительности и специфичности 95% и 100% (18). В другом исследовании сравнивали результаты биопсии, взятой под углом желудка, препилорическим участком и участком тела, с результатами 100%, 87% и 84,4% соответственно и без ложноположительных результатов (т.е. специфичность 100%) (19) . В целом, для достижения наилучших результатов достаточно двух образцов: одного из антрального отдела, избегающего участков изъязвления и явной кишечной метаплазии, и одного из нормального тела, которые обеспечивают самый высокий результат.Два образца могут быть помещены в один и тот же гель или среду или в отдельные контейнеры в зависимости от предпочтений врача и от того, планируется ли другое использование образцов.

Размер биопсии

Чувствительность и специфичность больших чашечных щипцов (диаметр 3,3 мм) и маленьких чашечных щипцов (диаметр 1,8 мм) сравнивали с использованием биопсии антрального отдела у одних и тех же пациентов (20). Чувствительность и специфичность больших щипцов составила 92,1% и 95,5% по сравнению с 88,5% и 98,8% для маленьких щипцов, соответственно.Таким образом, для практических целей размер чашки для биопсии не имеет большого значения. Поскольку большие щипцы также предоставляют больше информации для гистологического исследования, мы рекомендуем использовать самые большие щипцы, которые пройдут через канал введения эндоскопии. Если используется действительно крошечная эндоскопия, такая как ультратонкий эндоскоп, образцы для RUT могут быть взяты либо с помощью прилагаемых крошечных щипцов, либо путем чистки слизистой оболочки и помещения кисти в среду RUT.

Скорость реакции RUT частично зависит от температуры реакции.Было проведено сравнение, в котором биопсии антрального отдела были помещены при 38 ° C в более теплый воздух или хранились при комнатной температуре (~ 21 ° C). Возможность поставить диагноз в течение 30 минут была на 20% выше при использовании грелки (21), но в целом результаты были такими же. Многие эндоскописты кладут устройство RUT в карман, чтобы согреться. В целом, использование грелки не имеет большого значения, за исключением того, что это может позволить чаще подтверждать диагноз до того, как пациент покинет эндоскопическую область.

Имеющиеся в продаже наборы RUT предполагают принятие решения (положительный результат vs. отрицательный) в течение 24 часов. Время положительного результата теста зависит от концентрации бактерий и температуры. Большинство из них станет положительным в течение 120–180 минут, но лучше всего подержать отрицательные в течение 24 часов (22,23). Через 24 часа тест может стать положительным из-за присутствия организмов, не содержащих уреазу H. pylori (24). Положительные результаты через 24 часа чаще всего являются ложноположительными и не должны использоваться для принятия решения о лечении. Обычно мы выбрасываем образцы через 24 часа.Существует ряд различных коммерчески доступных наборов RUT, которые в основном различаются в зависимости от платформы (например, гель, жидкость, мембрана и т. Д.). Выбор зависит от доступности и местных предпочтений, поскольку ни один из них не оказался лучшим.

Ложноотрицательные и ложноположительные результаты

Как отмечалось выше, RUT — это тест на присутствие фермента уреазы. Однако фактические результаты будут зависеть от заболевания желудка и вероятности атрофических изменений или экзогенных факторов, которые снижают бактериальную нагрузку и, таким образом, дают ложноотрицательные результаты.Ложноположительные результаты могут быть получены, если другие организмы, содержащие уреазу, присутствуют в достаточном количестве или если один позволяет контактировать между образцом и средой в течение длительного периода, обычно более 24 часов. Как отмечалось ранее, для получения положительного результата в образце биопсии должно присутствовать приблизительно 10 5 бактерий (13), и все, что снижает плотность бактерий, например, использование антибиотиков, висмутсодержащих соединений или ингибиторов протонной помпы, может привести к ложноотрицательные результаты (25-27).Двумя наиболее частыми причинами ложноотрицательных результатов являются недавнее использование ингибиторов протонной помпы и наличие кишечной метаплазии. Антагонисты рецепторов H 2 не снижают бактериальную плотность и могут использоваться до дня проведения теста (28). Неясно, сколько времени нужно ждать после прекращения приема ингибиторов протонной помпы, прежде чем возможность ложноотрицательного результата станет маловероятной. Обычно рекомендуют две недели, исходя из соображений безопасности; однако организмы обычно быстро восстанавливаются после ингибирования ингибитором протонной помпы (26,29).Тем не менее, все тесты на активную инфекцию, включая RUT, гистологию, дыхательный тест на мочевину и посев, могут стать ложноотрицательными во время использования ингибитора протонной помпы или после использования висмута или антибиотика (28). Маловероятно, что ложноотрицательный RUT также будет сопровождаться гистологически невоспаленной и нормальной слизистой оболочкой желудка. Если есть сомнения и результат важен, лучше всего пройти неинвазивный тест (дыхательный тест на мочевину или антиген в стуле) после прекращения приема ИПП.

Ложноположительные результаты редки и, если они есть, могут быть связаны с присутствием других организмов, содержащих уреазу, таких как Proteus mirabilis , Citrobactor freundii , Klebsiella pneumonia , Enterobactor cloacae и Staphylococcus (Staphylococcus aure). .Однако, если у пациента нет ахлоргидрии или гипохлоргидрии, микроорганизмы H. pylori , отличные от , вряд ли будут присутствовать в достаточной концентрации для получения положительного результата, если только в субстрате RUT не будет ингибитора роста бактерий, в котором они могут разрастаться в течение 24 дней. часов периода наблюдения.

Клиническая интерпретация результатов RUT

Интерпретация RUT, как и любой другой диагностический тест, частично зависит от предварительной вероятности инфекции (30).Таким образом, у пациента с язвой двенадцатиперстной кишки один положительный результат RUT будет считаться подтверждением диагноза, тогда как отрицательный тест должен подтверждаться результатами другого теста, такого как гистология (например, отсутствие признаков воспаления желудка). Напротив, у пожилого пациента, подвергающегося эндоскопии по поводу гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, можно было бы нерешительно начинать терапию, основываясь только на положительном RUT. Таким образом, интерпретация зависит от вероятности предварительного тестирования и важности результата для последующего ведения пациента.Чтобы сэкономить деньги пациента, некоторые врачи предложили брать биопсию для RUT, а также для гистологии из нормальной слизистой оболочки, а затем, если RUT положительный, отбрасывать гистологические образцы за ненадобностью (23,31,32). Хотя это может иметь смысл при наличии высокой вероятности предварительного тестирования (например, активной язвы двенадцатиперстной кишки), это было бы нецелесообразно для пациента с неязвенной диспепсией, когда сами гистологические данные могут быть важны (например, наличие атрофических изменений, дисплазия и др.). Также было рекомендовано, чтобы RUT не использовался в качестве единственного арбитра результатов эрадикационной терапии H. pylori , потому что чувствительность RUT не составляет 100%, и, таким образом, отрицательный тест не полностью исключает присутствие активного инфекция (4,28). Это особенно важно, когда целью обследования является испытание на излечение. В действительности эндоскопия нечасто проводится для проверки излечения, за исключением пациентов с поражениями, где требуется дальнейшая эндоскопическая и / или гистологическая оценка, например, при язве желудка или после резекции аденоматозных полипов, и вопрос о роли посттерапии RUT возникает редко.Для таких пациентов, вероятно, наиболее экономически выгодно полагаться на гистологическое исследование биопсий антрального отдела и тела.

Вообще говоря, верхняя эндоскопия — это дорогостоящий тест, связанный с небольшим, но определенным риском, и, если нет особых противопоказаний, обычно показана биопсия для исследования гистологии слизистой оболочки. Также можно провести тестирование RUT, которое особенно полезно в сложных диагностических ситуациях, когда врач хотел бы в ближайшее время начать лечение. Таким образом, биопсии для RUT часто берутся у пациентов с недавним кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта.В этой ситуации может быть повышенное количество ложноотрицательных результатов. Было высказано предположение, что кровь приводит к снижению чувствительности RUT, возможно, связанной с присутствием альбумина (33), факторов уничтожения H. pylori в плазме человека (34) или крови в просвете желудка (35, 36). Однако другие исследования сообщают, что кровь не влияет на результаты теста (37,38). Ложноотрицательные тесты также распространены после частичной гастрэктомии, вероятно, из-за снижения бактериальной нагрузки, часто связанной с наличием желчи (39,40).Ни в одной из этих ситуаций критически важно немедленно диагностировать или начать лечение инфекции H. pylori . Такие ложноотрицательные результаты не имеют большого клинического значения, если они не принимаются как доказательство отсутствия инфекции H. pylori . Всегда нужно возвращаться к рассмотрению того, что вы планируете делать с информацией (т.е. положительным тестам обычно следует верить, но отрицательные тесты требуют гистологического или другого подтверждения при наличии H.pylori , вероятно, является причиной эндоскопии, например, при кровоточащей язвенной болезни). Поскольку большинство инфекций H. pylori были приобретены в детстве, немедленное лечение не требуется, и всегда можно подождать, пока не исчезнут острые состояния.

Использование образца RUT для дополнительных целей

Образец ткани, содержащийся в агаре теста RUT, можно использовать для других целей. Например, образец может быть извлечен из агарового геля положительных тестов и использован для молекулярного тестирования на H.pylori и / или наличие устойчивости к кларитромицину (41). Поскольку образец содержит ткань хозяина, его также можно использовать для других тестов, таких как генотип CYP2C19 хозяина (42).

Резюме

RUT — это быстрый, дешевый и простой тест, который часто используется в клинической практике. RUT лучше всего рассматривать как скрининговый тест, а не как золотой стандарт для инфекции H. pylori . Для клинических испытаний диагноз инфекции H. pylori требует, чтобы два разных типа теста были положительными или положительными культурами. H. pylori отрицательный, как правило, определяется как отрицательный результат всех тестов. Ключом к правильному использованию является рассмотрение любого теста с точки зрения предтестовой вероятности, а также важности информации с точки зрения ведения пациентов. Ложноотрицательные тесты встречаются чаще, чем ложноположительные, поэтому отрицательный результат не следует использовать для исключения H. pylori , если неправильный диагноз может нанести ущерб ведению пациента (например, у пациента с недавним кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта или после ). ЧАС.pylori ). Положительный посев считается единственным истинным золотым стандартом для диагностики H. pylori , поэтому при подозрении на ложноотрицательный результат требуется дополнительное тестирование. Наконец, тест также может использоваться в качестве неформальной оценки точности лаборатории патологии, и расхождения между RUT и гистологией, особенно положительная RUT и отрицательная гистология, должны побудить к пересмотру гистопатологии и обсуждениям с патологом.

Выражение признательности

Доктор Грэм получает частичную поддержку со стороны Управления исследований и разработок Службы медицинских исследований Департамента по делам ветеранов, гранты Службы общественного здравоохранения R01 DK062813 и DK56338, которые финансируют Центр болезней органов пищеварения Техасского медицинского центра. Авторы полностью несут ответственность за содержание и не обязательно отражают официальную точку зрения VA или NIH.

Вклад авторов: Каждый из авторов принимал участие в равной степени, прочитал и утвердил окончательный вариант рукописи.Каждый соответствует критериям авторства, установленным Международным комитетом редакторов медицинских журналов, и проверяет достоверность представленных результатов.

Раскрытие информации: Доктор Грэм является неоплачиваемым консультантом компании Novartis по вопросам разработки вакцины для лечения или профилактики инфекции H. pylori . Доктор Грэм является оплачиваемым консультантом RedHill Biopharma по новым методам лечения H. pylori и получил исследовательскую поддержку для культивирования H.pylori . Он является консультантом компании Otsuka Pharmaceuticals по вопросам диагностики дыхания. Доктор Грэм получил лицензионные отчисления от патентов Медицинского колледжа Бейлора, покрывающих материалы, относящиеся к дыхательному тесту 13 на содержание C-мочевины. Доктору Уотани нечего заявлять.

Ссылки

1. Шиотани А., Сен П., Грэм Д. Ликвидация рака желудка теперь возможна и практична. Semin Cancer Biol 2013; 23: 492-501. [PubMed] [Google Scholar] 2. Петерсон В.Л., Фендрик А.М., Кейв Д.Р. и др.Заболевание, связанное с Helicobacter pylori: рекомендации по тестированию и лечению. Arch Intern Med 2000; 160: 1285-91. [PubMed] [Google Scholar] 3. Град Ю.Х., Липсич М., Айелло А.Е. Секулярные тенденции в серопревалентности Helicobacter pylori у взрослых в Соединенных Штатах: доказательства устойчивых расовых / этнических различий. Am J Epidemiol 2012; 175: 54-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 4. Malfertheiner P, Megraud F, O’Morain CA и др. Управление инфекцией Helicobacter pylori — Маастрихтский отчет IV / Флорентийский консенсусный доклад.Кишечник 2012; 61: 646-64. [PubMed] [Google Scholar] 5. Асака М., Като М., Сакамото Н. Дорожная карта для ликвидации рака желудка с помощью эрадикации Helicobacter pylori и последовательного эпиднадзора в Японии. Журнал Гастроэнтерол 2014; 49: 1-8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 6. Campylobacter-подобные организмы в желудке пациентов и здоровых людей. Ланцет 1984; 1: 1348-9. [PubMed] [Google Scholar] 7. McNulty CA, Wise R. Быстрая диагностика гастрита, связанного с кампилобактерами. Ланцет 1985; 1: 1443-4. [PubMed] [Google Scholar] 8.McNulty CA, Dent JC, Uff JS и др. Обнаружение Campylobacter pylori с помощью биопсийного уреазного теста: оценка у 1445 пациентов. Кишечник 1989; 30: 1058-62. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 9. Graham DY, Go MF, Evans DJ, Jr. Обзорная статья: уреаза, желудочный аммоний / аммиак и Helicobacter pylori — прошлое, настоящее и рекомендации для будущих исследований. Aliment Pharmacol Ther 1992; 6: 659-69. [PubMed] [Google Scholar] 10. Фитцджеральд О., Мерфи П. Исследования физиологической химии и клинического значения уреазы с особым упором на желудок.Ирландский журнал J Med Sci 1950; 292: 97-159. [Google Scholar] 11. Фон Корфф Р.В., Глик Д. Роль уреазы в слизистой оболочке желудка. II. Исследования in vitro с изотопной мочевиной на слизистой оболочке лягушки. Am J Physiol 1951; 165: 688-94. [PubMed] [Google Scholar] 12. Hazell SL, Borody TJ, Gal A и др. Campylobacter pyloridis gastritis I: Обнаружение уреазы как маркера бактериальной колонизации и гастрита. Am J Gastroenterol 1987; 82: 292-6. [PubMed] [Google Scholar] 13. Mégraud F, Bessède E, Lehours P. Современные методы диагностики инфекции Helicobacter pylori.В: Buzás GM. ред. Helicobacter pylori — мировая перспектива, 2014. Дуб-парк: Bentham Science, 2014: 234-58. [Google Scholar] 14. Кальвет X, Санчес-Дельгадо Дж., Монтсеррат А. и др. Точность диагностических тестов на Helicobacter pylori: переоценка. Clin Infect Dis 2009; 48: 1385-91. [PubMed] [Google Scholar] 15. Аль-Хумаед С.М., Ахмед М.Э., Белло С.С. и др. Сравнение 4 лабораторных методов обнаружения Helicobacter pylori. Саудовская медицина, 2008; 29: 530-2. [PubMed] [Google Scholar] 16. Redéen S, Petersson F, Törnkrantz E, et al.Надежность диагностических тестов на инфекцию Helicobacter pylori. Гастроэнтерол Рес Прак 2011; 2011: 940650. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] 17. Вайра Д., Перна Ф. Насколько полезен экспресс-тест на уреазу для оценки успеха эрадикационной терапии Helicobacter pylori? Нат Клин Практ Гастроэнтерол Гепатол 2007; 4: 600-1. [PubMed] [Google Scholar] 18. эль-Зимаити Х.М., аль-Асси М.Т., Гента Р.М. и др. Подтверждение успешного лечения инфекции Helicobacter pylori: количество и место биопсии или экспресс-тест на уреазу.Am J Gastroenterol 1995; 90: 1962-4. [PubMed] [Google Scholar] 19. Woo JS, el-Zimaity HM, Genta RM и др. Лучшее место в желудке для получения положительного результата экспресс-теста на мочевину. Helicobacter 1996; 1: 256-9. [PubMed] [Google Scholar] 20. Юсфи М.М., Эль-Зимайты Н.М., Коул Р.А. и др. Обнаружение Helicobacter pylori с помощью экспресс-тестов на уреазу: является ли размер биопсии критической переменной? Gastrointest Endosc 1996; 43: 222-4. [PubMed] [Google Scholar] 21. Юсфи М.М., Эль-Зимайты Н.М., Коул Р.А. и др. Влияет ли использование грелки на результаты экспресс-теста на уреазу на Helicobacter pylori? Gastrointest Endosc 1996; 43: 260-1.[PubMed] [Google Scholar] 22. Осаки Т., Мабе К., Ханава Т. и др. Положительные по уреазе бактерии в желудке вызывают ложноположительную реакцию в дыхательном тесте на мочевину для диагностики инфекции Helicobacter pylori. J Med Microbiol 2008; 57: 814-9. [PubMed] [Google Scholar] 23. Перна Ф., Риччи С., Гатта Л. и др. Диагностическая точность нового экспресс-теста на уреазу (Pronto Dry) до и после лечения инфекции Helicobacter pylori. Минерва Гастроэнтерол Диетол 2005; 51: 247-54. [PubMed] [Google Scholar] 25. Грэм Д. Я., Лью Г. М., Малати Н. М. и др.Факторы, влияющие на эрадикацию Helicobacter pylori при тройной терапии. Гастроэнтерология 1992; 102: 493-6. [PubMed] [Google Scholar] 26. Грэм Д.Ю., Опекун А.Р., Хаммуд Ф. и др. Исследования механизма ложноотрицательных результатов дыхательных тестов на мочевину с ингибиторами протонной помпы. Am J Gastroenterol 2003; 98: 1005-9. [PubMed] [Google Scholar] 27. Форне М., Вивер Дж. М., Эспинос Дж. К. и др. Влияние коллоидного субнитрата висмута на скорость эрадикации язвы двенадцатиперстной кишки, связанной с инфекцией Helicobacter pylori, с использованием короткой схемы лечения омепразолом и кларитромицином: рандомизированное исследование.Am J Gastroenterol 1995; 90: 718-21. [PubMed] [Google Scholar] 28. Аттуми Т.А., Грэм Д.Ю. Контрольное обследование после лечения инфекций Helicobacter pylori: предостережения, предостережения и рекомендации. Clin Gastroenterol Hepatol 2011; 9: 373-5. [PubMed] [Google Scholar] 29. Лайне Л., Эстрада Р., Трухильо М. и др. Влияние терапии ингибиторами протонной помпы на диагностику Helicobacter pylori. Энн Интерн Мед 1998; 129: 547-50. [PubMed] [Google Scholar] 30. Vecchio TJ. Прогностическая ценность одного диагностического теста в неотобранных популяциях.N Engl J Med 1966; 274: 1171-3. [PubMed] [Google Scholar] 31. Мидоло П., Маршалл Б.Дж. Точный диагноз Helicobacter pylori. Тесты на уреазу. Гастроэнтерол Clin North Am 2000; 29: 871-8. [PubMed] [Google Scholar] 32. Лейн Л., Левин Д., Наритоку В. и др. Проспективное сравнение имеющихся в продаже экспресс-тестов на уреазу для диагностики Helicobacter pylori. Gastrointest Endosc 1996; 44: 523-6. [PubMed] [Google Scholar] 33. Леунг В.К., Сунг Дж.Дж., Сиу К.Л. и др. Ложноотрицательный результат биопсии на уреазу при кровоточащих язвах, вызванных буферным действием крови.Am J Gastroenterol 1998; 93: 1914-8. [PubMed] [Google Scholar] 34. Хоутон Дж., Рамамурти Р., Пандья Х. и др. Человеческая плазма обладает прямым бактерицидным действием против Helicobacter pylori in vitro, что потенциально объясняет снижение выявления Helicobacter pylori во время острого кровотечения из верхних отделов ЖКТ. Gastrointest Endosc 2002; 55: 11-6. [PubMed] [Google Scholar] 35. Tu TC, Lee CL, Wu CH, et al. Сравнение инвазивных и неинвазивных тестов для выявления инфекции Helicobacter pylori при кровоточащих пептических язвах. Gastrointest Endosc 1999; 49: 302-6.[PubMed] [Google Scholar] 36. Вильднер-Кристенсен М., Туборг Лассен А., Линдебьерг Дж. И др. Диагностика Helicobacter pylori у пациентов с кровоточащей язвенной болезнью, оценка тестов на мочевину. Пищеварение 2002; 66: 9-13. [PubMed] [Google Scholar] 37. Тан Дж. Х., Лю Н. Дж., Ченг Х. Т. и др. Эндоскопическая диагностика инфекции Helicobacter pylori с помощью экспресс-теста на уреазу при кровоточащих пептических язвах: проспективное исследование случай-контроль. J Clin Gastroenterol 2009; 43: 133-9. [PubMed] [Google Scholar] 38. Archimandritis A, Tzivras M, Sougioultzis S, et al.Экспресс-тест на уреазу менее чувствителен, чем гистология, при диагностике инфекции Helicobacter pylori у пациентов с кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта без варикозного расширения вен. J Gastroenterol Hepatol 2000; 15: 369-73. [PubMed] [Google Scholar] 39. Тянь XY, Чжу Х., Чжао Дж. И др. Диагностическая эффективность дыхательного теста на мочевину, экспресс-теста на мочевину и гистологии инфекции Helicobacter pylori у пациентов с частичной гастрэктомией: метаанализ. Дж. Клин Гастроэнтерол 2012; 46: 285-92. [PubMed] [Google Scholar] 40. Adamopoulos AB, Stergiou GS, Sakizlis GN, et al.Диагностическая ценность экспресс-теста на уреазу и дыхательного теста с мочевиной для выявления Helicobacter pylori у пациентов с гастрэктомией по Бильроту II: проспективное контролируемое исследование. Dig Liver Dis 2009; 41: 4-8. [PubMed] [Google Scholar] 41. Ли Й, Римбара Э, Тирумурти С. и др. Обнаружение устойчивости к кларитромицину у Helicobacter pylori после некриогенного хранения экспресс-тестов на уреазу в течение 30 дней. Журнал Dig Dis 2012; 13: 54-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 42. Фурута Т., Сугимото М., Кодайра С. и др.Схемы экстренной помощи третьей линии на основе ситафлоксацина при инфекции Helicobacter pylori в Японии. J Gastroenterol Hepatol 2014; 29: 487-93. [PubMed] [Google Scholar]

Диагностика Helicobacter pylori с помощью экспресс-теста на уреазу

Ann Transl Med. 2015 Янв; 3 (1): 9.

Департамент медицины, Медицинский центр Майкла Э. Дебейки, штат Вирджиния, и Медицинский колледж Бейлора, Хьюстон, Техас 77030, США

Автор, отвечающий за переписку. Для корреспонденции: Дэвид Ю. Грэм, доктор медицины. Майкл Э.DeBakey VA Medical Center, 2002 Holcombe Blvd- Rm 3a-320 (111d), Хьюстон, Техас 77030, США. Электронная почта: [email protected]

Поступило 26 июля 2014 г .; Принято 14 октября 2014 г.

Copyright 2015 Annals of Translational Medicine. Все права защищены.Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

Abstract

Helicobacter pylori ( H. pylori ) является основным патогеном человека, вызывающим прогрессирующее гастродуоденальное повреждение. Руководства рекомендуют, если нет веских причин для отсрочки, лечение показано всем пациентам, у которых диагностирована инфекция.Быстрый тест на уреазу (RUT) — популярный диагностический тест, поскольку это быстрый, дешевый и простой тест, который определяет присутствие уреазы в или на слизистой оболочке желудка. Чувствительность и специфичность обычно высоки, и многие версии были одобрены для использования на людях. Наилучшие результаты достигаются, если биопсия берется как из антрального отдела, так и из тела. Образец ткани, залитый в гель RUT, также можно использовать для других тестов, таких как молекулярные тесты микробной чувствительности или факторов хозяина.Ложноположительные результаты редки, если RUT содержит антибактериальный агент, предотвращающий рост загрязняющих веществ, содержащих уреазу, а тесты отбрасываются через 24 часа. Использование противомикробных препаратов и ингибиторов протонной помпы, а также наличие кишечной метаплазии может привести к ложноотрицательным результатам. Отрицательный результат теста не следует использовать в качестве критерия излечения или в случаях, когда точность важна для ведения пациента, например, при кровотечении из верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Интерпретация теста должна учитывать предварительную вероятность и распространенность H.pylori в популяции. Тест также может использоваться для неформальной оценки точности результата гистопатологии, а расхождения должны побудить к пересмотру гистопатологии и обсуждениям с патологом.

Ключевые слова: Диагностика, Helicobacter pylori ( H. pylori ), уреаза, экспресс-тест на уреазу (RUT), обзор, тест на кампилобактероподобные организмы

Введение

Helicobacter pylori ( H.pylori ) является важным патогеном человека, участвующим в патогенезе атрофического гастрита, гастродуоденальной язвы, рака желудка, лимфомы MALT, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры, железодефицитной анемии и дефицита витамина B12 (1). Несмотря на общее снижение распространенности инфекций H. pylori в западных странах, 30-40% населения США остаются инфицированными (2,3). H. pylori не является комменсальным организмом, поскольку инфекция всегда вызывает воспаление и повреждение слизистой оболочки желудка.Основное поражение — прогрессирующее воспаление слизистой оболочки, которое может привести к предопухолевым атрофическим изменениям (1). Хотя H. pylori различаются по вирулентности (например, присутствует ли островок патогенности cag), существует риск значительного клинического исхода, так как разница в риске между наименее и наиболее вирулентными только примерно двукратная (1). Поскольку скорость прогрессирования повреждения слизистой оболочки непредсказуема, а инфекция всегда передается, рекомендуется всякий раз, когда заражение H.pylori , его следует вылечить, если нет веских причин, которые могли бы смягчить этот выбор (например, очень пожилые люди с обширными сопутствующими заболеваниями) (4). В феврале 2013 года правительство Японии одобрило универсальную стратегию тестирования и лечения как часть цели Японии по ликвидации рака желудка (5).

Инфекции H. pylori , как и другие серьезные хронические инфекционные заболевания (например, сифилис и туберкулез), связаны с длительным латентным периодом до клинического проявления.Таким образом, в этот латентный период будет обнаружено множество инфекций. Было разработано несколько методов борьбы с инфекцией H. pylori , которые обычно сгруппированы как «инвазивные», что означает, что они требуют ткани желудка или слизи, или «неинвазивные», требующие только крови, дыхания или стула или анализа. Здесь мы обсуждаем экспресс-тест на уреазу (RUT) или RUT, который является инвазивным тестом, поскольку он требует отбора проб слизистой оболочки желудка. Тест обеспечивает косвенное свидетельство инфекции, идентифицируя присутствие фермента, не являющегося млекопитающим, уреазы, в слизистой оболочке желудка или на ней.

История

H. pylori был впервые посажен в 1983 году. В первоначальном отчете он был описан как отрицательный по уреазе. Однако другие лаборатории, пытающиеся воспроизвести первоначальный результат, правильно определили, что этот организм был положительным по уреазе (6). McNulty et al. адаптировал стандартный лабораторный тест на уреазную активность, в котором петлю культуры помещают в субстрат, содержащий мочевину с индикатором pH, такой как 2% бульон с мочевиной Кристенсена; Уреаза гидролизует мочевину с образованием аммиака и диоксида углерода (7).Аммиак увеличивает pH, что приводит к изменению цвета (с коричневого на розовый). McNulty et al. показал, что с помощью этого теста уреазу можно идентифицировать непосредственно из биопсии желудка, что устраняет необходимость в культуре или гистологии. За первоначальным наблюдением последовало большое клиническое испытание, опубликованное в 1989 г., в котором 1445 пациентов прошли тестирование на H. pylori с использованием модифицированного бульона мочевины Кристенсена (8). Они сообщили о почти 100% специфичности и 96% чувствительности по сравнению с гистологией и культурой.Барри Маршал добавил антибактериальный агент к агаровому гелю, содержащему мочевину и индикатор pH, и запатентовал первый тест RUT, называемый тестом на организм, подобный кампилобактерам (CLO), который быстро стал стандартом для клинического использования и клинических испытаний.

Желудочная уреаза

Желудочная уреаза имела долгую историю до открытия H. pylori (9). На протяжении десятилетий считалось, что уреаза является ферментом млекопитающих, и предполагалось, что уреаза вырабатывается желудком для защиты желудка от переваривания желудочной кислотой (9).Уреаза даже была основой терапии язвенной болезни. Например, ирландский врач Оливер Фицджеральд лечил пептические язвы мочевиной как перорально, так и внутривенно для нейтрализации кислотности желудочного сока и лечения пептических язв (10). Первый эквивалент дыхательного теста с мочевиной с использованием 13 C-мочевины был фактически зарегистрирован в 1951 году и использовался для измерения активности уреазы в желудке лягушки (11). Когда стало очевидно, что уреаза имеет микробное происхождение, интерес к уреазе ослаб, поскольку было ясно, что она не может нести ответственность за защиту слизистой оболочки желудка от повреждения кислотой, а также потому, что большинство соответствующих экспериментов уже было проведено.Открытие того, что H. pylori продуцирует большое количество уреазы, позволило этим многочисленным экспериментам обрести новое значение (6).

RUT — это косвенный тест на присутствие H. pylori , основанный на наличии уреазы в или на слизистой оболочке желудка. Он имеет преимущество перед серологией в том, что он обнаруживает только наличие активной инфекции. Для теста требуется образец слизистой оболочки желудка или слизи, который добавляется в пробирку, гель или другое устройство, которое приводит этот образец в контакт с мочевиной, а также метод обнаружения продуктов гидролиза мочевины, аммиака или диоксида углерода.Для оценки активности желудочной уреазы были разработаны различные тесты, основанные, вероятно, на всех возможных компонентах реакции, включая те, которые оценивают изменения меченого CO 2 в сыворотке или выдыхаемом воздухе, уровень аммиака в выдыхаемом воздухе и изменение pH, вызванное воздействием аммиак либо для изменения цвета, либо непосредственно с помощью pH-метра. В первоначальном тесте использовался феноловый красный, цвет индикатора которого менялся с желтого на розовый или красный по мере увеличения pH. В других тестах использовались разные индикаторы, каждый из которых имел потенциальное преимущество, например, возможность начать реакцию при более низком pH, таком как 5.4 и, таким образом, снизить активность контаминирующих бактерий ротовой полости, многие из которых также содержат много уреазы (например, HP fast ® ) (). Простейшие тесты выполняются самостоятельно и содержат небольшое количество субстрата в пробирке с индикатором pH и могут быть произведены по одному или двум центам каждый (12).

Примеры трех популярных коммерческих быстрых тестов на уреазу (RUT), доступных в Соединенных Штатах, включая тест CLO и два теста второго поколения, один с использованием геля с контролируемым pH, а другой — с мембраной, насыщенной мочевиной.Один из каждой пары является контрольным, а другой — после смены цвета. CLO, организм, похожий на кампилобактер.

Как и для любой ферментативной реакции, необходимо учитывать параметры, которые влияют на реакцию, такие как концентрация субстрата, концентрация и активность фермента, время и температура, и были проведены исследования для тестирования многих различных параметров, чтобы обеспечить надежные результаты. Важные переменные включают сбор образца, размер образца, время до того, как результат теста будет признан отрицательным, а также то, полезно ли потепление.Положительный результат RUT требует приблизительно 10 5 H. pylori в образце биопсии, чтобы изменить цвет с помощью теста на основе агара, такого как тест CLO (13). Обычно это не проблема, поскольку концентрация H. pylori обычно превышает этот минимум. Чувствительность различных тестов RUT в качестве первичных диагностических тестов высока и, по имеющимся данным, варьируется от 80% до 100%, а специфичность — от 97% до 99% (14-17).

Первое требование — образец биопсии должен быть взят из места, где присутствуют микроорганизмы.У пациентов с язвой двенадцатиперстной кишки обычно неатрофическая слизистая оболочка, и H. pylori особенно распространены по всему антральному отделу. Для этих пациентов один образец из антрального отдела или желудочного угла будет иметь высокий выход, обычно более 85% и часто в диапазоне от 95% до 100%. Однако, если у пациента атрофический гастрит и обширные области кишечной метаплазии, которые содержат несколько организмов H. pylori , результаты часто будут неутешительными. Опубликованы многочисленные исследования места биопсии.Например, в одном исследовании было взято два образца биопсии из антрального отдела, и сообщалось о чувствительности и специфичности 95% и 100% (18). В другом исследовании сравнивали результаты биопсии, взятой под углом желудка, препилорическим участком и участком тела, с результатами 100%, 87% и 84,4% соответственно и без ложноположительных результатов (т.е. специфичность 100%) (19) . В целом, для достижения наилучших результатов достаточно двух образцов: одного из антрального отдела, избегающего участков изъязвления и явной кишечной метаплазии, и одного из нормального тела, которые обеспечивают самый высокий результат.Два образца могут быть помещены в один и тот же гель или среду или в отдельные контейнеры в зависимости от предпочтений врача и от того, планируется ли другое использование образцов.

Размер биопсии

Чувствительность и специфичность больших чашечных щипцов (диаметр 3,3 мм) и маленьких чашечных щипцов (диаметр 1,8 мм) сравнивали с использованием биопсии антрального отдела у одних и тех же пациентов (20). Чувствительность и специфичность больших щипцов составила 92,1% и 95,5% по сравнению с 88,5% и 98,8% для маленьких щипцов, соответственно.Таким образом, для практических целей размер чашки для биопсии не имеет большого значения. Поскольку большие щипцы также предоставляют больше информации для гистологического исследования, мы рекомендуем использовать самые большие щипцы, которые пройдут через канал введения эндоскопии. Если используется действительно крошечная эндоскопия, такая как ультратонкий эндоскоп, образцы для RUT могут быть взяты либо с помощью прилагаемых крошечных щипцов, либо путем чистки слизистой оболочки и помещения кисти в среду RUT.

Скорость реакции RUT частично зависит от температуры реакции.Было проведено сравнение, в котором биопсии антрального отдела были помещены при 38 ° C в более теплый воздух или хранились при комнатной температуре (~ 21 ° C). Возможность поставить диагноз в течение 30 минут была на 20% выше при использовании грелки (21), но в целом результаты были такими же. Многие эндоскописты кладут устройство RUT в карман, чтобы согреться. В целом, использование грелки не имеет большого значения, за исключением того, что это может позволить чаще подтверждать диагноз до того, как пациент покинет эндоскопическую область.

Имеющиеся в продаже наборы RUT предполагают принятие решения (положительный результат vs. отрицательный) в течение 24 часов. Время положительного результата теста зависит от концентрации бактерий и температуры. Большинство из них станет положительным в течение 120–180 минут, но лучше всего подержать отрицательные в течение 24 часов (22,23). Через 24 часа тест может стать положительным из-за присутствия организмов, не содержащих уреазу H. pylori (24). Положительные результаты через 24 часа чаще всего являются ложноположительными и не должны использоваться для принятия решения о лечении. Обычно мы выбрасываем образцы через 24 часа.Существует ряд различных коммерчески доступных наборов RUT, которые в основном различаются в зависимости от платформы (например, гель, жидкость, мембрана и т. Д.). Выбор зависит от доступности и местных предпочтений, поскольку ни один из них не оказался лучшим.

Ложноотрицательные и ложноположительные результаты

Как отмечалось выше, RUT — это тест на присутствие фермента уреазы. Однако фактические результаты будут зависеть от заболевания желудка и вероятности атрофических изменений или экзогенных факторов, которые снижают бактериальную нагрузку и, таким образом, дают ложноотрицательные результаты.Ложноположительные результаты могут быть получены, если другие организмы, содержащие уреазу, присутствуют в достаточном количестве или если один позволяет контактировать между образцом и средой в течение длительного периода, обычно более 24 часов. Как отмечалось ранее, для получения положительного результата в образце биопсии должно присутствовать приблизительно 10 5 бактерий (13), и все, что снижает плотность бактерий, например, использование антибиотиков, висмутсодержащих соединений или ингибиторов протонной помпы, может привести к ложноотрицательные результаты (25-27).Двумя наиболее частыми причинами ложноотрицательных результатов являются недавнее использование ингибиторов протонной помпы и наличие кишечной метаплазии. Антагонисты рецепторов H 2 не снижают бактериальную плотность и могут использоваться до дня проведения теста (28). Неясно, сколько времени нужно ждать после прекращения приема ингибиторов протонной помпы, прежде чем возможность ложноотрицательного результата станет маловероятной. Обычно рекомендуют две недели, исходя из соображений безопасности; однако организмы обычно быстро восстанавливаются после ингибирования ингибитором протонной помпы (26,29).Тем не менее, все тесты на активную инфекцию, включая RUT, гистологию, дыхательный тест на мочевину и посев, могут стать ложноотрицательными во время использования ингибитора протонной помпы или после использования висмута или антибиотика (28). Маловероятно, что ложноотрицательный RUT также будет сопровождаться гистологически невоспаленной и нормальной слизистой оболочкой желудка. Если есть сомнения и результат важен, лучше всего пройти неинвазивный тест (дыхательный тест на мочевину или антиген в стуле) после прекращения приема ИПП.

Ложноположительные результаты редки и, если они есть, могут быть связаны с присутствием других организмов, содержащих уреазу, таких как Proteus mirabilis , Citrobactor freundii , Klebsiella pneumonia , Enterobactor cloacae и Staphylococcus (Staphylococcus aure). .Однако, если у пациента нет ахлоргидрии или гипохлоргидрии, микроорганизмы H. pylori , отличные от , вряд ли будут присутствовать в достаточной концентрации для получения положительного результата, если только в субстрате RUT не будет ингибитора роста бактерий, в котором они могут разрастаться в течение 24 дней. часов периода наблюдения.

Клиническая интерпретация результатов RUT

Интерпретация RUT, как и любой другой диагностический тест, частично зависит от предварительной вероятности инфекции (30).Таким образом, у пациента с язвой двенадцатиперстной кишки один положительный результат RUT будет считаться подтверждением диагноза, тогда как отрицательный тест должен подтверждаться результатами другого теста, такого как гистология (например, отсутствие признаков воспаления желудка). Напротив, у пожилого пациента, подвергающегося эндоскопии по поводу гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, можно было бы нерешительно начинать терапию, основываясь только на положительном RUT. Таким образом, интерпретация зависит от вероятности предварительного тестирования и важности результата для последующего ведения пациента.Чтобы сэкономить деньги пациента, некоторые врачи предложили брать биопсию для RUT, а также для гистологии из нормальной слизистой оболочки, а затем, если RUT положительный, отбрасывать гистологические образцы за ненадобностью (23,31,32). Хотя это может иметь смысл при наличии высокой вероятности предварительного тестирования (например, активной язвы двенадцатиперстной кишки), это было бы нецелесообразно для пациента с неязвенной диспепсией, когда сами гистологические данные могут быть важны (например, наличие атрофических изменений, дисплазия и др.). Также было рекомендовано, чтобы RUT не использовался в качестве единственного арбитра результатов эрадикационной терапии H. pylori , потому что чувствительность RUT не составляет 100%, и, таким образом, отрицательный тест не полностью исключает присутствие активного инфекция (4,28). Это особенно важно, когда целью обследования является испытание на излечение. В действительности эндоскопия нечасто проводится для проверки излечения, за исключением пациентов с поражениями, где требуется дальнейшая эндоскопическая и / или гистологическая оценка, например, при язве желудка или после резекции аденоматозных полипов, и вопрос о роли посттерапии RUT возникает редко.Для таких пациентов, вероятно, наиболее экономически выгодно полагаться на гистологическое исследование биопсий антрального отдела и тела.

Вообще говоря, верхняя эндоскопия — это дорогостоящий тест, связанный с небольшим, но определенным риском, и, если нет особых противопоказаний, обычно показана биопсия для исследования гистологии слизистой оболочки. Также можно провести тестирование RUT, которое особенно полезно в сложных диагностических ситуациях, когда врач хотел бы в ближайшее время начать лечение. Таким образом, биопсии для RUT часто берутся у пациентов с недавним кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта.В этой ситуации может быть повышенное количество ложноотрицательных результатов. Было высказано предположение, что кровь приводит к снижению чувствительности RUT, возможно, связанной с присутствием альбумина (33), факторов уничтожения H. pylori в плазме человека (34) или крови в просвете желудка (35, 36). Однако другие исследования сообщают, что кровь не влияет на результаты теста (37,38). Ложноотрицательные тесты также распространены после частичной гастрэктомии, вероятно, из-за снижения бактериальной нагрузки, часто связанной с наличием желчи (39,40).Ни в одной из этих ситуаций критически важно немедленно диагностировать или начать лечение инфекции H. pylori . Такие ложноотрицательные результаты не имеют большого клинического значения, если они не принимаются как доказательство отсутствия инфекции H. pylori . Всегда нужно возвращаться к рассмотрению того, что вы планируете делать с информацией (т.е. положительным тестам обычно следует верить, но отрицательные тесты требуют гистологического или другого подтверждения при наличии H.pylori , вероятно, является причиной эндоскопии, например, при кровоточащей язвенной болезни). Поскольку большинство инфекций H. pylori были приобретены в детстве, немедленное лечение не требуется, и всегда можно подождать, пока не исчезнут острые состояния.

Использование образца RUT для дополнительных целей

Образец ткани, содержащийся в агаре теста RUT, можно использовать для других целей. Например, образец может быть извлечен из агарового геля положительных тестов и использован для молекулярного тестирования на H.pylori и / или наличие устойчивости к кларитромицину (41). Поскольку образец содержит ткань хозяина, его также можно использовать для других тестов, таких как генотип CYP2C19 хозяина (42).

Резюме

RUT — это быстрый, дешевый и простой тест, который часто используется в клинической практике. RUT лучше всего рассматривать как скрининговый тест, а не как золотой стандарт для инфекции H. pylori . Для клинических испытаний диагноз инфекции H. pylori требует, чтобы два разных типа теста были положительными или положительными культурами. H. pylori отрицательный, как правило, определяется как отрицательный результат всех тестов. Ключом к правильному использованию является рассмотрение любого теста с точки зрения предтестовой вероятности, а также важности информации с точки зрения ведения пациентов. Ложноотрицательные тесты встречаются чаще, чем ложноположительные, поэтому отрицательный результат не следует использовать для исключения H. pylori , если неправильный диагноз может нанести ущерб ведению пациента (например, у пациента с недавним кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта или после ). ЧАС.pylori ). Положительный посев считается единственным истинным золотым стандартом для диагностики H. pylori , поэтому при подозрении на ложноотрицательный результат требуется дополнительное тестирование. Наконец, тест также может использоваться в качестве неформальной оценки точности лаборатории патологии, и расхождения между RUT и гистологией, особенно положительная RUT и отрицательная гистология, должны побудить к пересмотру гистопатологии и обсуждениям с патологом.

Выражение признательности

Доктор Грэм получает частичную поддержку со стороны Управления исследований и разработок Службы медицинских исследований Департамента по делам ветеранов, гранты Службы общественного здравоохранения R01 DK062813 и DK56338, которые финансируют Центр болезней органов пищеварения Техасского медицинского центра. Авторы полностью несут ответственность за содержание и не обязательно отражают официальную точку зрения VA или NIH.

Вклад авторов: Каждый из авторов принимал участие в равной степени, прочитал и утвердил окончательный вариант рукописи.Каждый соответствует критериям авторства, установленным Международным комитетом редакторов медицинских журналов, и проверяет достоверность представленных результатов.

Раскрытие информации: Доктор Грэм является неоплачиваемым консультантом компании Novartis по вопросам разработки вакцины для лечения или профилактики инфекции H. pylori . Доктор Грэм является оплачиваемым консультантом RedHill Biopharma по новым методам лечения H. pylori и получил исследовательскую поддержку для культивирования H.pylori . Он является консультантом компании Otsuka Pharmaceuticals по вопросам диагностики дыхания. Доктор Грэм получил лицензионные отчисления от патентов Медицинского колледжа Бейлора, покрывающих материалы, относящиеся к дыхательному тесту 13 на содержание C-мочевины. Доктору Уотани нечего заявлять.

Ссылки

1. Шиотани А., Сен П., Грэм Д. Ликвидация рака желудка теперь возможна и практична. Semin Cancer Biol 2013; 23: 492-501. [PubMed] [Google Scholar] 2. Петерсон В.Л., Фендрик А.М., Кейв Д.Р. и др.Заболевание, связанное с Helicobacter pylori: рекомендации по тестированию и лечению. Arch Intern Med 2000; 160: 1285-91. [PubMed] [Google Scholar] 3. Град Ю.Х., Липсич М., Айелло А.Е. Секулярные тенденции в серопревалентности Helicobacter pylori у взрослых в Соединенных Штатах: доказательства устойчивых расовых / этнических различий. Am J Epidemiol 2012; 175: 54-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 4. Malfertheiner P, Megraud F, O’Morain CA и др. Управление инфекцией Helicobacter pylori — Маастрихтский отчет IV / Флорентийский консенсусный доклад.Кишечник 2012; 61: 646-64. [PubMed] [Google Scholar] 5. Асака М., Като М., Сакамото Н. Дорожная карта для ликвидации рака желудка с помощью эрадикации Helicobacter pylori и последовательного эпиднадзора в Японии. Журнал Гастроэнтерол 2014; 49: 1-8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 6. Campylobacter-подобные организмы в желудке пациентов и здоровых людей. Ланцет 1984; 1: 1348-9. [PubMed] [Google Scholar] 7. McNulty CA, Wise R. Быстрая диагностика гастрита, связанного с кампилобактерами. Ланцет 1985; 1: 1443-4. [PubMed] [Google Scholar] 8.McNulty CA, Dent JC, Uff JS и др. Обнаружение Campylobacter pylori с помощью биопсийного уреазного теста: оценка у 1445 пациентов. Кишечник 1989; 30: 1058-62. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 9. Graham DY, Go MF, Evans DJ, Jr. Обзорная статья: уреаза, желудочный аммоний / аммиак и Helicobacter pylori — прошлое, настоящее и рекомендации для будущих исследований. Aliment Pharmacol Ther 1992; 6: 659-69. [PubMed] [Google Scholar] 10. Фитцджеральд О., Мерфи П. Исследования физиологической химии и клинического значения уреазы с особым упором на желудок.Ирландский журнал J Med Sci 1950; 292: 97-159. [Google Scholar] 11. Фон Корфф Р.В., Глик Д. Роль уреазы в слизистой оболочке желудка. II. Исследования in vitro с изотопной мочевиной на слизистой оболочке лягушки. Am J Physiol 1951; 165: 688-94. [PubMed] [Google Scholar] 12. Hazell SL, Borody TJ, Gal A и др. Campylobacter pyloridis gastritis I: Обнаружение уреазы как маркера бактериальной колонизации и гастрита. Am J Gastroenterol 1987; 82: 292-6. [PubMed] [Google Scholar] 13. Mégraud F, Bessède E, Lehours P. Современные методы диагностики инфекции Helicobacter pylori.В: Buzás GM. ред. Helicobacter pylori — мировая перспектива, 2014. Дуб-парк: Bentham Science, 2014: 234-58. [Google Scholar] 14. Кальвет X, Санчес-Дельгадо Дж., Монтсеррат А. и др. Точность диагностических тестов на Helicobacter pylori: переоценка. Clin Infect Dis 2009; 48: 1385-91. [PubMed] [Google Scholar] 15. Аль-Хумаед С.М., Ахмед М.Э., Белло С.С. и др. Сравнение 4 лабораторных методов обнаружения Helicobacter pylori. Саудовская медицина, 2008; 29: 530-2. [PubMed] [Google Scholar] 16. Redéen S, Petersson F, Törnkrantz E, et al.Надежность диагностических тестов на инфекцию Helicobacter pylori. Гастроэнтерол Рес Прак 2011; 2011: 940650. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] 17. Вайра Д., Перна Ф. Насколько полезен экспресс-тест на уреазу для оценки успеха эрадикационной терапии Helicobacter pylori? Нат Клин Практ Гастроэнтерол Гепатол 2007; 4: 600-1. [PubMed] [Google Scholar] 18. эль-Зимаити Х.М., аль-Асси М.Т., Гента Р.М. и др. Подтверждение успешного лечения инфекции Helicobacter pylori: количество и место биопсии или экспресс-тест на уреазу.Am J Gastroenterol 1995; 90: 1962-4. [PubMed] [Google Scholar] 19. Woo JS, el-Zimaity HM, Genta RM и др. Лучшее место в желудке для получения положительного результата экспресс-теста на мочевину. Helicobacter 1996; 1: 256-9. [PubMed] [Google Scholar] 20. Юсфи М.М., Эль-Зимайты Н.М., Коул Р.А. и др. Обнаружение Helicobacter pylori с помощью экспресс-тестов на уреазу: является ли размер биопсии критической переменной? Gastrointest Endosc 1996; 43: 222-4. [PubMed] [Google Scholar] 21. Юсфи М.М., Эль-Зимайты Н.М., Коул Р.А. и др. Влияет ли использование грелки на результаты экспресс-теста на уреазу на Helicobacter pylori? Gastrointest Endosc 1996; 43: 260-1.[PubMed] [Google Scholar] 22. Осаки Т., Мабе К., Ханава Т. и др. Положительные по уреазе бактерии в желудке вызывают ложноположительную реакцию в дыхательном тесте на мочевину для диагностики инфекции Helicobacter pylori. J Med Microbiol 2008; 57: 814-9. [PubMed] [Google Scholar] 23. Перна Ф., Риччи С., Гатта Л. и др. Диагностическая точность нового экспресс-теста на уреазу (Pronto Dry) до и после лечения инфекции Helicobacter pylori. Минерва Гастроэнтерол Диетол 2005; 51: 247-54. [PubMed] [Google Scholar] 25. Грэм Д. Я., Лью Г. М., Малати Н. М. и др.Факторы, влияющие на эрадикацию Helicobacter pylori при тройной терапии. Гастроэнтерология 1992; 102: 493-6. [PubMed] [Google Scholar] 26. Грэм Д.Ю., Опекун А.Р., Хаммуд Ф. и др. Исследования механизма ложноотрицательных результатов дыхательных тестов на мочевину с ингибиторами протонной помпы. Am J Gastroenterol 2003; 98: 1005-9. [PubMed] [Google Scholar] 27. Форне М., Вивер Дж. М., Эспинос Дж. К. и др. Влияние коллоидного субнитрата висмута на скорость эрадикации язвы двенадцатиперстной кишки, связанной с инфекцией Helicobacter pylori, с использованием короткой схемы лечения омепразолом и кларитромицином: рандомизированное исследование.Am J Gastroenterol 1995; 90: 718-21. [PubMed] [Google Scholar] 28. Аттуми Т.А., Грэм Д.Ю. Контрольное обследование после лечения инфекций Helicobacter pylori: предостережения, предостережения и рекомендации. Clin Gastroenterol Hepatol 2011; 9: 373-5. [PubMed] [Google Scholar] 29. Лайне Л., Эстрада Р., Трухильо М. и др. Влияние терапии ингибиторами протонной помпы на диагностику Helicobacter pylori. Энн Интерн Мед 1998; 129: 547-50. [PubMed] [Google Scholar] 30. Vecchio TJ. Прогностическая ценность одного диагностического теста в неотобранных популяциях.N Engl J Med 1966; 274: 1171-3. [PubMed] [Google Scholar] 31. Мидоло П., Маршалл Б.Дж. Точный диагноз Helicobacter pylori. Тесты на уреазу. Гастроэнтерол Clin North Am 2000; 29: 871-8. [PubMed] [Google Scholar] 32. Лейн Л., Левин Д., Наритоку В. и др. Проспективное сравнение имеющихся в продаже экспресс-тестов на уреазу для диагностики Helicobacter pylori. Gastrointest Endosc 1996; 44: 523-6. [PubMed] [Google Scholar] 33. Леунг В.К., Сунг Дж.Дж., Сиу К.Л. и др. Ложноотрицательный результат биопсии на уреазу при кровоточащих язвах, вызванных буферным действием крови.Am J Gastroenterol 1998; 93: 1914-8. [PubMed] [Google Scholar] 34. Хоутон Дж., Рамамурти Р., Пандья Х. и др. Человеческая плазма обладает прямым бактерицидным действием против Helicobacter pylori in vitro, что потенциально объясняет снижение выявления Helicobacter pylori во время острого кровотечения из верхних отделов ЖКТ. Gastrointest Endosc 2002; 55: 11-6. [PubMed] [Google Scholar] 35. Tu TC, Lee CL, Wu CH, et al. Сравнение инвазивных и неинвазивных тестов для выявления инфекции Helicobacter pylori при кровоточащих пептических язвах. Gastrointest Endosc 1999; 49: 302-6.[PubMed] [Google Scholar] 36. Вильднер-Кристенсен М., Туборг Лассен А., Линдебьерг Дж. И др. Диагностика Helicobacter pylori у пациентов с кровоточащей язвенной болезнью, оценка тестов на мочевину. Пищеварение 2002; 66: 9-13. [PubMed] [Google Scholar] 37. Тан Дж. Х., Лю Н. Дж., Ченг Х. Т. и др. Эндоскопическая диагностика инфекции Helicobacter pylori с помощью экспресс-теста на уреазу при кровоточащих пептических язвах: проспективное исследование случай-контроль. J Clin Gastroenterol 2009; 43: 133-9. [PubMed] [Google Scholar] 38. Archimandritis A, Tzivras M, Sougioultzis S, et al.Экспресс-тест на уреазу менее чувствителен, чем гистология, при диагностике инфекции Helicobacter pylori у пациентов с кровотечением из верхних отделов желудочно-кишечного тракта без варикозного расширения вен. J Gastroenterol Hepatol 2000; 15: 369-73. [PubMed] [Google Scholar] 39. Тянь XY, Чжу Х., Чжао Дж. И др. Диагностическая эффективность дыхательного теста на мочевину, экспресс-теста на мочевину и гистологии инфекции Helicobacter pylori у пациентов с частичной гастрэктомией: метаанализ. Дж. Клин Гастроэнтерол 2012; 46: 285-92. [PubMed] [Google Scholar] 40. Adamopoulos AB, Stergiou GS, Sakizlis GN, et al.Диагностическая ценность экспресс-теста на уреазу и дыхательного теста с мочевиной для выявления Helicobacter pylori у пациентов с гастрэктомией по Бильроту II: проспективное контролируемое исследование. Dig Liver Dis 2009; 41: 4-8. [PubMed] [Google Scholar] 41. Ли Й, Римбара Э, Тирумурти С. и др. Обнаружение устойчивости к кларитромицину у Helicobacter pylori после некриогенного хранения экспресс-тестов на уреазу в течение 30 дней. Журнал Dig Dis 2012; 13: 54-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 42. Фурута Т., Сугимото М., Кодайра С. и др.Схемы экстренной помощи третьей линии на основе ситафлоксацина при инфекции Helicobacter pylori в Японии. J Gastroenterol Hepatol 2014; 29: 487-93. [PubMed] [Google Scholar] Уреаза Helicobacter pylori

для диагностики инфекции Helicobacter pylori: мини-обзор

J Adv Res. 2018 сен; 13: 51–57.

Дэвид Ю. Грэм

a Департамент медицины, Медицинский центр Майкла Э. Дебейки и Медицинский колледж Бейлора, Хьюстон, Техас 77030, США

Мухаммад Мифтахуссурур

b Отделение гастроэнтеро-гепатологии Внутренняя медицина, Медицинский факультет — Институт тропических болезней, Universitas Airlangga, Сурабая 60115, Индонезия

a Кафедра медицины, Майкл Э.Медицинский центр DeBakey VA и Медицинский колледж Бейлора, Хьюстон, Техас 77030, США

b Отделение гастроэнтерогепатологии, Отделение внутренних болезней, Медицинский факультет — Институт тропических болезней, Universitas Airlangga, Сурабая 60115, Индонезия

Получено 2017 Oct 19; Пересмотрено 18 декабря 2017 г .; Принято 16 января 2018 г.

Copyright © 2018 Производство и хостинг Elsevier B.V. от имени Каирского университета.

Это статья в открытом доступе по лицензии CC BY-NC-ND (http: // creativecommons.org / licenses / by-nc-nd / 4.0 /).

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Графический реферат

Ключевые слова: Helicobacter pylori , Дыхательный тест на мочевину, Экспресс-тест на мочевину, Желудочная уреаза, Диагностика, Подтверждение излечения

Реферат

Содержимое желудка содержит как кислотные, так и протеолитические ферменты. То, как желудок переваривает пищу, не повреждая себя, оставалось предметом исследования на протяжении десятилетий. Одним из кандидатов была желудочная уреаза, которая нейтрализовала кислоту, производя аммиак из мочевины, диффундирующей из крови, и потенциально могла защитить желудок.Открытие того, что уреаза желудка не является млекопитающим, привело к перерыву в исследованиях до открытия, что уреаза желудка вырабатывается Helicobacter pylori , что вызывает гастрит, язвенную болезнь и рак желудка. Желудочная уреаза позволяет организму колонизировать кислый желудок и служит биомаркером присутствия H. pylori . Важные клинические тесты для H. pylori , экспресс-тест на уреазу и дыхательный тест на мочевину, основаны на желудочной уреазе. Экспресс-тесты на уреазу используют биопсию желудка или слизь, помещенную в устройство, содержащее мочевину и индикатор изменения pH, обычно феноловый красный.Дыхательные тесты на мочевину измеряют изменение изотопного обогащения на 13 C- или 14 CO 2 в выдыхаемом воздухе после перорального введения меченой мочевины. Дыхательный тест с мочевиной — это неинвазивный, удобный и точный и наиболее широко используемый тест для неинвазивного теста для обнаружения активной инфекции H. pylori и для подтверждения излечения после эрадикационной терапии.

Введение

Аммиак был впервые обнаружен в желудке в 1852 году и с тех пор остается объектом исследования [1].Даже сегодня медицинские устройства, предназначенные для обнаружения выдыхаемого аммиака, первоначально продуцируемого в желудке, используются в клинической практике для выявления инфекции грамотрицательной бактерией, Helicobacter pylori, , важным патогеном человека, который, несмотря на снижение распространенности, все еще поражает примерно 50% людей. по всему миру. Инфекция H. pylori является наиболее частым возбудителем гастрита, язвенной болезни и рака желудка [2]. Присутствие уреазы в желудке было обнаружено в начале 20 века (см. Обзоры в [1] и [3]).За этим открытием последовал широкий интерес к желудочной уреазе, включая ряд животных, у которых можно было обнаружить уреазу, а также ее роль в здоровье и болезнях.

В конце 19 века было обнаружено, что рак желудка каким-то образом связан с ахлоргидрией или потерей способности желудка вырабатывать кислоту [4]. Это наблюдение побудило к исследованиям в области физиологии желудка, которые были значительно усилены тем фактом, что в то время рак желудка был наиболее частой причиной смертельных случаев рака у человека [5].Конец 19 века и начало 20 века были временем большого интереса и исследований в области физиологии желудка и желудочных заболеваний [4], [6]. В этот период также делали свои открытия многие великие физиологи желудочно-кишечного тракта. К 1900 году желудочная хирургия также начала появляться как новая область, особенно посвященная язвенной болезни, которую тогда часто считали хирургическим заболеванием [4]. Язва двенадцатиперстной кишки, ранее считавшаяся редкой, на самом деле оказалась очень распространенной [4].Было установлено, что язвы каким-то образом связаны с кислотой и что язвы двенадцатиперстной кишки связаны с повышенной кислотностью, а рак желудка — с отсутствием кислоты.

Желудочная уреаза

Как желудок защищал себя от повреждений высококонцентрированной кислотой, содержащейся в нем, было неясно и стало предметом значительных исследований [7], [8]. Например, было известно, что если поместить ногу живой лягушки в желудок через отверстие в брюшной стенке, это приведет к перевариванию ее плоти без учета защитного действия живого начала [8].При гидролизе мочевины образуется щелочной аммиак, который считался хорошим кандидатом для механизма защиты слизистой оболочки желудка от разъедающей кислоты, повторно присутствующей в желудке [1]. Фитцджеральд и Мерфи представили доказательство принципа того, что мочевина может играть важную роль в защите желудка, показав, что можно нейтрализовать секрецию желудка и вылечить язву двенадцатиперстной кишки, давая мочевину людям перорально и парентерально [9].

Большая часть заслуг в нашем нынешнем понимании желудочной уреазы получена в результате десятилетий экспериментов Корнберга и соавт.которые изучали желудочную уреазу преимущественно на кошках [3], [10]. Их всесторонние исследования послужили основой для современных исследований. Обширные наблюдения Корнберга включали исследования: ( a ) влияния секреции кислоты на расщепление мочевины, ( b ) влияния присутствия кислоты в желудке, вариаций желудочного кровотока и секреции неорганических веществ. -кислый сок на гидролиз мочевины, ( c ) гидролиз мочевины, связанный с прохождением раствора мочевины из просвета желудка в кровь, ( d ) влияние антибактериальных веществ на гидролиз мочевины, ( e ) отложение уреазы в желудке, ( f ) содержание мочевины и аммиака в желудочном соке, ( г ) количественные аспекты активности уреазы желудка и ( h ) исчезновение мочевины из желудочного сока.Их выводы, касающиеся физиологии мочевины в желудке, включали: ( a ) гидролиз мочевины был связан с ее переходом из крови как в париетальном, так и в непариетальном секрете в просвет желудка, ( b ) количество гидролизованной мочевины соответствовало скорости секреции кислого сока ( c ), когда мочевина добавлялась в желудок, скорость гидролиза мочевины определялась скоростью прохождения жидкости, содержащей мочевину, через слизистую; большая часть мочевины гидролизовалась в слизистой оболочке перед попаданием в кровь, и, наконец, что наиболее важно, ( d ) уреаза желудка имела микробиологическое происхождение и была тесно связана с эпителием [1], [3], [10] .Доказательства микробного происхождения уреазы первоначально основывались на эффектах лечения противомикробными препаратами, например, у кошек с активностью уреазы желудка средняя концентрация мочевины и аммония в желудочном соке составляла 0,6 мМ и 4,2 мМ соответственно. После антимикробной терапии средние концентрации мочевины выросли, а аммония упали (3 мМ и <0,05 мМ соответственно) [3], [10].

В целом интерес к желудочной уреазе ослаб после того, как было показано, что уреаза не является ферментом млекопитающих, а скорее имеет микробное происхождение [1], [3].Интерес возродился после открытия H. pylori в 1982 г. и его роли при гастрите и язвенной болезни [11]. После открытия H. pylori вновь возродился интерес к роли уреазы в заболеваниях человека, включая роль желудочной уреазы в производстве аммиака, который играет роль в неврологических осложнениях заболеваний печени, от печеночной энцефалопатии до печеночной энцефалопатии. кома [12], [13], [14], [15], [16], [17], [18].

Середина 20 века была эпохой, характеризующейся большим интересом к язвенной болезни.Например, в течение 1970-х годов в США проводилось более 140 000 операций по поводу язвы в год [4], и Конгресс учредил специальные исследовательские центры для решения проблемы язв, известные как Центры исследований и обучения язве (CURE) [19]. Было известно, что язва двенадцатиперстной кишки связана со специфическими нарушениями в контроле желудочной секреции, и это послужило основанием для исследования CURE. Гипотеза о микробной причине язвенной болезни в течение десятилетий входила и выходила из моды. В середине 1970-х группа в Великобритании отметила присутствие спиральных бактерий, связанных с гастритом и язвенной болезнью [20], [21], [22].Попытки культивировать этот организм потерпели неудачу. Позже Робин Уоррен из Австралии, вдохновленный своими наблюдениями с использованием окрашенных серебром срезов желудка, также отметил связь спиральных бактерий и воспаления желудка. Ему удалось убедить научного сотрудника-клинического исследователя Берри Маршалл присоединиться к нему, и вместе они смогли подтвердить свои наблюдения и с помощью совета микробиолога Адриана Ли, который обладал специальными знаниями в области спиральных бактерий, и лабораторных услуг Стюарда. Гудвину удалось культивировать H.pylori и доказывают, что он этиологически связан с гастритом и язвенной болезнью. За это Уоррен и Маршалл получили Нобелевскую премию в 2005 г. [23].

Уреаза H. pylori

Хотя первоначальные микробиологические исследования указали на то, что H. pylori не является уреазоположительным, последующие исследования McNulty et al. сообщили об обильной уреазной активности [24], [25], [26]. МакНалти и др. также произвел клинический тест на активность уреазы при биопсии желудка, чтобы использовать простой тест для диагностики присутствия организма [24], [26].Впоследствии Маршалл добавил противомикробный агент к обычному лабораторному тесту на уреазу и произвел первый запатентованный тест для клинического обнаружения H. pylori , затем был назван тест CLO для Campylobacter -подобных организмов под названием H. pylori . Уреаза H. pylori также оказалась высоко антигенной и является компонентом большинства серологических тестов против H. pylori и вакцин-кандидатов.

Толерантность H. pylori к кислоте в значительной степени зависит от активности уреазы, цитоплазматического фермента.Доступ мочевины к ферменту ограничен наличием поры, закрываемой H + (UreI), так что в кислых условиях мочевина может проникать в цитоплазматическое пространство и гидролизоваться до CO 2 и аммиака [27], [28] ], [29], [30]. Продукт гена непосредственно отвечает за проницаемость для мочевины и активен при кислом pH или регулирует проницаемость для мочевины другого белка цитоплазматической мембраны. Образующийся аммиак диффундирует в желудок с низким pH, где он ионизируется и задерживается в просвете желудка, тогда как CO 2 появляется в крови и впоследствии выдыхается.

В эпоху Корнберга методология на основе изотопа 14 C и 13 C использовалась для неинвазивной идентификации уреазной активности в тестах квази-дыхания на экспериментальных животных, включая лягушку [1], [3]. Методы, использующие стабильные и радиоактивные изотопы, впоследствии были использованы для разработки диагностических тестов на людях, использующих изотопное обогащение дыхания, крови или мочи после перорального приема меченых соединений, чаще всего мочевины, для обнаружения инфекций H. pylori [31] , [32], [33], [34], [35], [36], [37].Хотя мочевину и аммиак можно легко измерить в желудочном соке [38], первые клинически полезные быстрые тесты для диагностики H. pylori с использованием содержимого желудка или биопсии нацелены на уреазу и были адаптированы к стандартным лабораторным тестам на активность уреазы и получили название Rapid Urease. Тесты (РУТ).

Экспресс-тест на уреазу (RUT)

Тот факт, что H. pylori в изобилии присутствует в желудке и содержит уреазу, широко используется для помощи в клинической диагностике.Как отмечалось выше, вскоре после открытия H. pylori были разработаны экспресс-тесты на уреазу, позволяющие быстро обнаружить H. pylori с использованием образцов желудка (слизи, биопсии или чистки щеткой). Хотя исследователи использовали практически все возможные методы для определения активности уреазы, методы определения изменений pH либо напрямую, либо с использованием изменений цвета после инкубации образцов желудка оказались простыми и надежными, и были наиболее широко адаптированы.Более сложные методы, требующие сложных устройств для точного измерения изменений pH, как правило, не были успешными с клинической точки зрения, поскольку методы, основанные на изменении цвета индикатора pH, включенного в субстрат мочевины, намного удобнее и, как правило, дешевы и точны. В большинстве тестов используют пропитанный мочевиной агар, жидкость или сухую мембрану, на которую или в которую помещают образец. Тот факт, что уреаза H. pylori имеет более низкий оптимум pH (например, 5,4), чем у большинства других бактерий, которые могут встречаться в желудке, привел к разработке потенциально более специфических тестов, таких как hp -fast®, в котором использовались два разные индикаторы pH, один при более низком, а другой при более высоком pH ().Выбор теста RUT зависит от доступности, стоимости и простоты использования. В регионах, где стоимость является существенной проблемой, тесты часто проводят на месте из раствора, содержащего 2 г мочевины в 100 мл 0,01 М натрий-фосфатного буфера, pH 6,5, в который добавлено 10 мл 0,5% (мас. / Об.) Фенолового красного. и добавляют 20 мг азида натрия. Приблизительно 0,5 мл этой смеси затем помещают во флаконы для драма, которые затем хранят в эндоскопическом кабинете. Первоначально раствор желтого цвета и обычно становится розовым или красным в течение 30–3 часов после H.pylori -содержащий образец погружают.

Примеры коммерческих экспресс-тестов на уреазу, широко доступных в США. Показаны CLOtest® и тест второго поколения, тест hp fast . Оба используют пропитанный мочевиной агар и систему индикатора pH. Верхний из каждой пары является контролем, а нижний показывает изменение цвета, указывающее на вероятную инфекцию H. pylori .

RUT включает ферментативную реакцию, и важные соображения при разработке теста включают концентрацию субстрата, концентрацию и активность фермента, время и температуру.Были проведены исследования для проверки большинства этих параметров. Критические переменные включают сбор образца, размер образца, время, необходимое до того, как тест может быть оценен как положительный или отрицательный. Для тестов на гелевой основе нагревание сократит необходимое время, и доступны коммерческие нагреватели, которые поддерживают температуру образца 37 ° C [39]. Некоторые эндоскописты кладут устройство с образцом в карман, чтобы согреть его и проверить, когда это удобно. Положительный результат RUT требует приблизительно 10 5 H. pylori в образце биопсии для получения положительной реакции с помощью теста на агаровой основе [40].Организмы имеют тенденцию локализоваться на поверхности образца или рядом с ним, так что большая часть ткани является «лишней» и не способствует реакции. Некоторые исследователи использовали открытые щипцы для соскабливания желудочной слизи, чтобы обеспечить высокую концентрацию материала, богатого бактериями [41].

Как правило, концентрация H. pylori наиболее высока в антральном отделе, однако, если пациент недавно принимал ингибиторы протонной помпы (ИПП), концентрация может значительно снизиться, что приведет к ложноотрицательному результату [42].Другой частой причиной ложноотрицательных тестов, особенно в регионах, где часто встречается атрофический гастрит, является наличие кишечной метаплазии, которая часто не содержит H. pylori . Мы рекомендуем взять по крайней мере две биопсии из большой чашечки из нормально выглядящей слизистой оболочки, одну из антрального отдела и одну из тела, избегая явных участков кишечной метаплазии. Затем две биопсии объединяют в одной лунке [40], [43]. Многие берут образцы для RUT или посева перед тем, как брать образцы для гистологии, полагая, что формалин может повлиять на результаты посева или RUT.Это предостережение необоснованно, и нет причин запрашивать новый пинцет, если пинцет ранее был погружен в формалин [43], [44], [45], [46], [47]. RUT считается удобным в течение 24 часов. По прошествии 24 часов устройство следует выбросить, поскольку изменение цвета по истечении этого времени не является надежным индикатором инфекции H. pylori и обычно может быть связано с низким уровнем контаминирующих бактерий во рту, которые, наконец, начинают обнаруживаться.

Чувствительность различных тестов RUT в качестве первичных диагностических тестов высока и, по имеющимся данным, варьируется от 80% до 100% со специфичностью от 97% до 99% [40], [48].Образец, залитый в гель, впоследствии может быть использован для дополнительных испытаний. Например, образец можно использовать для молекулярного тестирования на чувствительность к противомикробным препаратам [49], [50].

В Соединенных Штатах (США) RUT потерял популярность отчасти из-за того, что инфекция H. pylori становится все реже, часто нет компенсации, и многие пациенты в настоящее время принимают или недавно получали ИПП приводящие к ложноотрицательным тестам. Пациентам с язвой желудка или патологией слизистой оболочки обычно также проводится биопсия края и основания язвы вместе с другими образцами для исследования на H.pylori . Вопрос о том, достаточно ли только взятия образцов для RUT, не решен, но в большинстве случаев указываются дополнительные биопсии. Хотя положительный результат теста RUT при наличии высокой вероятности предварительного теста (например, язвы двенадцатиперстной кишки) был бы достаточен для подтверждения диагноза язвы двенадцатиперстной кишки, связанной с H. pylori- , , результаты теста обычно недоступны во время процедуры эндоскопии и поскольку у пациента с язвой двенадцатиперстной кишки может быть ложноотрицательный результат (например, из-за использования ИПП или антибиотиков), большинству потребуется дополнительная биопсия для гистологии.В США было предложено, чтобы эндоскописты держали образцы для гистологии до тех пор, пока не будут доступны результаты теста RUT. Если RUT был положительным, биопсии можно было выбросить, что сэкономило пациенту многие сотни долларов. Неясно, как часто это происходило на самом деле. Тем не менее, отрицательный результат RUT не является надежным индикатором отсутствия инфекции H. pylori , так как на результат могут влиять многие факторы. Следовательно, роль тестирования RUT будет зависеть от клинической ситуации и вероятности предварительного тестирования (т.е., распространенность H. pylori локально). Культуры для тестирования чувствительности к противомикробным препаратам по-прежнему трудно получить и они дороги. Мы подозреваем, что молекулярное тестирование скоро станет широко доступным, и сочетание RUT с последующим молекулярным тестированием положительных образцов, вероятно, станет наиболее частым показанием для тестирования RUT.

Исследования RUT на жидкой основе и теста с сухой фильтровальной бумагой показали, что некоторые новые платформы имеют более короткое время интерпретируемости, чем тесты на агаре, такие как тест CLO [51].Некоторые RUT, продаваемые в Европе, сообщают точные результаты в течение нескольких минут [52], [53]. Однако клинический опыт не показал, что быстрые или сверхбыстрые результаты клинически выгодны, особенно если рассматривать общую проблему, которая включает диагностику, лечение, последующее наблюдение и связанные с этим вопросы (например, риск рака желудка).

Дыхательный тест на мочевину (UBT)

Как отмечалось ранее, конечные продукты уреазного гидролиза мочевины, аммиака и CO 2 могут быть обнаружены неинвазивным способом и, таким образом, формируют основу для бесчисленных тестов, которые были разработаны для клинический диагноз H.pylori инфекция. Чаще всего используются дыхательные тесты, в которых используется меченый углерод либо стабильный изотоп 13 C, либо радиоактивный 14 C () [31], [33]. Меченая мочевина попадает в организм, и обогащение изотопом крови или дыхания оценивается с помощью специального детектора. Радиоактивный 14 C обычно обнаруживается сцинтилляцией, в отличие от стабильного изотопа 13 C, измеряемого масс-спектрометрией изотопного отношения [54]. Были описаны сотни вариантов UBT, в которых указаны доза, время, состав субстрата, использование адъювантов, тестовые обеды, тип детектора от разных производителей и т. Д.варьировались [55], [56]. Все оказались эффективными.

Это иллюстрирует детали дыхательного теста с мочевиной с использованием 13 C-мочевины, которая при приеме внутрь гидролизуется до 13 CO2 и аммиака. Помеченный CO 2 затем помещается в мешок для последующего анализа относительного обогащения 13 CO 2 : 12 CO 2 .

Клиническая проблема заключается в возможности получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов.Ложноположительные тесты чаще всего вызваны гидролизом мочевины бактериями полости рта или уреазосодержащими бактериями в желудке [57]. Это особенно вероятно при наличии ахлоргидрии или гипохлоргидрии. Другой потенциальной проблемой является истощение субстрата из-за введения небольшого количества 14 C-мочевины или опорожнение меченого субстрата до того, как он сможет вступить в реакцию с бактериальной уреазой [58]. В идеальном тесте использовался бы состав, который был немедленно доступен для гидролиза, оставался в желудке в течение периода тестирования, распределялся по желудку и подвергался воздействию большей части поверхности желудка.Практически все мыслимые вариации были утомлены, например, когда пациент лежал и перекатывался во время теста, предварительное очищение рта и предварительный прием пищи для замедления опорожнения желудка [55], [56]. Тесты, содержащие 14 C-мочевину, обычно не содержат нерадиоактивной (т. Е. «Холодной») мочевины, и небольшое количество субстрата может быть быстро истощено путем гидролиза через рот, глотание или отсутствие уреазы H. pylori . содержащие организмы в желудке, вызывающие ложноположительные тесты [58].Радиоактивный углерод имеет то преимущество, что он дешев, а поскольку в нем нет природного 14 CO 2 , анализ прост. Недостатком является то, что многие пациенты хотят избежать воздействия радиоактивного материала, несмотря на вводимые очень низкие дозы. Тест нельзя применять детям или беременным женщинам. Несмотря на эти опасения, он оказался клинически полезным.

13 C-мочевина относительно дорога и требует специальных устройств для обнаружения обогащения 13 CO 2 в выдыхаемом воздухе.В настоящее время существует ряд компаний, производящих портативные и точные спектрометры изотопного состава газа, что значительно упростило тестирование. 13 C-мочевина была приготовлена ​​в виде порошка, который нужно растворить в воде перед использованием, в капсулах и таблетках. Дозировка мочевины широко варьировалась. Из-за затрат оптимальная доза — это компромисс между стоимостью и адекватностью. В большинстве тестов используется от 50 до 100 мг 13 C-мочевины. Таблетки и капсулы использовались, чтобы попытаться уменьшить контакт с пероральными организмами, содержащими уреазу; однако твердая лекарственная форма также создает проблемы опорожнения перед растворением, медленного растворения или плохого распределения в желудке.Тем не менее, в большинстве стран все препараты клинически примерно одинаковы, особенно если в их состав входит лимонная кислота. Тестирование обычно проводится не ранее чем через час после последнего приема твердой пищи. Однако небольшие исследования не показали, что еда существенно мешает, и аналогичные результаты были получены при голодании, а после гамбургера и картошки фри и голодание не является абсолютным требованием [31], [59]. Продолжительность теста важна, и время от 10 до 30 минут после приема внутрь оказалось успешным.Первоначальная задержка предназначена для того, чтобы позволить любым эффектам бактерий полости рта рассеяться и получить значение, близкое к пику обогащения изотопов. В большинстве тестов используется время от 15 до 30 минут, что обычно близко к уровню плато. Результаты выражаются как дельта по сравнению с базовой линией (DOB). Собирают базовую пробу дыхания и сравнивают изотопное обогащение через определенное время после приема меченого субстрата. Граница обычно составляет DOB от 2 ‰ до 5, причем наиболее часто используются 2,4–2,5.В большинстве серий только около 5% образцов находятся вблизи отсечки. Однако эта пропорция может быть намного больше, особенно в регионах, где часто встречаются ахлоргидрия и гипохлоргидрия (см. Ниже).

Повышение надежности UBT

Присутствие UreI можно использовать для повышения точности UBT, особенно в желудках, где секреция кислоты низкая, подавленная или бактериальная нагрузка низкая. У здоровых взрослых pH желудочного сока натощак составляет приблизительно 1,8. Это может увеличиться до 3 или более в H.pylori инфицированных людей аммонием, продуцируемым уреазой H. pylori . Таким образом, внутрижелудочный pH будет результатом внутренней скорости основной секреции кислоты и бактериальной нагрузки. Когда мочевина попадает в желудок с относительно высоким pH, то закрытая пора, UreI, может ограничивать ее доступ к уреазе H. pylori и приводить к низкой активности уреазы [27], [28], [29], [ 30]. Когда мочевина вводится с лимонной или яблочной кислотой, доступ мочевины к H.pylori усиливается, и измеренная активность уреазы увеличивается. В то же время низкий уровень pH желудочного сока не позволяет бактериальным уреазам H. pylori гидролизовать меченый субстрат и вызывать ложноположительные результаты. В целом, добавление лимонной или яблочной кислоты в присутствии H. pylori приводит к увеличению активности уреазы (т. Е. Более высокому сигналу) и снижению активности уреазы у тех, кто не инфицирован H. pylori (более низкий исходный уровень), таким образом улучшая чувствительность и специфичность теста [60].Это особенно важно для групп населения, страдающих атрофическим гастритом, и для тех, кто принимает препараты, подавляющие кислотность, такие как антагонисты рецепторов H 2 . В этих популяциях доля ложноположительных или ложноотрицательных тестов часто имеет клиническое значение [48], [56], [58], [61], [62], [63], [64], [65]. Существует мало оправданий для отказа от использования лимонной или яблочной кислоты в качестве адъювантов при дыхательном тесте на мочевину. Проблема ложноположительных тестов оказалась клинически важной в Испании и Корее с таблетками без лимонной кислоты [59] и, вероятно, важна для других подобных групп населения, хотя систематически это не исследовалось.

UBT у детей

Диагностическая точность стандартного взрослого UBT снижена у маленьких детей [66], [67], [68], [69]. Проблема заключается в подсчете баллов дыхательного теста с мочевиной, который основан на соотношении 13 CO 2 к 12 CO 2 в дыхании, связанном с влиянием возраста, пола и скорости основного обмена на CO 2 производство. У маленьких детей относительно низкое производство CO 2 приведет к тому, что DOB будет пропорционально выше для данного количества меченой гидролизованной мочевины, что приведет к ложноположительным результатам теста [69].Одной из распространенных попыток преодолеть эту проблему было произвольное увеличение порогового значения UBT [69], [70]. Этот метод является произвольным и является лучшей альтернативой для оценки результата, основанного на скорости гидролиза мочевины (UHR), в котором антропометрические переменные используются для определения скорости производства CO 2 у детей. Скорость гидролиза C-мочевины 13 можно оценить с помощью алгоритма, разработанного Klein et al. [69], который основан на измерении изотопного обогащения и определении количества углекислого газа, полученного на основе расчетных затрат энергии в состоянии покоя (джоули).

По сути, скорость гидролиза мочевины (UHR) выражается как скорректированный продукт изменения изотопного обогащения парных проб дыхания, выраженный как DOB, умноженное на скорость образования диоксида углерода (CO2-PR):

UHR = DOB × CO2PR × 0,346294

CO2-PR рассчитывается на основе скорректированного значения VCO2 продукта [VCO2 × 0,6944]. VCO2 рассчитывается из уравнения расхода энергии в состоянии покоя [VCO2 = EE / 134,25], на основании которого рассчитывается значение EE на основе скорректированной скорости базального метаболизма [EE = 334.6 × BMR]. Это также доступно в Интернете (https://puhrca.otsuka-us.com/files/Pediatric%20UHR-CA_UG%20v2.0.pdf). Этот метод точен как для детей, так и для взрослых с пороговым значением 10 мкг / мин [68], [69].

Сравнение RUT, UBT и других методов

UBT и RUT имеют преимущества и недостатки [71]. UBT неинвазивен, прост и точен и обнаруживает активных инфекций H. pylori , что делает его предпочтительным тестом как для первоначальной диагностики, так и для подтверждения излечения.Слабые стороны — стоимость и относительная недоступность в развивающихся странах. Преимущества РУТ — широкая доступность и невысокая стоимость. Основным недостатком RUT является необходимость получения образцов желудка (т. Е. Инвазивность). Это особенно полезно, когда эндоскопия проводится по другим показаниям. Положительные тесты обеспечивают надежное свидетельство инфекции, в то время как отрицательные тесты не могут использоваться для определения отсутствия инфекции. Оба должны быть доступны.

Инфекция H. pylori также может быть идентифицирована с помощью гистологии биопсии желудка.Характерной гистологической находкой является наличие острого и хронического воспаления, называемого хроническим воспалением. Кроме того, бактерии часто можно увидеть при стандартном окрашивании гематоксилином и эозином, однако подтверждение с помощью Giemsa, окрашивания серебром или иммуногистохимического окрашивания является более точным [72]. Образцы биопсии также можно использовать для молекулярного тестирования на основе полимеразной цепи или для посева. Поскольку все, что находится в желудке, в конечном итоге должно появиться в стуле, были разработаны тесты на антигены стула и тесты с использованием моноклонального препарата H.pylori оказались аналогичными по чувствительности и специфичности дыхательному тесту с мочевиной [71]. Наконец, в крови появляются антитела к H. pylori , и широко доступны различные тесты, в основном для определения специфических антител IgG к H. pylori . Поскольку титр антител часто остается повышенным, серологическое тестирование лучше всего использовать для эпидемиологических исследований, а не для выявления активной инфекции или для проверки излечения. На выбор лучшего теста влияет местный H.pylori , распространенность, доступность, стоимость и клинические условия [72].

Выводы и перспективы на будущее

То, что было медицинским курьезом, желудочная уреаза, превратилась в механизм важного человеческого патогена, H. pylori , способного процветать в кислой среде желудка, что до недавнего времени считалось быть бесплодным. Уреаза H. pylori в настоящее время используется в качестве биомаркера инфекции, и были разработаны различные методы для надежного обнаружения ее присутствия и, таким образом, диагностики инфекции.Попытки найти ингибиторы уреазы для нанесения вреда организму и помощи в лечении продолжаются. Национальные программы ликвидации H. pylori разрабатываются как стратегия ликвидации рака желудка. Ингибиторы уреазы и / или вакцины, которые включают антигены уреазы, вероятно, будут играть важную роль в этих усилиях.

Раскрытие информации

Д-р Грэм является консультантом RedHill Biopharma по новым методам лечения H. pylori и получил поддержку исследований для культивирования Helicobacter pylori и является инициатором международного исследования использования антимикобактериальной терапии. для болезни Крона.Он также является консультантом BioGaia и Takeda в отношении пробиотической терапии инфекции H. pylori и Takeda. Доктор Мифтахуссурюр не разглашает какую-либо соответствующую информацию.

Конфликт интересов

Авторы заявили об отсутствии конфликта интересов .

Соответствие этическим требованиям

Эта статья не содержит исследований с участием людей или животных .

Выражение признательности

Доктор Грэм получает частичную поддержку со стороны Управления исследований и разработок Службы медицинских исследований по делам ветеранов, грант Службы общественного здравоохранения DK56338, который финансирует Центр болезней органов пищеварения Техасского медицинского центра.Доктор Мифтахуссурур частично поддерживается грантом Министерства исследований, технологий и высшего образования Индонезии для Программы профессоров мирового класса (№ 105 / D2.3 / KP / 2017).

Биографии

Дэвид Грэм , доктор медицины, штатный врач медицинского центра Майкла Э. Дебейки, штат Вирджиния, и профессор кафедры медицины, молекулярной вирусологии и микробиологии Медицинского колледжа Бейлора в Хьюстоне, штат Техас. Он получил степень бакалавра в Университете Нотр-Дам в Саут-Бенде, штат Индиана, его M.Докторская степень с отличием, полученная в Медицинском колледже Бейлорского университета в 1966 году. Он имеет сертификат в области медицины и гастроэнтерологии. Доктор Грэм является автором более 1000 научных работ, нескольких книг и 125 глав в медицинских учебниках. Он является одним из самых цитируемых исследователей клинической медицины ISI. Он подготовил более 125 иностранных врачей-ученых и более 200 студентов-гастроэнтерологов из США. У него есть патенты на разработку диагностических тестов на инфекцию Helicobacter pylori , вызывающую язвенную болезнь желудка и рак желудка, а также на разработку вакцины против инфекции, вызванной вирусом Норуолк, наиболее частой причиной диареи, передаваемой через пищевые продукты и морские перевозки.Его исследования в настоящее время сосредоточены на инфекционных заболеваниях и кишечнике и включают исследования Helicobacter pylori , вызывающего пептические язвы и рак желудка, ротавируса и вирусов Norwalk, а также Mycobacterium paratuberculosis , который предположительно является причиной болезни Крона.

Мухаммад Мифтахуссурур — преподаватель и практикующий врач отделения гастроэнтерогепатологии отделения внутренней медицины медицинского факультета Университета Эрлангга, Сурабая, Индонезия.Он также является исследователем в Институте тропических болезней Индонезии. Получив степень доктора медицины в 2003 году и степень магистра в 2007 году в Университете Эйрланга, Индонезия, он завершил обучение по внутренним болезням в 2012 году в Университете Эйрланга. Доктор Мифтах получил степень доктора медицинских наук в Университете Оита, Япония, под руководством профессора Йошио Ямаока в 2016 году. В 2016 году он прошел постдокторантуру в Медицинском колледже Бейлор, Хьюстон, Техас, США, под руководством профессора Дэвида Й. Грэма. В 2016 году он был удостоен чести быть вторым самым продуктивным лектором Университета Эйрланга в публикации Scopus и преподавателем высших достижений в Университете Эйрланга в 2017 году.Он имеет научный опыт в молекулярной эпидемиологии, иммунологии, микробиологии и гастроэнтерологии. Совсем недавно его работа была сосредоточена на микробиоте желудка и взаимодействии Helicobacter pylori в связи с риском рака желудка, особенно среди населения Индонезии, страны с низкой распространенностью инфекции H. pylori . Он опубликовал 26 рецензируемых журнальных статей в качестве автора или соавтора и обзоров в области желудочно-кишечных заболеваний, особенно H.пилори.

Сноски

Экспертная проверка под ответственностью Каирского университета.

Ссылки

1. Graham D.Y., Go M.F., Evans D.J., Jr. Уреаза, желудочный аммоний / аммиак и Helicobacter pylori — прошлое, настоящее и рекомендации для будущих исследований. Алимент Pharmacol Ther. 1992. 6 (6): 659–669. [PubMed] [Google Scholar] 2. Megraud F., Floch P., Labenz J., Lehours P. Диагностика инфекции Helicobacter pylori . Helicobacter.2016; 21 (Приложение 1): 8–13. [PubMed] [Google Scholar] 3. Корнберг Х. Л., Дэвис Р. Э. Желудочная уреаза. Physiol Rev.1955; 35 (1): 169–177. [PubMed] [Google Scholar] 4. Балакришнан М., Джордж Р., Шарма А., Грэм Д.Ю. Изменение тенденций развития рака желудка во всем мире. Curr Gastroenterol Rep.2017; 19 (8): 36. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5. Грэм Д.Ю., Асака М. Ликвидация рака желудка и более эффективный надзор за раком желудка в Японии: два горошка в стручке. J Gastroenterol. 2010. 45 (1): 1–8.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 6. Грэм Д.Ю. В анамнезе: Helicobacter pylori , язва двенадцатиперстной кишки, язвенная болезнь желудка и рак желудка. Мир Дж. Гастроэнтерол. 2014. 20 (18): 5191–5204. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 7. Давенпорт Х.В. Издательство Оксфордского университета; Нью-Йорк: 1992. История экспериментальных исследований желудочной секреции и пищеварения до 1975 года. [Google Scholar] 8. Айви А.К., Гроссман М.И., Бахрах В.Х. Blakiston Co .; Филадельфия: 1950 год. Язвенная болезнь. [Google Scholar] 9.Фитцджеральд О., Мерфи П. Исследования физиологической химии и клинического значения уреазы и мочевины с особым упором на желудок. Ir Med J. 1950; 292 (3): 97–159. [Google Scholar] 11. Маршалл Б.Дж., Уоррен Дж.Р. Неопознанные изогнутые бациллы в желудке пациентов с гастритом и язвенной болезнью. Ланцет. 1984; 1 (8390): 1311–1315. [PubMed] [Google Scholar] 12. Phear E.A., Sherlock S., Summerskill W.H. Уровни аммония в крови при заболеваниях печени и печеночной коме. Ланцет. 1955; 268 (6869): 836–840.[PubMed] [Google Scholar] 13. Phear E.A., Ruebner B. in vitro Производство аммония и аминов кишечными бактериями в связи с токсичностью азота как фактором печеночной комы. Br J Exp Pathol. 1956. 37 (3): 253–262. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 14. Фридман А.И. Препятствующие факторы развития печеночной комы, включая предварительные наблюдения за уровнем аммония в сыворотке крови. Am J Gastroenterol. 1957; 27 (1): 23–30. [PubMed] [Google Scholar] 15. Вебстер Л.Т., младший, Дэвидсон К.С. Цирроз печени; угрожающая печеночная кома и повышение концентрации аммония в крови во время инфузии гидролизата протеина. J Lab Clin Med. 1957; 50 (1): 1–10. [PubMed] [Google Scholar] 16. Дасани Б.М., Сигал С.Х., Либер К.С. Анализ факторов риска хронической печеночной энцефалопатии: роль инфекции Helicobacter pylori . Am J Gastroenterol. 1998. 93 (5): 726–731. [PubMed] [Google Scholar] 17. Габбинс Г.П., Мориц Т.Э., Марсано Л.С., Талвалкар Р., Макклейн С.Дж., Менденхолл С.Л. Helicobacter pylori — фактор риска печеночной энцефалопатии при остром алкогольном гепатите: пересмотр гипотезы аммиака. Кооперативная исследовательская группа ветеранов администрации № 275. Am J Gastroenterol. 1993; 88 (11): 1906–1910. [PubMed] [Google Scholar] 18. Либер К.С. Гастрит и Helicobacter pylori : сорок лет антибактериальной терапии. Пищеварение. 1997. 58 (3): 203–210. [PubMed] [Google Scholar] 19. Guth P.H., Kaunitz J.D. Личные воспоминания о Мортоне Гроссмане и основании Центра исследований и образования язвы (CURE) Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.2008; 294 (5) G1109-13. [PubMed] [Google Scholar] 21. Стир Х.В. Гастро-дуоденальный эпителий при язвенной болезни. J Pathol. 1985. 146 (4): 355–362. [PubMed] [Google Scholar] 22. Стир Х.В. Ультраструктура миграции клеток через эпителий желудка и ее связь с бактериями. J Clin Pathol. 1975. 28 (8): 639–646. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 23. Маршалл Б. Соединения хеликобактеров. ChemMedChem. 2006; 1 (8): 783–802. [PubMed] [Google Scholar] 24. Макналти К.А., Дент Дж. К., Уфф Дж. С., Гир М.W., Wilkinson S.P. Обнаружение Campylobacter pylori с помощью биопсийного уреазного теста: оценка у 1445 пациентов. Кишечник. 1989. 30 (8): 1058–1062. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 25. McNulty C.A., Wise R. Быстрая диагностика гастрита, связанного с кампилобактерами. Ланцет. 1985; 1 (8443): 1443–1444. [PubMed] [Google Scholar] 26. McNulty C.A., Dent J.C. Быстрая идентификация Campylobacter pylori ( C. pyloridis ) с помощью предварительно сформированных ферментов. J Clin Microbiol. 1987. 25 (9): 1683–1686.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 27. Сакс Г., Уикс Д.Л., Вен Й., Маркус Э.А., Скотт Д.Р., Мельчерс К. Кислотная акклиматизация с помощью Helicobacter pylori . Физиология (Bethesda) 2005; 20: 429–438. [PubMed] [Google Scholar] 28. Сакс Г., Шин Дж. М., Мансон К., Вагин О., Ламбрехт Н., Скотт Д. Р. Обзорная статья: борьба с кислотностью желудочного сока и эрадикация Helicobacter pylori . Алимент Pharmacol Ther. 2000. 14 (11): 1383–1401. [PubMed] [Google Scholar] 29. Скотт Д.Р., Маркус Э.А., Уикс Д.L., Lee A., Melchers K., Sachs G. Экспрессия гена Helicobacter pylori ureI необходима для кислотной активации цитоплазматической уреазы pH. Infect Immun. 2000. 68 (2): 470–477. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 30. Уикс Д.Л., Эскандари С., Скотт Д.Р., Сакс Г. H + -зависимый канал мочевины: связь между уреазой Helicobacter pylori и колонизацией желудка. Наука. 2000. 287 (5452): 482–485. [PubMed] [Google Scholar] 31. Грэм Д.Ю., Кляйн П.Д., Эванс Д.Дж., младший, Эванс Д.Г., Альперт Л.С., Опекун А.Р. Campylobacter pylori обнаруживается неинвазивно с помощью дыхательного теста с 13C-мочевиной. Ланцет. 1987; 1 (8543): 1174–1177. [PubMed] [Google Scholar] 32. Chey W.D., Murthy U., Toskes P., Carpenter S., Laine L. Анализ крови на 13C-мочевину точно определяет активную инфекцию Helicobacter pylori : многоцентровое исследование в США. Am J Gastroenterol. 1999. 94 (6): 1522–1524. [PubMed] [Google Scholar] 33. Маршалл Б.Дж., инспектор I. Дыхательный тест на карбамид-14 для диагностики гастрита, ассоциированного с Campylobacter pylori .J Nucl Med. 1988. 29 (1): 11–16. [PubMed] [Google Scholar] 34. Моултон-Барретт Р., Триадафилопулос Г., Миченер Р., Гологорский Д. Сывороточный 13C-бикарбонат в оценке активности уреазы Helicobacter pylori в желудке. Am J Gastroenterol. 1993. 88 (3): 369–374. [PubMed] [Google Scholar] 35. Патхак К.М., Бхасин Д.К., Паниграхи Д., Гоэль Р.С. Оценка экскреции 14C с мочой и ее сравнение с 14CO2 в выдыхаемом воздухе после введения 14C-мочевины при инфекции Helicobacter pylori .Am J Gastroenterol. 1994. 89 (5): 734–738. [PubMed] [Google Scholar] 36. Хартман Н.Г., Джей М., Хилл Д.Б., Бера Р.К., Никл Н.Дж., Рио У.Й. Неинвазивное обнаружение колонизации Helicobacter pylori в желудке с использованием [11C] мочевины. Dig Dis Sci. 1992. 37 (4): 618–621. [PubMed] [Google Scholar] 37. Wu J.C., Liu G.L., Zhang Z.H., Mou Y.L., Chen Q.A., Wu J.C. Тест экскреции 15Nh5 +: новый метод обнаружения инфекции Helicobacter pylori . J Clin Microbiol. 1992. 30 (1): 181–184. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 38.Нитеркат В.Д., Милн А., Читтаджаллу Р.С., эль-Нуджуми А.М., Макколл К.Э. Обнаружение инфекции Helicobacter pylori слизистой оболочки желудка путем измерения концентраций аммония и мочевины в желудочном аспирате. Кишечник. 1991. 32 (9): 973–976. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 39. Юсфи М.М., Эль-Зимайти Х.М., Коул Р.А., Гента Р.М., Грэм Д.Ю. Влияет ли использование грелки на результаты экспресс-теста на уреазу Helicobacter pylori ? Gastrointest Endosc. 1996. 43 (3): 260–261.[PubMed] [Google Scholar] 41. Мацумото Х., Шиотани А., Кацумата Р., Фудзита М., Накато Р., Мурао Т. Эрадикация Helicobacter pylori с помощью ингибиторов протонной помпы или калий-конкурентных блокаторов кислоты: эффект устойчивости к кларитромицину. Dig Dis Sci. 2016; 61 (11): 3215–3220. [PubMed] [Google Scholar] 42. Аттуми Т.А., Грэм Д.Ю. Контрольное обследование после лечения инфекций Helicobacter pylori : предостережения, предостережения и рекомендации. Clin Gastroenterol Hepatol. 2011; 9 (5): 373–375.[PubMed] [Google Scholar] 43. Ву Дж.С., Эль-Зимайти Х.М., Гента Р.М., Юсфи М.М., Грэм Д.Ю. Лучшее место в желудке для получения положительного результата экспресс-теста на уреазу. Helicobacter. 1996. 1 (4): 256–259. [PubMed] [Google Scholar] 44. Юсфи М.М., Редди Р., Осато М.С., Грэм Д.Ю. Культура Helicobacter pylori : эффект предварительного погружения биопсийных щипцов в формалин. Helicobacter. 1996. 1 (1): 62–64. [PubMed] [Google Scholar] 45. Эль-Зимайти Х.М., Аль-Асси М.Т., Гента Р.М., Грэм Д.Ю. Подтверждение успешного лечения инфекции Helicobacter pylori : количество и место проведения биопсии или экспресс-теста на уреазу.Am J Gastroenterol. 1995; 90 (11): 1962–1964. [PubMed] [Google Scholar] 46. Crantock L., Willett I. Чувствительность теста CLO не зависит от предварительного погружения щипцов для биопсии в формалин. Gastrointest Endosc. 1993; 39 (6): 858. [PubMed] [Google Scholar] 47. Wettstein A., Loy C., Frommer D.J. Влияние погружения щипцов для биопсии в формалин на уреазную активность тканей. J Gastroenterol Hepatol. 1999. 14 (10): 984–986. [PubMed] [Google Scholar] 48. Кальвет X., Санчес-Дельгадо Х., Монтсеррат А., Ларио С., Рамирес-Лазаро М.Дж., Кесада М. Точность диагностических тестов для Helicobacter pylori : переоценка. Clin Infect Dis. 2009. 48 (10): 1385–1391. [PubMed] [Google Scholar] 49. Ли Ю., Римбара Э., Тирумурти С., Треспаласиос А., Редди Р., Сабунчи С. Обнаружение устойчивости к кларитромицину у Helicobacter pylori после некриогенного хранения экспресс-тестов на уреазу в течение 30 дней. J Dig Dis. 2012. 13 (1): 54–59. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 50. Римбара Э., Сасацу М., Грэм Д.Ю. ПЦР-обнаружение Helicobacter pylori в клинических образцах.Методы Мол биол. 2013; 943: 279–287. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 51. Tseng C.A., Wang W.M., Wu D.C. Сравнение клинической осуществимости трех экспресс-тестов на уреазу в диагностике инфекции Helicobacter pylori . Dig Dis Sci. 2005. 50 (3): 449–452. [PubMed] [Google Scholar] 52. Куми А., Филиппидис Т., Леонтара В., Макри Л., Панос М.З. Обнаружение Helicobacter pylori : более быстрый тест на уреазу может сэкономить ресурсы. Мир Дж. Гастроэнтерол. 2011. 17 (3): 349–353. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 53.Вайра Д., Вакил Н., Гатта Л., Риччи К., Перна Ф., Сарацино И. Точность нового сверхбыстрого экспресс-теста на уреазу для диагностики инфекции Helicobacter pylori
у 1000 последовательных пациентов с диспепсией. Алимент Pharmacol Ther. 2010. 31 (2): 331–338. [PubMed] [Google Scholar] 55. Грэм Д.Ю., Кляйн П.Д. Точный диагноз Helicobacter pylori . Дыхательный тест с 13C-мочевиной. Гастроэнтерол Clin North Am. 2000. 29 (4): 885–893. [PubMed] [Google Scholar] 56. Грэм Д.Ю., Кляйн П.Д. Что вы должны знать о методах, проблемах, интерпретациях и использовании дыхательных тестов на мочевину.Am J Gastroenterol. 1991. 86 (9): 1118–1122. [PubMed] [Google Scholar] 57. Пэн Н.Дж., Лай К.Х., Лю Р.С., Ли С.С., Цай Д.Г., Ло К.С. Клиническое значение пероральной уреазы в диагностике инфекции Helicobacter pylori с помощью дыхательного теста с мочевиной [13C]. Dig Dis Sci. 2001. 46 (8): 1772–1778. [PubMed] [Google Scholar] 58. Ньюэлл Д.Г., Хотин П.Р., Стейси А.Р., Макдугалл М.Х., Раддл А.С. Оценка распространенности инфекции Helicobacter pylori среди бессимптомных пожилых людей, сравнивая дыхательный тест с мочевиной [14C] и серологические данные.J Clin Pathol. 1991; 44: 385–387. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 59. Моайеди П., Браунхольц Д., Хеминбро Э., Клаф М., Томпкинс Д.С., Мапстоун Н.П. Нужно ли пациентам голодать для сдачи дыхательного теста на 13C-мочевину? Eur J Gastroenterol Hepatol. 1997. 9 (3): 275–277. [PubMed] [Google Scholar] 60. Ага А., Опекун А.Р., Абудайе С., Грэм Д.Ю. Влияние различных органических кислот (лимонной, яблочной и аскорбиновой) на внутрижелудочную уреазную активность. Алимент Pharmacol Ther. 2005. 21 (9): 1145–1148. [PubMed] [Google Scholar] 61.Квон Ю.Х., Ким Н., Ли Дж.Й., Чой Ю.Дж., Юн К., Хван Дж.Дж. Диагностическая достоверность дыхательного теста с высокой дозой (13) С-мочевины без лимонной кислоты после эрадикации Helicobacter pylori в Корее. Helicobacter. 2015; 20 (3): 159–168. [PubMed] [Google Scholar] 62. Грэм Д.Ю. Альтернативное объяснение влияния лимонной кислоты на ложноотрицательные дыхательные тесты с мочевиной, связанные с ингибиторами протонной помпы. Am J Gastroenterol. 2001. 96 (10): 3037–3039. [PubMed] [Google Scholar] 63. Грэм Д.Ю., Рунке Д., Андерсон С.Ю., Малати Х.М., Кляйн П.Д. Лимонная кислота в качестве тестовой смеси для дыхательного теста с 13C-мочевиной. Am J Gastroenterol. 1999. 94 (5): 1214–1217. [PubMed] [Google Scholar] 64. Грэм Д.Ю., Опекун А.Р., Джоги М., Ямаока Ю., Лу Х., Редди Р. Ложноотрицательные дыхательные тесты на мочевину с антагонистами h3-рецепторов: взаимодействие между плотностью Helicobacter pylori и pH. Helicobacter. 2004. 9 (1): 17–27. [PubMed] [Google Scholar] 65. Грэм Д.Ю., Опекун А.Р., Хаммуд Ф., Ямаока Ю., Редди Р., Осато М.С. Исследования механизма ложноотрицательных результатов дыхательных тестов на мочевину с ингибиторами протонной помпы.Am J Gastroenterol. 2003. 98 (5): 1005–1009. [PubMed] [Google Scholar] 66. Сабби Т., Де А.П., Колистро Ф., Далл’Оглио Л., ди Абриола Г.Ф., Кастро М. Эффективность неинвазивных тестов в диагностике инфекции Helicobacter pylori у педиатрических пациентов. Arch Pediatr Adolesc Med. 2005. 159 (3): 238–241. [PubMed] [Google Scholar] 67. Левин А., Шевах О., Милох Т., Вайн Э., Нив Ю., Буяновер Ю. Валидация нового дыхательного теста с мочевиной 13C в реальном времени для быстрой оценки Helicobacter pylori у детей и подростков.J Pediatr. 2004. 145 (1): 112–114. [PubMed] [Google Scholar] 68. Элитсур Ю., Толиа В., Гилгер М.А., Ривз-Гарсия Дж., Шмидт-Зоммерфельд Э., Опекун А.Р. Дыхательный тест на мочевину у детей: проспективное многоцентровое исследование, США. Helicobacter. 2009. 14 (2): 134–140. [PubMed] [Google Scholar] 69. Кляйн П.Д., Малати Х.М., Цинн С.Д., Эммонс С.С., Мартин Р.Ф., Грэм Д.Ю. Нормализация результатов дыхательного теста с мочевиной 13C на уровень продукции CO2 у детей. J Pediatr Gastroenterol Nutr. 1999. 29 (3): 297–301.[PubMed] [Google Scholar] 70. Kalach N., Briet F., Raymond J., Benhamou P.H., Barbet P., Bergeret M. Дыхательный тест с 13 углеродом мочевины для неинвазивного обнаружения Helicobacter pylori у детей: сравнение с посевом и определение минимальных требований к анализу. J Pediatr Gastroenterol Nutr. 1998. 26 (3): 291–296. [PubMed] [Google Scholar] 71. Мифтахуссурур М., Ямаока Ю. Методы диагностики инфекции Helicobacter pylori для эпидемиологических исследований: критическое значение непрямого тестирования.BioMed Res Int. 2016; 2016: 4819423. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 72. Эль-Зимайти Х.М., Сегура А.М., Гента Р.М., Грэм Д.Ю. Гистологическая оценка статуса Helicobacter pylori после терапии: сравнение красок Гимза, Дифф-Квик и Гента. Мод Pathol. 1998. 11 (3): 288–291. [PubMed] [Google Scholar]

Роль экспресс-теста на уреазу и гистопатологии в диагностике инфекции Helicobacter pylori в развивающейся стране | BMC Gastroenterology

  • 1.

    Blaser MJ: Экология Helicobacter pylori в желудке человека.J Clin Invest. 1997, 100: 759-762.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 2.

    Blaser MJ, Perez-Perez GI, Kleanthous H, Cover TL, Peek RM, Chyou PH, Stemmermann GN, Nomura A: заражение штаммами Helicobacter pylori , содержащими cagA, связано с повышенным риском развития аденокарциномы желудка. Cancer Res. 1995, 55: 2111-2115.

    CAS PubMed Google ученый

  • 3.

    Goossens H, Glupczynski Y, Burette A, Van den Borre C, Butzler JP: Оценка коммерчески доступного иммуноферментного анализа иммуноглобулина G второго поколения для обнаружения инфекции Helicobacter pylori . J Clin Microbiol. 1992, 30: 176-180.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 4.

    Кляйн П.Д., Малати Х.М., Мартин Р.Ф., Грэм К.С., Гента Р.М., Грэм Д.Ю.: Неинвазивное обнаружение инфекции Helicobacter в клинической практике: дыхательный тест с мочевиной 13C.Am J Gastroenterol. 1996, 91: 690-696.

    CAS PubMed Google ученый

  • 5.

    Brooks HJ, Ahmed D, McConnell MA, Barbezat GO: Диагностика инфекции Helicobacter pylori с помощью полимеразной цепной реакции: стоит ли оно того ?. Диагностика Microbiol Infect Dis. 2004, 50: 1-5. 10.1016 / j.diagmicrobio.2003.11.010.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 6.

    Lam SK, Talley NJ: Конференция консенсуса по управлению инфекцией Helicobacter pylori . J Gastroenterol Hepatol. 1998, 13: 1-12.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 7.

    Laine L, Estrada R, Trujillo M, Knigge K, Fennerty MB: Влияние терапии ингибиторами протонной помпы на диагностическое тестирование Helicobacter pylori. Ann Intern Med. 1998, 129: 547-550.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 8.

    Дики В., Кенни Б. Д., МакКоннелл Дж. Б.: Влияние ингибиторов протонной помпы на обнаружение Helicobacter pylori в биопсиях желудка. Алимент Pharmacol Ther. 1996, 10: 289-293.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 9.

    Marshall BJ: Стратегии лечения инфекции Helicobacter pylori . Гастрентерол Clin North Am. 1993, 22: 183-198.

    CAS Google ученый

  • 10.

    Stolte M, Bethke B: Удаление Helicobacter pylori при лечении омепразолом. Zeitschrift Fur Gastroenterologie. 1990, 28: 271-274.

    CAS PubMed Google ученый

  • 11.

    Graham DY, Opekun AR, Jogi M, Yamaoka Y, Lu H, Reddy R, El-Zimaity HM: Ложноотрицательные дыхательные тесты на мочевину с антагонистами h3-рецепторов: взаимодействие между плотностью Helicobacter pylori и pH. Helicobacter. 2004, 9: 17-27.10.1111 / j.1083-4389.2004.00191.x.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 12.

    Сиддики С., Хамид С., Рафик Дж., Чаудри С.А., Али Н., Шахаб С., Зауэрборн Р.: Практика рецептов государственных и частных поставщиков медицинских услуг в районе Атток в Пакистане. Int J Health Plann Manage. 2002, 17: 23-40. 10.1002 / ч. 650.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 13.

    Sturm AW, van der Pol R, Smits AJ, van Hellemondt FM, Mouton SW, Jamil B, Minai AM, Sampers GH: Доступность противомикробных средств без рецепта, самолечение и модели устойчивости в Карачи, Пакистан. J Antimicrob Chemother. 1997, 39: 543-547. 10.1093 / jac / 39.4.543.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 14.

    Прайс AB: Сиднейская система: гистологическое подразделение. J Gastroenterol Hepatol. 1991, 6: 209-222.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 15.

    Саид Р.М., Cheah PL, Chin SC, Goh KL: Оценка нового биопсийного уреазного теста: Pronto Dry для диагностики инфекции Helicobacter pylori . Eur J Gastroenterol Hepatol. 2004, 16: 195-199. 10.1097 / 00042737-200402000-00012.

    Артикул PubMed Google ученый

  • 16.

    Шнелл Г.А., Шуберт Т.Т., Барнс В.Г., Рупани М.К.: Сравнение уреазы, H & E и тестов на культуру для Helicobacter pylori .Гастроэнтерология. 1998, 94: A 410-

    Google ученый

  • 17.

    Логан Р.П., Уокер М.М., Мисевич Дж.Дж., Гаммет П.А., Карим К.Н., Барон Дж.Х .: Изменения внутрижелудочного распределения Helicobacter pylori во время лечения омепразолом. Кишечник. 1995, 36: 12-16.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 18.

    Veldhuyzen van Zanten SJO, Leung V, O’Rourke JL, Lee A: Желудочные переходные зоны, области, где лечение Helicobacter неэффективно: результаты испытания лечения с использованием модели мышиного штамма Sydney.Антимикробные агенты Chemother. 2003, 47: 2249-2255. 10.1128 / AAC.47.7.2249-2255.2003.

    Артикул Google ученый

  • Диагностическая точность метода «развертки» по сравнению с традиционным отбором образцов в экспресс-тесте на уреазу для выявления Helicobacter pylori в атрофической слизистой оболочке

    Это было проспективное одноцентровое исследование, проведенное в Медицинском центре Университета Аджу (Сувон, Республика Корея) ). Протокол исследования был одобрен наблюдательным советом нашего учреждения (Наблюдательный совет больницы Университета Аджу, разрешение №AJIRB-MED-OBS-18-091). Информированное согласие на участие в исследовании было получено от всех пациентов. Эта статья соответствует Стандартам отчетности по диагностическим исследованиям точности 25 . Все методы были выполнены в соответствии с соответствующими инструкциями и правилами.

    Исследуемая популяция

    Подходящими для отбора пациентами были те, кто прошел верхнюю эндоскопию и потребовал или запросил тест H. pylori с ноября 2018 г. по июль 2019 г. Критериями исключения были беременность, H.pylori , возраст <20 лет, недавнее использование антибиотиков и пробиотиков (в течение последних 2 месяцев), противопоказание к биопсии из-за тяжелой коагулопатии и нежелание участвовать в исследовании. Были записаны общая демографическая информация и подробности прошлой истории болезни, лекарств (антибиотики, антитромбоциты и препараты для лечения язвы, включая ИПП), а также причины RUT. Пациенты, принимавшие ИПП в течение 2 недель до проведения эндоскопии верхних отделов, были включены в исследование, и для этих пациентов был проведен анализ подгруппы.На рисунке 2 показана блок-схема набора участников исследования.

    Рисунок 2

    Блок-схема отбора исследуемой выборки.

    Эндоскопическое обследование

    Эндоскопия верхних отделов позвоночника была выполнена четырьмя опытными гастроэнтерологами с использованием одноканального эндоскопа (Q260J, Olympus Optical Co., Токио, Япония). Стандартные щипцы для биопсии с диаметром отверстия 6 мм использовались у всех пациентов (FB-21K-1, Olympus, Токио, Япония). Все обследования проводились под умеренной седацией.В этом исследовании использовались четыре различных метода обнаружения H. pylori : наш новый метод подметания, стандартный метод отбора биоптатов, гистопатологическое подтверждение, включая иммуногистохимическое (ИГХ) окрашивание, и полимеразная цепная реакция в реальном времени (ОТ-ПЦР). ) с использованием ткани, залитой парафином. Каждый метод выполнялся во время одной и той же эндоскопической процедуры без перекрытия участков слизистой оболочки желудка, из которых были взяты образцы. Порядок всех методов был рандомизирован (1: 1: 1 для выборки, стандартной выборки и гистопатологии, случайный список, сгенерированный компьютером).Для RUT использовали коммерчески доступный набор Campylobacter- like Organism (CLO) (PYLO-PLUS, Gulf Coast Scientific, Oldsmar, FL, USA). Положительный результат RUT определяли по изменению цвета с желтого на красный в течение 60 минут после помещения образца в набор при комнатной температуре, как рекомендовано производителем. Тестируемые наборы хранились в лотке, и две опытные медсестры определили изменение цвета. Для анализа изменение цвета с использованием схемы сопоставления цветов в тестовом наборе оценивалось с 1-минутными интервалами в течение первых 15 минут и каждые 5 минут после этого до 60-минутного предела.Общее время обнаружения определялось как наименьшее время для получения результата, при этом время обнаружения антрального отдела и тела измерялось отдельно. Кровотечение оценивалось как отсутствие кровотечения, минимальное, просачивание и истечение, в то время как повреждение оценивалось как отсутствие повреждения, поверхностное, подслизистое воздействие и воздействие на мышцы (дополнительный рисунок 3).

    Метод подметания

    Подметание — это метод взятия мазка со слизистой с помощью широких движений впитывающим тампоном, удерживаемым щипцами. Стерилизованные круглые детали диаметром 6 мм вырубали из нетканого материала (LIVSEN SMMS BU3, Toray Advanced Materials Korea Inc., Гури, Корея), которая используется как хирургическая или процедурная салфетка (рис. 3а). Во время подметания желудочный сок не отсасывался. Зажав тампон пинцетом (рис. 3b), край большой кривизны антрального отдела проходил взад и вперед 10 раз (рис. 3c, дополнительное видео). После этого мазок извлекали из биопсийного канала и помещали в лунку для введения образца набора CLO, и определяли результат теста (рис. 3d). Тот же метод зачистки был повторен для корпуса.Хотя эндоскопы были продезинфицированы, возможность заражения через канал эндоскопа была проверена перед исследованием путем введения тампона в канал для проверки цвета. Стоимость одного тампона составляет менее 2 центов.

    Рисунок 3

    Дизайн исследования и иллюстрация процесса выполнения метода поиска. Показаны миметическая диаграмма и реальное изображение впитывающего тампона ( a , b ) для метода подметания, выполняемого в антральном отделе ( c ).Иллюстрация и реальное изображение, показывающее размещение тампона в наборе для обнаружения ( d ).

    Традиционный метод отбора образцов для биопсии

    В соответствии со стандартным протоколом для обычного отбора образцов 26 , два образца ткани были взяты из антрального отдела и тела. В антральном отделе брали по одному образцу на большей и меньшей кривизне, в областях, где не проводилось подметание. В теле один образец был взят на 4 см проксимальнее угла, а второй — в средней части большей кривизны.Образцы снова оценивали с помощью набора CLO.

    Биопсия и гистопатологическое подтверждение

    Биопсии слизистой оболочки желудка были также получены от всех пациентов для гистопатологического исследования, две из антрального отдела (большая и меньшая кривизна) и две из тела (большая и меньшая кривизна) 27 . Все образцы фиксировали в 10% забуференном растворе формалина, отправляли в патологоанатомическое отделение, где заливали парафином. Окрашивание гематоксилином и эозином, Гимза и ИГХ проводили во всех случаях для определения присутствия H.pylori (дополнительный рисунок 4). Два опытных патологоанатома, которые были не осведомлены о результатах обычного метода биопсии, выполнили анализ.

    Экстракция геномной ДНК и ОТ-ПЦР для обнаружения

    инфекции H. pylori

    Мы извлекли фиксированные формалином залитые парафином тканевые блоки образцов биопсии желудка из архива отделения патологии. Для получения достаточного количества геномной ДНК из фиксированного формалином залитого парафином тканевого блока вырезали 7-8 срезов толщиной 10 мкм.После депарафинизации и регидратации процедуру экстракции ДНК проводили с помощью микронабора ДНК QIAMP (Qiagen, Hilden, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Для определения инфекции, вызванной H. pylori , использовали набор для обнаружения U-TOP HPY CLAR (SeaSun Biomaterials, Тэджон, Республика Корея). ОТ-ПЦР выполняли с использованием системы обнаружения CFX96 RT-PCR (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) в соответствии с руководством производителя. Данные анализировали с помощью BIO-RAD CFX manager v1.6 (Bio-Rad, Геркулес, Калифорния, США). Присутствие H. pylori определяли по сигналу флуоресценции детекторных зондов и соответствующей температуре плавления.

    Инфекция Helicobacter pylori по определению золотого стандарта

    Поскольку и гистопатология, и ПЦР имеют очень высокую чувствительность и специфичность 27,28 , мы определили инфекционный статус H. pylori как положительный, если хотя бы одна из гистопатологий (IHC) ) и результаты ПЦР были положительными.Все остальные случаи считались неинфекционными.

    Результаты исследования

    Первичным результатом была диагностическая эффективность метода поиска при обнаружении инфекции H. pylori . Чувствительность, специфичность и точность метода развертки были проанализированы и сравнены с аналогичными показателями обычного метода. Второстепенным результатом было время обнаружения.

    Статистический анализ

    Размер выборки был рассчитан для обнаружения разницы в 0.132 между двумя диагностическими тестами, чувствительность которых составляет 0,985 и 0,853 соответственно (предварительное исследование), с мощностью 90%. В этой процедуре используется двусторонний тест Макнемара с уровнем значимости 0,05. Распространенность инфекции H. pylori среди населения в целом составляет 0,530 29 . Доля дискордантных пар составляет 0,185. Исходя из этого расчета размера выборки, требовалось минимум 200 участников. Время до обнаружения H. pylori между обычным и чистым методами сравнивалось с использованием t-критерия, а степень кровотечения и повреждения слизистой оболочки сравнивалась с использованием точного критерия Фишера.Были рассчитаны чувствительность, специфичность, точность, положительная прогностическая ценность (PPV) и отрицательная прогностическая ценность (NPV), включая 95% доверительный интервал (CI). Коэффициент Каппа Коэна использовался для определения соответствия между методом развертки и традиционным методом, гистопатологией или ПЦР. Значения каппа можно интерпретировать следующим образом: <0,00, плохо; 0,00–0,20 - слабый; 0,21–0,40, удовлетворительно; 0,41–0,60 - умеренный; 0,61–0,80 - существенное; 0,81–1,00, почти идеально 30 .Кривая рабочих характеристик приемника была рассчитана с соответствующим 95% доверительным интервалом, а статистическая разница в площади под рабочей характеристикой приемника (AUROC) между двумя методами была оценена с использованием метода DeLong et al. 31 Все сообщенные значения P были двусторонними, а значение P <0,05 считалось значимым. Анализы выполняли с использованием SAS версии 9.4 (SAS Institute Inc., Кэри, Северная Каролина, США).

    Leave a Reply

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    2021 © Все права защищены.